Nghiên cứu thành phần hóa học theo định hướng chống oxy hóa và độc tính tế bào của cây hồng quân (flacourtia rukam zoll et mor )

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC THEO ĐỊNH HƯỚNG CHỐNG OXY HÓA VÀ ĐỘC TÍNH TẾ BÀO CỦA CÂY HỒNG QUÂN (FLACOURTIA RUKAM ZOLL ET MOR ) LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC TP HỒ CHÍ MINH - Năm 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ Đ H D T P H M N G H I Ê N C Ứ U T H À N H P H Ầ N H Ó A H ỌC THEO ĐỊNH HƯỚNG CHỐNG OXY HĨA VÀ ĐỘC TÍNH TẾ BÀO CỦA CÂY HỒNG QUÂN (FLACOURTIA RUKAM ZOLL ET MOR ) NGÀNH: DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 62 72 04 06 LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Người hướng dẫn khoa học: TP HỒ CHÍ MINH - Năm 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực, khách quan chưa công bố nơi Tác giả luận án i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ viết tắt ADN ALT AST BHA CCl4 COSY d d DEPT DMEM DMF DMSO dNTP DPPH EAC ESI-MS Chữ nguyên Acid desoxynucleic Alanine Aminotransferase Aspartate aminotransferase Butylated hydroxylanisol Carbon tetraclorid Correlation Spectroscopy Doublet Chemical shift Distortionless Enhancement by Polarization Transfer Dulbecco’s Modified Eagle Medium Dimethyl formamid Dimethyl sulfoxyd Deoxynucleotid triphosphat 2,2-Diphenyl Picryl Hydrazyl Ehrilch Ascites Carcinoma Electron Sprayt Ionization mass spectroscopy HDL HMBC HR-MS HSQC IC J High Density Lipoprotein Heteronuclear Multiple Bond Correlation High Resolution mass Heteronuclear Single Quantum Correlation Inhibitory Concentration LDL LOD Low-density lipoproteins Limit of Detection LOQ m Limit of Quantification Multiplet MIC MS NCBI Minimal inhibitory concentration Mass Spectrometry National Center for Biotechnology Information NMR Nuclear Magnetic Resonance Ý nghĩa Đỉnh đơi Độ dời hóa học Lipoprotein tỷ trọng cao Nồng độ ức chế Hằng số ghép Lipoprotein tỷ trọng thấp Giới hạn phát Giới hạn định lượng Đỉnh đa Nồng độ ức chế tối thiểu Khối phổ Cộng hưởng từ hạt nhân ii PBS PCR PDA Phosphate Buffered Saline Polymerase Chain Reaction Photodiode Array PIC ppm q s SDS SKLM t TLTK TT Polymorphism Information Content Parts per million Quartet Singlet Sodium dodecyl sulfat UPLC UV Ultra-Performance Liquid Chromatography Ultraviolet VLDL VS Very-low-density lipoprotein Vanilin sulfuric Triplet Dãy diode quang Chỉ số đa hình di truyền Phần triệu Đỉnh bốn Đỉnh đơn Sắc ký lớp mỏng Đỉnh ba Tài liệu tham khảo Thuốc thử Sắc ký lỏng siêu hiệu Tử ngoại Lipoprotein tỷ trọng thấp iii MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT i MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH viii DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ x MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1 Tổng quan chi Flacourtia Tổng quan Flacourtia rukam 26 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 Đối tượng nghiên cứu 32 2 Phương pháp nghiên cứu 36 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 57 Kết khảo sát dược liệu Flacourtia rukam 57 Kết định tính nguyên liệu 70 3 Kết sàng lọc tác dụng sinh học 72 Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hợp chất 76 Xây dựng quy trình định lượng poliothrysosid thân Flacourtia rukam UPLC-PDA 112 CHƯƠNG BÀN LUẬN 127 Về mặt thực vật học 127 iv Về định tính nguyên liệu 130 Sàng lọc tác dụng sinh học 131 4 Chiết xuất phân lập hợp chất F rukam Về định lượng poliothrysosid mẫu dược liệu Hồng quân 137 142 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 145 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CĨ LIÊN QUAN 149 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1 Điểm khác biệt loài mang tên Hồng quân Việt Nam Bảng Flavon phân lập từ loài thuộc chi Flacourtia Bảng Flavonol phân lập từ loài thuộc chi Flacourtia Bảng Các hợp chất phenolic glycosid 12 Bảng Các dẫn chất acid quinic 14 Bảng IC50 dịch chiết F indica thử nghiệm DPPH NO 18 Bảng IC50 chất phân lập từ dịch F inermis thử nghiệm DPPH 19 Bảng Hoạt tính chống oxy hóa chi Flacourtia 19 Bảng MIC dịch chiết từ F indica số loài vi khuẩn 20 Bảng 10 MIC dịch chiết từ F indica số loài nấm 21 Bảng 11 MIC dịch chiết MeOH từ rễ F indica số vi khuẩn 21 Bảng 12 % ức chế gốc tự IC50 dịch chiết F indica 23 Bảng 13 Các chế phẩm có Flacourtia 25 Bảng 14 Hoạt tính chống oxy hóa cao chiết hợp chất từ vỏ thân F rukam 29 Bảng 15 Hoạt tính hạ cholesterol cao chiết từ vỏ thân F rukam 30 Bảng Ký hiệu mã hóa mẫu dùng nghiên cứu 32 Bảng 2 Danh mục thiết bị sử dụng thử nghiệm độc tính tế bào XO 36 Bảng Trình tự cặp mồi RbcL sử dụng phản ứng PCR 38 Bảng Thành phần thử tác dụng ức chế XO giếng đĩa 96 46 Bảng So sánh đặc điểm hình thái F rukam F indica 59 Bảng So sánh khác biệt trình tự gen mẫu HQ275 HQ2941 69 Bảng 3 Mức độ tương đồng 12 mẫu Hồng quân BLAST NCBI 69 Bảng Xác định độ ẩm, độ tro hàm lượng chất chiết cao toàn phần 70 Bảng Kết phân tích sơ thành phần hóa thực vật F rukam 70 Bảng Kết định lượng cao toàn phần thân cành F rukam 72 Bảng Hoạt tính chống oxy hóa cao phân đoạn thử nghiệm DPPH 73 Bảng Hoạt tính chống oxy hóa cao phân đoạn lực khử sắt 74 Bảng % ức chế dòng tế bào MDA-MB-231 74 Bảng 10 % ức chế dòng tế bào HepG2 75 vi Bảng 11 % ức chế dòng tế bào RD 75 Bảng 12 Hoạt tính độc tế bào mẫu thử dòng tế bào ung thư 75 Bảng 13 Dữ liệu phổ 1H -NMR 13C -NMR (CDCl3 500 MHz, CDCl3 125 MHz) hợp chất (1) 83 Bảng 14 Dữ liệu phổ 1H -NMR 13C -NMR (CDCl3 500 MHz, CDCl3 125 MHz) hợp chất (2) với acid chaumoogric (CDCl3 399,65 MHz; CDCl3 100,4 MHz) 86 Bảng 15 Dữ liệu phổ 1H -NMR 13C -NMR hợp chất (3) poliothrysosid (CDCl3 500 MHz, δ CDCl3 125 MHz) 88 Bảng 16 Dữ liệu phổ 1H -NMR 13C -NMR ( DMSO-d6: 500 MHz, DMSO-d6: 125 MHz) hợp chất (4) với Koabursid ( DMSO-d6: 400 MHz, DMSO-d6: 100 MHz) 90 Bảng 17 Dữ liệu phổ 1H-NMR 13C -NMR hợp chất (5) với daucosterol ( DMSO-d6: 500 MHz, DMSO-d6: 125 MHz) 92 Bảng 18 Dữ liệu phổ 1H -NMR 13C -NMR hợp chất (6) (CDCl3 500 MHz, CDCl3 125 MHz) 95 Bảng 19 Dữ liệu phổ 1H- NMR 13C -NMR (DMSO-d6: 500 MHz, DMSO-d6: 125 MHz) hợp chất (7) 98 Bảng 20 Dữ liệu phổ 1H- NMR 13C -NMR (DMSO-d6: 500 MHz, DMSO-d6: 125 MHz) hợp chất (8) acid vanilic 100 Bảng 21 Dữ liệu phổ 1H- NMR 13C -NMR (DMSO-d6 500 MHz, DMSO-d6 125MHz) hợp chất (9) với stigmasterol (CDCl3 100 MHz) 102 Bảng 22 Dữ liệu phổ 1H- NMR 13C -NMR (CDCl3 500 MHz, CDCl3 125 MHz) hợp chất (10) β-sitosterol (CDCl3 với giọt MeOH-d4 100,06 MHz) 104 Bảng 23 Dữ liệu phổ NMR hợp chất (11) 105 Bảng 24 Hoạt tính chống oxy hóa hợp chất thử nghiệm DPPH 106 Bảng 25 Năng lực khử sắt hoạt tính chống oxy hóa hợp chất 107 Bảng 26 Giá trị IC50 mẫu thử 108 Bảng 27 Kết tác dụng in vivo hạ acid uric máu mẫu thử 109 Bảng 28 % ức chế hoạt tính độc tế bào MDA-MB-231 cao phân đoạn 109 Bảng 29 Hoạt tính độc tế bào ung thư vú người MDA-MB-231 chất phân lập 110 Bảng 30 % ức chế hoạt tính độc tế bào HepG2 110 Bảng 31 Hoạt tính độc tế bào ung thư gan người HepG2 mẫu thử 110 Bảng 32 % ức chế hoạt tính độc tế bào RD 111 Bảng 33 Hoạt tính độc tế bào ung thư vân người RD mẫu thử 111 Bảng 34 Kết đánh giá độ tinh khiết poliothrysosid UPLC 113 46 [Equation] f = a/(1+exp(-(x-x0)/b)) fit f to y ''fit f to y with weight reciprocal_y ''fit f to y with weight reciprocal_ysquare ''fit f to y with weight reciprocal_x ''fit f to y with weight reciprocal_xsquare ''fit f to y with weight reciprocal_pred ''fit f to y with weight reciprocal_predsqr ''fit f to y with weight weight_Cauchy [Constraints] [Options] tolerance=1e-10 stepsize=1 iterations=200 2D Graph f = a/(1+exp(-(x-x0)/b)) 120 100 80 Y Da ta 60 40 20 0 Number of Iterations Performed = 13 IC50 = 51 µg/ml X Data Col vs Col x column vs y column 10 12 14 47 Phụ lục 70 Kết thử độc tính tế bào Bảng kết độc tính tế bào MDA-MB-231 MDA-MB-231 MT MEAN SEM %DMSO % ỨC CHẾ KQ DMSO Cao TP Cao CHCl3 100 50 25 12 100 50 25 12 705 697 433 425 418 487 234 396 422 448 722 655 384 427 444 518 189 334 395 42 751 778 368 419 435 502 177 332 389 402 726 71 395 423667 432333 502333 02 354 402 423333 023259 062522 033867 004163 013204 015503 03005 036387 017578 02318 55 6338 59 67136 60 89202 70 75117 28 16901 49 85915 56 61972 59 62441 44 3662 40 32864 39 10798 29 24883 71 83099 50 14085 43 38028 40 37559 TD yếu, IC50 > 100 ug/ml IC50 = 48 90 ug/ml Cao n-BuOH Cao nước Cao EtOAc 100 50 25 12 100 50 25 12 100 50 25 12 132 603 58 731 642 613 586 614 627 64 622 652 14 618 535 707 647 68 614 652 638 59 627 648 124 683 584 694 66 647 598 627 605 628 696 649 132 634667 566333 710667 649667 646667 599333 631 623333 619333 648333 649667 008 042525 027209 018771 009292 033501 014048 019313 016803 026102 041356 002082 18 59155 89 38967 79 76526 100 0939 91 50235 91 07981 84 41315 88 87324 87 79343 87 23005 91 31455 91 50235 81 40845 10 61033 20 23474 -0 0939 497653 920188 15 58685 11 12676 12 20657 12 76995 685446 497653 IC50 = 41 40 ug/ml TD yếu, IC50 > 100 ug/ml TD yếu, IC50 > 100 ug/ml MDA-MB-231 MT DMSO FRC11 FRE11 100 50 25 12 100 50 25 12 441798 447228 37063 405342 367505 404224 378997 398806 423138 429156 445948 437737 376233 366525 383784 367487 334076 409197 409388 481132 46686 455052 390958 357353 404129 372168 346309 414754 402859 424051 MEAN 451535 446672 379274 376407 385139 381293 353128 407586 411795 44478 SEM 013433 008671 0105 025475 018349 019996 023224 008095 010352 031586 %DMSO 84 91092 84 26915 86 22414 85 36297 79 05739 91 2494 92 19171 99 5763 % ỨC CHẾ 15 08908 15 73085 13 77586 14 63703 20 94261 750597 808289 423701 KQ TD yếu TD yếu MDA-MB-231 MT MEAN SEM %DMSO % ỨC CHẾ KQ 441798 445948 46686 451535 013433 DMSO 447228 437737 455052 446672 008671 100 379006 399268 404506 39426 013467 88 26601 11 73399 FRE12 50 25 389533 393669 399705 416605 409047 430448 399428 413574 00976 018576 89 42309 92 59002 10 57691 409982 TD yếu 12 452233 455482 422243 443319 018325 99 24931 750692 OD570 MDA-MB-231 MT DMSO 1% 100 µM 80 µM 60 µM 40 µM 20 µM 10 µM 461 469 370 422 435 422 504 488 FRE13 456 463 363 422 438 429 490 490 463 471 372 420 441 425 496 499 KQ % ức chế µM µM 100 µM 80 µM 60 µM 40 µM 20 µM 10 µM 495 518 21 23 10 01 25 10 18 -7 46 -3 98 483 513 21 65 96 51 34 -5 71 -5 71 482 525 21 04 10 85 29 68 -5 38 -5 91 µM µM IC50 -5 51 -10 32 -4 37 -10 70 -2 42 -11 45 TB > 100 µM 48 MDA-MB-231 MT DMSO 1% 100 µM 80 µM 432 446 379 447 437 451 388 441 436 452 407 452 FRHC12 KQ MDA-MB-231 MT 60 µM 494 509 501 DMSO 20 463 453 097 506 438 062 495 461 078 488 451 079 022 011 017 17 54 82 46 MEAN SEM %DMSO % ỨC CHẾ KQ OD570 40 µM 20 µM 483 487 479 489 501 474 10 µM 509 537 520 µM µM 100 µM 80 µM 490 528 15 18 -0 17 517 515 13 86 508 525 10 02 PACLITAXEL 10 201 304 201 256 256 308 219 289 032 029 48 65 64 14 51 35 35 86 IC50 = 11 06 uM 10 03 60 µM -10 82 -12 95 -10 85 % ức chế 40 µM 20 µM -8 26 -9 10 -6 20 -8 58 -10 71 -4 72 10 µM -14 09 -19 04 -14 95 µM µM IC50 -9 83 -18 32 -14 74 -14 17 -12 38 -16 18 TB > 100 µM 25 216 219 276 237 034 52 57 47 43 Bảng kết độc tính tế bào HepG2 HEPG2 MEAN SEM %DMSO % ỨC CHẾ KQ MT 623993 533073 560012 572359 046701 HEPG2 MEAN SEM %DMSO % ỨC CHẾ KQ HEPG2 MEAN SEM %DMSO % ỨC CHẾ KQ FRC11 KQ DMSO 388473 350087 287828 342129 050792 MT Cao TP 50 25 182433 239019 180528 215045 192102 181293 185021 211786 006206 029001 54 07927 61 90225 45 92073 38 09775 IC50 = 58 42 ug/ml DMSO 623993 533073 560012 572359 046701 MT 388473 350087 287828 342129 050792 388473 350087 287828 342129 050792 DMSO 1% 751 732 748 12 256143 244253 24157 247322 007756 72 28899 27 71101 100 083654 09125 097352 090752 006863 26 52572 73 47428 Cao CHCl3 50 25 15646 168149 163527 209995 187818 209385 169269 195843 016449 023986 49 47502 57 24242 50 52498 42 75758 IC50 = 47 55 ug/ml 12 200528 198392 244782 214567 026189 62 71526 37 28474 100 131702 085247 09187 10294 025128 30 08794 69 91206 Cao EtOAc 50 25 388185 376411 36885 336999 348605 335081 368546 349497 019792 023328 107 7214 102 1535 -7 72138 -2 15348 IC50 = 91 27 ug/ml 12 40631 366128 325413 365951 040449 106 9626 -6 96263 100 131702 085247 09187 10294 025128 30 08794 69 91206 Cao EtOAc 50 25 388185 376411 36885 336999 348605 335081 368546 349497 019792 023328 107 7214 102 1535 -7 72138 -2 15348 IC50 = 91 27 ug/ml 12 40631 366128 325413 365951 040449 106 9626 -6 96263 100 366117 331278 299835 33241 033156 97 15913 840866 Cao n-BuOH 50 25 481776 387649 444003 395501 456668 372746 460816 385298 019225 011558 134 6905 112 6178 -34 6905 -12 6178 TD yếu 12 369731 443568 41434 409213 037184 119 6077 -19 6077 100 317742 323243 345653 328879 014784 96 12719 872805 Cao nước 50 25 369081 439707 429601 464241 449426 493631 416036 465859 041855 026998 121 6019 136 1647 -21 6019 -36 1647 TD yếu 12 341265 325506 376324 347698 026012 101 6277 -1 62773 50 056977 052288 056457 055241 00257 16 14623 83 85377 Paclitaxel 20 10 063957 207863 062567 179021 064865 14921 063796 178698 001157 029328 18 64683 52 23114 81 35317 47 76886 IC50 = 11 96 uM 347491 353945 302519 334652 028014 97 81449 185511 DMSO 623993 533073 560012 572359 046701 MT 741 768 749 100 138635 132144 155201 141993 01189 41 50282 58 49718 Nồng độ cao (µg/ml) 100 50 25 12 563 619 636 660 566 625 647 647 572 616 643 644 Nồng độ cao (µg/ml) 100 50 25 12 25 03 17 54 15 26 12 11 22 62 14 62 11 55 11 61 23 48 17 56 13 95 13 86 TB IC50 > 100 ug/ml 49 FRE11 MT DMSO 1% 565 559 570 554 559 543 OD570 Nồng độ cao (µg/ml) 100 50 25 12 568 563 570 569 560 555 562 562 552 567 563 571 % ức chế Nồng độ cao (µg/ml) 100 50 25 12 IC50 -1 63 -0 67 -2 03 -1 75 -1 19 -0 20 -1 45 -1 52 -1 59 -4 38 -3 56 -5 15 TB > 100 ug/ml MT DMSO 1% 741 751 768 732 749 748 OD570 Nồng độ cao (µg/ml) 100 50 25 12 637 656 753 854 639 635 749 831 655 646 761 824 % ức chế Nồng độ cao (µg/ml) 100 50 25 12 IC50 15 16 12 58 -0 32 -13 81 12 63 13 24 -2 38 -13 57 12 43 13 66 -1 80 -10 17 TB > 100 ug/ml MT DMSO 1% 585 548 572 563 563 542 OD570 Nồng độ cao (µg/ml) 100 50 25 563 547 571 558 542 576 553 536 531 % ức chế Nồng độ cao (µg/ml) 100 50 25 -2 67 17 -4 10 90 65 -2 31 -1 88 22 06 MT 585 572 563 OD570 Nồng độ cao (µg/ml) 100 50 25 454 483 509 475 469 513 452 481 498 KQ FRE12 KQ FRE13 12 577 574 549 KQ FRHC12 DMSO 1% 548 563 542 12 -5 27 -2 03 -1 22 TB % ức chế Nồng độ cao (µg/ml) 100 50 25 12 17 10 11 82 15 84 15 66 16 67 90 10 49 16 75 11 34 22 23 TB 12 511 504 509 KQ IC50 > 100 ug/ml IC50 > 100 ug/ml Bảng kết độc tính tế bào RD MT Nồng độ Lần Lần Lần MEAN SEM 039 069 027 045 021 %DMSO % ỨC CHẾ KQ MT Nồng độ Lần Lần Lần MEAN SEM 039 069 027 045 021 %DMSO % ỨC CHẾ KQ DMSO 631 676 693 667 032 DMSO 631 676 693 667 032 100 374 438 366 392 039 58 86 41 14 100 374 438 366 392 039 58 86 41 14 Cao TP 50 25 476 561 550 579 554 560 527 567 044 011 79 00 85 01 21 00 14 99 TD yếu 12 537 478 475 497 035 74 51 25 49 Cao TP (TTC1) 50 25 476 561 550 579 554 560 527 567 044 011 79 00 85 01 21 00 14 99 TD yếu 100 070 065 066 067 002 10 05 89 95 Cao EtOAc 50 25 376 539 455 610 394 586 408 578 042 036 61 22 86 75 38 78 13 25 IC50 = 65 89 ug/ml 12 537 478 475 497 035 74 51 25 49 12 593 555 507 552 043 82 74 17 26 50 MT DMSO% Nồng độ cao (µg/ml) 010 812 996 805 001 820 MEAN 002 812 SEM 0069 0079 %DMSO % ỨC CHẾ KQ MT DMSO 171 767 058 644 154 702 MEAN 128 704 SEM 061 061 %DMSO % ỨC CHẾ KQ RD4 Nồng độ Lần Lần Lần MEAN SEM %DMSO % ỨC CHẾ KQ MT 100 432 563 528 508 067 72 08 27 92 DMSO 100 937818 664169 04016 740623 047865 72857 008614 71112 061432 041106 497625 557431 557819 537625 034641 75 60253 24 39747 100 23 246 237 238 0075 29 298 70 702 Cao CHCl3 50 25 361 475 362 462 351 475 358 471 0059 0078 42 841 57 946 57 159 42 054 IC50 = 38 35 ug/ml Cao n-BuOH 50 25 553 530 602 629 642 577 599 579 044 049 85 01 82 18 14 99 17 82 TD yếu FRC11 50 453498 320784 48621 332579 528642 383864 48945 345742 037676 033537 68 82798 48 61938 31 17202 51 38062 TD yếu 12 598 617 641 619 022 87 82 12 18 25 100 457 513 549 507 046 71 93 28 07 12 288076 32661 393591 336092 053393 47 26235 52 73765 100 264508 267826 277113 269816 006534 37 94231 62 05769 12 541 514 544 533 0165 65 591 34 409 Cao nước 50 25 757 675 774 796 752 765 761 745 012 063 108 05 105 82 -8 05 -5 82 TD yếu FRE11 50 25 421128 471111 441203 499779 50706 476036 456464 482308 044953 015329 64 18938 67 82374 35 81062 32 17626 IC50 = 77 80 uM 12 630 611 621 621 010 88 13 11 87 12 513543 65497 474942 547818 094782 77 03591 22 96409 OD570 RD MT DMSO 1% 100 µM 80 µM 60 µM 40 µM 20 µM 10 µM 841 639 433 445 553 594 596 629 FRE13 846 654 430 446 540 578 591 637 859 641 418 451 538 581 586 617 KQ MT DMSO 1% 100 µM 80 µM 60 µM 40 µM 20 µM 10 µM 841 639 600 624 633 673 679 610 FRHC12 846 654 594 620 659 674 686 603 859 641 592 617 628 683 691 630 KQ 100 571384 56029 565504 565726 00555 79 55415 20 44585 25 500 415 415 444 049 62 99 37 01 FRE12 50 585758 590046 627174 57642 628355 514144 613762 560203 02426 040466 86 30919 78 77755 13 69081 21 22245 TD yếu 12 537618 612859 591416 580631 038763 81 65016 18 34984 25 % ức chế µM µM 100 µM 80 µM 60 µM 40 µM 20 µM 10 µM 666 660 32 16 30 29 13 39 08 64 58 660 653 34 22 31 76 17 49 11 71 67 65 654 673 34 72 29 63 15 99 35 58 61 OD570 RD 20 132 085 113 110 024 15 59 84 41 PACLITAXEL 10 336 379 310 310 349 370 332 353 020 038 47 12 50 09 52 88 49 91 IC50 = 59 uM µM µM IC50 -4 34 -3 30 -0 92 18 -2 07 -5 07 TB > 100 µM % ức chế µM µM 100 µM 80 µM 60 µM 40 µM 20 µM 10 µM 618 612 03 28 96 -5 36 -6 32 47 648 621 13 15 -0 78 -3 06 -4 83 84 633 603 64 69 00 -6 62 -7 84 71 µM µM IC50 32 18 92 05 20 91 TB > 100 µM 51 Phụ lục 71 Sắc ký đồ khảo sát dung mơi chiết xuất Diện tích pic Dung môi MeOH (100%) MeOH (70%) MeOH (50%) 275106 231815 382923 Nước 100% 203955 Phụ lục 72 Sắc ký đồ khảo sát phương pháp thời gian chiết xuất Thời gian (phút ) 15 Diện tích pic Đun hồi Siêu âm lưu 95 50 oC o C 52099 318412 30 45 146412 272130 383106 330365 60 204593 306183 Siêu âm (50 oC) Đun hồi lưu (95 oC) Phụ lục 73 Sắc ký đồ khảo sát tính tương thích hệ thống 52 Phụ lục 74 Sắc ký đồ khảo sát độ đặc hiệu Phụ lục 75 Sắc ký đồ độ lặp lại 53 Phụ lục 76 Sắc ký đồ tính tuyến tính Poliothrysosid C (µg/ml) S (µV*S) 100 2298506 50 1159026 25 585238 10 264778 125266 25199 05 9834 Mối tương quan nồng độ diện tích pic poliothrysosid Đường tuyến tính chuẩn poliothrysosid 54 Phụ lục 77 Sắc ký đồ độ 80 Phụ lục 78 Sắc ký đồ độ 100 55 Phụ lục 79 Sắc ký đồ độ 120 56 Phụ lục 80 Sắc ký đồ mẫu theo dõi theo thời điểm - Mẫu Bến Tre Phụ lục 81 Sắc ký đồ mẫu thu hái theo phận dùng - Lá 57 Phụ lục 82 Sắc ký đồ mẫu thu hái theo phận dùng - Quả non Phụ lục 83 Sắc ký đồ mẫu thu hái theo phận dùng - Rễ 58 Phụ lục 84 Thông tin cấp số nhận diện ngân hàng gen (GenBank: MK088161 1) Flacourtia rukam ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit (rbcL) gene, partial cds; chloroplast GenBank: MK088161 FASTA Graphics Go to: LOCUS MK088161 416 bp DNA linear PLN 03- JUN-2019 DEFINITION Flacourtia rukam ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit (rbcL) gene, partial cds; chloroplast ACCESSION MK088161 VERSION MK088161 KEYWORDS SOURCE ORGANISM chloroplast Flacourtia rukam Flacourtia rukam Eukaryota; Viridiplantae; Streptophyta; Embryophyta; Tracheophyta; Spermatophyta; Magnoliophyta; eudicotyledons; Gunneridae; Pentapetalae; rosids; fabids; Malpighiales; Salicaceae; Flacourtieae; Flacourtia REFERENCE (bases to 416) AUTHORS Thai,C T TITLE Identification of Flacourtia rukam in Ben Tre, Viet Nam using rbcL gene JOURNAL REFERENCE Unpublished (bases to 416) AUTHORS Thai,C T TITLE Direct Submission JOURNAL Submitted (22-OCT-2018) Department of Genetics and Plant Breeding, Cantho University, 3/2, Can Tho, Cantho 084710, Vietnam COMMENT ##Assembly-Data-START## Sequencing Technology :: Sanger dideoxy sequencing ##Assembly-Data-END## FEATURES source Location/Qualifiers 416 /organism="Flacourtia rukam" 59 /organelle="plastid:chloroplast" /mol_type="genomic DNA" /db_xref="taxon:1085434" gene 416 /gene="rbcL" CDS 416 /gene="rbcL" /codon_start=3 /transl_table=11 /product="ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit" /protein_id="QCV37245 1" /translation="AGVKDYKLTYYTPDYETKDTDILAAFRVTPQPGVPPEEAGAAVA AESSTGTWTTVWTDGLTSLDRYKGRCYDIEPVAGEENQFIAYVAYPLDLFEEGSVTNM FTSIVGNVFGFKALRALRLEDLRIPPAYSKTFQGPP" ORIGIN aggctggtgt taaagattat aaattgactt attatactcc tgactatgaa accaaagata 61 ctgatatctt ggcagcattc cgagtaactc ctcaacctgg agttccgccc gaggaagcag 121 gggccgcggt agctgctgaa tcttctactg gtacatggac aactgtgtgg accgatgggc 181 ttaccagtct tgatcgttat aaaggacgat gctacgacat cgagcccgtt gctggagaag 241 aaaatcaatt tattgcttat gtagcttacc ccttagacct ttttgaagaa ggttctgtta 301 ctaacatgtt tacttccatt gtgggtaatg tatttgggtt caaagcctta cgcgctctac 361 gtctggagga tttgcgaatc ccccctgctt attctaaaac ttttcaaggc ccacct LInk: https://www ncbi nlm nih gov/nuccore/MK088161 ... nhóm nghiên cứu đặt vấn đề ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học theo định hướng chống oxy hóa độc tính tế bào Hồng quân (Flacourtia rukam Zoll Et Mor )? ?? với mục tiêu cụ thể sau: Xác định tên khoa học. .. GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ Đ H D T P H M N G H I Ê N C Ứ U T H À N H P H Ầ N H Ó A H ỌC THEO ĐỊNH HƯỚNG CHỐNG OXY HĨA VÀ ĐỘC TÍNH TẾ BÀO CỦA CÂY HỒNG QUÂN (FLACOURTIA RUKAM ZOLL ET MOR ) NGÀNH:... nguyên liệu nghiên cứu qua khảo sát hình thái thực vật, vi phẫu định danh mẫu giải trình tự ADN Khảo sát hóa học theo định hướng tác dụng chống oxy hóa độc tính tế bào thân Hồng quân CHƯƠNG