Giám sát mức độ làm sạch môi trường bằng phương pháp định lượng ATP-ADP-AMP (A3)

Bài viết Giám sát mức độ làm sạch môi trường bằng phương pháp định lượng ATP-ADP-AMP (A3) trình bày đánh giá mức độ sạch môi trường, dụng cụ phẫu thuật và dụng cụ nội soi, tay nhân viên y tế bằng phương pháp định lượng ATP-ADP-AMP (A3). So sánh giữa phương pháp định lượng ATP-ADPAMP (A3) và phương pháp đếm tế bào vi khuẩn trên cùng các mẫu bề mặt mẫu môi trường, dụng cụ phẫu thuật, dụng cụ phẫu thuật nội soi và tay nhân viên y tế.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 Nghiên cứu Y học GIÁM SÁT MỨC ĐỘ LÀM SẠCH MÔI TRƢỜNG BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG ATP-ADP-AMP (A3) Võ Thị Hồng Thoa1, Nguyễn Thị Kim Loan1, Phùng Mạnh Thắng1, Lê Thị Anh Thư1, Nguyễn Phúc Tiến1, Lê Thị Kim Anh1, Nguyễn Lê Thị Uyên Uyên1, Phan Tiến Dũng1, Trương Thiên Phú2, Lê Phương Mai2, Ngô Minh Quân2, Lê Văn Thanh2, Nguyễn Minh Thanh3, Nguyễn Thị Thanh Bình4 TĨM TẮT Mục tiêu: Đánh giá mức độ môi trường, dụng cụ phẫu thuật dụng cụ nội soi, tay nhân viên y tế phương pháp định lượng ATP-ADP-AMP (A3) So sánh phương pháp định lượng ATP-ADPAMP (A3) phương pháp đếm tế bào vi khuẩn mẫu bề mặt mẫu môi trường, dụng cụ phẫu thuật, dụng cụ phẫu thuật nội soi tay nhân viên y tế Qua đưa khuyến cáo mức độ làm bệnh viện Chợ Rẫy Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Cắt ngang mơ tả, phân tích, thực từ tháng 4/2019 đến tháng 11/2019; đơn vị Hồi sức tích cực khu A khu D, khoa Phẫu thuật Gây mê hồi sức, đơn vị Tiếp liệu trùng, Khoa Nội soi Sử dụng que LuciPac A3 surface (đo độ sạch); Đồng thời thực nuôi cấy đếm tổng tế bào vi khuẩn (CFU) theo phương pháp truyền thống mẫu khảo sát Kết quả: Số lượng mẫu A3 khảo sát 246 mẫu phân bố khoa; tỷ lệ mẫu không đạt chung: 50,80% (125/246) Mẫu không đạt theo khoa: Hồi sức cấp cứu D: 70% (35/50); Hồi sức cấp cứu A: 50% (5/10); Đơn vị tiệt khuẩn trung tâm: 48,7% (39/80); Khoa Nội soi: 45,60% (21/46); Khoa Phẫu thuật gây mê hồi sức: 41,70% (25/60) Bề mặt bàn mổ: 100% (20/20) Thành giường bệnh nhân: 70% (14/20); Tủ đầu giường bệnh nhân: 65% (13/20); Bề mặt máy thở: 65% (13/20); Dụng cụ nội soi: 45,60% (21/46); Tay phẫu thuật viên: 12,50% (5/40); Số lượng mẫu khảo sát vi sinh: 246; Số lượng trung bình vi khuẩn: 89 CFU/mẫu Tỷ lệ dương tính (khơng đạt): 25,61% (63/246) So sánh phương pháp A3 phương pháp đếm tế bào vi khuẩn mẫu môi trường bề mặt giường, tủ đầu giường, bàn phẫu thuậtt, bề mặt máy thở cho thấy A3 nhậy gấp lần (75% với 36,6%), với mẫu tay phẫu thuật viên, dụng cụ nội soi kết gần tương đồng phương pháp (12,5% với 10%) (45,7% với 47,8%) Kết luận: Công việc làm bệnh viện chưa tuân thủ đầy đủ khoa, nên giám sát công việc làm với hệ thống phát quang sinh học định lượng A3 phương pháp có kết nhanh chóng có độ xác cao khuyến cáo bệnh viện có xu hướng lưa chọn Từ khóa: ATP-ADP-AMP (A3), phát quang sinh học ABSTRACT SUPERVISION OF ENVIRONMENTAL CLEANING BY QUANTITY METHOD ATP-ADP-AMP (A3) Vo Thi Hong Thoa, Nguyen Thi Kim Loan, PhungManh Thang, Le Thi Anh Thu, Nguyen Phuc Tien, Le Thi Kim Anh, Nguyen Le Thi Uyen Uyen, Phan Tien Dung, Truong Thien Phu, Le Phuong Mai, Ngo Minh Quan, Le Van Thanh, Nguyen Minh Thanh, Nguyen Thi Thanh Binh * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Vol 25 - No - 2021: 07 - 13 2Khoa Vi Sinh BV Chợ Rẫy Khoa Kiểm soát Nhiễm khuẩn BV Chợ Rẫy 3Khoa Sinh Hóa BV Chợ Rẫy 4Phịng Quản trị Vật tư BV Chợ Rẫy Tác giả liên lạc: ThS Võ Thị Hồng Thoa ĐT: 0907865568 Email: thoavo2011@gmail.com Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 Nghiên cứu Y học Objectives: To evaluate the effectiveness of the process of cleaning environmental surfaces, medical equipment, surgical instruments and endoscopic instruments by quantifying ATP-ADP-AMP (A3) Comparison between quantitative method of ATP-ADP-AMP (RLU) and bacterial cell count method Thereby giving recommendations on the level of cleaning at Cho Ray hospital Methods: Description, cross-sectional, analysis study conducted in intensive care units, operating room, medical equipments, surgical instrument, endoscopic Use the LuciPac A3 surface and to culture of total bacterial cell count (CFU) Results: Number of A3 samples surveyed 246 samples distributed in the faculties; The sample rate did not reach the general level: 50.80% (125/246) The sample did not pass by department: The intensive care unit D: 70% (35/50); The intensive care unit A: 50% (5/10); The Central sterile services department: 48.7% (39/80); The Endoscopy department: 45.60% (21/46); The Operating room: 41.70% (25/60) The number of instrument samples failed: sorted by: Operating table surface: 100% (20/20) Patient beds: 70% (14/20); Bedside cabinets of patients: 65% (13/20); Surface of ventilator: 65% (13/20); Endoscopic tools: 45.60% (21/46); Hand of Surgeon after washing: 12.50% (5/40); Number of microbiological survey samples: 246; Average number of bacteria: 89 CFU/sample Positive rate (Fail): 25.61% (63/246) Comparison of A3 method and bacterial cell count method on environmental samples of bed surface, bedside cabinets of patients, surgical table, ventilator surface showed that A3 method is twice as sensitive (75% with 36.3%); With the samples of surgeons' hands, endoscopic instruments: The results are almost similar between the two methods (12.5% with 10%) (45.7% with 47.8%); Conclusions: Environment cleaning surveillance is an important in all hospitals to reduce hospital association infection A3 is one of method to improve faster and more accurate for environment surveillance Therefore, A3 method should be use in all hospitals in Vietnam Keywords: ATP-ADP-AMP (A3), bioluminescence ĐẶT VẤN ĐỀ ADP-AMP) (A3) chiết xuất tế bào vi khuẩn Nhiều nghiên cứu cho thấy môi trường bề mặt ô nhiễm nguyên nhân quan trọng dẫn đến lan truyền mầm bệnh gây vụ dịch bệnh viện (BV) Vi sinh vật (VSV) gây ô nhiễm môi trường bề mặt thường gặp Clostridium difficile, Enterococci kháng vancomycin, Staphylococcus aureus kháng methicillin (MRSA), Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Norovirus Phương pháp đánh giá có mặt chất hữu dù nhỏ bề mặt môi trường nhiễm bẩn vi sinh vật, để chứng minh quy trình làm bề mặt giường, tủ, máy thở, tay phẫu thuật viên, dụng cụ nội soi dụng cụ thay băng, cắt làm trước so sánh độ nhạy (A3) với phương pháp nuôi cấy định lượng vi khuẩn truyền thống, mong muốn có kết nhanh xác kịp thời nhắc nhở nhân viên làm vệ sinh môi trường nhân viên y tế thực quy trình nhằm nâng cao chất lượng khám điều trị giúp bệnh nhân an tâm nằm viện khách hài lòng bước chân vào bệnh viện Ngun nhân gây nhiễm mơi trường bề mặt việc phát tán VSV gây bệnh từ người bệnh (NB), nhân viên y tế (NVYT) nhiễm khuẩn mang VSV định cư vào môi trường qua hoạt động chăm sóc, điều trị(0) Xuất phát từ vấn đề trên, tiến hành thực đánh giá tính hữu ích, khả thi phương pháp định lượng mức độ phát quang sinh học Adenosine triphosphate, Adenosine diphosphate, Adenosine monophosphate (ATP- Mục tiêu Đánh giá mức độ bề mặt môi trường, dụng cụ phẫu thuật, dụng cụ nội soi tay nhân viên y tế phương định lượng (A3) So sánh phương pháp định lượng ATP- Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 ADP-AMP (A3) phương pháp đếm tế bào vi khuẩn mẫu bề mặt mẫu môi trường, dụng cụ phẫu thuật, dụng cụ phẫu thuật nội soi tay nhân viên y tế ĐỐI TƢỢNG- PHƢƠNG PHÁP NGHIÊNCỨU Đối tƣợng nghiên cứu Mẫu bề mặt môi trường khu vực: (khoa Hồi sức Cấp cứu, phòng mổ) Tay nhân viên y tế: (tay Phẫu thuật viên) Dụng cụ phẫu thuật (tại đơn vị Tiếp liệu trùng gồm: thay băng, kelly, kéo) Dụng cụ nội soi (tại khoa Nội soi) Tiêu chuẩn lựa chọn Các bề mặt có nguy cao, dụng cụ phẫu thuật có nhiều góc ngách khó vệ sinh Dụng cụ nội soi khó làm lịng ống Phƣơng pháp nghiên cứu Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu mô tả Cỡ mẫu Chọn mẫu thuận tiện với cỡ mẫu n=40 cho mẫu bề mặt khác Tổng số mẫu N= 160 Tay Phẫu thuật viên (PTV): 40 Môi trường (bàn mổ, giường, máy thở, tủ): 40 Dụng cụ phẫu thuật: 40 Dụng cụ nội soi: 40 Phương pháp thực Bàn mổ làm chuẩn bị cho bệnh nhân (BN) phẫu thuật, giường BN xuất viện làm sạch, bề mặt máy thở tủ làm vệ sinh thường quy Tay PTV rửa trước vào phòng phẫu thuật Dụng cụ thay băng, kéo cắt rửa tay máy chuẩn bị đóng gói tiệt khuẩn Dụng cụ nội soi khử khuẩn mức độ cao làm quy trình chuẩn bị thực cho BN mới, phết lịng ống chỗ khóa Nghiên cứu Y học mở đóng vào máy Olympus Phương pháp lấy mẫu A3 Dụng cụ: Que LuciPac A3 surface Thực lấy mẫu bề mặt máy thở, thành giường, bàn mổ, tủ đầu giường Lấy que LuciPac A3 surface khỏi tủ lạnh trước 15 phút, sau lấy que tăm khỏi ống test, làm ẩm nước cất, glucoza 5% nước muối sinh lý Nacl 9%o vô khuẩn xong bắt đầu phết lấy mẫu bề mặt máy thở, thành giường, bàn mổ, tủ đầu giường, tùy theo số mẫu loại, kích thước phết khoảng 10 x 10 cm, sau cho vào ống test lại surface  tiến hành kích hoạt que test sau 10 giây đưa máy đọc Lumitester PD-30 ghi nhận kết Thực lấy mẫu bàn tay phẫu thuật viên Lấy que LuciPac A3 surface khỏi tủ lạnh trước 15 phút, sau lấy que tăm khỏi ống test, làm ẩm nước cất, glucoza 5% nước muối sinh lý vô khuẩn xong bắt đầu phết mạnh vào vị trí đầu ngón trỏ, kẽ ngón tay đầu ngón tay, lịng bàn tay kích thước phết khoảng 10 x 10 cm, sau cho vào ống test lại surface  tiến hành kích hoạt que test sau 10 giây đưa máy đọc Lumitester PD-30 ghi nhận kết Thực lấy mẫu dụng cụ phẫu thuật kelly, kéo Lấy que LuciPac A3 surface khỏi tủ lạnh trước 15 phút, sau lấy que tăm bơng khỏi ống test, làm ẩm nước cất, glucoza 5% nước muối sinh lý vô khuẩn xong bắt đầu phết vào mặt cắt kéo cưa kelly với kích thước phết khoảng 10 x 10 cm, sau cho vào ống test lại surface  tiến hành kích hoạt que test sau 10 giây đưa máy đọc Lumitester PD-30 ghi nhận kết Thực lấy mẫu dụng cụ nội soi Lấy Que LuciPac A3 surface khỏi tủ lạnh trước 15 phút, lấy que tăm khỏi ống test, làm ẩm nước cất, glucoza 5% nước muối sinh lý vô khuẩn xong bắt đầu phết vào bên lòng ống nội soi, nơi có nhiều góc ngách cạnh khớp nối ống Olympus nội soi với Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 Nghiên cứu Y học kích thước phết khoảng 10 x 10 cm, sau cho vào ống test lại surface  tiến hành kích hoạt que test sau 10 giây đưa máy đọc Lumitester PD-30 ghi nhận kết Kỹ thuật lấy mẫu cấy định lượng vi khuẩn truyền thống lúc lấy mẫu A3 Thực lấy mẫu bề mặt máy thở, thành giường, bàn mổ, tủ đầu giường: Lấy que LuciPac A3 surface khỏi tủ lạnh trước 15 phút, lấy que tăm khỏi ống test, làm ẩm dung dịch vô khuẩn glucoza 5% 1ml, bắt đầu phết lấy mẫu bề mặt máy thở, thành giường, bàn mổ, tủ đầu giường tùy theo số mẫu loại, kích thước khoảng 10 x 10 cm, sau cho vào tube có chứa ml dung dịch glucoza 5%, xoay tăm khoảng 10 lần, ép nhẹ vào thành ống trước lấy mang đo định lượng tổng ATP-ADP-AMP (A3) Tube nước glucoza 5% cịn lại đậy nút kín chuyển khoa Vi sinh cấy định lượng tổng tế bào vi khuẩn (CFU) glucoza 5% cịn lại đậy nút kín chuyển khoa Vi sinh cấy định lượng tổng tế bào vi khuẩn (CFU) Thực lấy mẫu dụng cụ nội soi: Lấy Que LuciPac A3 surface khỏi tủ lạnh trước 15 phút, lấy que tăm khỏi ống test, làm ẩm dung dịch vô khuẩn glucoza 5% 1ml, bắt đầu phết vào bên lịng ống nội soi, nơi có nhiều góc ngách cạnh khớp nối ống Olympus kích thước khoảng 10 x 10 cm, sau cho vào ống tube xoay tăm khoảng 10 lần, ép nhẹ vào thành ống trước lấy đo định lượng tổng ATP-ADP-AMP (A3) Tube nước glucoza 5% lại đậy nút kín chuyển khoa Vi sinh cấy định lượng tổng tế bào vi khuẩn (CFU) Kỹ thuật cấy định lượng vi khuẩn khoa Vi sinh: + Chuẩn bị hộp thạch MHA đủ cho với mẫu bệnh phẩm cần định lượng, đĩa cho mẫu + Dùng bút lông dầu ghi tên, ngày lấy mẫu vào mặt hộp thạch Thực lấy mẫu bàn tay phẫu thuật viên: Lấy Que LuciPac A3 surface khỏi tủ lạnh trước 15 phút, lấy que tăm khỏi ống test, làm ẩm dung dịch vô khuẩn glucoza 5% 1ml, bắt đầu phết vào kẽ ngón tay, móng tay, lịng bàn tay ngón trỏ kích thước khoảng 10 x 10 cm, sau cho vào tube xoay vào tăm khoảng 10 lần, ép nhẹ vào thành ống trước lấy đo định lượng tổng ATP-ADP-AMP (A3) Tube nước glucoza 5% cịn lại đậy nút kín chuyển khoa Vi sinh cấy định lượng tổng tế bào vi khuẩn (CFU) Thực lấy mẫu dụng cụ phẫu thuật kelly, kéo: Lấy Que LuciPac A3 surface khỏi tủ lạnh trước 15 phút, lấy que tăm khỏi ống test, làm ẩm dung dịch vô khuẩn glucoza 5% 1ml, bắt đầu phết vào mặt cắt kéo, cưa kelly kích thước khoảng 10 x 10 cm, sau cho vào tube xoay vào tăm bơng khoảng 10 lần, ép nhẹ vào thành ống trước lấy đo định lượng tổng ATP-ADP-AMP (A3) Tube nước 10 + Đốt đèn cồn, khử trùng khuyên cấy + Dùng pipet Eppendorf vô trùng lấy 10μl dung dịch Glucoza 5% có chứa bệnh phẩm nhỏ lên mặt đĩa thạch, đậy nắp tube mẫu bệnh phẩm giữ tủ lạnh 2-4 độ (sẽ thải bỏ sau có kết cấy) + Dùng khuyên cấy tiệt trùng dàn bệnh phẩm toàn bề mặt đĩa thạch + Chờ mặt thạch vừa khô, lật úp hộp thạch mang ủ + Các mẫu bệnh phẩm ủ ấm nhiệt độ 37 C điều kiện khí Thời gian ủ ấm: 24 48 Sau ủ, kỹ thuật viên - khoa Vi sinh khoa Kiểm soát Nhiễm khuẩn đếm khuẩn lạc mắt thường ghi lại số lượng đơn vị khuẩn lạc VK (CFUs) đếm theo loại khuẩn lạc vào phiếu xét nghiệm Những khuẩn lạc có tiềm gây bệnh nhuộm soi, nuôi cấy phân lập, định danh VK Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 Tiêu chí đánh giá mức độ phương pháp đo định lượng (A3) Tiêu chí đánh giá Với dụng cụ: Các mẫu Đạt trị số đo: 100 RLU; Với mẫu môi trường: Các mẫu Đạt trị số đo: 500 RLU Với mẫu tay phẫu thuật viên (PTV): Các mẫu Đạt trị số đo: 2.000 RLU * Đánh giá mức độ phương pháp đếm tổng tế bào vi khuẩn truyền thống khoa Vi sinh Bệnh Viện Chợ Rẫy thực theo quy trình Phương pháp khảo sát Khảo sát theo phương pháp mô tả cắt ngang Lấy mẫu bề mặt môi trường sau làm khăn lau bề mặt thiết bị máy thở, thành giường bệnh nhân, bàn phẫu thuật khoa Phẫu thuật gây mê hồi sức (PTGMHS) Hồi sức cấp cứu khu D Lấy mẫu dụng cụ phẫu thuật: Lấy mẫu dụng cụ làm tay máy đơn vị Tiếp liệu trùng khoa Kiểm soát nhiễm khuẩn Nghiên cứu Y học Lấy mẫu dụng cụ nội soi: Lấy lịng ống nội soi nơi có nhiều góc ngách cạnh khớp nối sau khử khuẩn mức độ cao rửa khoa Nội soi Lấy mẫu tay PTV sau làm theo quy trình rửa tay ngoại khoa khoa Phẫu thuật gây mê hồi sức (PTGMHS) Tất mẫu đo định lượng ATPAMP-ADP đồng thời song song làm định lượng tổng tế bào vi khuẩn (CFU) truyền thống Phương pháp thống kê phân tích số liệu Các kết nghiên cứu nhập thành sở liệu định dạng Excel, Epidata 3.1 phân tích theo phương pháp thống kê mơ tả KẾT QUẢ Trong 246 mẫu song song vừa làm A3 vừa đếm tế bào vi khuẩn khoa vi sinh, cho thấy A3 có độ nhạy cao phát mẫu nhiễm bẩn nhanh mẫu thành giường, dụng phẫu thuật có ý nghĩa thống kê P=0,03 P=0,04 Nhìn chung với 246 mẫu song song vừa A3 vừa đếm tế bào vi khuẩn truyền thống có ý nghĩa thống kê p