Tài liệu Bảo quản tinh trùng người bằng Nito lỏng trong môi trường Glycerol, Geyc và Sperm Freeze ppt

TCNCYH-2003 Bảo quản tinh trùng ngời bằng nitơ lỏng trong môi trờng glycerol, GEYC và Sperm freeze Trịnh Sinh Tiên, Trịnh Bình Nguyễn Ngọc Hùng và Nguyễn Thị Bình Đại học Y Hà Nội Sử dụng ba loại môi trờng glycerol, GEYC và Sperm freeze để bảo quản tinh trùng ngời trong nitơ lỏng (-196 0 C) cho kết quả: Chất lợng tinh trùng sau bảo quản bằng môi trờng GEYC tơng đơng với môi trờng Sperm freeze và cao hơn có ý nghĩa thống kê so với bảo quản ở môi trờng glycerol đơn thuần (p < 0,01); Bảo quản tinh trùng ngời bằng lạnh sâu dùng môi trờng GEYC và Sperm freeze có hiệu quả với CSF 50%. (Từ viết tắt: GEYC: Glycerol egg yolk citrat; CSF: Cryosurvival factor; TT: Tinh trùng) I. Đặt vấn đề Bảo quản đông lạnh tế bào và mô là một nhánh của ngành sinh học nhiệt độ thấp, với mục đích làm ngừng và bảo tồn đợc đời sống tế bào trong suốt quá trình lu giữ kéo dài trong tình trạng đóng băng ở nhiệt độ thấp. Nguyên lý cơ bản của bảo quản lạnh sâu là kiểm soát đợc chuyển động của các phân tử trong các tế bào và mô. Quá trình sống luôn đòi hỏi những biến đổi sinh học, có liên quan đến sự chuyển động của các phân tử trong môi trờng nớc. Khi nớc ở trong và quanh tế bào chuyển thành dạng nớc đá đủ để ngăn cản sự chuyển động của các phân tử, và sau đó nếu đợc làm ấm lại, các hệ thống sinh học của tế bào không bị tổn thơng, ngời ta nói quá trình bảo quản thành công [5]. Chất lợng tế bào và mô đợc bảo quản phụ thuộc vào nhiều yếu tố khác nhau nh: quy trình bảo quản, nhiệt độ bảo quản, môi trờng bảo quản và quy trình làm tan băng Theo thời gian, trên thế giới nhiều loại môi trờng đã đợc dùng để bảo quản lạnh sâu tinh trùng ngời. Tuy nhiên, những công bố về hiệu quả của mỗi loại môi trờng bảo quản tinh trùng rất khác nhau. ở nớc ta, bảo quản lạnh sâu tinh trùng ngời để phục vụ nhu cầu chăm sóc sức khoẻ sinh sản là vấn đề mới mẻ và cần thiết. Câu hỏi đặt ra là: trong số các môi trờng, môi trờng nào phù hợp? Để góp phần trả lời câu hỏi này, chúng tôi tiến hành Nghiên cứu áp dụng quy trình bảo quản tinh trùng ng ời bằng lạnh sâu trong môi trờng glycerol, GEYC và Sperm freeze với mục tiêu: Đánh giá hiệu quả môi trờng glycerol, GEYC và Sperm freeze trong bảo quản tinh trùng ngời bằng nitơ lỏng (-196 0 C). II. đối tợng và phơng pháp nghiên cứu 1. Đối tợng nghiên cứu. - 30 mẫu tinh dịch có tinh dịch đồ bình thờng đợc xét nghiệm và bảo quản tại phòng bảo quản Mô - Phôi, Trờng Đại học Y Hà Nội trong thời gian từ tháng 5 đến tháng 8 năm 2002. - Tiêu chuẩn chọn đối tợng nghiên cứu: Nam giới trong độ tuổi sinh sản, không xuất tinh từ 3 đến 5 ngày trớc ngày lấy tinh dịch, không sốt, không dùng thuốc, không uống rợu tại thời điểm lấy mẫu. 2. Phơng pháp nghiên cứu áp dụng nghiên cứu can thiệp. So sánh hiệu quả bảo quản của 3 loại môi trờng ở các thời điểm 1, 2, 30 và 90 ngày sau bảo quản, theo các chỉ số tinh trùng sống di động tiến tới nhanh sau bảo quản (CSF 1 ), chỉ số tinh trùng sống di động tiến tới nhanh và chậm sau bảo quản (CSF 2 ), và chỉ số tinh trùng sống sau bảo 3 - Đề tài đợc thực hiện tại Lab bảo quản Mô - Phôi Đại học Y Hà Nội. TCNCYH-2003 quản (CSF 3 ). 2.1. Chuẩn bị và chọn mẫu tinh dịch. Tinh dịch đợc lấy trong một phòng riêng, nằm cạnh phòng xét nghiệm, bằng cách tự kích thích và cho xuất tinh thẳng vào một cốc thuỷ tinh có chia vạch, miệng rộng, đã ghi sẵn tên bệnh nhân và ngày giờ lấy mẫu. Cốc đựng tinh dịch đợc đặt trong tủ ấm 37 0 C; sau thời gian 30 phút, lấy ra để đánh giá các chỉ số tại phòng xét nghiệm có nhiệt độ ổn định từ 20 24 0 C. Những mẫu tinh dịch trong giới hạn bình thờng đợc tiến hành bảo quản đông lạnh. 2.2. Quy trình bảo quản tinh trùng bằng nitơ lỏng (- 196 0 C). 2.2.1. Môi trờng bảo quản. a. Glycerol: glycerol 99%. b. Sperm freeze: Do Perti Pro N.V - Bỉ sản xuất, đợc bán trên thị trờng. Thành phần: 15% glycerol và 0,4% albumin huyết thanh ngời. c. Glycerol egg yolk citrat (GEYC) [1]: Đợc pha tại phòng bảo quản Mô, bộ môn Mô học Phôi thai học, theo công thức của Ackerman. Thành phần trong 200 ml môi trờng GEYC có: 1 Penicillin 1triệu UI 01 lọ 2 Streptomycin 1gam 01 lọ 3 Egg yolks Bột khô 40 gam 4 Glycerol PA 30 ml 5 Glycocol Glycin 2 gam 6 Glucose 2,6 gam 7 Natri citrat PA 2,3 gam 8 Nớc cất 2 lần, khử ion kim loại 130 ml 2.2.2. Quy trình bảo quản và tan đông. Để làm rõ u điểm của môi trờng bảo quản theo mục tiêu đã đề ra, một quy trình chung đã đợc thực hiện ở tất cả các mẫu nghiên cứu. - Chia mỗi mẫu tinh dịch thành ba phần bằng nhau, cho vào 3 cốc thuỷ tinh đã ghi nhãn: tên bệnh nhân, môi trờng pha. Mỗi phần sử dụng một loại môi trờng, nhỏ từng giọt môi tr ờng lắc đều, theo tỉ lệ glycerol 2 giọt/1ml tinh dịch [5], môi trờng GEYC 1ml/1ml tinh dịch [1], Sperm freeze 0.7ml/1ml tinh dịch. Sau khi cho môi trờng, để mẫu ở nhiệt độ phòng thí nghiệm 15 phút. - Nạp mỗi mẫu đã chuẩn bị để bảo quản trong 4 cọng rạ (straw) bằng máy hút cầm tay. Cọng rạ 0,25 ml, dài 13 cm, một đầu đợc nút bởi bột dính. Khi nạp để lại 1 đoạn trống ở đầu kia và hàn kín bằng máy ép nhiệt. In các thông tin cá nhân và thời hạn bảo quản bằng máy in lên thành cọng rạ. - Hạ nhiệt độ bằng máy Nicool 10: Từ +25C xuống -10C trong 6 phút; từ -10C xuống -120C trong 20 phút; từ -120C xuống - 196C trong 5 phút. - Chuyển các cọng rạ vào gầu chứa, nhúng thẳng vào bình trữ GT 35 chứa đầy nitơ lỏng. - Lấy mẫu sau bảo quản đông lạnh: Chọn mẫu cần lấy qua ký hiệu đã ghi trên cán gầu. Đa gầu ra khỏi bình trữ, lấy cọng rạ đặt vào tủ ấm 37C trong 10 phút. 2.4 Xử lý số liệu theo phần mềm Epi-Info Version 6.0 của WHO. Kiểm định sự khác biệt bằng test t và sự khác biệt có ý nghĩa thống kê khi p < 0,05. 3. Những chỉ tiêu nghiên cứu. * CSF 1 (chỉ số tinh trùng di động tiến tới nhanh sau bảo quản) Tỷ lệ % tinh trùng di động tiến tới nhanh sau bảo quản CSF 1 = Tỷ lệ % tinh trùng di động tiến tới nhanh trớc bảo quản X 100` 4 TCNCYH-2003 CSF 2 (chỉ số tinh trùng di động tiến tới nhanh và chậm sau bảo quản) Tỷ lệ % tinh trùng di động tiến tới nhanh và chậm sau bảo quản CSF 2 = Tỷ lệ % tinh trùng di động tiến tới nhanh và chậm trớc bảo quản X 100` CSF 3 (chỉ số tinh trùng sống sau bảo quản) Tỷ lệ % tinh trùng sống sau bảo quản CSF 3 = Tỷ lệ % tinh trùng sống trớc bảo quản X 100` III. Kết quả Chất lợng tinh trùng bảo quản bằng nitơ lỏng (-196 0 C) đợc đánh giá theo các chỉ số CSF 1 , CSF 2 và CSF 3 ở các khoảng thời gian sau bảo quản 1, 2, 30 và 90 ngày. Kết quả đợc trình bày ở các bảng sau. Bảng 1. Chỉ số chất lợng tinh trùng (CSF 1,2,3 ) ở khoảng thời gian bảo quản 1 ngày: X SD. Môi trờng Chỉ số % Glycerol (I) GEYC (II) Sperm freeze (III) So sánh (p) CSF 1 (Di động nhanh) 16,7 12,1 56,7 20,2 59,0 20,1 p I,II < 0,01 p I,III < 0,01 p II,III > 0,05 CSF 2 (DĐ nhanh & chậm) 40,0 18,6 69,0 15,2 62,3 16,5 p I,II < 0,01 p I,III < 0,01 p II,III > 0,05 CSF 3 (TT sống) 58,0 17,5 76,0 13,5 69,3 13,6 p I,II < 0,01 p I,III < 0,05 p II,III > 0,05 Qua kết quả trên cho thấy, ở cả 3 chỉ số, môi trờng GEYC đảm bảo hiệu quả cao hơn so với khi dùng môi trờng Glycerol với ý nghĩa thống kê p <0,01. So sánh với môi trờng Sperm freeze thì chỉ số CSF 1 có thấp hơn, còn hai chỉ số CSF 2 , CSF 3 đều đạt cao hơn, tuy nhiên sự khác biệt này cha có ý nghĩa thống kê (p > 0,05). Bảng 2. Chỉ số chất lợng tinh trùng (CSF 1,2,3 ) ở khoảng thời gian bảo quản 2 ngày: X SD. Môi trờng Chỉ số % Glycerol (I) GEYC (II) Sperm freeze (III) So sánh (p) CSF 1 (Di động nhanh) 16,7 14,2 52,3 18,3 55,3 20,3 p I,II < 0,01 p I,III < 0,01 p II,III > 0,05 CSF 2 (DĐ nhanh &chậm) 37,0 15,8 62,3 16,5 56,7 15,2 p I,II < 0,01 p I,III < 0,01 p II,III > 0,05 CSF 3 (TT sống) 54,0 16,3 72,0 13,0 65,7 13,8 p I,II < 0,01 p I,III < 0,05 p II,III > 0,05 Kết quả trên cho thấy, sau hai ngày bảo quản, chất lợng tinh trùng đợc đánh giá theo các chỉ tiêu vẫn đợc duy trì tơng ứng nh sau một ngày. 5 TCNCYH-2003 Bảng 3. Chỉ số chất lợng tinh trùng (CSF 1,2,3 ) ở khoảng thời gian bảo quản 30 ngày: X SD. Môi trờng Chỉ số % Glycerol (I) GEYC (II) Sperm freeze (III) So sánh (p) CSF 1 (Di động nhanh) 17,7 15,5 55,7 23,0 50,0 20,3 p I,II < 0,01 p I,III < 0,01 p II,III > 0,05 CSF 2 (DĐ nhanh & chậm) 33,3 10,6 62,3 12,2 54,0 14,0 p I,II < 0,01 p I,III < 0,05 p II,III < 0,05 CSF 3 (TT sống) 49,0 14,0 75,3 13,8 65,7 14,5 p I,II < 0,01 p I,III < 0,05 p II,III < 0,05 Kết quả trên cho thấy sau 30 ngày bảo quản, chất lợng tinh trùng vẫn đợc duy trì với các chỉ số đánh giá môi trờng GEYC vẫn cao hơn so với môi trờng Sperm freeze. Tuy nhiên chỉ số CSF 2 , CSF 3 còn cao hơn với sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với p < 0,05. Bảng 4. Chỉ số chất lợng tinh trùng (CSF 1,2,3 ) ở khoảng thời gian bảo quản 90 ngày: X SD. Môi trờng Chỉ số % Glycerol (I) GEYC (II) Sperm freeze (III) So sánh (p) CSF 1 (Di động nhanh) 22,3 12,5 56,7 18,8 59,0 23,1 p I,II < 0,01 p I,III < 0,01 p II,III > 0,05 CSF 2 (DĐ nhanh & chậm) 38,3 13,9 64,0 13,5 55,3 12,0 p I,II < 0,01 p I,III < 0.05 p II,III < 0,05 CSF 3 (TT sống) 54,0 15,9 73,7 13,8 67,3 15,3 p I,II < 0,01 p I,III < 0.05 p II,III > 0,05 Kết quả trên cho thấy sau 90 ngày bảo quản, môi trờng GEYC vẫn duy trì đợc các chỉ số chất lợng tinh trùng cao hơn so với môi trờng Glycerol với sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,01). So với môi trờng chuẩn Sperm freeze thì chỉ số CSF 2 trong môi trờng GEYC không những vẫn duy trì đợc hiệu quả cao hơn nh chỉ số CSF 1 , CSF 3 mà còn cao hơn với sự khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05. Từ những kết quả xác định chỉ số CSF, chúng tôi có những nhận xét sau: - Chỉ số CSF 3 ở tất cả các giai đoạn bảo quản khi dùng 3 loại môi trờng đều đạt mức trên 50% (trừ giai đoạn sau 30 ngày với môi trờng glycerol). - Các chỉ số CSF 1 , CSF 2 và CSF 3 ở tất cả các giai đoạn bảo quản, khi dùng hai môi trờng hỗn hợp GEYC và Sperm freeze, đều đạt trên mức 50%, nhng không vợt quá 76%. - Chỉ số CSF 1 và CSF 2 ở tất cả các giai đoạn bảo quản khi dùng môi trờng đơn thuần glycerol đều ở mức dới 50%. - ở tất cả các giai đoạn bảo quản, dùng môi trờng hỗn hợp GEYC và Sperm freeze, các chỉ số CSF 1 , CSF 2 và CSF 3 đều cao hơn có ý nghĩa thống kê so với dùng môi trờng glycerol. - Có sự khác biệt nhng cha có ý nghĩa thống kê về chỉ số CSF 1 , khi dùng môi trờng GEYC và Sperm freeze ở tất cả các giai đoạn bảo quản; trong khi đó chỉ số CSF 2 và CSF 3 6 TCNCYH-2003 khác nhau có ý nghĩa thống kê hoặc không có ý nghĩa thống kê tuỳ giai đoạn bảo quản. iv. bàn luận 1. Về phơng pháp nghiên cứu. Để đánh giá đợc hiệu quả của từng môi trờng bảo quản dùng trong công trình nghiên cứu này, chúng tôi đã tiến hành làm đông lạnh cho từng mẫu tinh dịch ở các thời điểm nh nhau với cùng một quy trình thao tác kỹ thuật. Trong đó, những yếu tố ảnh hởng đến chất lợng tinh trùng sau bảo quản đã đợc chú ý là: sốc lạnh, tốc độ làm lạnh (hạ nhiệt độ chậm theo chơng trình của máy Nicool 10), làm tan đông sau bảo quản (đa mẫu đông lạnh vào tủ ấm 37 0 C). Về sốc lạnh, theo nhiều tác giả, tinh trùng ngời không hoặc rất ít nhạy cảm với yếu tố này, tuy nhiên không loại trừ tính nhạy cảm của một số mẫu tuỳ cá thể. Trong cả 3 môi trờng đã dùng, đều có glycerol là chất chống sốc lạnh cho tinh trùng [5], môi trờng chứa lòng đỏ trứng, theo một số tác giả cũng có khả năng làm giảm tính nhạy cảm với sốc lạnh cho tinh trùng của một số cá thể [3] [4]. Trong công trình này, 30 mẫu tinh dịch đã đợc xác định có tinh dịch đồ nằm trong giới hạn của một tinh dịch đồ bình thờng (theo tiêu chuẩn do WHO 1999 đề xuất [6]). Trong đó những thông số quan trọng là: mật độ tinh trùng, tỉ lệ tinh trùng di động tiến tới trớc, tỉ lệ tinh trùng có hình thái bình thờng. Chúng tôi cho rằng với những mục tiêu nghiên cứu đã đặt ra, việc chọn mẫu nghiên cứu nh vậy là phù hợp. Về thời gian bảo quản (hay thời điểm lấy mẫu sau bảo quản để đánh giá) ở công trình này là 1, 2, 30 và 90 ngày. Đây là những mốc thời gian bảo quản ngắn. Theo chúng tôi có thể phù hợp với liệu trình điều trị cho các cặp vô sinh mà các nhà lâm sàng áp dụng nh lọc rửa tinh trùng bơm vào buồng tử cung, thụ tinh trong ống nghiệm Những nghiên cứu bảo quản tinh trùng dài ngày sẽ đợc thực hiện tiếp tục sau công trình nghiên cứu này. Theo tiêu chuẩn của Hiệp hội ngân hàng Mô Hoa Kỳ [5], chỉ số tinh trùng di động sau bảo quản CSF là từ 50% trở lên thì đợc coi là mẫu tinh dịch đợc bảo quản thành công. Chỉ số này tơng ứng với chỉ số CSF 1 và CSF 2 mà chúng tôi đặt ra trong công trình nghiên cứu này. Theo chúng tôi, chỉ số CSF 1 (tinh trùng di động tiến tới trớc nhanh, sau bảo quản đông lạnh) là chỉ số có giá trị thực tế nhất, cần đợc đặt ra khi xác định chất lợng của một mẫu sau bảo quản lạnh sâu, đặc biệt là những mẫu có tinh dịch đồ thấp hơn giới hạn bình thờng. 2. Về hiệu quả bảo quản lạnh sâu tinh trùng ngời của 3 môi trờng dùng trong công trình này. Cho đến nay, glycerol đã đợc công nhận là chất bảo vệ lạnh có hiệu quả nhất trong bảo quản tinh trùng. Glycerol làm hạ thấp điểm đóng băng, làm giảm tập trung các chất điện giải, duy trì độ pH và làm tăng tính bền vững của màng tinh trùng [5] [2]. Trong hai môi trờng hỗn hợp đã sử dụng trong công trình, tỉ lệ glycerol đều chiếm khoảng 15%. Môi trờng Sperm freeze có thêm 0,4% albumin huyết thanh ngời, môi trờng GEYC có thêm 20% lòng đỏ trứng, một tỉ lệ nhỏ glucose, glycin và citrat natri. Những thành phần đợc đa thêm này có tác dụng hỗ trợ cho glycerol giúp duy trì áp lực thẩm thấu và pH, đồng thời cung cấp năng lợng cho tinh trùng tránh việc sử dụng phospholipid bên trong tế bào [4]. Kết quả nghiên cứu từ công trình này qua các chỉ số tinh trùng sau bảo quản (CSF 1 , CSF 2 và CSF 3 ) là những số liệu xác nhận tính hiệu quả của 3 môi trờng đã dùng. - Căn cứ tiêu chuẩn của Hiệp hội ngân hàng Mô Hoa Kỳ, cả 3 môi trờng đều đạt chỉ số CSF 3 trên 50%; riêng với môi trờng glycerol đơn thuần ở giai đoạn bảo quản 30 ngày, chỉ số này chỉ đạt 49%. Nếu căn cứ vào chỉ số CSF 1 và CSF 2 , môi trờng GEYC và Sperm freeze đều đạt mức trên 50% ở tất cả các giai đoạn bảo quản, trong khi đó dùng môi trờng glycerol đơn thuần hai chỉ số này chỉ đạt mức thấp dới 40%, sự khác biệt này có ý nghĩa thống kê. Từ những nhận xét trên, chúng tôi cho rằng dùng hai môi trờng GEYC và Sperm freeze để bảo quản lạnh sâu tinh trùng rõ ràng có hiệu quả hơn so với dùng môi trờng glycerol đơn thuần. 7 TCNCYH-2003 2. Quy trình bảo quản tinh trùng ngời bằng lạnh sâu dùng môi trờng GEYC và Sperm freeze có hiệu quả với chỉ số CSF 50%. - So sánh các chỉ số CSF 1 giữa 2 môi truờng hỗn hợp ở cả 4 giai đoạn, tuy có khác biệt nhng không có ý nhĩa thống kê. Đồng thời, sự khác biệt giữa các chỉ số CSF 2 và giữa các chỉ số CSF 3 ở các giai đoạn bảo quản cũng không hoàn toàn có ý nghĩa thống kê. Từ những nhận xét trên, chúng tôi cho rằng hiệu quả bảo quản lạnh sâu tinh trùng ngời trong nghiên cứu này giữa hai môi trờng Sperm freeze và môi trờng GEYC là tơng đơng nhau. - Bài báo là một phần của luận văn cao học và nghiên cứu cơ sở. Bạn đọc có thể tìm đọc toàn văn tại Th viện trờng ĐHYHN, Trung tâm thông tin Y học, Th viện Quốc gia. tài liệu tham khảo 1. Trơng Công Hổ, Hồ Mạnh Tờng (2001). Phơng pháp trữ tinh trùng. Phơng pháp xét nghiệm tinh dịch. Bệnh viện Phụ sản Từ Dũ, Thành phố Hồ Chí Minh. Tuy nhiên, khi sử dụng cần cân nhắc những u điểm và nhợc điểm của 2 loại môi trờng này về quy trình thao tác. Môi trờng Sperm freeze là môi trờng đợc pha sẵn, bán trên thị trờng, giá cao và có hạn dùng ngắn; tuy nhiên sau khi làm tan đông mẫu để đánh giá chất lợng và sử dụng tinh trùng chỉ cần loại bỏ môi trờng bằng phơng pháp lọc rửa tinh trùng thông thờng (phơng pháp swim up hoặc phơng pháp thang nồng độ). Môi trờng GEYC là môi trờng có thể tự pha, giá thành hạ, nhng muốn làm sạch môi trờng để có tinh trùng cần phải ly tâm tách phần nhằm tách hoàn toàn môi trờng, đặc biệt là các hạt lòng đỏ trứng. 2. Hồ Mạnh Tờng, Nguyễn Thị Mai, Lại Văn Tám (2000). Trữ lạnh tinh trùng ngời trong thụ tinh nhân tạo. Thời sự Y dợc học. Bộ V (1), tr: 8-10 3. Foote RH; McGonagle; Goldstein M; Feldschuh J (2002). The influence of cryoprotective media and processing procedures on motility and migration of frozen thawed human sperm. Asian J Androl, 4(2), pp: 137 41. 4. Hollanders J.M., Carver Ward J.A. (1996). Male Infertility from A to Z. Studies in profertility series. The Parthenon publishing Group, Vol. 4, p. 32-33. III. kết luận: Nghiên cứu bảo quản tinh trùng ngời, mẫu có tinh dịch đồ trong giới hạn bình thờng bằng nitơ lỏng (- 196 0 C) với 3 môi trờng glycerol, GEYC và Sperm freeze, chúng tôi có những kết luận sau: 5. J.K.Sherman (1990). Cryopreservation of human semen. CRC Handbook of the Laboratory Diagnosis and Treatment of Infertility. pp: 229-258. 6. World health organisation (1999). WHO laboratory manual for the examination of human semen and sperm Cervical mucus interation. Fourth edition, Cambridge University press. 34. 1. Chất lợng tinh trùng sau bảo quản ở môi trờng GEYC tơng đơng với môi trờng Sperm freeze và cao hơn có ý nghĩa thống kê so với bảo quản ở môi trờng glycerol đơn thuần. Summary deep cryopreservation of human spermatoza in glycerol, geyc and sperm freeze Deep cryopreservation (- 196 0 C) of human spermatoza in glycerol, GEYC and Sperm freeze media shows that after preservation, quality of spermatozais the same in GEYC and Sperm freeze but higher in glycerol medium with statisticallysignificant level p < 0,01. CSF of deep cryopreservation of human spermatoza in GEYC and Sperm freeze media are > 50%. 8 . loại môi trờng glycerol, GEYC và Sperm freeze để bảo quản tinh trùng ngời trong nitơ lỏng (-196 0 C) cho kết quả: Chất lợng tinh trùng sau bảo quản bằng môi. trình bảo quản tinh trùng ng ời bằng lạnh sâu trong môi trờng glycerol, GEYC và Sperm freeze với mục tiêu: Đánh giá hiệu quả môi trờng glycerol, GEYC và