Trong nghiên cứu này, chủng nấm được đặt tên PLUS được phân lập từ vùng Lâm Đồng và được phân loại là Phellinus linteus dựa vào trình tự rARN vùng ITS. Chủng nấm này được tối ưu hóa điều kiện nuôi cấy để thu sinh khối dạng sợi.
TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 509 - THÁNG 12 - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2021 Capling, L., et al., Validity of Dietary Assessment in Athletes: A Systematic Review Nutrients, 2017 9(12): p 1313 Tardy, A.L., et al., Vitamins and Minerals for Energy, Fatigue and Cognition: A Narrative Review of the Biochemical and Clinical Evidence Nutrients, 2020 12(1) Lukaski, H.C., Vitamin and mineral status: effects on physical performance Nutrition, 2004 20(7-8): p 632-44 Beck, K.L., et al., Micronutrients and athletic performance: A review Food Chem Toxicol, 2021 158: p 112618 Amrein, K., et al., Vitamin D deficiency 2.0: an update on the current status worldwide European Journal of Clinical Nutrition, 2020 74(11): p 1498-1513 Larson-Meyer, D.E., K Woolf, and L Burke, Assessment of Nutrient Status in Athletes and the Need for Supplementation Int J Sport Nutr Exerc Metab, 2018 28(2): p 139-158 Kawashima, I., et al., Comparison of vitamin D sufficiency between indoor and outdoor elite male collegiate athletes Nagoya J Med Sci, 2021 83(2): p 219-226 10 Teixeira, P., et al., Prevalence of vitamin D deficiency amongst soccer athletes and effects of weeks supplementation J Sports Med Phys Fitness, 2019 59(4): p 693-699 KHẢ NĂNG LÊN MEN CHÌM VÀ TÁC DỤNG CỦA DỊCH CHIẾT SINH KHỐI NẤM THƯỢNG HOÀNG (Phelinus linteus) PHÂN LẬP TẠI LÂM ĐỒNG, VIỆT NAM LÊN MỘT SỐ DỊNG TẾ BÀO NGƯỜI Phạm Đức Minh2, Hồng Vân Thanh3, Hoàng Phú Hiệp3, Hoa Thị Minh Tú1, Nguyễn Hữu Trí2, Lê Thị Hồng Yến5, Nguyễn Thị Minh Huyền1 TĨM TẮT 20 Nấm Thượng hoàng (Phellinus linteus) biết đến giới loại nấm dược liệu Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam; Học viện Quân y, Bệnh viện Quân y 103; Đại học Sư phạm, Đại học Thái Nguyên; Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh; Viện Vi sinh vật công nghệ sinh học, Đại học Quốc gia Hà Nội; Chịu trách nhiệm chính: Nguyễn Thị Minh Huyền Email: ntminhhuyen@ibt.ac.vn Ngày nhận bài: 23.11.2021 Ngày phản biện khoa học: 27.11.2021 Ngày duyệt bài: 30.11.2021 có nhiều cơng dụng tốt cho sức khỏe người Tuy nhiên, thể nấm Việt Nam giá cao việc trồng nấm nước ta có nhiều hạn chế Do đó, trồng nấm dạng sinh khối môi trường lên men lỏng lựa chọn quan tâm Trong nghiên cứu này, chủng nấm đặt tên PLUS phân lập từ vùng Lâm Đồng phân loại Phellinus linteus dựa vào trình tự rARN vùng ITS Chủng nấm tối ưu hóa điều kiện ni cấy để thu sinh khối dạng sợi Sinh khối nấm thu sau lên men sấy khơ chiết với nước nóng cồn, sau dịch chiết đánh giá khả ảnh hưởng đến dòng tế bào ung thư vú BT474 KIT MTS Kết 137 HỘI NGHỊ KHOA HỌC LẦN THỨ XXIV CỦA HỘI HÓA SINH Y HỌC HÀ NỘI VÀ CÁC TỈNH PHÍA BẮC cho thấy hai dịch chiết Phellinus linteus có khả kìm hãm phát triển BT474 Dịch chiết nước nóng có kìm hãm BT474 cao dịch chiết cồn Cả loại dịch chiết không ảnh hưởng đến dịng tế bào phơi thận thường người (HEK293) Từ khóa: Phân lập, nấm dược liệu, lên men chìm, sinh khối, Phellinus linteus SUMMARY SUBMERGE FERMENTATION ABILITY AND EFFECT OF EXTRACTION OF PHELLINUS LINTEUS BIOMASS WHICH ISOLATED IN LAM DONG, VIETNAM ON HUMAN CELL LINES Phellinus linteus has been worldwide known as a medicinal mushroom with many usefull activity for human health However, its fruit body still rare in Vietnam and is very expensive, because it is difficult for cultivated in artificial medium Therefore, biomass production by liquid fermentation is still being a good way for obtaining this mushroom’s production in Vietnam In this study, one mushroom naming PLUS was isolated from Lam Dong Based on morphology observation and rARN sequence analysis of the ITS region PLUS was identified as Phellinus linteus Biomass of this fungus obtained from an optimized liquid medium was used for hot waterand ethanol extraction These extractions were used for testing ability to affect to human breast cancer cell line (BT474) activity by using MTS KIT The results showed that both of two extractions inhibit activity of BT474 cell line However, the hot water extraction showed higher activity than the ethanol extraction Both of these extractions showed no effective to the normal human embryonic kidney (HEK293) cell line 138 Keywords: Isolation, medicinal mushroom, submerged fermentation, biomass, Phellinus linteus I ĐẶT VẤN ĐỀ Nấm Thượng hoàng (TH) có tên khoa học Phellinus linteus, họ Hymenochaetaceae, chi Phellinus Nấm có màu vàng, đường kính 6-12 cm, dày khoảng 2-10 cm, hình bán nguyệt, dạng nhẵn, trịn hình dạng đa dạng Bề mặt có màu sậm, lông ngắn dần trưởng thành, nấm ngả sang màu đen vàng sậm, bề ngang bề dọc khác biệt hẳn Mặt thường có màu vàng sáng, mặt màu sẫm Thỉnh thoảng nấm có hình dạng khơng miếng bào tử có màu vàng nhạt Đây lồi nấm hóa gỗ, thường mọc vùng rừng sâu, núi cao hiểm trở, hay khu rừng nguyên sinh nên tuổi nấm có lên tới hàng chục năm Chúng sử dụng phổ biến Hàn Quốc, Trung Quốc, Nhật Bản Tổng sản lượng loài Phellinus giới khoảng 30 tấn/năm, chủ yếu từ tự nhiên Việt Nam nước có nhiều lồi Phellinus, nhiên bị khai thác cạn kiệt, tận thu khó gặp khơng sâu vào vùng rừng nguyên sinh Tác dụng nấm sức khỏe người nghiên cứu nhiều Các loại nấm nhà khoa học giới quan tâm đặc tính chống khối u [1] Các nghiên cứu cịn có tác dụng tốt điều trị bệnh đái tháo đường, nhiễm khuẩn, bệnh tim, cao huyết áp có tính kháng viêm lt [2] Hiện nay, có số nghiên cứu Việt Nam tìm đặc điểm sinh trưởng nấm [3] hay nghiên cứu loài chi Phellinus Phellinus baumi [4] nhằm mục đích Trong nghiên cứu này, phân lập định danh nấm Thượng TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 509 - THÁNG 12 - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2021 hoàng vùng Lâm Đồng, Việt Nam số nghiên cứu sơ đặc tính sinh trưởng tác dụng dịch chiết sinh khối nấm lên dòng tế bào ung thư vú BT474 tế bào thường HEK293 thực II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu Chủng nấm TH thu vùng Madagui, huyện Đạ Huoai, tỉnh Lâm Đồng; Các hóa chất đạt chuẩn vi sinh sinh học phân tử; Môi trường thạch khoai tây (PDAPotato Dextrose Agar): 200 g khoai tây, đun lấy nước 20 phút, glucose 20 g/l; Yeast extract g/l; Agar 15 g/l khử trùng 121oC 15 phút Môi trường lỏng chuẩn bị dựa tham khảo Lee et al [5].Thành phần môi trường gồm: glucose 40 g/l; cao nấm men 20 g/l; K2HPO4 0,46 g/l; KH2PO4 1,00 g/l; MgSO4.7 H2O 0,5 g/l; FeCl2 0,01 g/l; MnCl2.4H2O 0.036 g/l; ZnCl2 0.03 g/l; CuSO4.7H2O 0,005 g/l; hấp khử trùng 121°C thời gian 15-20 phút Phương pháp nghiên cứu Phân lập nấm Thượng hoàng Phellinus sp.: Tai nấm TH thu nhận thị trấn Madagui, huyện Đạ Huoai, tỉnh Lâm Đồng Tai nấm phát triển tốt, không bị sâu mọt đục khoét Mẫu xử lý theo cách sau: Dùng thấm cồn 70o lau bề mặt thể nấm để loại bỏ bào tử bụi bẩn thể, cắt chân nấm Sau đó, dùng bơng thấm cồn 70o lau bề mặt thể nấm Khử trùng dao cấy lửa đèn cồn Dùng lưỡi dao rạch nhẹ mặt thể nấm tách thể làm hai Tiến hành lấy dao cấy lấy mẫu mô bên cấy lên môi trường PDA đĩa petri có kích thước 90 x 15 mm Sau đó, mang đĩa giống để vào phòng tối, nhiệt độ phòng từ 25oC – 32oC Quan sát sợi nấm mọc sau Nhân giống nấm môi trường thạch lỏng: Giống nấm nhân bảo quản môi trường PDA Trước thí nghiệm, làm cách cấy nấm đĩa PDA, ủ 28°C Cắt nhỏ sợi nấm chuyển sang mơi trường lỏng bình tam giác 250ml với 50 ml môi trường, cấy giống theo tỉ lệ 10% Các điều kiện gồm: nhiệt độ 28oC, tốc độ lắc 150 vịng/phút, thời gian ni lắc 12 ngày để thu sinh khối Tách chiết tinh DNA từ nấm Thượng Hoàng: Sinh khối nấm thu cách ly tâm 10000 vòng/phút phút ống 2ml nghiền mịn với Ni tơ lỏng Bổ sung 800 µl đệm TE + 1% triton X100, trộn Thêm 15 µl lysozyme 100 mg/ml, ủ 37°C 1h Thêm 60µl SDS 10% 15µl proteinaise K (20mg/ml), trộn đều, ủ 56°C 30 phút Tiếp tục thêm 100µl CTAB/NaCl 100µl NaCl 5M, trộn đều, ủ 65°C 10 phút Bổ sung 800µl hỗn hợp Cloroform/isoamylalcohol (24:1) đảo nhẹ nhàng, ly tâm 10 phút 12000 vòng/phút Hút dịch sang ống Lặp lại bước lần Bổ sung 800µl isopropanol, đảo ống ủ -20°C 1giờ Ly tâm với tốc độ 12000 vòng/phút 15 phút 4oC Rửa tủa lần 500µl ethanol 70%, ly tâm thu cặn, để khơ Hịa tan lại DNA 100µl nước khử ion (DDW), bổ sung 200 µl lysis buffer tiếp tục tinh lại với kit Thermo Scientific GeneJET DNA purification DNA elute 100µl DDW Bảo quản tủ -20oC Nồng độ DNA xác định với máy đo nanodrop PCR giải trình tự DNA: Hỗn hợp phản ứng PCR gồm có: 1x PCR buffer 22,5 µl, 10 pmol primer 0,5 µl loại (ITS1: TCC GTA GGT GAA CCT GCG G; ITS4: TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC), DNA 139 HỘI NGHỊ KHOA HỌC LẦN THỨ XXIV CỦA HỘI HÓA SINH Y HỌC HÀ NỘI VÀ CÁC TỈNH PHÍA BẮC khn 0,5 µl, nước khử ion vừa đủ 25 µl (EZ PCR mix, Phusa Biochem) Chu trình nhiệt: 1, 95oC phút; 2, 95oC 30 giây; 3, 58oC 30 giây; 4, 72oC 30 giây; lặp lại bước đến từ 30 đến 35 chu kỳ; 5, 72oC phút Sản phẩm PCR phân tách điện di 1% agarose gel, 100V, 30 phút kiểm tra kết với UV visualizer Sau giải trình tự Phịng thí nghiệm Trọng điểm cơng nghệ gene, Viện Cơng nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Kết phân tích sử dụng phần mềm BioEdit Blast tool NCBI Chiết bột sinh khối nấm Thượng hoàng: a, Chiết cồn: Ngâm 10 g bột sinh khối 300 ml cồn (2~3 ngày), thu dịch cách lọc với giấy lọc 3M Dịch sau lọc cô đặc với máy cô quay chân không đến khối lượng không thay đổi Xác định khối lượng bình trước sau cơ, hịa lại chất cịn bình quay với 2ml DMSO Hàm lượng chất tính theo mg/ml b, Chiết nước nóng: Ngâm 10g bột sinh khối 200-300 ml nước cất nóng ~90oC 2-3 (h) Thu dịch cô đặc tương tự chiết với cồn hịa lại ml nước Cách tính hàm lượng chất dịch chiết tương tự với chiết cồn (mg/ml) Thí nghiệm tế bào BT474 HEK293: Tế bào sau hoạt hóa cấy chuyển số lần để đạt độ ổn định trước thí nghiệm Tế bào trì mơi trường DMEM low glucose bổ sung 10 % FBS, 1% Pen/strep tủ ấm 37oC, 5% CO2 Đếm tế bào sử dụng Trypan blue chia đĩa 96 giếng nồng độ 104 tế bào/giếng/100 µl, ủ qua đêm Bổ sung dịch chiết nước nóng nấm nồng độ 0,425 mg/ml, 0,85 mg/ml, 1,7 mg/ml, 3,4 mg/ml; dịch chiết cồn nồng độ: 0,15 140 mg/ml, 0,3 mg/ml, 0,6 mg/ml, 1,2 mg/ml tổng 10 µl vào giếng tiếp tục theo dõi sau ủ 24h, 48h Ảnh hưởng dịch chiết đến tế bào đánh giá cách quan sát kính hiển vi quang học theo phương pháp MTS sử dụng Kit CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS) hãng Promega Mỗi mẫu thí nghiệm lặp lại lần III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Thu thập phân lập định danh nấm Thượng hồng Nấm TH tìm thấy hốc mục vùng Madagui, huyện Đạ Huoai, tỉnh Lâm Đồng (hình 1a) Tai nấm có kích thước lớn, bề mặt xen lẫn màu đen vàng Vùng màu đen có bề mặt nhẵn, mịn Vùng màu vàng có bề mặt mịn nhung, cấu tạo xốp Sợi nấm phát triển bề mặt thạch PDA có màu vàng đậm, bề mặt mịn nhung Sợi tơ khỏe, tốc độ lan tơ đầy đĩa khoảng đến 10 ngày (hình 1b) Trong mơi trường lỏng, sợi nấm mọc theo khối tròn dài, sợi tơ lan tỏa xung quanh khối cầu (hình 1c) Nhiệt độ thích hợp để sợi nấm phát triển mơi trường thạch 28oC Trình tự gene vùng ITS khuếch đại với phản ứng PCR dùng mồi đặc trưng ITS1 ITS4 [6] Vùng gene khuếch đại băng to, rõ nét, có kích thước khoảng 800bp (hình 1d) Sản phẩm PCR giải trình tự theo phương pháp Sanger Trình tự PCR blast NCBI cho thấy nấm thu thập có trình tự tương đồng với Phellinus linteus strain DGUM25004 (99% tương đồng, 100% cover) với gene bank accession: AF080458.1 TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 509 - THÁNG 12 - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2021 a b c d Hình 1: Thu thập phân lập nấm Thượng hoàng a Ảnh nấm trường b Sợi nấm mọc đĩa thạch PDA c Sợi nấm phát triển môi trường lỏng d Sản phẩm PCR ADN tổng số với mồi ITS1 ITS4 Ảnh hưởng dịch chiết sinh khối nấm Thượng hồng lên dịng tế bào ung thư vú BT474 tế bào thường phôi thận người (HEK293) 2.1 Ảnh hưởng dịch chiết cồn sinh khối nấm lên tế bào BT474 0,15 mg /ml 0,3 mg /ml 0,6 mg /ml 1,2 mg /ml 24h 48h Hình 2: Tế bào BT474 sau 24h 48h ủ với dịch chiết cồn sinh khối nấm TH Sau 24h ủ với dịch chiết cồn, hàm lượng với 0,1% 0,2 % DMSO (tương ứng với dịch chiết tăng lên tế bào phát triển nồng độ DMSO có 0,6 mg/ml 1,2 hơn, thưa hơn, đặc biệt nồng độ cao mg/ml dịch chiết), tế bào sống bình (1,2 mg/ml) tế bào có dấu hiệu chết, thường, khỏe, vách tế bào lan tỏa bám vào tế bào trở nên tròn hơn, khơng thấy cịn chân đáy đĩa ni, khơng có dấu hiệu bị chết (kết bám bề mặt phồng lên nhiều (hình 2) khơng thể hình 2) Như vậy, Sau 48h, nồng độ thấp khơng thấy có DMSO có đối chứng hay mẫu ảnh hưởng nhiều Ở nồng độ 0,6 mg/ml tế không ảnh hưởng đến sống tế bào bào thưa thớt nhiều nồng độ 1,2 nồng độ ủ 0,1% 0,2% Sau ủ mg/ml tế bào chết, cấu trúc tế bào với MTS (hình 3), sau 24h tế bào BT474 khơng cịn, nhiều vùng tế bào tan rã thành giảm dần sống nồng độ dịch chiết mảnh vụn nhỏ (hình 2) Ở thí nghiệm tăng Ở nồng độ mg/ml hay khơng bổ sung đối chứng gồm tế bào không xử lý ủ dịch chiết cồn nấm, tế bào có sức sống 141 HỘI NGHỊ KHOA HỌC LẦN THỨ XXIV CỦA HỘI HÓA SINH Y HỌC HÀ NỘI VÀ CÁC TỈNH PHÍA BẮC cao Ở nồng độ 1,2 mg/ml, tế bào cho thấy sức sống thấp Hay nói cách khác dịch chiết cồn sinh khối nấm ức chế phát triển tế bào ung thư vú BT474 Tuy nhiên, sau 48h kết không ổn định trường hợp 24h Điều sau 48h có số chất ảnh hưởng đến kết đọc phổ hấp thụ 490 nm kết khơng ổn định Ở trường hợp đối chứng kết không thay đổi đáng kể Hình 3: Kết MTS tế bào BT474 sau 24h 48h ủ với dịch chiết cồn sinh khối nấm TH DC1: tế bào ủ với 0,2 % DMSO; DC2: tế bào ủ với 0,1% DMSO; số nồng độ dịch chiết (mg/ml) 2.2 Ảnh hưởng dịch chiết nước nóng sinh khối nấm lên tế bào BT474 0,425 mg /ml 0,85 mg /ml 1,7 mg /ml 3,4 mg /ml 24h 48h Hình 4: Tế bào BT474 sau 24h 48h ủ với dịch chiết nước nóng sinh khối nấm TH Trong trường hợp tế bào BT474 ủ với Kết MTS (hình 5) sau 24h cho thấy tế dịch chiết nước nóng sinh khối nấm bào giảm dần sống nồng độ dịch (hình 4), sau 24h, nồng độ thấp chiết nước nóng bột sinh khối nấm 0,425 mg/ml, tế bào có chân bám vào bề Thượng hoàng tăng dần Tuy nhiên, mặt đĩa nuôi cấy, nồng độ cao giống trường hợp dịch chiết cồn, sau khơng cịn nhìn rõ tế bào Sau 48h, 48h kết MTS khơng ổn định Các thí nồng độ thấp không nghiệm khẳng định cần làm thêm để có thấy rõ chân tế bào bám vào đáy đĩa nuôi kết tốt 142 TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 509 - THÁNG 12 - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2021 Hình 5: Kết MTS tế bào BT474 sau 24h 48h ủ với dịch chiết nước nóng sinh khối nấm TH DC: tế bào ủ với 10 µl nước cất; Các số nồng độ dịch chiết (mg/ml) 2.3 Ảnh hưởng dịch chiết cồn sinh khối nấm lên tế bào HEK293 Với dòng tế bào thường, tế bào HEK293 ủ với nồng độ khác dịch chiết cồn sinh khối nấm có hình ảnh sau: 0,15 mg /ml 0,3 mg /ml 0,6 mg /ml 1,2 mg /ml 24h 48 h Hình 6: Tế bào HEK293 sau 24h 48h ủ với dịch chiết cồn sinh khối nấm TH Sau 24h ủ với dịch chiết cồn, tế bào chiết cồn sinh khối nấm, tế bào HEK293 phát triển bình thường tất phát triển tốt trường hợp bổ sung dịch nồng độ dịch chiết thí nghiệm, chiết so với trường hợp khơng ủ dịch chiết chân tế bào tỏa ra, bám vào bề mặt đáy DMSO có đối chứng hay mẫu đĩa ni cấy, khơng bị co trịn lại, không ảnh hưởng đến sống tế bào quan sát rõ ràng Sau 48h ủ, nồng độ ủ 0,1% 0,2%, nồng độ nồng độ cao 1,2 mg/ml dịch chiết, tế 0,2% DMSO tương đương lượng DMSO có bào HEK293 phát triển bình thường, 1,2 mg/ml dịch chiết Như vậy, dịch không thấy dấu hiệu tế bào chết (hình 6) Kết chiết sinh khối nấm cồn có tác dụng MTS (hình 7) cho thấy tế bào phát tốt lên dòng tế bào thường HEK293, không triển tốt nồng độ dịch chiết khác ức chế tế bào mà lại kích thích tế bào phát so với không bổ sung dịch chiết (nồng triển độ mg/ml) Tương tự sau 48h ủ với dịch 143 HỘI NGHỊ KHOA HỌC LẦN THỨ XXIV CỦA HỘI HÓA SINH Y HỌC HÀ NỘI VÀ CÁC TỈNH PHÍA BẮC Hình 7: Kết MTS tế bào HEK293 sau 24h 48h ủ với dịch chiết cồn sinh khối nấm TH DC1: tế bào ủ với 0,2 % DMSO; DC2: tế bào ủ với 0,1 % DMSO; số nồng độ dịch chiết (mg/ml) 2.4 Ảnh hưởng dịch chiết nước nóng sinh khối nấm lên tế bào HEK293 0,425 mg /ml 0,85 mg /ml 1,7 mg /ml 3,4 mg /ml 24 h 48 h Hình 8: Tế bào HEK293 sau 24h 48h ủ với dịch chiết nước nóng sinh khối nấm TH Trong hình ta thấy, tế bào HEK293 ủ với dịch chiết nước nóng nấm phát triển bình thường Có số thành phần chưa tan hoàn toàn nồng độ cao dịch chiết nước nóng (3,4 mg/ml) ảnh hưởng đến hình ảnh (các đám hạt trịn nhỏ che hình ảnh tế bào) Tuy nhiên, quan sát rõ ràng hình ảnh chân tế bào bám vào đáy đĩa nuôi, cho thấy tế bào không bị ảnh hưởng việc bổ sung dịch chiết nước nóng nấm Thượng hồng Hình 9: Kết MTS tế bào HEK293 sau 24h 48h ủ với dịch chiết nước nóng sinh khối nấm TH DC: tế bào ủ với 10 µl nước cất; Các số nồng độ dịch chiết (mg/ml) 144 TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 509 - THÁNG 12 - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2021 Ở hình 9, kết ủ với MTS, sau ủ với dịch chiết nước nóng nấm độ hấp phụ tế bào thời điểm đo tăng lên so với không ủ Điều cho thấy dịch chiết sinh khối nấm ngâm nước nóng có đáp ứng tốt đến tế bào HEK, kích thích tế bào phát triển tăng sinh Tuy nhiên, nồng độ dịch chiết cao sức sống tế bào giảm dần Sức sống tế bào cao nồng độ dịch chiết 0,425 mg/ml thấp nồng độ dịch chiết 3,4 mg/ml Như vậy, nồng độ nghiên cứu để sử dụng nấm quan trọng để suy liều lượng bổ sung hàng ngày giúp nâng cao sức khỏe người, hay khơng tốt dùng liều cao dịch chiết chúng trở nên ức chế tế bào Theo Sensuke [1], 10 dòng tế bào ung thư gồm có PC-3, DU-145, LNCaP, T24, ACHN, A549, MCF-7, AGS, HepG2, U87 bị ức chế dịch chiết Phellinus linteus (PL-ES PL-I-ES) Kết cho thấy tiềm kháng khối u dịch chiết nấm Với kết Jun [7], dịch chiết nấm TH với tre nấm Chaga biểu hoạt tính kháng khối u thơng qua kích thích đáp ứng miễn dịch nguyên thủy Như kết ức chế phát triển tế bào ung thư vú BT474 dịch chiết sinh khối nấm chúng tơi đáng tin cậy Ngồi ra, theo Jung-ok, 2008 [8] dịch chiết cồn (PLE) có hàm lượng tổng flavonoid phenolic cao dịch chiết nước nóng (PLW) nấm TH; hoạt tính ức chế tyrosinase hay elastase PLE cao PLE thích hợp để sử dụng thực phẩm chức nguyên liệu cho mỹ phẩm V KẾT LUẬN Đã phân lập định danh nấm Thượng hoàng thu thập vùng Lâm Đồng, Việt Nam Nấm thu thập có trình tự tương đồng với Phellinus linteus strain DGUM25004 (99% tương đồng, 100% cover) với gene bank accession: AF080458.1 Nấm phát triển tốt điều kiện môi trường thạch bán rắn môi trường lỏng Sinh khối nấm chiết cồn chiết nước nóng có tác dụng ức chế tăng sinh tế bào ung thư vú BT474 Đối với dòng tế bào thường HEK293, dịch chiết cồn nước nóng sinh khối nấm kích thích tế bào phát triển so với không bổ sung dịch chiết Liều lượng sử dụng để phát huy tốt tác dụng dịch chiết cần phải nghiên cứu kỹ TÀI LIỆU THAM KHẢO Sensuke Konnoa et al, 2015, Potent Anticancer Effects of Bioactive Mushroom Extracts (Phellinus linteus) on a Variety of Human Cancer Cells, J Clin Med Res., (2),76-82.2 Kim HM et al, 2010, Evaluation of antidiabetic activity of polysaccharide isolated from Phellinus linteus in non-obese diabetic mouse, Int Immnunopharmacol, 10 (1), 72-78 Phạm Quang Thu, 2016, Đặc điểm sinh học nấm thượng hồng (Phellinus linteus) ni cấy khiết, Tạp chí Khoa học lâm nghiệp, 1, 4231 - 4237 Trần Thị Lụa, Vũ Văn Hạnh, 2017, Nghiên cứu điều kiện nhân sinh khối nấm thượng hồng vàng (Phellinus baumi), Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nông nghiệp Việt Nam, (81), 106-108 June Woo Lee et al, 2008, Submerged Culture of Phellinus linteus for Mass Production of Polysaccharides, The Korean Society of Mycology – Mycobiology, 36 (3), 178-182 145 ... VIỆT NAM TẬP 509 - THÁNG 12 - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2021 hoàng vùng Lâm Đồng, Việt Nam số nghiên cứu sơ đặc tính sinh trưởng tác dụng dịch chiết sinh khối nấm lên dòng tế bào ung thư vú BT474 tế bào. .. lỏng Sinh khối nấm chiết cồn chiết nước nóng có tác dụng ức chế tăng sinh tế bào ung thư vú BT474 Đối với dòng tế bào thường HEK293, dịch chiết cồn nước nóng sinh khối nấm kích thích tế bào phát... dịch chiết (mg/ml) 2.3 Ảnh hưởng dịch chiết cồn sinh khối nấm lên tế bào HEK293 Với dòng tế bào thường, tế bào HEK293 ủ với nồng độ khác dịch chiết cồn sinh khối nấm có hình ảnh sau: 0,15 mg /ml