Chƣơng 3 : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.4 Phân tích và Phân tách sắc ký các phần chiết phần trên mặt đất cây Cỏ mực
mực (EP)
3.4.1 Phân tích sắc ký lớp mỏng các phần chiết phần trên mặt đất cây Cỏ mực (EP) (EP)
Các phân tích TLC các phần chiết được thực hiện trên bản mỏng silica gel 60F254 (TLC, Merck) với các hệ dung môi triển khai n-hexan-axeton cho các phần
chiết ít phân cực n-hexan và điclometan và hệ ba dung môi n-hexan-etyl axetat-axit fomic cho phần chiết phân cực hơn etyl axetat.
Sự phân giải trên sắc kí lớp mỏng cho thấy phân tách sắc kí cột các phần chiết này cần được thực hiện với sự rửa giải gradient.
3.4.2 Phân tách phần chiết điclometan (EP2)
Phần chiết điclometan (EP2) được phân tách bằng sắc kí cột (CC) gradient trên silica gel với hệ dung môi n-hexan-axeton 19:1, 9:1, 6:1, 3:1 và 1:1 thành 12
nhóm phân đoạn: EP2.1 (phân đoạn 1-3), EP2.2 (phân đoạn 4-13), EP2.3 (phân đoạn 14-15), EP2.4 (phân đoạn 16-24), EP2.5 (phân đoạn 25-30), EP2.6 (phân đoạn 31-36), EP2.7 (phân đoạn 37-42), EP2.8 (phân đoạn 43-48), EP2.9 (phân đoạn 49-51), EP2.10 (phân đoạn 52-60), EP2.11 (phân đoạn 61-62) và EP2.12
(phân đoạn 63-66).
Nhóm phân đoạn EP2.2 được rửa bằng n-hexan cho β-sitosterol (chất I). Nhóm phân đoạn EP2.11 được phân tách bằng cột chiết pha rắn SPE RP-18 với hệ dung môi MeOH-H2O 70%, chất nhận được được rửa bằng hệ dung môi n-
hexan-axeton 1:1 cho saponin tritecpenoit eclalbasaponin II (chất IV). Chất này
cũng nhận được từ phân đoạn EP2.12 sau khi phân đoạn này được tinh chế bằng
cách chiết pha rắn SPE RP-18 với hệ dung môi MeOH-H2O 70%.
3.4.3 Phân tách phần chiết etyl axetat (EP3)
Phần chiết etyl axetat (EP3) được phân tách bằng sắc kí cột (CC) gradient trên silica gel với hệ dung môi n-hexan-EtOAc-HCOOH 20:19:1 và 10:20:1 thành
10 nhóm phân đoạn: EP3.1 (phân đoạn 1-2), EP3.2 (phân đoạn 3-4), EP3.3 (phân
16-17), EP3.7 (phân đoạn 18-22), EP3.8 (phân đoạn 23-27), EP3.9 (phân đoạn 28- 35) và EP3.10 (phân đoạn 35-37).
Các nhóm phân đoạn EP3.7, EP3.8 và EP3.9 được phân tách sắc kí cột Sephadex LH-20 với dung mơi MeOH sau đó được rửa bằng hệ dung mơi n-hexan- axeton 1:1 cho eclalbasaponin II (IV) đã phân lập được từ phần chiết điclometan (EP2).
Nhóm phân đoạn EP3.10 được rửa bằng dung môi MeOH cho chất flavonoit glycozit hesperidin (chất VI).
3.4.4 Phân tách phần chiết nƣớc (EP4)
Phần chiết nước (EP4) được phân tách bằng sắc kí cột (CC) gradient trên nhưa polyme pha đảo Diaion HP-20 với gradient MeOH-H2O thành 4 phân đoạn:
EP4.1 (20%MeOH), EP4.2 (40%), EP4.3 (60%) và EP4.4 (MeOH).
Phân đoạn EP4.2 được phân tách bằng sắc kí cột (CC) trên silica gel với các hệ dung môi CH2Cl2-MeOH 15:1, 9:1, 6:1 và 3:1. Phân đoạn EP4.2.4 được tinh chế bằng Mini-C trên silica gel với hệ dung môi CH2Cl2-MeOH-H2O 8:2:0,2 và 7:3:0,5 thu được norwedelolacton (chất V).
Phân đoạn EP4.3 được tách bằng sắc kí cột (CC) trên silica gel với các hệ
dung môi CH2Cl2-MeOH 15:1, 9:1, 6:1, 3:1 và rửa bằng MeOH cho hesperidin (VI) đã được xác định từ phần chiết etyl axetat (EP3).
Quy trình chiết và phân tách phần trên mặt đất cây Eclipta prostrata (EP)
Sơ đồ 2: Chiết và phân tách sắc ký phần trên mặt đất cây Cỏ mực (EP) EP1 107,2 g EP2 4,9 g EP3 4,9 g EP4 12,1 g EP2.1 0,55 g EP2.2 0,45 g EP2.11-2.12 0,5 g EP2.3-EP2.9 1,65 g EP3.1-EP3.6 1,8 g EP3.7-EP3.9 0,96 g EP3.10 0,64 g EP4.1 1,54 g EP4.2 1,87 g EP4.3 2,25 g EP4.4 2,1 g I 0,39 g IV 40 mg IV 0,5 g VI 28 mg V 10 mg VI 26 mg CC, silica gel, n-hexan-axeton
19:1, 9:1, 6:1, 3:1, 1:1
CC, silica gel,n-hexan-EtOAc-HCOOH 20:19:1, 10:19:1
1. CC, silica gel, CH2Cl2-MeOH 15:1, 9:1, 6:1, 3:1 2. CC, silica gel, CH2Cl2-MeOH-H2O 8:2:0,2 và 7:3:0,5 3. Rửa MeOH
1,2 1,3
Rửa, n-hexan Sephadex, MeOH 1, Sephadex, MeOH Rửa MeOH
2, Rửa n-hexan-axeton 1:1
EP
(3,4 kg)
Diaion HP-20, H2O, 20%, 40%, 60% MeOH-H2O, MeOH
1. Ngâm với MeOH ở nhiệt độ phòng 2. Chiết với n-hexan, điclometan, etyl axetat