(LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu thành phần hóa học cây cỏ mực (eclipta prostrata l , asteraceae)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN -*** Nguyễn Thị Thơi NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY CỎ MỰC (ECLIPTA PROSTRATA L., ASTERACEAE) LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2011 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN -*** Nguyễn Thị Thơi NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY CỎ MỰC (ECLIPTA PROSTRATA L., ASTERACEAE) Chuyên ngành: Hóa Học Hữu Cơ Mã số: 60 44 27 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS TS Phan Minh Giang Hà Nội – 2011 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com MỤC LỤC MỞ ĐẦU …….1 Chƣơng 1: TỔNG QUAN …….2 1.1 Khái quát Eclipta prostrata L (syn Eclipta alba L.) (Asteraceae) …….2 1.1.1 Đặc điểm thực vật …….2 1.1.2 Ứng dụng Y học cổ truyền Việt Nam …….3 1.2 Các nghiên cứu thành phần hóa học Eclipta prostrata …….3 1.3 Hoạt tính sinh học Eclipta prostrata hợp chất thành phần …….8 Chƣơng 2: NHIỆM VỤ VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU … 11 2.1 Nhiệm vụ Luận văn … 11 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu … 11 2.2.1 Các phƣơng pháp phân tích, phân tách hỗn hợp phân lập hợp chất.11 2.2.2 Các phƣơng pháp xác định cấu trúc … 14 Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN … 14 3.1 Đối tƣợng nghiên cứu … 14 3.2 Điều chế phần chiết hữu từ Cỏ mực … 14 3.3 Phân tích Phân tách sắc ký phần chiết thân Cỏ mực … 15 3.3.1 Phân tích sắc ký lớp mỏng phần chiết thân Cỏ mực … 15 3.3.2 Phân tách phần chiết n-hexan (EA1) … 16 3.3.3 Phân tách phần chiết điclometan (EA2) … 16 3.3.4 Phân tách phần chiết etyl axetat (EA3) … 16 3.3.5 Phân tách phần chiết nƣớc (EA4) … 17 3.4 Phân tích Phân tách sắc ký phần chiết phần mặt đất Cỏ mực (EP)………………………………………………………………………………….19 3.4.1 Phân tích sắc ký lớp mỏng phần chiết phần mặt đất Cỏ mực (EP) … 19 3.4.2 Phân tách phần chiết điclometan (EP2)………………………………….19 3.4.3 Phân tách phần chiết etyl axetat (EP3) … 19 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 3.4.4 Phân tách phần chiết nƣớc (EP4) … 20 3.5 Xác định cấu trúc hợp chất đƣợc phân lập … 22 Chƣơng 4: THỰC NGHIỆM … 31 4.1 Thiết bị hóa chất … 31 4.2 Đối tƣợng nghiên cứu … 32 4.3 Điều chế phần chiết từ Cỏ mực … 32 4.4 Phân tích sắc ký lớp mỏng phần chiết EA………………………………32 4.4.1 Phân tích sắc kí lớp mỏng phần chiết n-hexan (EA1) … 32 4.4.2 Phân tích sắc kí lớp mỏng phần chiết điclometan (EA2) … 34 4.4.3 Phân tích sắc kí lớp mỏng phần chiết etyl axetat (EA3) … 34 4.4.4 Phân tích sắc kí lớp mỏng phần chiết nƣớc (EA4) … 34 4.5 Phân tích sắc ký lớp mỏng phần chiết EP … 35 4.5.1 Phân tích sắc kí lớp mỏng phần chiết điclometan (EP2) … 35 4.5.2 Phân tích sắc kí lớp mỏng phần chiết etyl axetat (EP3) … 36 4.5.3 Phân tích sắc kí lớp mỏng phần chiết nƣớc (EP4) … 36 4.6 Phân tách sắc ký phần chiết EA … 37 4.6.1 Phần chiết n-hexan (EA1) … 37 4.6.2 Phần chiết điclometan (EA2) … 38 4.6.3 Phần chiết etyl axetat (EA3) … 38 4.6.4 Phần chiết nƣớc (EA4) … 39 4.7 Hằng số vật lý kiện phổ hợp chất đƣợc phân lập từ EA … 39 4.8 Phân tách sắc ký phần chiết EP … 40 4.8.1 Phần chiết điclometan (EP2) … 40 4.8.2 Phần chiết etyl axetat (EP3) … 41 4.8.3 Phần chiết nƣớc (EP4) … 41 4.9 Hằng số vật lý kiện phổ hợp chất đƣợc phân lập từ EP…… 42 KẾT LUẬN … 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO … 46 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com CÁC CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN TLC (Thin-Layer Chromatography): Sắc kí lớp mỏng CC (Column Chromatography): Sắc kí cột thường FC (Flash Chromatography): Sắc kí cột nhanh Mini-C (Mini-column Chromatography): Sắc kí cột tinh chế H-NMR (Proton Nuclear Magnetic Resonance): Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton 13 C-NMR (Carbon 13 Nuclear Magnetic Resonance): Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 DEPT (Distortionless Enhancement by Polarition Transfer): Phổ DEPT ESI-MS (Electrospray Ionization-Mass Spectrometry): Phổ khối lượng phun bụi điện tử TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com MỤC LỤC CÁC HÌNH, CÁC BẢNG VÀ CÁC SƠ ĐỒ Hình 1: Cây Cỏ mực (Eclipta prostrata L., Asteraceae) Bảng 1: Hiệu suất điều chế phần chiết từ Cỏ mực Bảng 2: Phân tích sắc kí lớp mỏng phần chiết n-hexan (EA1) Bảng 3: Phân tích sắc kí lớp mỏng phần chiết điclometan (EA2) Bảng 4: Phân tích sắc kí lớp mỏng phần chiết etyl axetat (EA3) Bảng 5: Phân tích TLC phân đoạn phần chiết nước (EA4) Bảng 6: Phân tích sắc kí lớp mỏng phần chiết điclometan (EP2) Bảng 7: Phân tích sắc kí lớp mỏng phần chiết etyl axetat (EP3) Bảng 8: Phân tích TLC phân đoạn phần chiết nước (EP4) Sơ đồ 1: Chiết phân tách sắc ký phần thân Cỏ mực (EA) Sơ đồ 2: Chiết phân tách sắc ký phần mặt đất Cỏ mực (EP) TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com MỤC LỤC CÁC PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phổ 1H-NMR Metyl gallat (II) Phụ lục 2: Phổ 13C-NMR DEPT Metyl gallat (II) Phụ lục 3: Phổ ESI-MS Eclalbasaponin I (III) Phụ lục 4: Phổ 1H-NMR Eclalbasaponin I (III) Phụ lục 5: Phổ 13C-NMR DEPT Eclalbasaponin I (III) Phụ lục 6: Phổ ESI-MS Eclalbasaponin II (IV) Phụ lục 7: Phổ 1H-NMR Eclalbasaponin II (IV) Phụ lục 8: Phổ 13C-NMR DEPT Eclalbasaponin II (IV) Phụ lục 9: Phổ 1H-NMR Norwedelolacton (V) Phụ lục 10: Phổ 13C-NMR DEPT Norwedelolacton (V) Phụ lục 11: Phổ 1H-NMR Hesperidin (VI) Phụ lục 12: Phổ 13C-NMR DEPT Hesperidin (VI) TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com LỜI MỞ ĐẦU Trong nghiên cứu y dược đại hợp chất thiên nhiên từ thuốc bao gồm flavonoit, tecpenoit ancoloit tiếp tục nguồn cung cấp hợp chất có tiềm cho thử nghiệm hoạt tính sinh học Eclipta prostrata L., syn Eclipta alba L (Asteraceae) thuốc dùng phổ biến Y học cổ truyền Việt Nam số nước giới Các nghiên cứu hóa học lồi Eclipta prostrata Trung Quốc, Nhật Bản Ấn Độ xác định nhóm hợp chất tritecpen (oleanan taraxastan) glycozit, flavonoit, coumarin, ancaloit-steroit thiophen polyacetylen phận Eclipta prostrata Dựa kiến thức dược lý học dân tộc hoạt tính sinh học phần chiết nhiều hoạt chất có tác dụng chống ung thư, kháng viêm chống HIV chất phân lập từ Eclipta prostrata phát Sự đa dạng nhóm cấu trúc lý thú Eclipta prostrata, tương quan cấu trúc với nhiều hoạt tính sinh học quan trọng ý nghĩa khoa học thực tiễn việc đặt sở khoa học cho việc sử dụng thuốc Cỏ mực (Eclipta prostrata L., Asteraceae) Việt Nam thúc đẩy tiếp tục nghiên cứu cách hệ thống hóa thực vật Cỏ mực Luận văn đặt mục tiêu nghiên cứu phân lập sắc ký xác định cấu trúc thành phần hóa học đặc biệt hợp chất phân cực từ phần mặt đất Cỏ mực Việt Nam Các kết nghiên cứu theo hướng bước chương trình đại hóa Y học cổ truyền Việt Nam Các hợp chất phân cực chưa xác định số nghiên cứu trước phân lập nghiên cứu sử dụng phương pháp sắc ký đại TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 Khái quát Eclipta prostrata L (syn Eclipta alba L.) (Asteraceae) 1.1.1 Đặc điểm thực vật [1] Họ Cúc (danh pháp khoa học: Asteraceae hay Compositae), gọi họ Hướng dương, họ Cúc tây, họ thực vật có hoa hai mầm Họ Asteraceae phân bố rộng khắp giới, phổ biến khu vực ôn đới miền núi nhiệt đới Các chi họ chia thành 13 tơng Chỉ có số 13 tơng Lactuceae, có đủ khác biệt để coi phân họ (phân họ Cichorioideae), tơng cịn lại, phần lớn chồng ghép lẫn nhau, đưa vào phân họ Asteroideae Các lồi thuộc họ Cúc có đặc trưng sau: cụm hoa dạng đầu, bao phấn hữu tính, tức với nhị hoa kết hợp lại với gờ chúng bao phấn, tạo thành ống, bầu nhụy với phân bổ noãn hoa, noãn hoa bầu nhụy, mào lông (chùm lông quả), loại bế (tạo thành từ nỗn khơng nẻ chín) Eclipta prostrata L (syn Eclipta alba L.), họ Cúc (Asteraceae), có tên thơng dụng Việt Nam Cỏ mực, Cỏ nhọ nồi, Nhọ nồi, hạn liên thảo, mặc hạn liên, kim lăng thảo Hình 1: Cây Cỏ mực (Eclipta prostrata L., Asteraceae) 10 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Cỏ mực thuộc loại thân thảo niên, cao từ 10-60 cm, mọc bị có gần thẳng đứng, có lông trắng, cứng, thưa Thân màu lục hay màu nâu nhạt hay đỏ tía Lá mọc đối, phiến dài hẹp cỡ 2,5  1,2 cm Mép nguyên hay có cưa cạn, hai mặt có lông Hoa trắng tập hợp thành đầu nách hay đầu cành, hoa hình lưỡi ngồi, hoa lưỡng tính hình ống Qủa bế dẹt có cạnh, có cánh dài mm Vùng phân bố Cỏ mực giới rộng lồi nhiệt đới, mọc hoang chỗ ẩm mát 1.1.2 Ứng dụng Y học cổ truyền Việt Nam [1] Cỏ mực dùng để điều trị bệnh như: nôn máu từ dày, chảy máu cam, đái máu, xuất huyết tử cung, viêm gan mãn tính, viêm ruột, lỵ, trẻ em suy dinh dưỡng, ù tai, rụng tóc đẻ non, suy nhược thần kinh, nấm da, ezecma, vết loét, bị thương, chảy máu, viêm da Ngồi Cỏ mực cịn dùng làm thuốc sát trùng bệnh ho lao, viêm cổ họng, ban chẩn, lở ngứa, đau mắt, sưng răng, đau dày, bệnh nấm da gây rụng tóc Cách dùng: dùng tươi hay giã lấy nước uống, cháy đen với liều 1530 g sắc uống Dùng riêng phối hợp với ngó sen, trắc bá Trong trường hợp sát trùng dùng sắc uống giã tươi lấy nước uống, bã đắp Có thể dùng tươi xoa tay chữa rát vôi, chữa nấm ngồi da nhuộm tóc có màu tím đen Viện chống lao Trung ương Bệnh viện lao K71 pha chế thành thuốc tiêm cầm máu, tiêm bắp thịt, ngày 1-3 ống (2 ml) Có nơi sản xuất thành công dạng cao nén thành viên dùng cầm máu 1.2 Các nghiên cứu thành phần hóa học Eclipta prostrata Năm 1966: F Bolhman cộng (Đại học tổng hợp Kỹ thuật Berlin, Đức) phân lập từ khô Eclipta alba dẫn xuất thiophen và polyacetylen [5] H3C-C C (C C)2 CH=CH2 S 11 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học, Thành phố Hồ Chí Minh Trần Vũ Thiên, Phùng Văn Trung, Nguyễn Ngọc Hạnh (2009) “Phân lập echino cystic axit eclabasapnin II từ Cỏ mực Eclipta prostrata Họ cúc (Asteraceae)”, Tạp chí Khoa học, 11, 278-283 Tiếng Anh Abdel-Kader M S., Bahler B D., Malone S., Werkhoven M C M., Troon F., David, Wisse J H., Bursuker I., Neddermann K., Mamber S W., Kington D G I (1998), “DNA-damaging steroidal alkaloids from Eclipta alba from the Suriname rainforest”, J Nat Prod., 61, 1202-1208 Govindachari T R., Premila M S (1985), “The benzofuran norwedelic acid from Wedelia calendulaceae”, Phytochemistry, 24, 3068-3069 Krishnaswamy N R., Seehadri T R., Sharma B R (1966), “The structure of a new polythienyl from Eclipta alba”, Tetrahedron Letters, 35, 42274230 Lee M K., Ha N R., Yang H., Sung S H., Kim G H., Kim Y C (2008), “Antiproliferative activity of triterpenoids from Eclipta prostrata on hepatic stellate cells”, Phytomedicine, 15, 775-780 Lee M K., Ha N R., Yang H., Sung S H., Kim Y C (2009), “Stimulatory constituent of Eclipta prostrata on mouse osteoblast differentiation”, Phytother Res., 23, 129-131 Li C C., Xie Z X., Zhang Y D., Chen J H., Yang Z (2003), “Total synthesis of wedelolactone”, J Org Chem., 68, 8500-8504 Maltese F., Erkelans C., Vander Kooy F., Choi Y H., Verpoorte R (2009), “Identification of natural epimeric flavanone glycosides by NMR spectroscopy”, Food Chemistry, 116, 575-579 54 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 10 Michels M G., Bertolini L C T., Esteves A F., Moreira P., S Franca C (2010), “Anticoccidial effects of coumestans from Eclipta alba for sustainable control of Eimeria tenella parasitosis in poultry production”, Veterinary Parasitology, 1873-2550 11 Sing P., Sharma A K., Joshi K C., Bohlmann F (1985), “A futher dithienylacetylene from Eclipta erecta”, Phytochemistry, 24, 615-616 12 Sing P., Bhargava S (1992), “A dithienylacetylene ester from Eclipta erecta”, Phytochemistry, 31, 2883-2884 13 Tewtrakul S., Subhadhirasakul S., Cheenpracha S., Karalai C (2007), “HIV1 protease and HIV-1 integrase inhibitory substances from Eclipta prostrata”, Phytother Res., 21, 1092-1095 14 Tewtrakul S., Subhadhirasakul S., Tansakul P., Cheenpracha S., Karalai C (2011), “Antiinflammatory constituents from Eclipta prostrata using RAW264.7 macrophage cells”, Phytother Res.,25, 1313-1316 15 Yahara S., Ding N., Nohara T (1994), “Oleanane glycosides from Eclipta alba”, Chem Pharm Bull., 42, 1336-1338 16 Yahara S., Ding N., Nohara T., Masuda K., Ageta H (1997), “Taraxastane glycosides from Eclipta alba”, Phytochemistry, 44, 131-135 55 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com PHẦN PHỤ LỤC 56 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 57 Phụ lục 1: Phổ 1H-NMR Metyl gallat (II) TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 58 DEPT Metyl gallat (II) Phụ lục 2: Phổ 13C-NMR TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Phụ lục 3: Phổ ESI-MS 59của Eclalbasaponin I (III) TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Phụ lục 4: Phổ 1H-NMR 60 Eclalbasaponin I (III) TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 61 Phụ lục 5: Phổ 1C-NMR DEPT Eclalbasaponin I (III) TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 62 Phụ lục 6: Phổ ESI-MS Eclalbasaponin II (IV) TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Phụ lục 7: Phổ63 H-NMR Eclalbasaponin II (IV) TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 64 Phụ lục 8: Phổ 13C-NMR DEPT Eclalbasaponin II (IV) TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Phụ lục 9: Phổ 65 H-NMR Norwedelolacton (V) TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 66 Phụ lục 10: Phổ 13C-NMR DEPT Norwedelolacton (V) TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 67 Phụ lục 11: Phổ 1H-NMR Hesperidin (VI) TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com 13 68 Phụ lục 12: Phổ C-NMR DEPT Hesperidin (VI) TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com ... (t, C-11 ), 2 5,1 (q, C-30 ), 2 7,1 (t, C-2 ), 2 7,3 (q, C-27 ), 2 8,6 (q, C23 ), 3 1,3 (s, C-20 ), 3 1,6 (t, C-22 ), 3 3,3 (q, C-29 ), 3 4,2 (t, C-7 ), 3 6,3 (t, C-21 ), 3 6,4 (t, C-15 ), 3 7,9 (s, C-10 ), 3 9,9 (s,... C-8 ), 4 0,2 (t, C-1 ), 4 0,9 (s, C-4 ), 4 2,2 (d, C-18 ), 4 2,7 (s, C-14 ), 4 7,8 (t, C-19 ), 4 8,2 (d, C-9 ), 5 0,1 (s, C-17 ), 5 7,2 (d, C-5 ), 6 2,5 (t, C6 ), 6 2,8 (t, C-6 ), 7 1,2 (d, C-4 ), 7 1,7 (d, C-4 ),. .. C-20 ), 3 2,6 (t, C-22 ), 3 3,4 (q, C-29 ), 3 4,3 (t, C-7 ), 3 6,3 (t, C-15 ), 3 6,6 (t, C21 ), 3 7,9 (s, C-10 ), 3 9,9 (t, C-1 ), 4 0,2 (s, C-4 ), 4 0,7 (s, C-8 ), 4 2,1 (d, C-18 ), 4 2,7 (s, C-14 ), 4 7,7 (t, C-19),