Nghiên cứu quy trình công nghệ sản xuất sinh khối hệ sợi nấm mối (termitomyces sp )”

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ SẢN XUẤT SINH KHỐI HỆ SỢI NẤM MỐI (Termitomyces sp ) LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã ngành: 62420201 Cần Thơ, 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ MÃ SỐ NCS: P0915005 NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ SẢN XUẤT SINH KHỐI HỆ SỢI NẤM MỐI (Termitomyces sp ) LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã ngành: 62420201 NGƯỜI HƯỚNG DẪN Cần Thơ, 2022 LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình học tập nghiên cứu làm luận án, nhận nhiều giúp đỡ quý báu từ phía thầy cơ, bạn bè người thân Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến: Quý thầy cô Ban Giám hiêu Trường Đại học Cần Thơ, Khoa Sau Đại học, Viên Nghiên cứu Phát triển Công nghê Sinh học tạo điều kiên thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập Xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy PGS TS – người ln tận tụy với học trị, nhiêt tình hướng dẫn chun mơn, ln đơn đốc, động viên giúp đỡ tơi suốt q trình học tập thực hiên luận án Xin trân trọng cảm ơn quý thầy cô PGS TS cung cấp cho kiến thức quý báu suốt khóa học q trình hồn thành luận án Xin đơng kính gửi lời chân thành cảm ơn đến quý thầy cô GS TSKH tận tình giúp đỡ truyền đạt kinh nghiêm q báu cho tơi để hồn thành luận án Nhân xin gửi lời biết ơn đến thầy PGS TS (chủ tịch hội đông trường) quý thầy cô trường Đại học Thủ Dầu Một tạo điều kiên để tơi hồn thành chương trình Xin cảm ơn anh em sinh viên thu mẫu động viên suốt trình học tập Cảm ơn người thân yêu gia đình bạn bè giúp đỡ động viên suốt thời gian qua Xin trân trọng cảm ơn tất cả! i TÓM TẮT Luận án “ Nghiên cứu quy trình cơng nghê sản xuất sinh khối sợi nấm mối (Termitomyces sp )” thực hiên nhằm mục tiêu thiết lập qui trình nuôi cấy sản xuât thử nghiêm sinh khối sợi nấm mối T clypeatus thống nuôi cấy sinh học (bioreactor) 60L Kết dựa khảo sát hình thái thể nấm khuẩn lạc, kết hợp giải trình tự gen đoạn IST1, 5S IST2 đặc trưng nấm cho thấy bảy chủng nấm mối phân lập thuộc chi Terminomyces, có hai chủng định danh đến loài T clypeatus (N1) T microcarpus (BD) Nghiên cứu sản xuất thử nghiêm loài nấm mối T clypeatus cho thấy mơi trường nhân giống cấp thích hợp cho phát triển lồi nấm mơi trường có chứa KH2PO4 (0,1%), pepton (0,2%), glucose (4%), yeast extract (0,1%), MgSO4 (0,015%), thời gian nuôi tối ưu 20 ngày Trong mơi trường nhân giống cấp có khác biêt gôm gôm ty lê chủng giống 10% v/v với chế độ sục khí 0,4 v/v/m Một qui trình sản xuất thử nghiêm nuôi sinh khối sợi nấm mối T clypeatus thiết lập thống ni cấy sinh học với bình ni thể tích 60L Kết khảo sát cho thấy điều kiên tối thích cho sinh khối sợi phát triển mạnh tỉ lê giống chủng vào môi trường nuôi cấy 5% (v/v), pH 5,0, lượng khí sục 0,4 v/v/m, tốc độ khuấy 180 vịng/phút, nhiêt độ mơi trường 28oC Lượng sinh khối thu nhận 6,633±0,041 g/L Sinh khối sợi nấm tươi (93,9% ẩm độ) có chứa protein (3,75%), carbohydrate (1,76%), acid amin tổng (2,16%) bao gôm acid amin thiết yếu valine, leucine, isoleucine, threonine, phenylalanine, lysine, arginine, histidine Cao chiết methanol sinh khối khô sợi nấm T clypeatus trung hịa gốc tự DPPH với IC50 trung bình 2,26 mg/mL, nơng độ mg/mL ức chế lên đến 71,65-83,52% gốc tự DPPH Bên cạnh cao chiết có khả kháng vi khuẩn gây bênh Bacillus cereus ATCC 11778, Candida albicans ATCC 10231, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Staphylococcus aureus ATCC 6538 với MIC 10,98 mg/mL Độc tính cao chiết xác định tế bào gan người LO-2, kết cho thấy tỉ lê sống tế bào cao (90%) nông độ cao chiết 500 μg/mL Kết xác định độc tính cấp độc tính bán trường diễn cao chiết chuột cho thấy, hai trường hợp khơng có chuột tử vong liều 10 000 mg/kg thể trọng thử nghiêm độc tính cấp, liều 000 mg/kg thể trọng thử nghiêm độc tính bán trường diễn Từ khóa: Hê thống ni sinh học, hoạt tính sinh học, nấm mối, ni cấy chìm ii ABSTRACT The thesis “Studying on mycelium biomass production procedure from Termitomyces sp ” was carried out with the aim of establishing a culture process for experimental production of T clypeatus mycelium in 60 L Bioreactor The results based on the morphological survey of fungal fruiting bodies and colonies, combined with gene sequencing of ITS1, 5S and ITS2 fragments that are characteristic of fungi, showed that seven strains of termite mushroom, belonged to the genus Terminomyces, in which there are two strains that have been identified as T clypeatus (N1) and T microcarpus (BD) Research on experimental production on the termite mushroom T clypeatus showed that the primary propagation medium suitable for the growth of this fungus was the medium containing KH2PO4 (0 1%), peptone (0 2%), glucose (4%), yeast extract (0 1%), MgSO4 (0 015%), optimal culture time is 20 days Meanwhile, the secondary propagation medium was different, including the seed rate of 10% v/v with the aeration mode of v/v/m An experimental production procedure for T clypeatus mycelium was established on a biological culture system with a cultural tank of 60 liters The survey results showed that the optimal conditions for the growth of mycelium biomass were the seed rate 5% (v/v), pH 5, aeration mode of v/v/m, stirring speed 180 rmp, the temperature of 28ºC The amount of collected biomass was 633±0 041 g/L Fresh mycelium biomass (93 9% moisture) contains proteins (3 75%), carbohydrates (1 76%), total amino acids (2 16%) including essential amino acids such as valine, leucine, isoleucine, threonine, phenylalanine, lysine, arginine, histidine The dry biomass methanol extract of mycelium was able to neutralize DPPH free radicals with an average IC50 value of 26 mg/mL, at a concentration of mg/mL inhibiting up to 71 6583 52% DPPH free radicals Besides, this extract was also resistant to pathogenic bacteria such as Bacillus cereus ATCC 11778, Candida albicans ATCC 10231, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 and Staphylococcus aureus ATCC 6538 with MIC of 10 98 mg/mL The toxicity of the extract was also determined on LO-2 hepatocytes, the results indicated extremely high cell survival (90%) at the extract concentration of 2500 g/mL The results of determining acute toxicity and semi-permanent toxicity of the extract in rats showed that, in both cases, there was no death of rats at the dose of 10,000 mg/kg body weight in the acute toxicity test, and at the dose of 1,000 mg/kg body weight in the semi-permanent toxicity test Keywords: Biological activity, bioreactor, submerged culture, termite mushroom iii LỜI CAM ĐOAN Quyển luận án thân nghiên cứu sinh thực hiên hướng dẫn PGS TS Trần Nhân Dũng, không người khác làm thay, tài liêu tham khảo nghiên cứu sinh xem xét, chọn lọc kỹ lưỡng trích dẫn đầy đủ Kết nêu luận án hoàn thành dựa kết nghiên cứu thân kết nghiên cứu chưa dùng cho luận án cấp khác Cán hướng dẫn Tác giả luận án PGS TS Trần Nhân Dũng iv MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN TÓM TẮT ABSTRACT LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC DANH SÁCH BẢNG DANH SÁCH HÌNH CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nội dung nghiên cứu Mục tiêu 2 Nội dung nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Phạm vi nghiên cứu Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học thực tiễn luận án i ii iii iiv v viii x 1 2 3 3 CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Nấm 1 Khái quát nấm 2 Chu trình sống nấm Các giai đoạn phát triển nấm Đặc điểm biến dưỡng nấm Điều kiện sinh trưởng nấm 4 7 2 Nấm mối 2 Nguồn gốc, vị trí phân loại 2 Chu trình sống nấm mối 2 Đặc điểm hình thái thể nấm mối 2 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng nấm mối 2 Mối quan hệ cộng sinh nấm mối mối 2 Giá trị dinh dưỡng dược tính nấm mối 9 10 19 20 22 Tổng quan ni cấy chìm Tổng quan ni cấy chìm lồi nấm Tổng quan ni cấy chìm nấm mối 28 28 31 Giới thiệu ni cấy chìm hệ thống Bioreactor 32 Tình hình nghiên cứu nấm mối giới Việt Nam Tình hình nghiên cứu nấm mối giới Tình hình nghiên cứu nấm mối Việt Nam 35 35 35 Định danh nấm ăn nấm dược liệu dựa sở sinh học phân tử CHƯƠNG 3: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 38 v Thời gian địa điểm Vật liệu nghiên cứu Mẫu vật nghiên cứu 2 Hóa chất 3 Thiết bị dụng cụ 38 38 38 38 39 3 Phương pháp nghiên cứu 39 3 Nội dung 1: Phân lập, định danh giữ giống nấm mối 39 3 Nội dung 2: Khảo sát môi trường nhân giống nấm mối cấp 1, dạng dịch thể 42 3 Nội dung 3: Nghiên cứu quy trình cơng nghệ sản xuất sinh khối hệ sợi nấm mối Bioreactor 60 lít 47 3 Nội dung 4: Phân tích thành phần dinh dưỡng khảo sát hoạt tính sinh học sinh khối hệ sợi nấm mối 52 3 Nội dung 5: Sản xuất thử nghiệm độc tính sản phẩm 56 Phương pháp xử lý số liệu CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết phân lập định danh nấm mối 1 Kết phân lập định danh nấm mối Termitomyces clypeatus Kết phân lập định danh nấm mối Termitomyces microcarpus Kết phân lập định danh nấm mối Termitomyces sp 4 Kết phân lập số chủng nấm mối khác Phân tích mối quan hệ di truyền chủng nấm mối phân lập 59 60 60 60 63 65 66 68 Khảo sát môi trường nhân giống nấm mối T clypeatus 69 Ảnh hưởng môi trường thời gian ni cấy lên tích lũy sinh khối hệ sợi nấm mối 69 2 Tối ưu hóa hàm lượng chất chủ yếu ảnh hưởng đến tích lũy sinh khối hệ sợi nấm mối 71 Tối ưu hóa điều kiện ni cấy chủ yếu ảnh hưởng tới tích lũy sinh khối hệ sợi nấm mối 778 4 Tác động tỷ lệ cấp giống chế độ sục khí tới phát triển sinh khối hệ sợi nấm mối 84 Sản xuất thử nghiệm sinh khối nấm mối Bioreactor 85 Ảnh hưởng nơng độ mơi trường dịch thể tới tích lũy sinh khối nấm mối 85 Ảnh hưởng tốc độ khuấy tới tích lũy sinh khối sợi nấm mối 87 3 Quy trình cơng nghê sản xuất thử nghiêm sinh khối sợi nấm mối Bioreactor 88 4 Phân tích thành phần dinh dưỡng sinh khối nấm mối Kết thử hoạt tính sinh học Khảo sát hoạt tính chống oxy hóa sinh khối nấm mối vi 90 93 93 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn Thử độc tính dịch chiết sinh khối nấm mối Thử độc tính tế bào dịch chiết sinh khối nấm mối Thử độc tính cấp dịch chiết sinh khối nấm mối Thử độc tính bán trường diễn dịch chiết sinh khối nấm mối CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận Đề xuất TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ PHỤ LỤC vii 94 99 99 101 104 1099 109 109 110 126 DANH SÁCH BẢNG Bảng 1: Tóm tắt hình thái thể lồi nấm mối (Termitomyces) (Tibuhwa et al , 2010) 16 Bảng 2: Thành phần dịch chiết tổ mối (Zeleke et al , 2013) 19 Bảng 3: Kết phát triển hoạt độ enzyme nấm mối môi trường khác (Zeleke et al , 2013) 20 Bảng 4: Thành phần dinh dưỡng nấm mối (% khối lượng khơ) 23 Bảng 5: Thành phần khống chất nấm mối (mg/100g khối lượng khô) (Gbolagade et al , 2006) 23 Bảng 6: Hàm lượng saponin polysaccharides từ sinh khối khô nuôi cấy lỏng (DMCB) thể nấm mối T albuminosus (Lu et al , 2008) 26 Bảng 7: Thành phần môi trường ni cấy chìm nấm sản xuất hợp chất sinh học 29 Bảng 8: Sinh khối nấm ni cấy chìm loại nấm có sử dụng Glucose (Elisashvili, 2012) 30 Bảng 9: Các loại nấm nuôi cấy Bioreactor 33 Bảng 1: Thành phần môi trường YESS………………… ………………… 41 Bảng 2: Thành phần mơi trường PDB có bổ sung muối khống 42 Bảng 3: Sự tác động môi trường thời gian ni cấy lên tích lũy sinh khối sợi nấm mối 43 Bảng 4: Bố trí thí nghiêm khảo sát tác động đông thời nông độ (g/L) glucose, pepton KH2PO4 44 Bảng 5: Sự tác động ty lê cấp giống chế độ sục khí tới tích lũy sinh khối sợi nấm mối 47 Bảng 6: Nhiêt độ cô quay mẫu nấm chiết ethanol 55 Bảng 7: Bố trí thử nghiêm độc tính cấp 58 Bảng 8: Bố trí thử nghiêm độc tính bán trường diễn 59 Bảng 1: Kết phân tích ANOVA khối lượng khô ……………………… 70 Bảng 2: Các nơng độ glucose, nơng độ pepton nơng độ khống KH2PO4 có tác động lên tích lũy sinh khối sợi nấm mối lựa chọn 74 Bảng 3: Ảnh hưởng nông độ glucose, nông độ pepton nơng độ khống KH2PO4 lên tích lũy sinh khối sợi nấm mối 75 Bảng 4: Kết phân tích quy ANOVA sản lượng sinh khối khô sợi nấm Termitomyces clypeatus 76 Bảng 5: Các pH, tốc độ lắc nhiêt độ có tác động lên tích lũy sinh khối sợi nấm mối lựa chọn 81 viii B Xử lý thống kê số sinh lý máu Descriptive Statistics: WBC, LYM%, MID%, NEUT%, LYM@, MID@, NEUT@, RBC, Chú Variable thích N Mean StDev WBC ĐC 97 47 Nt1 800 529 Nt2 300 600 Nt3 000 964 Nt4 300 510 Nt5 93 47 ĐC 76 17 17 Nt1 76 27 55 Nt2 74 70 08 Nt3 75 200 866 Nt4 77 00 24 Nt5 75 10 72 ĐC 11 77 99 Nt1 12 333 115 Nt2 13 47 16 Nt3 13 50 73 Nt4 10 77 79 Nt5 12 40 40 ĐC 12 07 56 Nt1 11 40 69 Nt2 11 83 40 Nt3 11 30 33 Nt4 12 23 50 Nt5 12 50 43 ĐC 40 25 Nt1 433 473 Nt2 30 98 Nt3 3 033 723 Nt4 3 900 917 Nt5 17 86 ĐC 800 265 Nt1 7000 1000 Nt2 7333 1528 Nt3 533 208 LYM% MID% NEUT% LYM@ MID@ — 55 — Nt4 Nt5 933 0 252 567 462 NEUT@ RBC HGB HCT MCV MCH ĐC 7667 0577 Nt1 6667 1528 Nt2 600 200 Nt3 4333 0577 Nt4 667 351 Nt5 833 208 ĐC 17 20 Nt1 10 210 466 Nt2 10 237 301 Nt3 54 82 Nt4 91 26 Nt5 69 92 ĐC 10 17 57 Nt1 14 500 500 Nt2 14 200 700 Nt3 10 43 97 Nt4 10 47 30 Nt5 10 97 66 ĐC 36 10 17 16 Nt1 52 57 35 Nt2 52 17 54 Nt3 37 18 Nt4 35 70 11 66 Nt5 38 03 31 ĐC 49 73 38 Nt1 51 400 800 Nt2 51 000 453 Nt3 49 767 737 Nt4 51 667 643 Nt5 49 567 201 ĐC 14 100 100 Nt1 14 133 153 Nt2 13 833 473 Nt3 13 933 924 Nt4 15 133 208 Nt5 14 233 651 — 56 — MCHC RDW-SD RDW-CV PLT MPV PDW PCT ĐC 28 500 323 Nt1 25 57 15 Nt2 27 167 252 Nt3 28 067 422 Nt4 29 333 416 Nt5 28 800 700 ĐC 28 500 039 Nt1 31 600 000000 Nt2 31 600 000000 Nt3 30 37 14 Nt4 31 57 85 Nt5 30 33 80 ĐC 13 833 569 Nt1 14 767 252 Nt2 14 933 451 Nt3 14 733 242 Nt4 14 733 874 Nt5 14 767 026 ĐC 331 93 Nt1 436 28 Nt2 428 00 14 18 Nt3 383 48 Nt4 580 188 Nt5 345 56 ĐC 50 85 Nt1 2333 1528 Nt2 100 400 Nt3 033 577 Nt4 533 289 Nt5 267 551 ĐC 90 30 Nt1 3333 1155 Nt2 867 569 Nt3 200 300 Nt4 10 067 404 Nt5 11 067 814 ĐC 2467 0709 Nt1 3300 0624 Nt2 3000 0300 — 57 — Nt3 Nt4 Nt5 P-LCR 26333 01528 4333 1531 2767 0404 ĐC 12 27 91 Nt1 10 833 450 Nt2 33 46 Nt3 37 88 Nt4 11 87 22 Nt5 19 70 21 B10 Thử độc tính bán trường diễn B10 Số liệu thô khối lượng chuột thử nghiệm độc tính bán trường diễn Số chuột cân Khối lượng tổng Khối lượng TB/con 81 20 33 Chuột đem sau 24 82 20 Chuột đem sau 24 bố trí chng ni 10 207 20 72 Chuột đem sau 24 bố trí chng ni 82 20 63 Chuột đem sau 24 bố trí chuông nuôi 10 210 21 07 Chuột đem sau 24 bố trí chng nuôi 4 122 30 63 Chuột nuôi sau 30 ngày lô ĐC chuông 148 29 74 Chuột nuôi sau 30 ngày lô ĐC chuông 156 31 32 Chuột nuôi sau 30 ngày lô ĐC chuông 147 29 Chuột nuôi sau 30 ngày lô thử nghiêm chuông 151 30 Chuột nuôi sau 30 ngày lô thử nghiêm chuông 147 29 56 Chuột nuôi sau 30 ngày lô thử nghiêm chuông — 58 — Chú thích B10 Xử lý thống kê phần khối lượng Descriptive Statistics: khối lượng TB/con Variable Lô chuột khối lượng TB/con N Chuột đem vê Mean 20 690 SE Mean 118 StDev 264 Chuột nuôi ĐC sau 30 ngà 30 563 457 792 Chuột nuôi thử nghiệm sa 29 787 257 446 One-way ANOVA: khối lượng TB/con versus Lô chuột Source DF SS MS F P Lô chuột 246 265 123 132 510 25 000 Error 931 241 Total 10 248 195 S = 4912 R-Sq = 99 22% R-Sq(adj) = 99 03% Level N Mean StDev Chuột đem vê 20 690 264 Chuột nuôi ĐC sau 30 ngà 30 563 792 Chuột nuôi thử nghiệm sa 29 787 446 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level -+ -+ -+ -+ Chuột đem vê (-*-) Chuột nuôi ĐC sau 30 ngà (-*-) Chuột nuôi thử nghiệm sa (-*-) -+ -+ -+ -+ -21 24 27 30 Pooled StDev = 491 Grouping Information Using Tukey Method Lô chuột N Mean Grouping Chuột nuôi ĐC sau 30 ngày 30 563 A Chuột nuôi thử nghiệm sau 30 ngày 29 787 A Chuột đem vê 20 690 B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Lô chuột Individual confidence level = 97 87% — 59 — B10 Số liệu thô số sinh lý máu thử độc tính bán trường diễn WBC LYM MID NEUT LYM MID NEUT % % % @ @ @ RBC HGB HCT MCV MCH MCHC RDW- RDW SD -CV PLT MPV PDW PCT P-LCR Chú thích 48 63 17 19 31 08 09 62 13 45 53 15 28 31 14 475 77 89 36 13 ĐC ban đầu 72 16 11 36 08 06 11 52 17 63 54 15 28 29 13 441 81 10 35 17 ĐC ban đầu 73 44 18 37 33 13 27 33 12 42 51 14 28 26 12 497 76 82 37 13 ĐC ban đầu 72 13 14 29 05 06 11 41 16 61 53 14 27 29 13 539 10 43 16 ĐC ban đầu 41 75 11 13 31 05 05 10 52 15 54 51 14 28 33 13 349 75 89 26 13 Liều thử 1000 45 74 14 10 34 06 05 97 14 50 51 14 27 29 13 300 77 89 23 15 Liều thử 1000 65 66 11 22 43 07 15 10 25 14 52 50 13 27 31 15 480 74 82 35 12 Liều thử 1000 75 70 11 17 53 09 13 12 42 52 15 28 31 14 431 83 12 35 18 Liều thử 1000 55 79 12 89 44 07 04 79 11 39 51 14 27 29 14 538 74 37 91 ĐC sau 30 ngày 10 80 97 95 81 09 11 42 15 56 49 13 27 27 13 458 77 89 35 14 ĐC sau 30 ngày 59 58 16 25 35 14 10 22 13 51 50 13 27 27 13 321 65 77 02 98 ĐC sau 30 ngày 41 81 82 99 34 03 04 91 69 23 48 14 29 29 13 240 79 95 18 16 ĐC sau 30 ngày — 60 — B10 Xử lý thống kê số sinh lý máu thử độc tính bán trường diễn Descriptive Statistics: WBC, LYM%, MID%, NEUT%, LYM@, MID@, NEUT@, RBC, Variable Chú thích N Mean StDev WBC ĐC ban đầu 275 417 ĐC sau 30 ngày 38 54 Liều thử 1000 650 620 ĐC ban đầu 63 20 13 04 ĐC sau 30 ngày 75 10 11 00 Liều thử 1000 71 85 39 ĐC ban đầu 16 250 923 ĐC sau 30 ngày 11 55 49 Liều thử 1000 12 050 507 ĐC ban đầu 20 55 11 54 ĐC sau 30 ngày 13 35 84 Liều thử 1000 16 10 23 ĐC ban đầu 225 299 ĐC sau 30 ngày 4 85 21 Liều thử 1000 4 025 991 ĐC ban đầu 850 332 ĐC sau 30 ngày 750 332 Liều thử 1000 6750 1708 ĐC ban đầu 200 010 ĐC sau 30 ngày 775 479 Liều thử 1000 950 526 ĐC ban đầu 970 731 ĐC sau 30 ngày 59 88 Liều thử 1000 617 131 ĐC ban đầu 15 00 72 ĐC sau 30 ngày 11 85 77 Liều thử 1000 13 975 328 ĐC ban đầu 53 13 10 52 ĐC sau 30 ngày 42 70 14 38 Liều thử 1000 49 65 32 ĐC ban đầu 53 175 489 ĐC sau 30 ngày 49 725 231 Liều thử 1000 51 750 737 LYM% MID% NEUT% LYM@ MID@ NEUT@ RBC HGB HCT MCV — 61 — MCH MCHC RDW-SD RDW-CV PLT MPV PDW PCT P-LCR ĐC ban đầu 15 000 408 ĐC sau 30 ngày 13 825 330 Liều thử 1000 14 525 538 ĐC ban đầu 28 275 650 ĐC sau 30 ngày 27 875 885 Liều thử 1000 28 125 634 ĐC ban đầu 29 25 34 ĐC sau 30 ngày 28 800 039 Liều thử 1000 31 575 511 ĐC ban đầu 13 250 904 ĐC sau 30 ngày 13 975 650 Liều thử 1000 14 275 550 ĐC ban đầu 488 41 ĐC sau 30 ngày 389 133 Liều thử 1000 390 80 ĐC ban đầu 850 238 ĐC sau 30 ngày 275 645 Liều thử 1000 725 403 ĐC ban đầu 625 274 ĐC sau 30 ngày 375 991 Liều thử 1000 575 846 ĐC ban đầu 3775 0359 ĐC sau 30 ngày 2750 0988 Liều thử 1000 2975 0618 ĐC ban đầu 15 25 03 ĐC sau 30 ngày 12 30 38 Liều thử 1000 15 27 56 — 62 — Two-Sample T-Test & CI: WBC, Chú thích Two-sample T for WBC Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 38 54 Liều thử 1000 65 62 81 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: 72 (-2 96, 41) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = 48 P-Value = 647 DF = Both use Pooled StDev = 1283 Two-Sample T-Test & CI: LYM%, Chú thích Two-sample T for LYM% Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 75 11 5 Liều thử 1000 71 85 39 2 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: 25 (-15 59, 22 09) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = 55 P-Value = 621 DF = Two-Sample T-Test & CI: MID%, Chú thích Two-sample T for MID% Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 11 55 49 Liều thử 1000 12 05 51 75 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: -0 50 (-5 78, 78) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -0 26 Two-Sample T-Test & CI: NEUT%, Chú thích Two-sample T for NEUT% Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 13 35 84 Liều thử 1000 16 10 23 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: -2 75 — 63 — P-Value = 806 DF = 95% CI for difference: (-14 29, 79) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -0 58 P-Value = 581 DF = Both use Pooled StDev = 6677 Two-Sample T-Test & CI: LYM@, Chú thích Two-sample T for LYM@ Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 4 85 21 1 Liều thử 1000 4 025 991 50 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: 82 (-2 54, 19) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = 68 P-Value = 534 DF = Two-Sample T-Test & CI: MID@, Chú thích Two-sample T for MID@ Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 750 332 17 Liều thử 1000 675 171 085 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: 075 (-0 443, 593) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = 40 P-Value = 708 DF = Two-Sample T-Test & CI: NEUT@, Chú thích Two-sample T for NEUT@ Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 775 479 24 Liều thử 1000 950 526 26 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: -0 175 (-1 045, 695) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -0 49 Both use Pooled StDev = 5029 Two-Sample T-Test & CI: NEUT@, Chú thích Two-sample T for NEUT@ Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 775 479 24 — 64 — 1000 Liều thử P-Value = 640 DF = 950 0 526 26 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: -0 175 (-1 089, 739) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -0 49 P-Value = 643 DF = P-Value = 552 DF = P-Value = 328 DF = P-Value = 431 DF = Two-Sample T-Test & CI: RBC, Chú thích Two-sample T for RBC Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 59 88 Liều thử 1000 62 13 57 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: -1 03 (-5 95, 89) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -0 67 Two-Sample T-Test & CI: HGB, Chú thích Two-sample T for HGB Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 11 85 77 Liều thử 1000 13 98 33 66 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: -2 13 (-7 01, 76) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -1 06 Both use Pooled StDev = 8248 Two-Sample T-Test & CI: HCT, Chú thích Two-sample T for HCT Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 42 14 Liều thử 1000 49 65 32 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: -6 95 (-31 34, 17 44) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -0 91 — 65 — Two-Sample T-Test & CI: MCV, Chú thích Two-sample T for MCV Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 49 73 23 62 Liều thử 1000 51 750 737 37 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: -2 025 (-4 017, -0 033) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -2 82 P-Value = 048 DF = P-Value = 091 DF = P-Value = 662 DF = Two-Sample T-Test & CI: MCH, Chú thích Two-sample T for MCH Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 13 825 330 17 Liều thử 1000 14 525 538 27 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: -0 700 (-1 576, 176) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -2 22 Two-Sample T-Test & CI: MCHC, Chú thích Two-sample T for MCHC Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 27 875 885 44 Liều thử 1000 28 125 634 32 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: -0 250 (-1 582, 082) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -0 46 Both use Pooled StDev = 7697 Two-Sample T-Test & CI: RDW-SD, Chú thích Two-sample T for RDW-SD Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 28 80 04 52 Liều thử 1000 31 57 51 76 — 66 — Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: -2 775 (-5 018, -0 532) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -3 03 P-Value = 023 DF = P-Value = 993 DF = P-Value = 290 DF = P-Value = 316 DF = Both use Pooled StDev = 2966 Two-Sample T-Test & CI: PLT, Chú thích Two-sample T for PLT SE Chú thích N Mean StDev Mean ĐC sau 30 ngày 389 134 67 Liều thử 1000 390 80 40 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: -0 (-217 8, 216 3) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -0 01 Two-Sample T-Test & CI: MPV, Chú thích Two-sample T for MPV Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 275 645 32 Liều thử 1000 725 403 20 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: -0 450 (-1 427, 527) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -1 18 Two-Sample T-Test & CI: PDW, Chú thích Two-sample T for PDW Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 375 991 50 Liều thử 1000 57 85 92 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: -1 20 (-4 11, 71) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -1 15 — 67 — Two-Sample T-Test & CI: PCT, Chú thích Two-sample T for PCT Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 2750 0988 049 Liều thử 1000 2975 0618 031 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: -0 0225 (-0 1723, 1273) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -0 39 P-Value = 715 DF = P-Value = 210 DF = Two-Sample T-Test & CI: P-LCR, Chú thích Two-sample T for P-LCR Chú thích N Mean StDev SE Mean ĐC sau 30 ngày 12 30 38 Liều thử 1000 15 27 56 Difference = mu (ĐC sau 30 ngày) - mu (Liều thử 1000) Estimate for difference: 95% CI for difference: -2 97 (-8 16, 21) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -1 40 Both use Pooled StDev = 9974 B11 Kết so sánh trình tự nu NCBI (bổ sung cho hình 6) — 68 — — 69 — ... TẮT Luận án “ Nghiên cứu quy trình cơng nghê sản xuất sinh khối sợi nấm mối (Termitomyces sp )” thực hiên nhằm mục tiêu thiết lập qui trình ni cấy sản xt thử nghiêm sinh khối sợi nấm mối T clypeatus... ĐẠI HỌC CẦN THƠ MÃ SỐ NCS: P0915005 NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ SẢN XUẤT SINH KHỐI HỆ SỢI NẤM MỐI (Termitomyces sp ) LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã ngành: 62420201 NGƯỜI... khối sợi nấm mối phương pháp nuôi cấy dịch thể viêc thiết thực, tiền đề cho nghiên cứu nuôi cấy lồi khác sau Chính lý trên, đề tài ? ?Nghiên cứu quy trình cơng nghệ sản xuất sinh khối hệ sợi nấm mối