Phân tích phả hệ di truyền và đặc điểm bộ gen của các chủng virus cúm gia cầm H5N6 phân lập tại Việt Nam trong năm 2014-2015

Bài viết Phân tích phả hệ di truyền và đặc điểm bộ gen của các chủng virus cúm gia cầm H5N6 phân lập tại Việt Nam trong năm 2014-2015 trình bày các nội dung chính sau: Phương pháp phục hồi virus trên phôi trứng; Phương pháp RT-PCR; Phương pháp giải trình tự gen và phân tích gen.

KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 PHÂN TÍCH PHẢ HỆ DI TRUYỀN VÀ ĐẶC ĐIỂM BỘ GEN CỦA CÁC CHỦNG VIRUS CÚM GIA CẦM H5N6 PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM TRONG NĂM 2014-2015 Cấn Xuân Minh1,2, Phạm Thị Huê1, Bùi Ngọc Anh1, Phạm Thị Nga , Nguyễn Thanh Hịa1, Ngơ Thị Minh Quyền1, Hồng Thị Thủy1, Nguyễn Hoàng Giang1, Hoàng Việt Hưng3, Đào Duy Tùng1, Bùi Nghĩa Vượng1 TÓM TẮT Virus cúm gia cầm H5N6 độc lực cao phát đàn gia cầm Việt Nam vào cuối năm 2013, chủng virus gây thiệt hại nghiêm trọng cho ngành chăn nuôi gia cầm nước ta Cho đến nay, virus cúm A/ H5N6 tiếp tục gây ổ dịch rải rác toàn lãnh thổ Việt Nam Phân tích đặc điểm gen phả hệ di truyền chủng virus H5N6 phân lập năm 2014-2015 lưu giữ Viện Thú y cho thấy, chủng virus độc lực cao thuộc clade 2.3.4.4 Trong số chủng H5N6, có chủng có đột biến đoạn vị trí 49-68 gen NA chủng có đột biến T160A gen HA, đột biến có khả làm tăng khả liên kết với thụ thể tế bào người cường hóa độc lực virus Các virus có khả lây nhiễm cho người thông qua tiếp xúc trực tiếp, việc xuất virus H5N6 thể độc lưc cao gây mối lo ngại virus gây đại dịch Phân tích đột biến gây kháng thuốc kháng virus amantadine hay taminflu cho thấy chủng mẫn cảm với thuốc kháng virus So sánh trình tự nucleotide gen HA chủng virus H5N6 lưu hành Việt Nam với chủng vacxin Trung Quốc cho thấy chủng virus có mức tương đồng 90,76% - 98,18% Kết phân tích cho thấy có nhiều biến đổi chủng H5N6 lưu hành chủng vacxin Điều lý giải nhiều đàn gà tiêm phòng vacxin cúm gia cầm dịch nổ Do virus cúm độc lực cao liên tục biến đổi, nên việc tiếp tục giám sát biến đổi lưu hành virus cúm H5 độc lực cao cần thiết quan trọng Từ khóa: Virus cúm gia cầm, H5N6, virus độc lực cao, đột biến, trình tự nucleotide, mức tương đồng Phylogenetic analysis and genetic characteristics of Avian influenza H5N6 virus strains isolated in Viet Nam in 2014-2015 Can Xuan Minh, Pham Thi Hue, Bui Ngoc Anh, Pham Thi Nga, Nguyen Thanh Hoa, Ngo Thi Minh Quyen, Hoang Thi Thuy, Nguyen Hoang Giang, Hoang Viet Hung, Dao Duy Tung, Bui Nghia Vuong SUMMARY Highly pathogenic avian influenza (HPAI) H5N6 virus was detected in poultry flocks in Viet Nam at the end of 2013, these virus strains caused serious economic loss for the poultry husbandry industry in the country So far, the outbreaks caused by influenza A/H5N6 virus strains have still occurred scatteredly throughout the territory of Viet Nam Genetic characteristics and phylogenetic analysis of H5N6 virus strains which were isolated in 2014-2015 and currently kept at the National Institute of Veterinary Research showed that, these virus strains were highly virulent and belonged to clade 2.3.4.4 There were out of H5N6 virus strains appeared a fragmentary mutation at the positions 49-68 in the NA gene and all virus strains possessed a T160A mutation in the HA gene, these mutations have the ability to increase binding with receptors form on human cells and enhance virulence of the virus These viruses have the potential to infect humans through direct contact; so far the presence of the highly pathogenic H5N6 virus has raised the concerns about the pandemic Bộ môn Virus – Viện Thú y Chi cục Chăn nuôi Thú y Hà Nội Bộ mơn Tốn Tin – Đại học Y Hà Nội 19 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 Analysis of mutations causing resistance to antiviral drugs, such as amantadine or taminflu showed that all virus strains were susceptible to antiviral drugs When comparing nucleotide sequence on HA gene of H5N6 virus strains that were circulating in Viet Nam with the Chinese vaccine strains showed that, the homogeneity level of these virus strains was 90.76% - 98.18% The analysis result showed the variation diversity between the circulating H5N6 viruses and the vaccine strains This might explain the phenomenon that avian influenza outbreaks still occurred in many vaccinated chicken flocks Since the highly virulent influenza virus is constantly changing, it is important and necessary to continue monitoring the variability and circulation of the highly virulent H5 virus Keywords: Avian influenza virus, H5N6, highly pathogenic virus, mutation, nucleotide sequence, homogeneity level I ĐẶT VẤN ĐỀ Virus H5N1 gây bệnh cúm gia cầm tái xuất vào năm 2003 Từ đến nay, virus H5N1 lây lan rộng khắp đàn gia cầm người 17 quốc gia vùng lãnh thổ giới, có Việt Nam Năm 2014, Việt Nam phát chủng virus cúm gia cầm type A/H5N6 Lạng Sơn, Hà Tĩnh, Lào Cai, Quảng Trị, Quảng Ngãi, Bắc Giang, Phú Thọ, Thừa Thiên-Huế, Quảng Nam, Nghệ An; gây ổ dịch địa phương Ở Việt Nam, H5N6 tuy chưa phát trường hợp người, Trung Quốc đến đầu năm 2017 có số trường hợp nhiễm virus H5N6 người, chí gây tử vong Vì dịch cúm H5N6 đe dọa sức khỏe cộng đồng sức khỏe động vật với nguy virus biến đổi gây đại dịch Những diễn biến dịch nêu cho thấy bệnh cúm gia cầm hữu ngày trở nên nguy hiểm biến đổi chủng gây bệnh gia cầm Virus biến đổi gây giảm hiệu vacxin phòng bệnh Đặc biệt nguy hiểm virus cúm gia cầm cho dễ “vượt hàng rào lồi”, có khả lây sang người, gây bệnh với tỷ lệ tử vong cao Bệnh biến đổi phức tạp với nhiều subtype H5 khác nhau, bệnh cúm gia cầm type A/ H5Ny thể độc lực cao HPAI bệnh truyền nhiễm cấp tính nguy hiểm, cần quan tâm để khống chế toán bệnh đàn gia cầm Virus cúm gia cầm có khả biến chủng phức tạp, dẫn đến đợt dịch nhiều chủng virus xuất chủng virus H5N6 xuất Việt Nam năm gần Để góp phần vào việc phịng, chống bệnh cúm gia cầm virus cúm A/H5N6 đạt hiệu cao, 20 nghiên cứu chủng virus cúm gia gia cầm A/ H5N6 nhằm cung cấp thêm phần thông tin đặc tính gen chủng virus phân lập Việt Nam, tiến hành nghiên cứu: “Phân tích phả hệ di truyền đặc điểm gen chủng virus cúm gia cầm H5N6 phân lập Việt Nam năm 2014-2015” II PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Phương pháp phục hồi virus phôi trứng Virus sau phân lập thành công trứng gà có phơi từ mẫu bệnh phẩm bảo quản -80oC Để phục hồi chủng virus này, tiến hành đông tan nước trứng có chứa virus, sau pha lỗng 1:100 PBS tiến hành tiêm cho 10 trứng gà có phơi Nuôi cấy virus cúm gia cầm phôi gà 9-11 ngày tuổi Sau theo dõi, tiến hành thu nước trứng giám định lại số, đặc biệt kiểm tra hiệu giá HA theo quy trình Viện Thú y giám định lại phương pháp realtime RT-PCR để chắn virus H5N6 2.2 Phương pháp RT-PCR Để xác định virus H5N6, tiến hành phản ứng realtime reverse transcription PCR (RT-qPCR) sử dụng mồi đặc hiệu PCR để phát cúm A sử dụng mồi đầu dò Matrix gene, tương tự cho việc xác định H5 N6 theo quy trình Viện Thú y Cho µl mẫu ARN vào ống phản ứng pipet chuyên dùng cho lấy mẫu ARN Đóng nắp ống, ký hiệu ống phản ứng tương ứng với phiếu xét nghiệm Cho µl ARN đối chứng dương vào ống đối chứng dương µl nước RNase vào KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 ống đối chứng âm ARN đối chứng dương pha loãng độ pha lỗng thích hợp có chu kỳ ngưỡng khoảng 25 Đặt ống phản ứng vào máy chu kỳ nhiệt chọn chương trình chạy PCR Đối chứng dương ARN mã pha loãng hàm lượng sử dụng cho giá trị Ct khoảng 25 Khi đối chứng có Ct cao 29 phải làm lại để đảm bảo kết xét nghiệm Nếu Ct đối chứng dương thấp 20, nên chuẩn độ lại độ pha loãng đối chứng Bất kỳ thời điểm Ct đối chứng dương đường biểu diễn khuếch đại khác thấp 14, giá trị trừ bị sai lệch để loại nối đoạn với loại bỏ primer Kết trình tự sau xử lý phần mềm CLC tiến hành so sánh với trình tự GenBank phần mềm BLAST-N Để phát biến đổi gen đặc tính bật chủng virus H5N6 phân tích phần mềm BioEdit ver Cây phả hệ gen HA virus thí nghiệm trình tự khác vẽ phân tích phân mềm MEGA III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Trong năm 2014 2015, Viện Thú y tiến hành phân lập thành công số chủng virus H5N6 từ mẫu bệnh phẩm gia cầm số tỉnh phía Bắc Việt Nam số chợ gia cầm sống Hà Nội Các chủng phân lập thành công trứng có phơi xác định virus cúm type A/H5N6 phương pháp realtime RT-PCR Trong thí nghiệm sử dụng chủng bao gồm chủng phân lập từ gà, vịt, ngan chim cút Thơng tin chủng sử dụng thí nghiệm trình bày bảng 2.3 Phương pháp giải trình tự gen phân tích gen Đặc tính di truyền phân tử gen chủng H5N6 lựa chọn phân tích phương pháp giải trình tự gen ARN sau xác định dương tính với H5N6 phương pháp realtime RT-PCR ARN gửi sang Nhật để tiến hành giải trình tự phương pháp Next Generation Sequencing hệ II (NGS) sử dụng máy Miseq Illuminar Kết thu từ hệ thống NGS phân tích phần mềm CLC Bảng Thông tin chủng virus H5N6 sử dụng nghiên cứu STT Ký hiệu chủng Thời gian lấy mẫu Loài HA titer Tên chủng 19/14 6/10/2014 Ngan 11 A/MDk/VNHN/19/14 53/14 8/12/2014 Vịt A/Dk/VNVP/53/14 46/15 26/7/2015 Cút A/Quail/VNHN/46/15 49/15 21/8/2015 Ngan A/MDk/VNHN/49/15 61/15 9/9/2015 Gà A/Ck/VNHN/61/15 Ở Việt Nam, vacxin phòng bệnh cúm gia cầm áp dụng từ năm 2005 chương trình tiêm phịng cúm tiếp tục tiến hành có nhiều thay đổi chủng lưu hành Giai đoạn đầu, vacxin tiêm đợt năm sử dụng vacxin Trung Quốc RE-1 với chủng vacxin thuộc clade chủng A/Gs/GD/1/1996 (H5N1) Sau đến năm 2010, xuất nhiều sub clades clades nên Chính phủ ngành Thú y cho nhập vacxin RE-5 có nguồn gốc từ chủng A/Dk/Anhui/1/2006 (H5N1) thuộc clade 2.3.4 Do virus tiếp tục phát triển tiến hóa quần thể gia cầm, vacxin RE-6 có chủng vacxin A/Dk/Guang Dong/S1222/2010 (H5N1) thuộc clade 2.3.2.1 vacxin RE-8 có nguồn gốc từ chủng A/Ck/GuiZho/4/2013 thuộc clade 2.3.4.4 nhập để phục vụ công tác tiêm phòng cho đàn gia cầm Mặc dù áp dụng chương trình tiêm phịng dịch xuất lác đác đàn gia cầm Việc tạo mối lo ngại khả bảo hộ vacxin hành Do chúng tơi tiến hành so sánh tính tương đồng gen 21 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 HA chủng H5N6 với chủng vacxin nhập từ Trung Quốc mà Việt Nam sử dụng Đối với virus cúm, HA protein protein quan trọng vừa có tác dụng bám vào thụ thể tế bào vật chủ vừa protein kích thích sinh miễn dịch, việc so sánh tương đồng HA protein quan trọng để sơ đánh giá khả bảo hộ vacxin Trước tiên chủng virus H5N6 thí nghiệm tương đồng với nucleotide từ 94,68 đến 98,67% Tuy nhiên chủng H5N6 có tỷ lệ tương đồng nucleotide thấp so sánh với chủng vacxin chủng vacxin RE-6 thuộc clade 2.3.2.1 thấp khoảng 90,59% RE-8 thuộc clade 2.3.4.4 có tính tương đồng cao với chủng H5N6 Việt Nam với số từ 94,98% đến 97,82% Khi so sánh tính tương đồng amino acid kết tương tự so sánh nucleotide, chủng H5N6 Việt Nam giống có tỷ lệ tương đồng cao với chủng vacxin RE-8 thuộc clade 2.3.4.4 Từ kết phân tích tương đồng nucleotide amino acid trên, nhận xét chủng H5N6 có liên quan họ hàng gần hay có nguồn gốc từ chủng virus thuộc clade 2.3.4 Việc xác định nguồn gốc tiến hóa virus lưu hành có ý nghĩa quan trọng việc lựa chọn vacxin phù hợp để ứng phó với dịch bệnh, đặc biệt bối cảnh Việt Nam nhập nhiều loại vacxin RE-6, RE-8, RE-5 RE-1 Tuy nhiên việc nghiên cứu gen có tính chất dự báo dự đốn tương đồng vacxin phù hợp với chủng virus lưu hành thực địa Trên thực tế, việc sử dụng đánh giá vacxin cần phải có kiểm chứng phương pháp cơng cường độc phịng thí nghiệm Kết so sánh gen HA trình bày bảng Bảng So sánh tương đồng trình tự nuclotide (phía dưới) amino acid (phía trên) gen HA KH chủng nghiên cứu Clade Ký hiệu chủng 2.3.4.4 2.3.4.4 Chủng vacxin 19/14 53/14 61/15 49/15 46/15 GD01 Anhui06 19/14   97,09 96,55 97,27 97,27 91,84 95,09 97,09 92,21 53/14 94,92   98,54 99,09 99,09 90,76 93,82 98,18 91,84 2.3.4.4 61/15 94,68 98,12   98,72 98,72 90,94 93,64 97,64 92,21 2.3.4.4 49/15 94,68 98,36 98,67   99,63 90,94 94,01 98,18 91,84 2.3.4.4 46/15 94,68 98,36 98,67 98,67   90,94 94,01 98,18 91,84 A/gs/Guangdong/1/96 91,19 91,44 91,25 91,5 91,5   95,28 91,3 92,02 2.3 A/dk/Anhui/1/06 93,53 93,9 93,47 93,84 93,84 95,78   94,55 93,47 2.3.4 A/ck/Guizhou/4/13 94,98 97,88 97,46 97,82 97,82 91,86 94,38   91,66 2.3.2.1 A/dk/Guangdong/S1322/10 90,71 90,65 90,59 90,71 90,71 92,82 94,45 90,89   Kết bảng cho thấy so sánh nucleotide amino acid chủng H5N6 không giống hoàn toàn chủng 19/14 khác chủng khác có chủng 53/14 chủng phân lập năm 2015 Điều cho thấy virus H5N6 biến đổi Kết phân tích bảng cho thấy việc tiếp tục nghiên cứu gen theo dõi biến đổi virus cúm quan trọng để phát chủng virus cúm biến đổi Để tìm hiểu kỹ đặc tính gen chủng virus H5N6, chúng tơi tiến hành phân tích số đặc 22 Guizhou S1322 trưng virus sử dụng phần mềm BioEdit Kết phân tích HA protein chủng H5N6 cho thấy virus có chứa nhiều base amino acid điểm cắt HA1 HA2 (bảng 3) Các amino acid điểm cắt chủng Việt Nam H5N6 xác định thành loại loại đại diện cho chủng năm 2014 (REKRRKR/GLF) loại lại đại diện cho chủng phân lập năm 2015 (RERRRKR/GLF) Hai dạng khác điểm đột biến từ K sang R Mặc dù vậy, trình tự KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 đặc trưng cho chủng virus độc lực cao Protein HA chủng có thụ thể gia cầm Q226 G228 (đánh số theo H3) Protein HA chủng có T160, có biến đổi điểm T160A tương thích cho thụ thể người (Zang et al., 2013; Gao et al., 2009) Bảng Đặc điểm di truyền virus H5N6 liên quan đến HA, PB2, NA, M2 PB1-F2  KH chủng Cleavage site 19/14 53/14 HA PB2 NA M2 PB1-F2 156 222 224 591 627 701 274 Xóa đoạn 31 ghép 50-90 REKRRKR/GLF A Q G Q E D H Khơng S Có REKRRKR/GLF A Q G Q E D H 58-68 S Có 61/15 RERRRKR/GLF A Q G Q E D H 58-68 S Có 49/15 RERRRKR/GLF A Q G Q E D H 58-68 S Có 46/15 RERRRKR/GLF A Q G Q E D H 58-68 S Có Phân tích gen NA cho thấy chủng H5N6 có đột biến đoạn khoảng 11 amino acid (ở vị trí 58 đến 68) trừ chủng virus 19/14 Đột biến đoạn làm tăng khả nhân lên virus gia cầm làm tăng độc lực virus động vật (Matsuoka et al., 2009; Zhou et al., 2009) Các nghiên cứu động vật cần tiến hành để đánh giá khả gây bệnh chủng H5N6 Các thí nghiệm động vật có ý nghĩa quan trọng việc sinh bệnh người Tuy nhiên phân tích đột biến đoạn khơng thấy xuất chủng H5N6 gây bệnh người Các amino acid Q591, E672 D701 ghi nhận PB2 protein chủng H5N6, điều thích nghi virus nhân lên động vật mức độ thấp Tuy nhiên chủng H5N6 người có đột biến D701N, đột biến làm tăng độc lực virus người Thêm vào chủng H5N6 có đoạn ghép nối PB1-F2 với độ dài 57 amino acid, biến đổi có tác dụng làm tăng khả gây bệnh virus động vật (Zamarin et al., 2006; McAuley et al., 2010) Hiện để điều trị virus cúm người có hai loại thuốc dùng phổ biến amantidine taminflu Tuy nhiên, số chủng virus cúm H5 ghi nhận có biến đổi vị trí S31N gen M2 làm cho virus kháng lại thuốc amantadine Tương tự đột biến vị trí H274Y gây giảm hiệu lực thuốc taminflu Phân tích kháng thuốc amantadine hay taminflu cho thấy chủng H5N6 không phát đột biến gen HA với đột biến H274Y gen M2 S31N Điều chứng tỏ chủng H5N6 mẫn cảm với thuốc kháng virus Tuy nhiên việc tiếp tục theo dõi đột biến có liên quan đến kháng thuốc cần thiết quan trọng virus cúm nhận gen kháng thuốc từ virus kháng thuốc tạo nên virus kháng thuốc Do việc tiếp tục theo dõi kháng thuốc virus cúm A/H5 quan trọng, đặc biệt virus độc lực cao có khả gây bệnh cho người Để xác định xem chủng virus H5N6 Việt Nam thuộc vào phân nhóm, clade nào, chúng tơi tiến hành phân tích 71 trình tự bao gồm trình tự chủng virus H5N6 số trình tự chủng tham khảo số chủng virus H5 Việt Nam nghiên cứu Phân tích phả hệ cho thấy tất trình tự chủng H5N6 thí nghiệm thuộc clade 2.3.4.4 với chủng H5N6 khác Việt Nam Trong chủng phân thành phân nhánh khác chủng phân lập năm 2015 gần chứng tỏ có chung nguồn gốc gần với chủng A/duck/Vietnam/VNVP53/2014 Ngược lại chủng A/moscovy duck/VNHN/19/2014 đứng riêng nhánh tách biệt so với chủng H5N6 khác thí nghiệm Điều 23 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 Hình Cây phả hệ gen HA chủng virus phân lập Việt Nam so sánh với chủng virus H5 khác giới Các chủng virus Việt Nam sử dụng thí nghiệm đánh dấu hình tròn mầu đen Cây phả hệ xây dựng liệu 71 trình tự, với model Maximum Likelyhood sử dụng phần mềm MEGA với hỗ trợ bootrap mức 1000 Cây phả hệ lấy gốc clade 24 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ - 2021 chứng tỏ virus H5N6 tiếp tục biến đổi chủng H5N6 thí nghiệm khơng hồn tồn giống Kết phân tích phả hệ tương tự phân tích gen virus H5N6 có nguồn gốc khác Cây phả hệ virus H5N6 Việt Nam với chủng tham chiếu trình bày hình Kết phả hệ H5 cho thấy bắt nguồn từ gốc A/goose/GD/1/1996 (H5N1) virus tiến hóa nhanh, clade clade có nhiều sub-clades H5N6 rơi vào subclade 2.3.4.4 IV KẾT LUẬN tương lai Vì vậy, việc tiếp tục giám sát, phân tích đặc tính gen đặc tính miễn dịch cần thiết với chủng H5 tái Việt Nam Lời cảm ơn: Nhóm tác giả xin cảm ơn GS TS Kunitoshi Imai GS TS Haruko Ogawa thuộc Đại học Nông nghiệp Thú y Obihiro tài trợ cho việc giải trình tự gen phương pháp NGS Chúng xin cảm ơn GS TS Tesnia Mizutani thuộc Đại học Nông nghiệp Kỹ thuật Tokyo giúp phân tích giải trình tự Nghiên cứu hoàn thành với tài trợ ngân sách nhiệm vụ thường xuyên năm 2017 TÀI LIỆU THAM KHẢO Các chủng virus cúm H5N6 phân lập Việt Nam năm 2014 2015 tiến hành phân tích đặc tính gen thí nghiệm nhằm cung cấp thơng tin cần thiết hữu ích cho nhà quản lý, người chăn ni để phịng bệnh virus cúm gây Gao, Y et al., 2009 Identification of amino acids in HA and PB2 critical for the transmission of H5N1 avian influenza viruses in a mammalian host PLoS Pathog 5(e1000709) Phân tích gen phân tích tiến hoá năm chủng thuộc vào nhóm virus có độc lực cao clade 2.3.4.4 chủng tiến hóa từ chủng virus H5N1 clade 2.3.4 Matsuoka, Y et al., 2009 Neuraminidase stalk length and additional glycosylation of the hemagglutinin influence the virulence of influenza H5N1 viruses for mice J Virol, 83: p 4704-4708 Mặc dù virus có subtype H5N6 nhiên gen virus khơng hồn tồn giống cho thấy chủng tiến hóa riêng rẽ tự nhiên chủng phân lập năm 2014 có tương đồng thấp chủng phân lập năm 2015 Điều cho thấy virus cúm H5N6 tiếp tục thay đổi Một số đột biến cho thấy virus có khả gây bệnh động vật có vú Tuy nhiên virus mẫn cảm với thuốc điều trị cúm amantidine taminflu Chủng vacxin thử nghiệm Viện Thú y cho phản ứng tốt với chủng lựa chọn chủng vacxin clade 2.3.4.4 phân lập Việt Nam Kết nhấn mạnh việc sản xuất nước với chủng thực địa cần thiết quan trọng Tổng hợp kết luận chúng tơi nhận định việc phân tích đặc tính chủng phân lập vơ quan trọng cần thiết cho việc sản xuất vacxin khống chế dịch bệnh McAuley, J.L et al., 2010 PB1-F2 proteins from H5N1 and 20 century pandemic influenza viruses cause immunopathology PLoS Pathog, 6(e1001014) Zamarin, D., M.B Ortigoza, and P Palese, 2006 Influenza A virus PB1-F2 protein contributes to viral pathogenesis in mice J Virol, 80: p 7976-7983 Zhang, W et al., 2013 An airborne transmissible avian influenza H5 hemagglutinin seen at the atomic level Science, 340: p 1463-1467 Zhou, H et al., 2009 The special neuraminidase stalk-motif responsible for increased virulence and pathogenesis of H5N1 influenza A virus PLoS One, 4: p e6277 Ngày nhận 15-3-2021 Ngày phản biện 20-4-2021 Ngày đăng 1-7-2021 25 ... thơng tin đặc tính gen chủng virus phân lập Việt Nam, tiến hành nghiên cứu: ? ?Phân tích phả hệ di truyền đặc điểm gen chủng virus cúm gia cầm H5N6 phân lập Việt Nam năm 2014-2015? ?? II PHƯƠNG PHÁP... Việt Nam năm gần Để góp phần vào việc phịng, chống bệnh cúm gia cầm virus cúm A /H5N6 đạt hiệu cao, 20 nghiên cứu chủng virus cúm gia gia cầm A/ H5N6 nhằm cung cấp thêm phần thơng tin đặc tính gen. .. QUẢ VÀ THẢO LUẬN Trong năm 2014 2015, Viện Thú y tiến hành phân lập thành công số chủng virus H5N6 từ mẫu bệnh phẩm gia cầm số tỉnh phía Bắc Việt Nam số chợ gia cầm sống Hà Nội Các chủng phân lập