Báo cáo môn học: Công Nghệ Di Truyền docx

Báo cáo môn h cọ Công Ngh Di Truy nệ ề Cán b h ng d n:ộ ướ ẫ Ths. Nguy n Th Phaễ ị Ph n dành cho đ n vầ ơ ị Sinh viên th c hi n:ự ệ Tr n Th Trúc Ph ngầ ị ươ Nguy n Vi t Namễ ệ Ph m Tr ng Tínạ ọ Nguy n Huỳnh H ngễ ươ NG D NGỨ Ụ K THU T SINH H C PHÂN TỸ Ậ Ọ Ử Đ XÁC Đ NH M T S LOÀI SÂM THU C CHI PANAXỂ Ị Ộ Ố Ộ Tác gi : Nguy n Thanh Thu n, Vũ Thanh ả ễ ậ Th o, Nguy n Văn Thanh, Tr n Cát Đôngả ễ ầ Trích t trang:http://tcyh.yds.edu.vn/2010/Duoc_RHM_YTCCừ Các ph n chínhầ I M Đ UỞ Ầ II V T LI U VÀ PH NG Ậ Ệ ƯƠ PHÁP III K T QU VÀ TH O LU NẾ Ả Ả Ậ IV K T LU NẾ Ậ I M Đ UỞ Ầ • Nhân Sâm • Tên khoa h c: ọ Panax ginseng C. A. Mey • H : Araliaceae ọ (nhân sâm Hay Ngũ gia bì) • Chi: Pana x I M Đ UỞ Ầ Nhân Sâm Nhi u loàiề D c li u quíượ ệ D c tính các loài ượ có s khác bi tự ệ Phân bi t ệ loài m c ở ứ phân tử I M Đ UỞ Ầ M c tiêu: Xây d ng các ph ng ụ ự ươ pháp thu n ti n và có đ l p l i ậ ệ ộ ặ ạ cao đ xác đ nh các loài sâm thu c ể ị ố chi Panax và ngu n g c c a ồ ố ủ chúng. II. V t li u và ph ng phápậ ệ ươ N i ơ mua Lo i ạ sâm Vi t ệ Nam Hàn Qu cố Pg1 Pg2 Pg3 Pg4 Pq Pn1 Pn2 Pv X X X X X X X X II V T LI U VÀ PH NG PHÁPẬ Ệ ƯƠ Ph ng pháp:ươ Tách chi t DNAtheo ph ng phápế ươ c a Manian đ c bi n đ iủ ượ ế ổ Th c hi n PCR-RFLPự ệ Vùng ITS đ c khu ch đ i v i ượ ế ạ ớ c p m i chung ITS_AF và ITS_BRặ ồ Vùng 18S đ c khu ch đ i v i c pượ ế ạ ớ ặ m i chung 18SCOM_F và 18SCOM_Rồ S n ph m PCR đ c tinh chả ẩ ượ ế qua c t Promega Wizard® SV Gelộ and PCR Clean-Up System và c t b ngắ ằ h n h p enzyme ỗ ợ HaeIII và HindIII (BioLabs)trong 1 gi 37oC.ờ ở S n ph m c t đ c đi n di trênả ẩ ắ ượ ệ gel polyacrylamide 15%. Các s n ph m PCR đ c gi i trình tả ẩ ượ ả ự b i công ty Macrogen (Hàn Qu c).ở ố K t qu đ c BLAST trên NCBI ế ả ượ đ tìm các trình t t ng đ ngể ự ươ ồ Th c hi n RAMS v i các m i ự ệ ớ ồ RAMS1 (ACA)5, RAMS2 (CCA)5, RAMS3 (CGA)5, RAMS4 (GT)5G. Đi n di s n ph m PCR trên gel agarose 1%.ệ ả ẩ Ch p hình gel b ng máy Dolphin(Wealtec Corp)ụ ằ Phân tích k t qu b ng ph n m mế ả ằ ầ ề BioNumerics 3.0 đ t o ể ạ cây phát sinh loài làm căn c phân bi t.ứ ệ III K T QU VÀ TH O LU NẾ Ả Ả Ậ Hình 1. K t qu RFLP ế ả vùng ITS. M: thang 100bp Hình 2. K t qu phân tích s ế ả ự đa hình s n ph m RFLP đo n ả ẩ ạ ITS III K T QU VÀ TH O LU NẾ Ả Ả Ậ Hình 3. K t qu RFLP vùng ế ả 18S. M: thang 100bp Hình 4. K t qu phân tích s đa ế ả ự hình s n ph m RFLP đo n 18Sả ẩ ạ . Báo cáo môn h cọ Công Ngh Di Truy nệ ề Cán b h ng d n:ộ ướ ẫ Ths. Nguy n Th Phaễ ị Ph n dành. và c t b ngắ ằ h n h p enzyme ỗ ợ HaeIII và HindIII (BioLabs)trong 1 gi 37oC.ờ ở S n ph m c t đ c đi n di trênả ẩ ắ ượ ệ gel polyacrylamide 15%. Các