Ứng dụng phương pháp tạo gel để xác định nội độc tố vi khuẩn trong nước lọc thận

Bài viết Ứng dụng phương pháp tạo gel để xác định nội độc tố vi khuẩn trong nước lọc thận trình bày việc xác định giá trị sử dụng của phương pháp bán định lượng bằng kỹ thuật tạo Gel xác định nội độc tố vi khuẩn trong môi trường nước; Đánh giá khả năng ứng dụng của phương pháp để xác định nội độc tố vi khuẩn trong nước lọc thận tại một số bệnh viện ở Hà Nội.

HỘI NGHỊ KHOA HỌC TOÀN QUỐC LẦN THỨ X - SỨC KHỎE NGHỀ NGHIỆP VÀ MÔI TRƯỜNG HỢP TÁC CÙNG PHÁT TRIỂN ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP TẠO GEL ĐỂ XÁC ĐỊNH NỘI ĐỘC TỐ VI KHUẨN TRONG NƯỚC LỌC THẬN Nguyễn Thị Quỳnh Mai1, Đàm Thương Thương1, Phạm Thị Thi1, Nguyễn Thị Mai Hương1, Nguyễn Văn Thắng1 TÓM TẮT 31 Hiện nay, với số lượng người mắc suy thận mạn ngày cao, nhu cầu chữa trị lớn, việc chạy thận ứng dụng phương pháp để xác định nội độc tố nước RO chạy thận nhân tạo quan trọng Nước RO sử dụng lọc thận nhân tạo đánh giá chất lượng theo tiêu chuẩn AAMI (Association for the Advancement of Medical Instrumentation), tiêu xét nghiệm nội độc tố vi khuẩn (Bacterial Endotoxin) tiêu bắt buộc phải kiểm tra Hiện có phương pháp xác định nội độc tố vi khuẩn nước: phương pháp tạo gel (Gel clot method), phương pháp đo độ đục (Turbidibidimetric method) phương pháp đo màu (Chromogenic method) Phương pháp tạo gel phương pháp đơn giản, dễ thực hiện, có giá trị bán định lượng nội độc tố vi khuẩn phù hợp với điều kiện phịng thí nghiệm Việt Nam Để ứng dụng phương pháp tạo gel, tiến hành thẩm định thông số phương pháp, thực xác định nội độc tố nước lọc thận hai bệnh viện Thanh Nhàn Bệnh viện Thận Hà Nội Kết cho thấy: Độ nhạy thuốc thử LAL 0,1486 EU/ml khoảng từ λ/2 đến 2λ, đáp ứng tiêu chuẩn dược điển Việt Nam IV Phân tích nội độc tố 20 mẫu nước lọc thận lấy hai bệnh viện Thanh Nhàn Bệnh viện Thận Hà Viện Sức khỏe nghề nghiệp mơi trường Chịu trách nhiệm chính: Nguyễn Thị Quỳnh Mai Email: quynhmai2012@yahoo.com Ngày nhận bài: 23/03/2022 Ngày phản biện khoa học: 08/04/2022 Ngày duyệt bài: 14/04/2022 236 Nội cho kết âm tính Kiểm tra giới hạn nội độc tố nước chạy thận tiêu quan trọng để kiểm tra tính an tồn cho bệnh nhân Phương pháp Gel clot đơn giản, xác ứng dụng nhiều phịng thí nghiệm nước Từ khóa: Nội độc tố vi khuẩn, Dược điển Việt Nam 4, phương pháp Gel Clot, nước lọc thận SUMMARY APPLYING THE GEL CLOT METHOD TO DETERMINE THE BACTERIA ENDOTOXIN IN HEMODIALYSIS WATER Nowadays, the number of people suffer from kidney diseases is increasing dramatically, the treatment and the method to determine the endotoxins in RO water used for hemodialysis are very important RO water evaluated according to AAMI standard (Association for the Advancement of Medical Instrumentation), of which the index of bacterial endotoxin testing is mandatory Currently, there are three methods of identifying endotoxin in water, including Gel clot method, Turbidibidimetric method and Chromogenic method The gel clot method is simple, easy to implement, has semi-quantitative value of bacterial endotoxin suitable with Vietnamese laboratory conditions In order to apply this method, we conducted the evaluation of parameters of the method, determination of endotoxin in kidney filter water at Thanh Nhan hospital and Hanoi Nephrology hospital The TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 514 - THÁNG - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 results showed that the sensitivity of LAL reagent was 0.14686 EU/ml in the range of λ/2 to 2λ, meeting the criteria in Vietnamese Pharmacopoeia IV Endotoxin analysis of 20 RO water used for hemodialysis samples collected at Thanh Nhan hospital and Hanoi Nephrology hospital showed negative results Verification of endotoxins in dialysis water is one of the important indicators for the safety of patients The gel clot method can be applied in many laboratories in the country Keywords: Bacteria Endotoxin, hemodialysis, RO water, Gel clot method I ĐẶT VẤN ĐỀ Theo Hội Thận học Thế giới, có 500 triệu người (chiếm 10%) người trưởng thành giới bị bệnh thận mạn tính mức độ khác Việc thay, ghép thận có chi phí cao, nên chạy thận nhân tạo biết đến cách phổ biến để điều trị suy thận vĩnh viễn Hiện phổ biến có hai kiểu lọc máu: lọc máu thận nhân tạo (hemodialysis), lọc máu qua màng bụng (peritoneal dialysis) Nhưng dù lọc máu theo kiểu đòi hỏi phải theo lịch trình điều trị nghiêm ngặt Trong hệ thống chạy thận nhân tạo, với dịch thẩm tán, chất lượng nước dùng cho chạy thận nhân tạo yếu tố quan trọng ảnh hưởng trực tiếp đến sức khỏe bệnh nhân thận Do đó, nước dùng chạy thận nhân tạo cần phải xử lý kiểm tra nghiêm ngặt đánh giá chất lượng nước lọc thận theo tiêu chuẩn AAMI (Association for the Advancement of Medical Instrumentation), tiêu kiểm tra định, định lượng tổng số vi khuẩn, độ tinh sạch, vô trùng, tiêu bắt buộc phải kiểm tra tiêu nội độc tố vi khuẩn (Bacterial Endotoxin) phải đạt giới hạn cho phép Hiện có phương pháp xác định nội độc tố vi khuẩn nước: phương pháp tạo gel (Gel clot method), phương pháp đo độ đục (Turbidibidimetric method) phương pháp đo màu (Chromogenic method) Mỗi phương pháp có giá trị xác định khác ứng dụng vào để xác định giới hạn nội độc tố vi khuẩn nước lọc thận.Việc lựa chọn phương pháp để xét nghiệm phụ thuộc vào điều kiện trang thiết bị phịng thí nghiệm tính chất loại mẫu thử Hai phương pháp đo độ đục đo màu đòi hỏi phải hệ thống máy ủ kèm thiết bị đo quang cộng với phần mềm hỗ trợ phức tạp dẫn đến giá thành cao khó đáp ứng nhiều phịng thí nghiệm Do đó, với điều kiện phịng thí nghiệm Vi sinh, Viện Sức khỏe nghề nghiệp môi trường, tiến hành nghiên cứu với đề tài “Ứng dụng phương pháp bán định lượng kỹ thuật tạo Gel để xác định giới hạn nội độc tố vi khuẩn nước lọc thận” với 02 mục tiêu: 1- Xác định giá trị sử dụng phương pháp bán định lượng kỹ thuật tạo Gel xác định nội độc tố vi khuẩn môi trường nước; 2- Đánh giá khả ứng dụng phương pháp để xác định nội độc tố vi khuẩn nước lọc thận số bệnh viện Hà Nội II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu: Phương pháp bán định lượng kỹ thuật tạo Gel 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu: Thử nghiệm phịng thí nghiệm 2.2.2 Hóa chất trang thiết bị Hóa chất: Nước BET; Thuốc thử LAL độ nhạy 0,125 0,03 IU/ml; Chuẩn gốc Nội 237 HỘI NGHỊ KHOA HỌC TOÀN QUỐC LẦN THỨ X - SỨC KHỎE NGHỀ NGHIỆP VÀ MÔI TRƯỜNG HỢP TÁC CÙNG PHÁT TRIỂN độc tố Thiết bị dụng cụ: Thiết bị ủ nhiệt Block heater; Tủ sấy Memmert; Máy lắc; Máy đo pH; Micropipet 10 - 1000 µl (Eppendoft); Micropipet - 100 µl (Eppendoft); Ống nghiệm khơng chứa Endotoxin (10 x 75 mm); Ống nghiệm không chứa Endotoxin (13 x100 mm); Đầu khơng có Endotoxin (0,05 – ml); Đầu khơng có Endotoxin (0,002 – 0,2 ml) 2.2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.2.3.1 Xây dựng phép thử xác định giới hạn nội độc tố nước lọc thận phương pháp tạo gel a) Căn xây dựng phương pháp: Dược điển Mỹ 38 (USP), Dược điển Anh 2016, dược điển Châu Âu, dược điển Nhật; Tiêu chuẩn ANSI/AAMI RD52 - 2004 Mỹ Dược điển Việt Nam (xuất lần thứ 4); Các hướng dẫn nhà sản xuất; Các tài liệu FDA Q&A b) Nguyên lý: Dựa tạo gel thuốc thử LAL với nội độc tố có mẫu thử Phương pháp kiểm tra xem lượng nội độc tố mẫu thử có lớn giới hạn quy định hay không c) Xác định giá trị sử dụng phương pháp: Kiểm tra pH, độ nhạy thuốc thử, xác định khoảng pha loãng mẫu thử, kiểm tra yếu tố ảnh hưởng xác định độ xác phương pháp Kiểm tra pH mẫu thử Pha loãng dung dịch mẫu thử với nước BET đến độ pha lỗng thích hợp dựa vào giới hạn nội độc tố (EL) độ nhạy (λ) thuốc thử LAL theo cơng thức sau: Độ pha lỗng tối đa (MVD) = Giới hạn nội độc tố (EL) x nồng độ dung dịch thử / λ Giới hạn nội độc tố vi khuẩn theo tiêu chuẩn không 0,25 EU/ml → MVD = 0,25/0,125 =2 Tiến hành pha loãng mẫu thử độ pha loãng 2; 1,5 lần nguyên mẫu theo Bảng Mẫu thử pha với nước BET để đạt dãy thử với độ pha loãng tối đa Tiến hành kiểm tra pH dung dịch mẫu thử Bảng 2.1 Pha loãng dung dịch mẫu thử Độ pha loãng MVD Hút 3ml mẫu thử + ml nước BET → ml dd (A) Độ pha loãng Hút 3ml mẫu thử + 1,5 ml BET → 4,5 ml dd (B) MVD/1,5 Độ pha loãng MVD/2 Dùng nguyên mẫu Kiểm tra độ nhạy thuốc thử LAL (Limulus Amebocyte Lysate) Độ nhạy thuốc thử LAL lượng nội độc tố thấp cần thiết để tạo gel với thuốc thử điều kiện xác định Cách tiến hành: - Pha chuẩn nội độc tố: Pha loãng dung dịch chuẩn nội độc tố với nước BET để dung dịch có nồng độ chuẩn nội độc tố λ, λ, λ/2, λ/4 theo Bảng Bảng 2.2 Dãy dung dịch NĐT chuẩn dùng để kiểm tra độ nhạy thuốc thử LAL Nồng độ nội độc tố Hệ số Tên Nồng độ nội độc Dung Số ống thêm vào pha ống tố sau pha môi nghiệm dung dịch loãng nghiệm loãng S1 2λ λ/BET Nước BET S2 λ 238 TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 514 - THÁNG - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 0/nước BET - Chuẩn bị dung dịch A, B, C, D theo bảng Cho vào ống nghiệm 0,1 ml dung dịch A, B, C, D 0,1 ml thuốc thử LAL Lắc nhẹ ống nghiệm 2-3 giây sau ủ 37°C ± 1°C thời gian 60 ± phút Lấy nhẹ ống nghiệm khỏi buồng ủ, nghiêng đầu ống nghiệm từ từ đến 180° Nếu dịch thử ống nghiệm tạo thành gel không bị chảy nhẹ nhàng dốc ngược S3 λ/2 S4 λ/4 BET ống nghiệm kết dương tính Nếu khơng tạo thành gel gel bị chảy lỗng kết âm tính Đánh dấu ống nghiệm có kết dương tính Tính logarit nồng độ “điểm dừng” (nồng độ cuối dãy có kết dương tính) dãy Độ nhạy thuốc thử LAL đối logarit giá trị logarit trung bình Bảng 2.3 Thí nghiệm thử giới hạn nội độc tố phương pháp tạo gel Dung Nồng độ nội độc Số ống Ghi dịch tố thêm vào A 0/dung dịch thử Mẫu thử độ pha loãng ≤ MVD NĐT pha dung dịch thử: kiểm soát âm tính B 2λ/dung dịch thử giả Chuẩn NĐT pha nước BET: đối chứng dương C 2λ/BET tính D BET Đối chứng âm tính, kiểm sốt điều kiện tiến hành - Nhận định kết quả: Phép thử có giá trị chuẩn nội độc tố mẫu thử độ pha ống dung dịch B C cho lỗng khác có nồng độ 2λ Ở kết dương tính dung dịch D âm tính nồng độ bắt buộc dùng ống để kiểm tra Mẫu thử đạt yêu cầu kết âm tính Tiến hành ủ 37 ± 0,1 ºC thời gian 60 hai ống nghiệm dung dịch A Mẫu thử ± phút Đọc kết sau vừa đủ thời khơng đạt u cầu kết dương tính gian hai ống nghiệm dung dịch A Nếu hai Nhận định kết quả: Phép thử có hiệu lực ống dung dịch A cho kết khác nhau, dung dịch BET cho kết âm tính ống dương tính ống âm tính dung dịch chuẩn nội độc tố BET cho làm lại phép thử Mẫu thử đạt yêu cầu kết dương tính Độ pha lỗng khơng gây lần thứ hai hai ống cho kết âm ảnh hưởng đến phép thử độ pha loãng tính dung dịch thử cho kết âm tính cịn Xác định khoảng pha lỗng phù hợp dung dịch chuẩn nội độc tố mẫu thử Pha loãng dung dịch chuẩn nội độc tố gốc cho kết dương tính Độ pha lỗng gây với BET để thu dung dịch chuẩn nội ảnh hưởng đến phép thử độ pha lỗng độc tố có nồng độ 2λ Pha lỗng dung dịch dung dịch thử dung dịch chuẩn nội độc chuẩn nội độc tố gốc với mẫu thử độ tố mẫu thử cho kết âm tính pha lỗng khác để thu dung dịch Khoảng pha lỗng thích hợp: từ độ pha lỗng 239 HỘI NGHỊ KHOA HỌC TỒN QUỐC LẦN THỨ X - SỨC KHỎE NGHỀ NGHIỆP VÀ MÔI TRƯỜNG HỢP TÁC CÙNG PHÁT TRIỂN tối thiểu đến độ pha loãng tối đa Kiểm tra yếu tố ảnh hưởng Chuẩn bị dãy phản ứng dung dịch theo Bảng sau: Dung dịch I (mẫu thử nội độc tố), II (nội độc tố mẫu thử), III (nội độc tố nước BET), IV (nước BET) Bảng 2.4 Dãy dung dịch dùng để kiểm tra yếu tố ảnh hưởng Nồng độ nội độc tố Nồng độ nội Dung Hệ số pha Số ống thêm vào Dung môi độc tố sau dịch loãng nghiệm dung dịch pha loãng Độ pha I 0/dung dịch thử loãng MVD Dung dịch 2λ mẫu thử λ độ pha λ/2 λ/dung dịch thử II loãng lựa chọn λ/4 (MVD) 2λ λ III λ/nước BET Nước BET λ/2 λ/4 IV 0/ nước BET - Cách thực hiện: Cho vào ống Độ xác mức độ giống giũa nghiệm 0,1 ml dung dịch chuẩn bị kết phân tích với giá trị tham chiếu bảng 0,1 ml thuốc thử LAL Lắc nhẹ Độ xác chúng tơi đánh giá ống nghiệm 2-3 giây sau ủ 37±1 0C yếu tố độ lặp lại độ thời gian 60 ± phút Đọc kết sau xác trung gian vừa đủ thời gian, đánh dấu ống nghiệm Độ lặp lại: Để tính tốn độ lặp chúng tơi có kết dương tính vào bảng Tính logarit tiến hành phân tích mẫu lần Phương nồng độ “ điểm dừng ” (nồng độ cuối pháp thực hiện: dãy có kết dương tính) dãy - Pha loãng mẫu dung dịch chuẩn nội Độ nhạy thuốc thử LAL đối logarit độc tố gốc (mỗi mẫu 1,0 ml) với 3,9 ml/ giá trị logarit trung bình Phép thử có giá mẫu dung dịch mẫu thử độ pha loãng trị dung dịch I IV cho phản ứng âm MVD để thu mẫu dung dịch chuẩn tính dung dịch III có độ nhạy lớn nội độc tố mẫu thử (mỗi mẫu 4,0 ml) λ/2 nhỏ λ có nồng độ 2λ (Dung dịch chuẩn/thử) Nếu độ nhạy LAL tính theo dung dịch II đánh số từ đến lớn λ/2 nhỏ λ mẫu thử - Pha loãng mẫu dung dịch thử (mỗi không chứa yếu tố ảnh hưởng mẫu 2,0ml) với 2,0 ml nước BET mẫu ta Đánh giá độ xác mẫu dung dịch thử pha lỗng (mỗi 240 TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 514 - THÁNG - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 mẫu 4,0 ml) với độ pha loãng MVD đánh số từ đến - Pha loãng dung dịch chuẩn nội độc tố nước BET thành dung dịch có nồng độ 2λ (0,25 EU/ml) - Hoàn nguyên lọ chuẩn nội độc tố với 5,0 ml BET → 5,0 ml dd S (10 EU/ml); 0,1 ml dd S + 3,9 ml BET → 4,0 ml dd S1 (nồng độ 0,25 EU/ml) Độ xác trung gian: Tiến hành độ lặp lại khác ngày thực cán khác Phương pháp thực tương tự thực tính tốn độ lặp 2.2.3.2 Kỹ thuật lấy mẫu bảo quản mẫu nước lọc thận để xác định nội độc tố vi khuẩn nước lọc thận số bệnh viện Hà Nội - Địa điểm lấy mẫu: Đường ống cấp vào máy lọc thận Bệnh viện Thận Hà Nội Bệnh viện Thanh Nhàn Các mẫu nước lấy bể chứa thành phẩm nước RO điểm cuối cấp vào máy dựa vào sơ đồ vị trí hệ thống xử lý nước RO - Số lượng thể tích mẫu mẫu: 10 mẫu/bệnh viện với thể tích 50ml/mẫu - Chuẩn bị dụng cụ lấy mẫu: tuýp nhựa khơng có Endotoxin chai thủy tinh, nút mài rửa sạch, tráng nước cất sấy khô vô khuẩn nhiệt độ khô 250ºC 1h; Bông cồn, bật lửa, kẹp - Phương pháp lấy mẫu: (1) Trước lấy mẫu cần có nhãn ghi rõ địa điểm, thời gian, phương pháp lấy mẫu người lấy mẫu (2) Xả vịi nước cho chảy - phút Đóng vòi khử khuẩn kỹ vòi nhiệt độ bồng cồn Mở lại cho chảy - phút, điều chỉnh dòng chảy vừa đủ để lấy mẫu Khử khuẩn miệng chai hứng nước, để trống chừng khoảng -3 cm từ mặt nút chai trở xuống để tránh nhiễm khuẩn từ miệng nút chai - Bảo quản mẫu: Sau lấy mẫu, mẫu bảo quản bình tích lạnh mang phịng thí nghiệm ngày bảo quản – º C 2.2.4 Xử lý số liệu: Tổng hợp, phân tích số liệu đánh giá khả ứng dụng Tổng kết, biên soạn viết báo cáo III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Xác định giá trị sử dụng phép thử xác định giới hạn nội độc tố vi khuẩn phương pháp tạo gel 3.1.1 Kiểm tra pH mẫu thử Kết kiểm tra pH dung dịch mẫu thử nồng độ pha loãng: 2; 1,5 lần nguyên mẫu cho kết 7,49; 7,47 7,45 Từ kết kiểm tra pH cho thấy dãy dung dịch thử sau pha lỗng có pH nằm giới hạn cho phép phép thử từ 6,0 – 8,0 3.1.2 Kiểm tra độ nhạy thuốc thử LAL (Limulus Amebocyte Lysate) Bảng cho thấy giới hạn thuốc thử đạt độ nhạy thuốc thử LAL 0,1486 EU/ml nằm khoảng từ λ/2 đến 2λ (theo quy định dược điển Việt Nam: 0,0625 EU/ml đến 0,25 EU/ml) nằm khoảng giới hạn cho phép Bảng 3.1 Kết kiểm tra độ nhạy thuốc thử LAL STT BET S1 (2λ) S2 (λ) S3 (λ/2) S4 (λ/4) + + + + + + - Logarit “điểm dừng” -0,9031 -0,9031 -0,9031 241 HỘI NGHỊ KHOA HỌC TOÀN QUỐC LẦN THỨ X - SỨC KHỎE NGHỀ NGHIỆP VÀ MÔI TRƯỜNG HỢP TÁC CÙNG PHÁT TRIỂN + -0,6021 Trung bình -0,8279 Đổi logarit 0,1486 (-): âm tính, (+): dương tính 3.1.3 Xác định khoảng pha lỗng phù hợp Từ chúng tơi tìm độ pha lỗng tối thiểu khơng gây ảnh hưởng đến phép thử (ở nồng độ dược chất tá dược cao nhất) Từ Bảng cho thấy độ pha lỗng tối thiểu MVD Chúng tơi Lựa chọn độ pha loãng để đánh giá yếu tố ảnh hưởng Bảng 3.2 Xác định khoảng pha loãng phù hợp mẫu thử Dung dịch Kết Độ pha BET Mẫu LAL STT chuẩn NĐT/ loãng (μl) thử (μl) (μl) Ống Ống mẫu thử MVD/2 100 100 + + Dd chuẩn NĐT/ mẫu MVD/1,5 100 100 + + thử MVD 100 100 + + MVD/2 100 100 + + Dung dịch MVD/1,5 100 100 + + mẫu thử MVD 100 100 BET 100 100 Dd chuẩn 100 100 + + NĐT/BET (-): âm tính, (+): dương tính 3.1.4 Kiểm tra yếu tố ảnh hưởng Bảng cho thấy dung dịch thử nước BET cho kết âm tính Độ nhạy thuốc thử LAL nước BET 0,1486 EU/ml độ nhạy thuốc thử LAL mẫu thử 0,0743 EU/ml nằm khoảng từ 2λ đến λ/2 (0,25 EU/ml đến 0,0625 EU/ml) Mẫu thử với độ pha loãng MVD khơng chứa yếu tố ảnh hưởng đến q trình tạo gel Bảng 3.3 Kết kiểm tra yếu tố ảnh hưởng đến độ nhạy thuốc thử LAL Chuẩn NĐT Logarit Chuẩn NĐT mẫu A Logarit BET thử “điểm BET (mẫu “điểm STT S1 S2 S3 S4 SA SA1 SA2 SA3 thử) dừng” (2λ) (λ) (λ/2) (λ/4) dừng” (2λ) (λ) (λ/2) (λ/4) + + -0,9031 + + + -1,2041 + + -0,9031 + + + -1,2041 + + -0,9031 + + -0,9031 + -0,6021 + + + -1,2041 Trung bình -0,8279 -1,1289 Đối logarit 0,1486 0,0743 242 - TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 514 - THÁNG - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 (-): âm tính, (+): dương tính 3.1.5 Đánh giá độ xác 3.1.5.1 Độ lặp lại Tất dung dịch chuẩn NĐT (2 λ)/ mẫu thử dung dịch chuẩn NĐT (2 λ)/BET cho phản ứng dương tính Tất dung dịch mẫu thử nước BET cho kết âm tính Mẫu thử đạt yêu cầu độ lặp lại 3.1.5.2 Độ xác trung gian Tất 12 dung dịch chuẩn NĐT (2λ)/mẫu thử dung dịch chuẩn NĐT (2λ)/BET ngày kiểm nghiệm khác cho phản ứng dương tính Tất 12 dung dịch mẫu thử nước BET ngày kiểm nghiệm khác cho kết âm tính Mẫu thử đạt yêu cầu độ xác 3.2 Kết kiểm tra nội độc tố vi khuẩn Nghiên cứu tiến hành lấy 20 mẫu nước lọc thận hai Bệnh viện Thận Hà Nội Bệnh viện Thanh Nhàn, bệnh viện 10 mẫu Kết khảo sát kiểm tra nội độc tố vi khuẩn mẫu thử phương pháp tạo gel độ pha loãng MVD thời điểm sau lấy mẫu sau 24 giờ, 48 giờ, 72 giờ, ngày, ngày, ngày, ngày cho kết đạt yêu cầu giới hạn nội độc tố vi khuẩn Kết kiểm tra nội độc tố vi khuẩn mẫu thử phương pháp tạo gel độ pha loãng MVD hai bệnh viện cho kết đạt yêu cầu (Bảng 8) Bảng 3.4 Kiểm tra nội độc tố vi khuẩn mẫu RO lọc thận nhân tạo bệnh viện BV Thanh Nhàn BV Thận Hà Nội Số Độ nhạy Độ nhạy Độ nhạy Độ nhạy Đo pH Đo pH mẫu thuốc thử thuốc thử thuốc thử thuốc mẫu thử mẫu thử 0,125 0,03 0,125 thử 0,03 7,76 7,86 7,79 7,54 7,73 7,68 7,74 7,39 7,82 7,80 7,78 7,79 7,95 7,32 7,64 7,59 7,70 7,71 10 7,49 7,34 (-): âm tính, (+): dương tính IV KẾT LUẬN Nghiên cứu xây dựng quy trình lấy mẫu, bảo quản mẫu để kiểm tra giới hạn nội độc tố vi khuẩn mẫu nước RO lọc thận nhân tạo Các mẫu thử lấy chai không chứa nội độc tố bảo quản điều kiện - ºC vòng ngày hai bệnh viện Thanh Nhàn Bệnh viện Thận 243 HỘI NGHỊ KHOA HỌC TOÀN QUỐC LẦN THỨ X - SỨC KHỎE NGHỀ NGHIỆP VÀ MÔI TRƯỜNG HỢP TÁC CÙNG PHÁT TRIỂN Hà Nội phù hợp để kiểm tra giới hạn nội độc tố vi khuẩn Nghiên cứu xây dựng quy trình kiểm tra giới hạn nội độc tố trong nước lọc thận kỹ thuật tạo gel xác định giá trị sử dụng phương pháp với tiêu: - Xác định khoảng giới hạn pha loãng tối đa phù hợp - Xác định giới hạn độ nhạy thuốc thử LAL 0,1486 EU/ml nằm khoảng từ λ/2 đến 2λ phù hợp tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam IV - Chứng minh phương pháp có độ xác cao (độ lặp lại độ xác trung gian đạt yêu cầu) Ứng dụng phương pháp xây dựng để kiểm tra nội độc tố vi khuẩn mẫu thử hai bệnh viện Thanh Nhàn Bệnh viện Thận Hà Nội cho kết mẫu nước đạt tiêu giới hạn nội độc tố vi khuẩn V KIẾN NGHỊ Kiểm tra giới hạn nội độc tố nước chạy thận tiêu quan trọng để kiểm tra tính an toàn cho bệnh nhân Từ kết thử nghiệm cho thấy phép thử giới hạn nội độc tố vi khuẩn phương pháp tạo gel phù hợp với điều kiện sở để thử giới hạn nội độc tố vi khuẩn mẫu thử nước chạy thận Phương pháp đơn giản, xác ứng dụng nhiều phịng thí nghiệm nước Cần sớm ứng dụng phương pháp để kiểm tra giới hạn nội độc tố vi khuẩn nước chạy thận bệnh viện nước 244 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam, lần xuất thứ 4, NXB Y học, Hà Nội Lê Huy Chính (2007), Vi sinh vật Y học : Sách đào tạo bác sỹ đa khoa, NXB Y học, Hà Nội Lê Quang Huấn Lê Xuân Tú (2001), "Nội độc tố phương pháp xác định", Tạp chí Sinh học, 23(4), tr 53-56 Lưu Thị Hương (2013), Kiến thức bệnh suy thận mãn cách tự chăm sóc bệnh nhân suy thận mãn chạy thận nhân tạo chu kỳ Bệnh viện Đa khoa tỉnh Gia Lai Nguyễn Thị Kim Hương Lê Văn Đạt (2012), "Giới thiệu hệ thống xác định nội độc tố tự động", Tạp chí Y học Diễn đàn Xét nghiệm đa khoa, Nhiễm trùng độc lực vi sinh vật, truy cập 5/8/2016, http://xetnghiemdakhoa.com/diendan/showthr ead.php?tid=2794 Máy lọc WATTS, Lọc nước ngành dược phẩm, bệnh viện: Nước tinh khiết chạy thận nhân tạo, truy cập ngày 05/8/2016, trang web http://www.thietbiloc.com/nuoc-y-te/92nuoc-tinh-khiet-chay-than-nhan-tao Đại học Thái Nguyên, Giáo trình bệnh truyền nhiễm, truy cập 05/8/2016, http://www.tnu.edu.vn/sites/trungtq/Bi%20gin g%20chia%20s/Giao%20tr%C3%ACnh%20b %E1%BB%87nh%20truy%E1%BB%81n%2 0nhi%E1%BB%85m%20Ch%C6%B0%C6% A1ng%20I.pdf Ahmed F El-Koraie et al (2012), "Endotoxins and inflammation in hemodialysis patients", Hemodialysis International, 17: 359–365 10 Elizabeth Lindley, Leeds St James’s University Hospital and Leeds General Infirmary, UK, Dialysis Fluid Purity Best Practice Guidelines (and real life), access date TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 514 - THÁNG - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 15/10/2015: https://www.rairarubiabooks.com/related-pdfdialysis-fluid-purity-best-practice-guidelinesand-real-life-elizabeth-lindley.html 11 Ikuto Masakane et al (2013), "Guidelines: 2011 JSDT Standard on the Management of Endotoxin Retentive Filter for Dialysis and Related Therapies", Therapeutic Apheresis and Dialysis, 17(2): 229–240 12 Association for the Advancement of Medical Instrumentation (2014), American National Standard, Guidance for the preparation and quality management of fluids for hemodialysis and related therapies of the document before making a purchasing decision 13 PhD Kenneth Todar, Todar's Online Textbook of Bacteriology, access date 05/8/2016, http://textbookofbacteriology.net/endotoxin.ht ml 14 Koraie AF et al (2007), "Bacteriologicalmonitoring of dialysis fluid in hemodialysis units in Alexandria, Egypt ", Saudi medical Journal, 28(8): 1234 -1238 15 Nephrology Dialysis Transplantation (2002), "European Best Practice Guidelines for haemodialysis Part Section IV Dialysis fluid purity: implications in the haemocompatibility network system", Oxford journals, 17(Supplement S45-S46) 16 R Perez - Garcia and P Rodriguez Beniter (2000), "Why and how to monitor bacterial contamination of dialysate?", Nephrology Dialysis Transplantation, 15(1): 760 -764 17 Skarupskienė I et al (2010), "The level of endotoxins in hemodialysis water and dialysate in Lithuanian hemodialysis centers", Medicina (Kaunas), 46(8): 556-560 18 Skarupskienė I, Bumblytė IA and Kuzminskis V (2007), "The level of endotoxins in hemodialysis water and dialysate", Medicina (Kaunas), 43(1): 81-4 245 ... 1- Xác định giá trị sử dụng phương pháp bán định lượng kỹ thuật tạo Gel xác định nội độc tố vi khuẩn môi trường nước; 2- Đánh giá khả ứng dụng phương pháp để xác định nội độc tố vi khuẩn nước lọc. .. method) phương pháp đo màu (Chromogenic method) Mỗi phương pháp có giá trị xác định khác ứng dụng vào để xác định giới hạn nội độc tố vi khuẩn nước lọc thận .Vi? ??c lựa chọn phương pháp để xét nghiệm... hạn nội độc tố vi khuẩn phương pháp tạo gel phù hợp với điều kiện sở để thử giới hạn nội độc tố vi khuẩn mẫu thử nước chạy thận Phương pháp đơn giản, xác ứng dụng nhiều phịng thí nghiệm nước