Xây dựng tương quan in vitro in vivo cho hệ phân phối thuốc qua da chứa i tetrahydropalmatin

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HÒA XÂY DỰNG TƯƠNG QUAN IN VITRO – IN VIVO CHO HỆ PHÂN PHỐI THUỐC QUA DA CHỨA l-TETRAHYDROPALMATIN LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HÒA XÂY DỰNG TƯƠNG QUAN IN VITRO – IN VIVO CHO HỆ PHÂN PHỐI THUỐC QUA DA CHỨA l-TETRAHYDROPALMATIN LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ DƯỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ THUỐC MÃ SỐ: 8720202 Người hướng dẫn: TS Nguyễn Trần Linh TS Trần Cao Sơn Nơi thực đề tài: Bộ môn Bào chế, Trường Đại học Dược Hà Nội Viện Kiểm nghiệm An toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia Thời gian thực hiện: từ 08/2021 đến 04/2022 HÀ NỘI, 2022 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến TS Nguyễn Trần Linh, TS Nguyễn Thạch Tùng TS Trần Cao Sơn, ba người thầy hướng dẫn bảo đường nghiên cứu Để hoàn thành luận văn nay, vô cảm ơn thầy hướng dẫn, bảo từ điều nhỏ nhặt nhất, dạy cho cách tư khoa học, trao cho tơi niềm đam mê tìm tịi nghiên cứu Cảm ơn thầy bên động viên đồng hành suốt trình làm luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô, anh chị kĩ thuật viên môn Bào chế, trường Đại học Dược Hà Nội, anh chị em cơng tác Viện Kiểm nghiệm an tồn vệ sinh thực phẩm Quốc gia tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành luận văn Tôi xin cảm ơn Ban Giám hiệu thầy cô trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện sở vật chất với hệ thống trang thiết bị máy móc đại, thuận tiện cho việc học tập nghiên cứu Tôi xin cảm ơn anh chị, đồng nghiệp, bạn sinh viên khóa 71, 72, 73 nhóm nghiên cứu khoa học môn Bào chế giúp đỡ cổ vũ tơi q trình làm luận văn Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn thân thương tới gia đình, bạn bè - người ln bên cạnh ủng hộ suốt thời gian qua Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2022 Học viên Nguyễn Thị Hòa MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Vài nét l-tetrahydropalmatin 1.1.1 Công thức cấu tạo 1.1.2 Tính chất lý hóa .3 1.1.3 Nguồn gốc 1.1.4 Dược động học 1.1.5 Tác dụng dược lý .6 1.1.6 Chỉ định tác dụng không mong muốn 1.1.7 Một số dạng bào chế thị trường 1.2 Hệ phân phối thuốc qua da 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Phân loại 1.2.3 Ưu nhược điểm miếng dán 1.2.4 Thành phần miếng dán 1.2.5 Cơ chế hấp thu dược chất qua da 1.2.6 Một số nghiên cứu thuốc qua da chứa l-tetrahydropalmatin 10 1.3 Tương quan in vitro – in vivo 11 1.3.1 Đại cương 11 1.3.2 Sinh khả dụng in vivo phương pháp đánh giá thuốc qua da 13 1.3.3 Sinh khả dụng in vitro phương pháp đánh giá thuốc qua da 14 1.3.4 Mơ hình dược động học 15 1.3.5 Mơ hình tương quan in vitro – in vivo 22 1.3.6 Một số nghiên cứu tương quan in vitro – in vivo 24 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Nguyên vật liệu thiết bị 27 2.1.1 Nguyên vật liệu 27 2.1.2 Thiết bị nghiên cứu 28 2.2 Động vật thí nghiệm 29 2.3 Nội dung nghiên cứu 29 2.4 Phương pháp nghiên cứu 29 2.4.1 Phương pháp bào chế 29 2.4.2 Phương pháp đánh giá sinh khả dụng in vitro miếng dán 30 2.4.3 Phương pháp đánh giá sinh khả dụng in vivo miếng dán 32 2.4.4 Phương pháp thiếp lập tương quan in vitro – in vivo miếng dán 34 2.4.5 Phương pháp thẩm định tương quan 37 2.4.6 Phương pháp xử lý số liệu 38 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .39 3.1 Thẩm tra phương pháp định lượng l-tetrahydropalmatin 39 3.1.1 Thẩm tra phương pháp định lượng l-tetrahydropalmatin sắc kí lỏng hiệu cao với detector UV 39 3.1.2 Thẩm tra phương pháp định lượng l-tetrahydropalmatin sắc kí lỏng với detector khối phổ kép (LC-MS/MS) 40 3.2 Nghiên cứu bào chế miếng dán chứa l-tetrahydropalmatin 40 3.2.1 Đánh giá độ tan l-tetrahydropalmatin dung môi 40 3.2.2 Bào chế miếng dán chứa l-tetrahydropalmatin 42 3.3 Đánh giá sinh khả dụng in vitro 44 3.3.1 Kết đánh giá phần trăm thấm in vitro dược chất qua da chuột môi trường khuếch tán khác 44 3.3.2 Mơ hình hóa liệu phần trăm thấm in vitro dược chất qua da chuột môi trường khuếch tán khác 45 3.4 Đánh giá sinh khả dụng in vivo miếng dán chứa l-tetrahydropalmatin 47 3.4.1 Sinh khả dụng miếng dán 47 3.4.2 Mô liệu in vivo miếng dán 49 3.5 Xây dựng tương quan in vitro – in vivo cho miếng dán 54 3.5.1 Xây dựng tương quan in vitro – in vivo cho môi trường khuếch tán 54 3.5.2 Lựa chọn mơ hình xây dựng tương quan 58 3.5.3 Kết thẩm định tương quan in vitro – in vivo 61 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 62 4.1 Về kết đánh giá sinh khả dụng in vitro công thức miếng dán 62 4.1.1 Ảnh hưởng môi trường khuếch tán 62 4.1.2 Ảnh hưởng cơng thức bào chế đến tính thấm in vitro dược chất qua da 63 4.2 Về kết đánh giá sinh khả dụng in vivo miếng dán 64 4.3 Về mơ hình dược động học sinh lý xây dựng tương quan in vitro – in vivo ứng dụng mô hình 65 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHI 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT AIC Tiêu chuẩn thông tin Akaike (the Akaike’s information criterion) ACN Acetonitril ADME AUC Quá trình hấp thu phân bố chuyển hóa thải trừ thuốc (Absorption, Distribution, Metabolism, and Excretion) Diện tích đường cong nồng độ theo thời gian (Area under curve) AUC0-∞ Diện tích đường cong từ thời điểm đến thời điểm vơ AUC0-t Diện tích đường cong từ thời điểm đến thời điểm t Cmax Nồng độ dược chất cực đại huyết tương (The maximum drug concentration) DĐVN Dược điển Việt Nam DMSO Dimethyl sulfoxyd IV Tiêm tĩnh mạch (Intravenous) IVIVC Tương quan in vitro – in vivo (In Vitro – In Vivo Correlation) KLPT Khối lượng phân tử l-THP l-tetrahydropalmatin MRT Thời gian lưu trú trung bình (Mean residence time) NMP N-methyl-2-pyrrolidon PBPK Mơ hình dược động học dựa sinh lý (Physiologically based pharmacokinetics) PE Sai số dự đoán (Predicted error) PG Propylen glycol PSA Phân tích thơng số nhạy cảm (Parameter sensitivity analysis) TCAT TCNSX Mơ hình sinh lý da (Transdermal Compartmental Absorption & Transit Model) Tiêu chuẩn nhà sản xuất TDDS Tmax US.FDA USP Hệ phân phối thuốc qua da (Transdermal Drug Delivery System) Thời điểm dược chất đạt nồng độ tối đa huyết tương (Time to peak drug concentration) Cục quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ (United States Food and Drug Administration) Dược điển Mỹ (United States Pharmacopeia) DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Đặc tính sinh dược học l-THP dự đoán từ phần mềm ADMET Predictor Bảng 1.2 Một số mơ hình tương quan in vitro – in vivo phi tuyến tính 23 Bảng 2.1 Nguyên liệu hóa chất nghiên cứu 27 Bảng 2.2 Thiết bị dụng cụ nghiên cứu 28 Bảng 2.3 Thành phần công thức bào chế miếng dán 29 Bảng 2.4 Chương trình dung mơi phương pháp sắc ký lỏng khối phổ 34 Bảng 3.1 Độ tan l-THP dung môi (n=3, TB ± SD) 41 Bảng 3.2 Công thức gel bào chế miếng dán 42 Bảng 3.3 Chỉ số f2 so sánh đường cong phần trăm thấm in vitro miếng dán qua da chuột 43 Bảng 3.4 Các thông số dược động học theo mơ hình khơng ngăn 48 Bảng 3.5 Các thông số dược động học theo mơ hình ngăn 48 Bảng 3.6 Các thông số sinh lý quan sau tối ưu hóa liệu in vivo IV .51 Bảng 3.7 Giá trị AIC R2 mơ hình IVIVC xây dựng theo môi trường 57 Bảng 3.8 Giá trị AIC R2 mơ hình IVIVC xây dựng theo mơ hình dược động học .59 Bảng 3.9 Giá trị sai số AUC0-24h Cmax dự đoán so với thực tế dạng bào chế dự đoán tương quan 61 DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo l -tetrahydropalmatin Hình 1.2 Mơ hình ngăn dược động học 16 Hình 1.3 Mơ hình dược động học sinh lý .19 Hình 1.4 Mơ hình sinh lý da 21 Hình 3.1 Đường chuẩn biểu diễn mối tương quan nồng độ diện tích pic l- THP .39 Hình 3.2 Đường chuẩn l-THP huyết tương trắng LC-MS/MS 40 Hình 3.3 Đồ thị phần trăm dược chất thấm qua da chuột miếng dán chứa l- THP môi trường ethanol (n=3) 43 Hình 3.4 Đồ thị phần trăm dược chất thấm qua da chuột miếng dán chứa lTHP môi trường Tween PG (n=3) 44 Hình 3.5 Mơ hình hóa liệu phần trăm thấm in vitro qua da chuột môi trường ethanol miếng dán 45 Hình 3.6 Mơ hình hóa liệu phần trăm thấm in vitro qua da chuột môi trường PG miếng dán 46 Hình 3.7 Mơ hình hóa liệu phần trăm thấm in vitro qua da chuột môi trường Tween miếng dán 46 Hình 3.8 Đồ thị biểu diễn nồng độ l-THP huyết tương thỏ theo thời gian miếng dán (n = 4) 47 Hình 3.9 Mức độ ảnh hưởng thông số sinh lý quan đến AUC0-t đường tiêm tĩnh mạch 50 Hình 3.10 Nồng độ l-THP huyết tương đường tiêm tĩnh mạch (đường) so với nồng độ l-THP quan sát (điểm) sau tối ưu thông số ảnh hưởng 51 Hình 3.11 Mơ hình mơ liệu in vivo miếng dán dựa liệu phần trăm thấm in vitro qua da chuột môi trường ethanol 53 Hình 3.12 Mơ hình mơ liệu in vivo miếng dán dựa liệu phần trăm thấm in vitro qua da chuột môi trường PG 53 Hình 3.13 Mơ hình mơ liệu in vivo miếng dán dựa liệu phần trăm thấm in vitro qua da chuột môi trường Tween 54 KIẾN NGHỊ - Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến phương pháp đánh giá in vitro miếng dán thiết bị thử tính thấm khác (thiết bị thử tính thấm có dịng chảy để khắc phục nhược điểm thiết bị Franz); loại màng thử khuếch tán (da thỏ sinh khả dụng in vivo đánh giá thỏ); môi trường khuếch tán khác (mơi trường pH 5,5 bề mặt sinh lý da có pH 5,5) để có tương quan chặt chẽ - Nghiên cứu ảnh hưởng thành phần công thức bào chế miếng dán ứng dụng mơ hình IVIVC để xây dựng công thức miếng dán tối ưu - Nghiên cứu sử dụng mơ hình PBPK để đánh giá đặc tính ADME dược chất từ ứng dụng nghiên cứu phát triển công thức bào chế miếng dán 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Bộ y tế (2015), "Hướng dẫn chẩn đoán xử trí ngộ độc", tr 17-19 Bộ y tế (2017), Dược điển Việt Nam V, Nhà xuất Y học, Hà Nội Đinh Đại Độ (2015), Đánh giá tác dụng cải thiện sa sút trí nhớ thực nghiệm ltetrahydropalmatin, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội Bùi Quang Đông (2018), Nghiên cứu tương quan in vivo - in vitro ltetrahydropalmatin, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội Nguyễn Trần Linh (2005), Mơ hình hóa so sánh đồ thị giải phóng dược chất từ dạng bào chế, Trường Đại học Dược Hà Nội Nguyễn Như Nam (2021), Ứng dụng tương quan in vitro - in vivo bào chế pellet l- tetrahydropalmatin giải phóng kéo dài, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội Bùi Đức Nhật (2017), Tiếp tục nghiên cứu bào chế đánh giá hệ phân tán rắn vơ định hình chứa l-tetrahydropalmatin, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội Tài liệu Tiếng Anh Abouir Kenza, Caroline F Samer, et al (2021), "Reviewing Data Integrated for PBPK Model Development to Predict Metabolic Drug-Drug Interactions: Shifting Perspectives and Emerging Trends", Frontiers in Pharmacology 12 Bischoff KB, RL Dedrick, et al (1971), "Methotrexate pharmacokinetics", Journal of pharmaceutical sciences 60(8), pp 1128-1133 10 Chao-Wu Li, Zhang Shuo, et al (2011), "Determination of L-tetrahydropalmatine in human plasma by HPLC and pharmacokinetics of its disintegrating tablets in healthy Chinese", European journal of drug metabolism and pharmacokinetics 36(4), pp 257-262 11 Chen Yan-Jiong, Yan-Ling Liu, et al (2012), "Tetrahydropalmatine protects against methamphetamine-induced spatial learning and memory impairment in mice", Neuroscience bulletin 28(3), pp 222-232 12 Chilukuri D Murthy G Sunkara (2019), Pharmaceutical product development in vitro-in vivo correlation, Drug and pharmaceutical sciences 13 Chu Hongyuan, Guozhang Jin, et al (2008), "Recent development in studies of tetrahydroprotoberberines: mechanism in antinociception and drug addiction", Cellular and molecular neurobiology 28(4), pp 491-499 14 Dunnex Adrian, Thomas O’Hara, et al (1997), "Level A in Vivo− in Vitro Correlation: Nonlinear Models and Statistical Methodology", Journal of pharmaceutical sciences 86(11), pp 1245-1249 15 Food and Drug Administration (1997), Guidance for Industry Extended Release Oral Dosage Forms: Development, evaluation, and application of In Vitro/In Vivo Correlations 16 Ghiculescu RA (2008), "Therapeutic drug monitoring: which drugs, why, when and how to it", Aust Prescr, pp 42 - 44 17 Ghosh Tapash K (2020), Dermal Drug Delivery: From Innovation to Production, CRC Press 18 Ho Kwong Yat and Kalliopi Dodou (2007), "Rheological studies on pressuresensitive silicone adhesives and drug-in-adhesive layers as a means to characterise adhesive performance", International journal of pharmaceutics 333(1-2), pp 2433 19 Horowitz Rivka S, Kim Feldhaus, et al (1996), "The clinical spectrum of Jin Bu Huan toxicity", Archives of Internal Medicine 156(8), pp 899-903 20 Jones Hannah M, Iain B Gardner, et al (2009), "Modelling and PBPK simulation in drug discovery", The AAPS journal 11(1), pp 155-166 21 Kadir Ron, Dov Stempler, et al (1987), "Delivery of theophylline into excised human skin from alkanoic acid solutions: a “push-pull” mechanism", Journal of pharmaceutical sciences 76(10), pp 774-779 22 Kalia Yogeshvar N and Richard H Guy (2001), "Modeling transdermal drug release", Advanced drug delivery reviews 48(2-3), pp 159-172 23 Kim Tae Hwan, Soyoung Shin, et al (2017), "Development of a physiologically relevant population pharmacokinetic in vitro–in vivo correlation approach for designing extended-release oral dosage formulation", Molecular Pharmaceutics 14(1), pp 53-65 24 Li Chunmei, Chao Liu, et al (2011), "Correlation between rheological properties, in vitro release, and percutaneous permeation of tetrahydropalmatine", Aaps Pharmscitech 12(3), pp 1002-1010 25 Liu Hailong Huang Yulan, Gao Hong, Chen Lijuan (2011), Tetrahydropalmatine transdermal patch and preparation method thereof, Editor^Editors, Trung Quốc 26 Lu Ying, Sungwon Kim, et al (2011), "In vitro–in vivo correlation: Perspectives on model development", International journal of pharmaceutics 418(1), pp 142148 27 Meyers Robert A (2002), Encyclopedia of physical science and technology, Academic 28 Mittapelly Naresh, Gitu Pandey, et al (2018), "In depth analysis of pressuresensitive adhesive patch-assisted delivery of memantine and donepezil using physiologically based pharmacokinetic modeling and in vitro/in vivo correlations", Molecular pharmaceutics 15(7), pp 2646-2655 29 Mutalik Srinivas, Harendra S Parekh, et al (2009), "A combined approach of chemical enhancers and sonophoresis for the transdermal delivery of tizanidine hydrochloride", Drug delivery 16(2), pp 82-91 30 National Center for Biotechnology Information (2021), PubChem Compound Summary for CID 5417, Rotundine, PubChem, database on the Internet, accessed, from https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Rotundine 31 Nicoli S, C Padula, et al (2008), "Characterization of rabbit ear skin as a skin model for in vitro transdermal permeation experiments: histology, lipid composition and permeability", Skin pharmacology and physiology 21(4), pp 218-226 32 Pang Zhigong, Baoqi Wang, et al (1995), "Study on pharmacokinetics of tetrahydropalmatine in rabbit plasma", Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis 15(3), pp 13-15 33 Park Eun-Seok, Seok-Jung Chang, et al (2001), "Effects of adhesives and permeation enhancers on the skin permeation of captopril", Drug development and industrial pharmacy 27(9), pp 975-980 34 Pastore Michael N, Yogeshvar N Kalia, et al (2015), "Transdermal patches: history, development and pharmacology", British journal of pharmacology 172(9), pp 2179-2209 35 Patel Hiren J, Darshan G Trivedi, et al (2011), "Penetration enhancers for transdermal drug delivery system: A review", Journal of Pharmaceutics and Cosmetology 1(2), pp 67-80 36 Proost Johannes Holger (1987), "Critical evaluation of the determination of bioavailability by numerical deconvolution", Computers in biology and medicine 31, pp 1746-51 37 Rojas Gómez Ricardo and Piedad Restrepo Valencia (2015), "In vitro-in vivo Pharmacokinetic correlation model for quality assurance of antiretroviral drugs", Colombia Médica 46(3), pp 109-116 38 Sager Jennifer E, Jingjing Yu, et al (2015), "Physiologically based pharmacokinetic (PBPK) modeling and simulation approaches: a systematic review of published models, applications, and model verification", Drug Metabolism and Disposition 43(11), pp 1823-1837 39 Sakore SOMNATH and BHASWAT Chakraborty (2011), "In vitro–in vivo correlation (IVIVC): a strategic tool in drug development", J Bioequiv Availab S 3, p 40 Shah Vinod P, Yi Tsong, et al (1998), "In vitro dissolution profile comparison— statistics and analysis of the similarity factor, f2", Pharmaceutical research 15(6), pp 889-896 41 Song Ling, Yi Zhang, et al (2018), "Development of a Physiologically Based Pharmacokinetic Model for Sinogliatin, a First-in-Class Glucokinase Activator, by Integrating Allometric Scaling, In Vitro to In Vivo Exploration and Steady-State Concentration–Mean Residence Time Methods: Mechanistic Understanding of its Pharmacokinetics", Clinical Pharmacokinetics 57(10), pp 1307-1323 42 Stillhart Cordula, Xavier Pepin, et al (2019), "PBPK absorption modeling: establishing the in vitro–in vivo link—industry perspective", The AAPS Journal 21(2), pp 1-13 43 Suarez-Sharp Sandra, Min Li, et al (2016), "Regulatory experience with in vivo in vitro correlations (IVIVC) in new drug applications", The AAPS journal 18(6), pp 1379-1390 44 Tran Son Cao, Nguyen Dinh Duc, et al (2016), "Pharmacokinetic analysis of levo-tetrahydropalmatine in rabbit plasma by rapid sample preparation and liquid chromatography–tandem mass spectrometry", Journal of Chromatography B 1008, pp 81-86 45 Tung Nguyen-Thach, Cao-Son Tran, et al (2018), "Development of solidified self-microemulsifying drug delivery systems containing l-tetrahydropalmatine: design of experiment approach and bioavailability comparison", International journal of pharmaceutics 537(1-2), pp 9-21 46 Wang Jia Bei and John R Mantsch (2012), "l-tetrahydropalamatine: A potential new medication for the treatment of cocaine addiction", Future medicinal chemistry 4(2), pp 177-186 47 Williams Adrian C and Brian W Barry (2012), "Penetration enhancers", Advanced drug delivery reviews 64, pp 128-137 48 Wishart Ds F Y Guo Ac, Lo Ej, Marcu a, Grant Jr, Sajed T, Johnson D, Li C, Sayeeda Z, Assempour N, Iynkkaran I, Liu Y, Maciejewski a, Gale N, Wilson a, Chin L, Cummings R, Le D, Pon a, Knox C, Wilson M, (2021), DrugBank 5.0: Tetrahydropalmatine, database on the Internet, accessed 13 August-2021 49 Xie Wei-Jie and Zhang Yong-Ping (2016), "Pharmacokinetic study of dltetrahydropalmatine patches by UPLC-MS/MS in rabbits", Traditional Medicine Research 1(4), p 206 50 Yang Yang, Prashanth Manda, et al (2015), "Development and validation of in vitro–in vivo correlation (IVIVC) for estradiol transdermal drug delivery systems", Journal of controlled release 210, pp 58-66 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Hình ảnh sắc kí đồ định lượng HPLC với detector UV Hình PL1.1 Sắc ký đồ mẫu chuẩn định lượng l-THP HPLC Hình PL1.2 Sắc ký đồ mẫu thử định lượng l-THP HPLC Phụ lục 2: Hình ảnh sắc kí đồ định lượng LC-MS/MS Hình PL2.1 Sắc ký đồ mẫu chuẩn định lượng L-THP LC-MS/MS Hình PL2.2 Sắc ký đồ mẫu thử định lượng l-THP LC-MS/MS Phụ lục Kết khảo sát khoảng tuyến tính phương pháp định lượng LC – MS/MS Nồng độ l-THP (ng/ml) 20 50 100 200 𝐒𝐥−𝐓𝐇𝐏 1949 3341 8616 16597 32917 60927 𝐒𝐛𝐞𝐫𝐛𝐞𝐫𝐢𝐧 27629 26923 27081 26730 28307 27468 𝐒𝐥−𝐓𝐇𝐏 /𝐒𝐛𝐞𝐫𝐛𝐞𝐫𝐢𝐧 0,070542 0,124095 0,318157 0,620913 1,162857 2,218108 Phụ lục 4: Mức độ ảnh hưởng thông số nhạy cảm miếng dán theo môi trường in vitro khác Phụ lục 3.1 Mức độ ảnh hưởng thông số nhạy cảm miếng dán theo môi trường ethanol Phụ lục 3.2 Mức độ ảnh hưởng thông số nhạy cảm miếng dán theo môi trường PG Phụ lục 3.3 Mức độ ảnh hưởng thông số nhạy cảm miếng dán theo môi trường Tween Phụ lục 5: Giá trị R2 mơ hình mơ liệu in vivo miếng dán theo môi trường in vitro khác Ethanol R2 Patch Patch 0,984 PG Patch 0,823 -58,536 Patch Tween Patch Patch Patch Patch Patch -0,865 0,3902 -0,608 0,873 -2,515 0,344 Phụ lục Các thông tin thu thập đặc tính dược chất sinh lý thỏ sử dụng GastroPlus Thông số Giá trị Nguồn tham khảo LogP 3,68 Phần mềm ADMET Predictor Độ tan pH 7,4 0,0207 mg/mL Kết thực nghiệm Hệ số khuếch tán 0,68.105 cm2/s Phần mềm ADMET Predictor Khối lượng phân tử 355,44 Phần mềm ADMET Predictor LogD 3,645 Phần mềm ADMET Predictor pKa 6,29 Phần mềm ADMET Predictor Hệ số khuếch tán lớp mơ/ biểu bì 0,7 Phần mềm ADMET Predictor Chiều dày lớp sừng da thỏ 11,7 m [31] Chiều dày lớp biếu bì da thỏ 17 m [31] Chiều dày lớp hạ bì da thỏ 247,7 m [31] Phụ lục Dữ liệu phần trăm thấm l-THP qua da chuột miếng dán môi trường khác (TB ± SD) Đơn vị: (%) Thời Môi trường ethanol Môi trường PG Môi trường Tween gian Patch Patch Patch Patch Patch Patch Patch Patch Patch (giờ) 3 0 0 0 0 0 3,11 ± 0,72 ± 1,68 ± 1,36 0,38± 0,03 0,27 ± 0,90 0,05 0,45 16,17 ± 3,15 ± 8,42 ± 0,55 ± 0,04 ± 0,10 ± 1,14 ± 0,88 ± 0,28 ± 5,85 1,00 7,20 0,63 0,03 0,07 0,40 0,59 0,20 34,23 ± 7,30 ± 17,42 3,61 ± 0,11 ± 0,49 ± 2,61 1,64 ± 0,60 ± 13,32 2,10 ±13,23 3,78 0,05 0,53 ±0,85 0,85 0,30 52,29 ± 12,64 ± 27,20 ± 5,07 0,26 ± 1,56 ± 3,79 ± 2,09 ± 1,00 ± ±4,80 0,16 1,59 1,35 1,35 0,49 6,46 ± 0,46 2,10 ± 4,40 ± 2,63 ± 1,38 ± 5,41 ±0,28 1,80 1,56 1,61 0,75 5,87 ± 9,75 ± 2,62 2,12 24 15,89 3,47 18,91 59,16 ± 15,96 ± 31,87 ± 16,89 101,76 ± 11,13 4,19 21,11 69,05 ± 86,90 ± 28,48 ± 10,58± 12,32 20,89 12,27 0,85 16,05 ± 12,34 ± 3,16 6,67 Phụ lục Dữ liệu nồng độ l-THP huyết tương thỏ (ng/ml) sau sử dụng miếng dán khác Patch Đơn vị: ng/ml Thời gian (giờ) Con Con Con Con TB SD 0 0 0 0.5 17,173 15,870 10,712 NA 14,585 2,790 19,397 27,867 24,020 NA 23,761 3,463 15,372 35,479 NA 41,957 30,936 11,319 16,393 24,928 30,573 32,138 26,008 6,165 10,373 28,423 19,134 23,242 20,293 6,606 12,631 20,498 13,231 19,619 16,495 3,584 10,153 15,579 16,046 19,359 15,284 3,301 8,577 14,238 15,642 17,356 13,953 3,294 24 3,818 3,764 7,213 4,359 4,789 1,419 Patch Đơn vị: ng/ml Thời gian (giờ) Con Con Con Con TB SD 0 0 0 2,740 4,738 2,286 4,017 3,445 0,980 4,929 2,362 3,985 3,205 3,620 0,949 7,462 3,496 4,633 6,482 5,518 1,548 Thời gian (giờ) Con Con Con Con TB SD 9,953 20,672 7,041 6,136 10,950 5,787 6,089 9,10 9,557 5,390 7,587 1,865 11,444 18,407 NA 5,429 11,760 5,303 19,543 4,844 8,595 5,558 9,635 5,891 14,930 3,711 7,166 8,099 8,476 4,069 NA 6,590 10,082 4,914 7,195 2,153 24 NA NA 2,059 2,602 2,330 0,272 Patch Đơn vị: ng/ml Thời gian (giờ) Con Con Con Con TB SD 0 0 0 0.5 2,902 11,004 10,069 6,351 7,582 3,214 NA 6,233 12,127 8,358 8,906 2,437 NA 7,290 11,023 7,338 8,550 1,748 11,759 6,281 15,445 7,614 10,274 3,604 4,304 5,773 NA 8,091 6,056 1,559 NA 7,854 12,532 9,839 10,075 1,917 9,013 22,138 24,296 6,968 15,604 7,686 23,.452 5,393 25,947 5,708 15,125 9,616 8,049 5,312 16,889 5,903 9,038 4,646 24 4,286 5,177 13,062 7,105 7,408 3,420 IV Đơn vị: ng/ml Thời gian (phút) Con Con Con TB SD 0 0 0 4611,5 3095,5 5422,37 4376,46 964,37 15 1472,5 1093,0 914,69 1160,06 232,62 30 666,38 459,11 534,22 553,24 85,68 45 566,9 342,54 372,75 427,40 99,41 60 520,69 263,6 354,39 379,56 106,45 120 420 224,65 358,97 334,54 81,60 240 0 0 ... ? ?Xây dựng tương quan in vitro - in vivo cho hệ phân ph? ?i thuốc qua da chứa ltetrahydropalmatin” v? ?i mục tiêu sau: Bước đầu xây dựng mơ hình IVIVC mức độ thấm in vitro mức độ hấp thu in vivo cho hệ. .. dạng thuốc qua da l-THP nên việc phát triển dạng bào chế TDDS chứa l-THP dựa kiến thức tương quan in vitro – in vivo hướng hợp lý Tương quan in vitro – in vivo (in vitro - in vivo correlation - IVIVC)... in vivo 1.3.5.1 Các mơ hình tương quan in vitro – in vivo mức A Tương quan in vitro – in vivo mức A xác định mơ hình tốn học dự đốn m? ?i liên hệ tất liệu in vitro theo th? ?i gian toàn đáp ứng in