Ứng dụng phương pháp ELISA chẩn đoán bệnh sán dây do Echinococcus spp. gây ra trên linh trưởng

Bài viết Ứng dụng phương pháp ELISA chẩn đoán bệnh sán dây do Echinococcus spp. gây ra trên linh trưởng cho phép chẩn đoán sớm bệnh nang sán Echinococcus spp. trên linh trưởng, giúp đề xuất các biện pháp điều trị kịp thời, tránh các trường hợp đáng tiếc xảy ra.

HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NI THÚ Y TỒN QUỐC 2021 - AVS2021: 157-164 ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP ELISA CHẨN ĐOÁN BỆNH SÁN DÂY DO ECHINOCOCCUS SPP GÂY RA TRÊN LINH TRƯỞNG Nguyễn Thị Nhiên*, Vũ Hoài Nam1,, Bùi Thị Huyền Thương1, Trần Thị Kim Lan1, Nguyễn Phương Anh1 Bùi Khánh Linh1 Tóm tắt Bệnh nang sán Echinococcus spp gây ghi nhận nhiều quốc gia giới bệnh truyền lây nguy hiểm Tại Trung tâm Cứu hộ Linh trưởng nguy cấp (EPRC), vườn quốc gia Cúc Phương, tình trạng bệnh nang sán Echinococcus spp cho nguyên nhân ảnh hưởng tới sức khỏe chí tính mạng cá thể linh trưởng Trong tổng số 36 cá thể xét nghiệm ELISA, có 17 cá thể cho kết dương tính, chiếm tỷ lệ 47,2% cá thể phát thấy nang quan thể dương tính với ELISA Từ khóa: Echinococcus, ELISA, linh trưởng APPLICATION OF ELISA IN EARLY DIAGNOSIS OF ECHINOCOCCUS SPP IN PRIMATES Abstract Hydatid disease caused by Echinococcus spp is noted in many countries around the world and is a dangerous contagious disease At the Endangered Primate Rescue Center (EPRC), Cuc Phuong National Park, hydatid cyst disease is thought to be one of the main causes affecting the health of primates and even threatening their life Out of a total of 36 individuals tested for ELISA, there are 17 individuals with positive results, accounting for 47,2% individuals detected cysts in organs in the body were all positive for ELISA Keywords: Echinococcus, ELISA, primates I ĐẶT VẤN ĐỀ Trung tâm cứu hộ linh trưởng nguy cấp (EPRC), Ninh Bình, Việt Nam trung tâm bảo tồn cá thể linh trưởng bị săn bắt, nhiều cá thể có nguy tuyệt chủng Ngày nay, nỗ lực bảo tồn động vật hoang dã ngày cần thiết tác động tiêu cực người tồn quần thể động vật hoang dã môi trường sống chúng Ngồi việc đóng góp trực tiếp cho hoạt động bảo tồn loài động vật này, hoạt động trì sức khỏe cá thể linh trưởng mang ý nghĩa biểu tượng, tạo động lực cho việc bảo tồn tất loài động vật hoang dã khác, giúp trì sinh học hệ sinh thái đa dạng Vì vậy, sức khoẻ vấn đề đặc biệt trọng việc bảo tồn cá thể linh trưởng trung tâm Các loài linh trưởng, bao gờm cả người có nguy nhiễm nhiều bệnh ký sinh trùng khác Trong đó, sán dây nhỏ Echinococcus spp là một những mầm bệnh quan tâm nhiều khả Bộ môn Ký sinh trùng, khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam; Trung Tâm Cứu hộ Linh trưởng nguy cấp (EPRC), vườn quốc gia Cúc Phương; * Tác giả liên hệ: Nguyễn Thị Nhiên Email: nhienvet@gmail.com; ĐT:0944903969 157 HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NUÔI THÚ Y TOÀN QUỐC 2021 - AVS2021: 157-164 tạo nang nước gây tổn thương quan gan, thận, phổi, thậm chí là cả tim và não (Bacciarini cs., 2005; Boufana cs., 2012) Nang sán phát triển từ từ thể, chèn ép quan, ảnh hưởng tới chức bình thường quan thể, khiến vật chịu đau đớn kéo dài (Denk cs., 2016; Dinkel cs., 2004) Đơi phát triển thành u nang não gây tử vong (Kvascevicius cs., 2016) Về vòng đời, Echinococcus spp có vật chủ ći cùng là động vật ăn thịt điển hình chó vật chủ trung gian bao gờm lồi gặm nhấm (chuột, sóc, nhím ) hay động vật ăn cỏ bò, dê, cừu (Di Comiye cs., 2000; Brunet cs., 2015; Deplazes cs., 2001) Hơn nữa, tỷ lệ chó thả rông quanh khu vực Vườn quốc gia Cúc Phương cao điều kiện thuận lợi để mầm bệnh phát tán ngồi mơi trường Điều nguy hiểm trứng sau thải môi trường qua phân dễ dàng để xâm nhập vào vật chủ trung gian người, linh trưởng, gia súc Việc kiểm sốt bệnh có nhiều khó khăn vật chủ trung gian linh trưởng người, bị nhiễm bệnh, sán khơng hồn thành vịng đời cách thải đốt sán mà ký sinh tạo nang quan.  Phương pháp sử dụng chủ yếu để chẩn đoán nang sán Echinococcus spp phương pháp chẩn đốn hình ảnh, thông qua siêu âm chụp X-quang, phương thức chụp  cắt lớp vi tính (CT) cộng hưởng từ (MRI) (Brack cs., 1997; Grenouillet cs., 2014) Tuy nhiên, phương pháp phát bệnh nang sán hình thành bên thể vật chủ, gây triệu chứng nặng nề, chí đe dọa tính mạng vật chủ Những phương pháp xét nghiệm hóa học hay dựa vào số huyết học không đặc hiệu cho bệnh, thay đổi số xảy nang bên thể vỡ dịch nang vào hệ tuần hoàn (Kamenetzky cs., 2002; Plesker cs., 2009). Bên cạnh đó, chưa có phương pháp kiểm tra huyết học hỗ trợ chẩn đoán linh trưởng.  158  Nang sán phát trung tâm xác định Echinococcus ortleppi một loài sán dây nhỏ được ghi nhận xuất hiện người Thanh Hoá, khu vực tiếp giáp Ninh Bình (De cs., 2017) Đối với lồi E ortleppi, mầm bệnh trì đường lây truyền chó gia súc (trâu, bị) (Plesker cs, 2009) (Shi cs., 2019) (Umhang cs., 2013) Chó nhiễm bệnh ăn phải trứng Echinococcus spp ngồi mơi trường tiêu hố phải nang sán có thịt trâu bị chưa nấu chín, sau thải trực tiếp mầm bệnh ngồi mơi trường qua phân Tại vườn quốc gia Cúc Phương, Việt Nam, theo thống kê của Trung Tâm Cứu Hộ Linh Trưởng Nguy Cấp, tỉ lệ nhiễm sán dây nhỏ loài linh trưởng đạt tới 55%, đó ở loài voọc chà vá chân đỏ tỉ lệ nhiễm lên tới 75% Dữ liệu khẳng định tồn mầm bệnh xung quanh khu vực trung tâm Từ cho thấy việc tìm nguyên nhân gây bệnh thiết lập phương pháp chẩn đốn sớm vơ cần thiết việc bảo vệ sức khoẻ cho cá thể linh trưởng trung tâm. Các phương pháp huyết học phát kháng thể phần giải vấn đề này, phương pháp kinh tế hơn, trình thực đơn giản tiềm mặt rút ngắn thời gian thực Với tỷ lệ nhiễm cao gây ảnh hưởng lớn đến sức khoẻ linh trưởng nói riêng cộng đồng nói chung, nhu cầu địi hỏi cơng cụ chẩn đốn có độ nhạy, độ xác cao có khả phát bệnh sớm để có biện pháp điều trị kịp thời, giảm thiểu tối đa nguy truyền lây Vì nghiên cứu chúng tơi tiến hành “Ứng dụng phương pháp ELISA chẩn đoán sớm bệnh sán dây Echinococcus spp gây linh trưởng” cho phép chẩn đoán sớm bệnh nang sán Echinococcus spp linh trưởng, giúp đề xuất biện pháp điều trị kịp thời, tránh trường hợp đáng tiếc xảy HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NUÔI THÚ Y TOÀN QUỐC 2021 - AVS2021: 157-164 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU, ĐỐI KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU 3.1 Kết xét nghiệm ELISA 36 cá thể linh trưởng trung tâm 2.1 Phương pháp ELISA gián tiếp ứng dụng để chẩn đoán thực nghiệm Pha loãng kháng nguyên với dung dịch đệm natri cacbonat 0,1M pH 9.6 nhỏ lên đĩa 96 giếng, ủ qua đêm 40C Khố vị trí không gắn protein dung dịch blocking buffer (PBS chứa 0,05% skimmilk) Kháng thể pha loãng với dung dịch PBS-T theo tỷ lệ xác định.  Kháng kháng thể (Goat anti- Primate IgG (H+L) pha loãng với PBS-T nồng độ 1/10000 Ủ TMB giếng nhiệt độ phòng 10 phút Dừng phản ứng H2SO4 2M Đọc kết bước sóng 450nm/630nm 2.2.  Phương pháp chuẩn bị mẫu huyết âm huyết dương Mẫu huyết âm dương chuẩn cung cấp tiến sĩ Bruno Gottstein (trường đại học Bern, Thụy Sĩ) Đối với linh trưởng dương tính với nang sán sau mổ khám, mẫu huyết thu thập bảo quản -20 oC 2.3 Phương pháp thu thập mẫu huyết linh trưởng ứng dụng chẩn đoán thực nghiệm Mẫu huyết thu thập từ 36 cá thể linh trưởng trung tâm để đánh giá phương pháp ELISA thiết lập Toàn bảo quản -20oC sử dụng Các cá thể ghi chép lại toàn triệu chứng, tiền sử bệnh thuốc dùng để điều trị.  2.4 Phương pháp xử lý số liệu Xử lý số liệu phương pháp thống kê sinh học thông qua phần mềm tin học Microsoft Excel 2015 GraphPad PRISM 8, sử dụng t- test để so sánh số liệu nhóm Hệ số Cohen’s kappa tính phần mềm IDoStatistics (https:// idostatistics.com/cohen-kappa-freecalculator/) Xét nghiệm ELISA tổng số 36 cá thể linh trưởng cho thấy tỉ lệ dương tính 47,2% (n = 17) Do cá thể linh trưởng cứu hộ từ nhiều địa điểm khoảng thời gian khác nhau, nên có cá thể chưa kiểm tra phương pháp siêu âm Trong 17 cá thể cho kết dương tính, có cá thể khơng có thơng tin kết phương pháp siêu âm Trong có cá thể cho giá trị OD khoảng từ 0.66 đến 0.88 Kết tương ứng với nhóm cá thể xác định có nang phổi nhóm 23 cá thể có kết phương pháp siêu âm Như vậy, nhiều khả cá thể mắc bệnh, việc chẩn đốn siêu âm tìm nang phổi sử dụng xét nghiệm miễn dịch khác, ví dụ Western blot, điều cần thiết để xác định bệnh Plesker cs (2001) tiến hành xét nghiệm ELISA 14 cá thể khỉ sau tiến hành siêu âm, thông qua ELISA xác định cá thể cho kết dương tính Tiến hành siêu âm phát cá thể có mang nang, cá thể có nhiều đám đơng đặc phổi gan cá thể không phát thấy dấu hiệu bất thường Cá thể có nang sau chẩn đốn phương pháp ELISA, cho kết dương tính với E granulosus Như vậy, phản ứng ELISA đóng vai trị biện pháp sàng lọc ban đầu, giúp q trình chẩn đốn bệnh xác Với trường hợp cho kết âm tính, chưa thể khẳng định chắn cá thể không nhiễm nang Nếu siêu âm tiến hành sau khơng phát thấy nang hay dấu hiệu bất thường khác, việc cá thể bị mắc bệnh nang sán loại trừ Trong thời gian thu thập mẫu huyết trung tâm, phát ca bệnh (cá thể - 47) tiến hành mổ khám. Con vật trước chết khơng có biểu đặc biệt, ăn uống hoạt động bình thường Sau mổ khám, khoang ngực phải, quan sát thấy - nang thuỳ hoành phổi khiến phổi sưng xung huyết nang lớn gan (Hình 1) 159 HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NI THÚ Y TỒN QUỐC 2021 - AVS2021: 157-164 A B Hình Bệnh tích đại thể (A) phổi (B) gan vọoc (Pygathrix nemaeus) có chứa nang sán Echinococcus spp Các mơ cịn lại phổi bị xẹp chèn ép nang sán Nang gan có kích thước khoảng - cm, nang sưng to không rõ thuỳ Nang hai quan có màng trắng, mở có chứa dịch màu vàng nhạt protoscolesces quan sát kiểm tra dịch kính hiển vi (Hình 2) Hình Protoscoleces Echinococcus spp chụp vật kính có độ phóng đại 40x 3.2 Kết xét nghiệm huyết học 23 cá thể linh trưởng có kết phương pháp siêu âm tổng số 36 cá thể Dựa vào phương pháp siêu âm, 23 cá thể, xác định cá thể linh trưởng có hình thành nang quan khác thể, tương ứng tỷ lệ 39%, có cá thể phát thấy nang vùng ngực, cá thể lại phát thấy chủ yếu vùng thận Tuy nhiên, nang sán Echinococcosis phát phương 160 pháp dễ bị nhầm lẫn với tình trạng khối u khác, chẳng hạn u nang không ký sinh, u máu đơn lẻ nhiều u máu, áp xe sinh mủ, tụ máu, ung thư biểu mô tế bào gan, di căn, ung thư hạch (Rinadil cs., 2014) Phương pháp siêu âm phát nang sán Echinococcus spp (CE) tiêu chuẩn hóa nhằm thúc đẩy tiêu chuẩn chẩn đoán điều trị thống áp dụng cho việc điều trị lâm sàng cho khảo sát thực địa (Amer cs., 2015) Nang sán giai đoạn cuối có thành bị vơi hóa dạng HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NI THÚ Y TỒN QUỐC 2021 - AVS2021: 157-164 vỏ trứng hồn tồn bị vơi hóa với bóng mờ, chúng dễ bị chẩn đốn nhầm đa số trường hợp, nên chẩn đoán xác định thực kết siêu âm (Brunetti cs., 2018; Yamano cs., 2009) Tuy nhiên, tất cá thể linh trưởng có khối u xác định siêu âm thí nghiệm cho kết dương tính với xét nghiệm ELISA, kết biểu thị Biểu đồ 1.0 OD value 0.8 0.6 0.4 0.2 Cut off = 0.09 0.0 kh ơn g N hó m N hó m có có na n g na ng (A (B ) ) -0.2 Biểu đồ Kết xét nghiệm huyết học 23 cá thể có thơng tin siêu âm trung tâm (A: mean = 0.4922; n = 9) (B: mean = 0.084; n = 14) (p < 0,0001) (Cohen’s k: 0.82) Trong thí nghiệm này, hệ số Cohen’s kappa xác định 0,82, cho thấy có tương quan việc có nang thể cho kết ELISA dương tính, nhiều khả cá thể mắc nang sán Echinococcosis Các cá thể phát thấy nang sán phổi gan cho kết giá trị OD cao so với cá thể lại phát thấy nang xoang chậu (p < 0.001) Điều giải thích kháng ngun thô sử dụng xét nghiệm ELISA điều chế từ dịch nang sán ký sinh phổi, có khác thành phần kháng nguyên nang ký sinh vị trí khác thể Vì vậy, thí nghiệm này, cá thể có nang ký sinh phổi cho giá trị kết ELISA cao so với cá thể có nang vị trí khác, chúng có nhiều kháng thể có đáp ứng miễn dịch với kháng nguyên tương ứng Nghiên cứu Rinaldi cs (2014) đánh giá hiệu kháng nguyên tách chiết từ dịch nang nhiều loại vật chủ trung gian khác từ nang gan phổi loài, xác định kháng nguyên cho hiệu tốt tách từ nang phổi người cừu Điều giải thích chủng Echinococcus granulosus bật người Iran chủng G1 (19, 20), với vật chủ trung gian cừu (Rojas cs., 2014) Bệnh nhân CE người tăng kháng thể chống lại chủng G1, AgB từ nang gan cừu ứng cử viên thích hợp cho chẩn đốn miễn dịch CE người Ở thí nghiệm chúng tơi, kháng nguyên sử dụng dịch nang phổi cá thể linh trưởng chết, protein tách chiết từ dịch nang, nên cho đáp ứng miễn dịch với chủng khác Mặc dù vậy, thí nghiệm Rahimi cs (2011), tất phương pháp ELISA sử dụng nguồn kháng nguyên thu từ vật chủ trung gian khác nhau, gan hay phổi, cho độ nhạy độ đặc hiệu cao 80% Chưa có thí nghiệm so sánh với dịch nang thu thận, trường hợp 161 HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NI THÚ Y TỒN QUỐC 2021 - AVS2021: 157-164 mắc CE có nang thận người coi trường hợp Các xét nghiệm huyết học hữu ích để xác nhận kết chẩn đốn hình ảnh Tuy nhiên, hạn chế chẩn đốn huyết CE phải lưu ý để giải thích xác kết Xét nghiệm huyết học để chẩn đốn CE khuyến nghị khơng nên phương pháp chẩn đốn nhất, đặc biệt khơng có tổn thương tương thích xác định siêu âm, giá trị xác định dương tính ELISA với bệnh đa số trường hợp không cao Nhiều biến số ảnh hưởng đến hiệu suất xét nghiệm chẩn đoán huyết Chúng bao gồm yếu tố liên quan đến xét nghiệm (kháng nguyên sử dụng), yếu tố liên quan đến cá thể (tình trạng miễn dịch) yếu tố liên quan đến u nang (vị trí, giai đoạn, kích thước, số lượng, liệu pháp điều trị trước biến chứng) (Tappe cs., 2007) Các kháng nguyên sử dụng để chẩn đốn huyết học CE khơng tiêu chuẩn hóa, dẫn đến khác biệt lớn kết chẩn đốn báo cáo khó khăn việc so sánh kết từ nhóm khác Nhìn chung, phương pháp ELISA sử dụng kháng nguyên thô dịch nang hydatid (HCF) cho thấy độ nhạy tốt (độ nhạy 80 - 99% độ đặc hiệu 60 - 97%), xét nghiệm dựa protein tinh tái tổ hợp cho thấy độ đặc hiệu tốt (độ nhạy 38 - 93% độ đặc hiệu 80 - 100%) Kết xét nghiệm âm tính giả xảy trường hợp nang xuất gan với nang giai đoạn hình thành (30 - 58%), nang giai đoạn không hoạt động (50 - 87%), trường hợp nang vị trí khác thể ngồi gan; lên tới 50% cá thể có nang phổi, cá thể có nang vị trí khác Cá thể có nang giai đoạn hoạt động chuyển tiếp cho thấy tỷ lệ huyết âm tính thấp (5 - 20%), cá thể có nhiều u nang thường cho kết huyết dương tính Xét nghiệm huyết học cho kết dương tính nhiều năm sau điều trị phẫu thuật thành công, làm 162 hạn chế phần việc sử dụng huyết học để đánh giá đáp ứng với điều trị, khiến bác sĩ lâm sàng cho cá thể bị mắc bệnh dẫn tới điều trị mức Tuy nhiên, việc quan sát nồng độ OD giảm theo thời gian (vài tháng đến nhiều năm) sau điều trị, có nang khơng hoạt động, sử dụng yếu tố thể thuyên giảm tình trạng bệnh Tương tự, hiệu giá kháng thể thường tăng tái phát, trường hợp không phổ biến Các xét nghiệm phát kháng thể đặc hiệu sử dụng số protein tái tổ hợp đề xuất để cải thiện việc đánh giá theo dõi Tuy nhiên, khơng có test thương mại hóa thị trường Kết dương tính giả xảy cá thể bị nhiễm loài sán khác, đặc biệt bệnh nang sán nhiễm E multilocularis (50 - 100%) Ít phổ biến trường hợp dương tính giả phát với bệnh không lây nhiễm khác, chẳng hạn ung thư rối loạn miễn dịch mãn tính IV KẾT LUẬN 17 cá thể cho kết dương tính tổng số 36 cá thể xét nghiệm ELISA chiếm tỷ lệ 47,2% cá thể phát thấy nang quan thể dương tính với ELISA Điều cho thấy phản ứng ELISA đóng vai trị biện pháp sàng lọc ban đầu, giúp q trình chẩn đốn bệnh xác TÀI LIỆU THAM KHẢO Amer, S., Helal, I.B., Kamau, E., Feng, Y and Xiao, L (2015) Molecular characterization of Echinococcus granulosus sensu lato from farm animals in Egypt PLoS ONE 10:e0118509 Bacciarini, L.N., Gottsteinm B., Wenker, C and Gröne, A (2005) Rapid development of hepatic alveolar Echinococcosis in a cynomolgus monkey (Macaca fascicularis) Veterinary Record 156: 90-91 Boufana, B., Stidworthy, M.F., Bell, S., Chantrey, J., Masters, N, and Unwin, S (2012) Echinococcus spp and Taenia HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NUÔI THÚ Y TOÀN QUỐC 2021 - AVS2021: 157-164 spp from captive mammals in the United Kingdom Vet Parasitol 190:95-103 Brunet, J., Regnard, P., Pesson, B., AbouBacar, A., Sabou, M., Pfaff, A.W and Candolfi, E (2015) Description of vertebral and liver alveolar echinococcosis cases in Cynomolgus monkeys (Macaca fascicularis) BMC Veterinary Research 11: 198 Brunetti, E., Tamarozzi, F., Macpherson, C., Filice, C., Piontek, M S., Kabaalioglu, A., Dong, Y., Atkinson, N., Richter, J., Schreiber-Dietrich, D and Dietrich, C F (2018) Ultrasound and Cystic Echinococcosis Ultrasound international open 4(3): E70-E78 Denk, D., Boufana, B., Masters, N.J and Stidworthy, M.F (2016) Fatal Echinococcosis in three lemurs in the United Kingdom - A case series Veterinary Parasitology 218: 10-14 Deplazes, P and Eckert, J (2001) Veterinary aspects of alveolar Echinococcosis – A zoonosis of public health significance Veterinary Parasitology 98: 65-87 Di Comite, G., Dognini, G., Gaiera, G., Ieri, R and Praderio, L (2000) Acute Echinococcosis: a case report.  J Clin Microbiol 38(12):4679-4680 Dinkel, A., Njoroge, E.M., Zimmermann, A., Walz, M., Zeyhle, E and Elmahdi IE (2004) A PCR system for detection of species and genotypes of the Echinococcus granulosus-complex, with reference to the epidemiological situation in eastern Africa Int J Parasitol 34: 645-53 Grenouillet, F., Umhang, G., Arbez-Gindre, F., Mantion, G., Delabrousse, E and Millon, L (2014) Echinococcus ortleppi infections in humans and cattle, France Emerging infectious diseases 20(12):2100 Kamenetzky, L., Gutierrez, A.M., Canova, S.G., Haag, K.L., Guarnera, E.A and Parra, A (2002) Several strains of Echinococcus granulosus infect livestock and humans in Argentina Infect Genet Evol 2:129-36 Kvascevicius, R., Lapteva, O and Awar, O.A (2016) Fatal Liver and Lung Alveolar Echinococcosis with Newly Developed Neurologic Symptoms due to the Brain Involvement Surg J (N.Y) 2(3):e83-e88 De, N.V and Le Van, D (2017) The first report of two cases of cystic echinococcosis in the lung by Echinococcus ortleppi infection, in Vietnam Research and Reports in Tropical Medicine 8:45 Pednekar, R.P., Gatne, M.L., Thompson, R.C and Traub, R.J (2009) Molecular and morphological characterisation of Echinococcus from food producing animals in India Vet Parasitol 165: 58-65 Plesker, R., Bauer, C., Tackmann, K and Dinkel,A (2001) Hydatid Echinococcosis (Echinococcus granulosus) in a laboratory colony of pig-tailed macaques (Macaca nemestrina) Journal of Veterinary Medicine 48: 367-372 Plesker, R., Nadler, T., Dinkel, A and Romig, T (2009) A case of an Echinococcus ortleppi infestation in a red-shanked douc langur (Pygathrix nemaeus) in northern Vietnam.Vietnam J Primatol 3: 75e81 Rinaldi, F., Brunetti, E., Neumayr, A., Maestri, M., Goblirsch, S and Tamarozzi, F (2014) Cystic Echinococcosis of the liver: A primer for hepatologists. World journal of hepatology. 6(5):293-305 Rojas, C.A.A., Romig, T and Lightowlers, M.W (2014) Echinococcus granulosus sensu lato genotypes infecting humans–review of current knowledge International Journal for Parasitology 44(1):9-18 Shi, Y., Wan, X., Wang, Z., Li, J., Jiang, Z and Yang, Y (2019) First description of Echinococcus ortleppi infection in China Parasites & vectors 12(1):1-6 163 HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NI THÚ Y TỒN QUỐC 2021 - AVS2021: 157-164 Tappe, D., Brehm, K., Frosch, M., Blankenburg, A., Schrod, A., Kaup, F.J, and Mätz-Rensing, K (2007) Echinococcus multilocularis infection of several old world monkey species in a breeding enclosure American Journal of Tropical Medicine and Hygiene 77: 504-506 Umhang, G., Lahoreau, J., Nicolier, A and Boué, F (2013) Echinococcus multilocularis infection of a ring- 164 tailed lemur (Lemur catta) and a nutria (Myocastor coypus) in a French zoo Parasitology International 62: 561-563 Yamano, K., Kanetoshi, A., Goto, A., Kishimoto, M., Kobayashi, N and Fujimoto, S (2009) Japanese monkey (Macaca fuscata) with alveolar Echinococcosis after treatment with albendazole for 10 years: serodiagnosis and determination of albendazole metabolites Parasitol Res 106: 69-74 ... phương pháp ELISA chẩn đoán sớm bệnh sán dây Echinococcus spp gây linh trưởng? ?? cho phép chẩn đoán sớm bệnh nang sán Echinococcus spp linh trưởng, giúp đề xuất biện pháp điều trị kịp thời, tránh trường... cụ chẩn đốn có độ nhạy, độ xác cao có khả phát bệnh sớm để có biện pháp điều trị kịp thời, giảm thiểu tối đa nguy truyền lây Vì nghiên cứu tiến hành ? ?Ứng dụng phương pháp ELISA chẩn đoán sớm bệnh. .. soát bệnh có nhiều khó khăn vật chủ trung gian linh trưởng người, bị nhiễm bệnh, sán khơng hồn thành vịng đời cách thải đốt sán mà ký sinh tạo nang quan.  Phương pháp sử dụng chủ yếu để chẩn đoán