nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của ba loài thuộc chi bách bộ (stemona) mọc ở lào

Khoa học kĩ thuật phát triển, đời sống người ngày cải thiện Tuy nhiên phát triển q nóng dẫn đến nhiễm mơi trường; nhiều chứng bệnh nan y phát sinh, nhiều loài vi khuẩn mới, nhờn thuốc xuất nguy gây đại dịch đe dọa toàn cầu Các dược phẩm chữa trị bệnh nan y hạn chế chủng loại, giá thành cao thường có tác động phụ khơng mong muốn, gây tổn hại cho tế bào lành Điều thúc nhà khoa học khơng ngừng nghiên cứu tìm dược phẩm mới, hiệu hơn, an toàn hơn, ưu tiên nghiên cứu hoạt chất từ tự nhiên Cây Bách Bộ thuộc loại bụi, mọc hoang vùng đồng Nam Bộ Việt Nam, Lào, Đơng Bắc Thái Lan, lồi thuốc quí Theo kinh nghiệm dân gian Nam Lào, người ta sử dụng phần củ Bách Bộ để làm thuốc chữa nhiều loại bệnh có hiệu như: bệnh da, ung thư gan… ngồi củ Bách Bộ cịn có khả làm thuốc diệt sâu bọ, mối mọt… Việc nghiên cứu Bách Bộ Lào hạn chế: phần lớn dùng mức nghiên cứu phân loài thực vật mà thơi; chưa có cơng trình nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học Bách Lào Vì lý đây, khn khổ Luận án tiến sĩ hóa học này, chọn đề tài: “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học ba loài thuộc chi Bách Bộ (Stemona) mọc Lào” Các đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu luận án gồm củ ba loài thuộc chi Bách Bộ thu hái Lào, gồm củ Bách Bộ thân đứng S cochinchinensis, Bách Bộ nhỏ S pierrei, Bách Bộ thân leo S tuberosa Những đóng góp luận án a Lần từ củ Bách Bộ thân đứng (S cochinchinensis) thu hái tỉnh Savannakhet (Lào), phân lập xác định cấu trúc 12 hợp chất, có chất 1-(3-hydroxy-2-metoxyphenyl)-2-(3’hydroxy-5’-metoxy-2’,4’-đimetylphenyl)etan (K8), lại 11 chất biết gồm β-sitosterol (K1), Sesamin (K2), cinnamat (K3, K4, K6), dẫn xuất bibenzyl (K5), stilbenoit (K7, K9), Pinoresinol (K10) ancaloit (K11, K12) b Lần từ củ Bách Bộ nhỏ (S pierrei) thu hái tỉnh Savannakhet (Lào), phân lập xác định cấu trúc hợp chất, có chất mới, Stemobenzofuran A (K13), metyl 1’-hydroxy-1’-(4-hydroxy-3metoxyphenyl)propylat (K18) , lại hợp chất biết Sesamin (K2), Stemanthren B (K14), Syrigaresinol (K15), Axit thơm (K16, K17) c Lần từ củ Bách Bộ thân leo (S tuberosa) thu hái tỉnh Attapu (Lào), phân lập xác định cấu trúc hợp chất Tất chất chất mới, bao gồm: Stemophenanthren A-D (K19-K22), Stemostemanthren E (K23) Stemobenzofuran B (K24) d Lần từ thử nghiệm hoạt tính sinh học hợp chất tinh phân lập từ loài Bách Bộ Lào Kết nghiên cứu cho thấy chất K21, K22 K23 có hoạt tính kháng sinh, gây độc bốn dòng tế bào ung thư mức độ (IC 50 từ 4,49 đến 63,65 µg/ml), chất K7, K8, K9, K19 K20 gây độc tế bào ung thư KB mức trung bình (IC 50 = 20,67-82,30 µg/ml) Bố cục luận án Luận án gồm 140 trang với 31 bảng số liệu, 71 hình, sơ đồ, 101 tài liệu tham khảo (9 tiếng Việt, 92 tiếng Anh) Bố cục luận án: Mở đầu (2 trang), Chương 1: Tổng quan tài liệu (25 trang), Chương 2: Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu (6 trang), Chương : Thực nghiệm (20 trang), Chương 4: Kết thảo luận (77 trang), Kết luận (2 trang) CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1 Giới thiệu chung họ Bách Bộ Stemonaceae 1 Phân loại Bách Bộ Họ Bách Bộ (Stemonaceae) thuộc Dứa dại (Pandanales), lớp thực vật mầm (Monocosts) ngành hạt kín (Angiosperms) [1,3,4, 51] Bách Bộ chia thành bốn chi Croomia Torr , Stemona Lour , Stichoneuron Hook F Pentastemona Steenis Trong đó, chi Stemona lớn với 30 lồi, chi Pentastemona chi thuộc họ Bách Bộ xếp thành họ riêng [7,9] Các loài Bách Bộ phân bố rải rác khắp châu lục, chủ yếu vùng trung du, miền núi vùng có khí hậu nhiệt đới, nóng ẩm Trung Quốc, Việt Nam, Lào, Campuchia, Thái Lan … [16,24] Dưới số khóa phân loại thực vật họ Bách Bộ cơng bố Bảng 1: Bảng phân lồi Thực vật chi Croomia WCSP (Word Checklist of Selected Plant family) đến ngày 1/1/2011 Croomia heterosepala (Baker) Okuyama Croomia Japonica Miq Croomia pauciflora (Nutt ) Torr Bảng 2: Bảng phân loài thực vật chi Stichoneuron Hook F theo WCSP (Word Checklist of Selected Plant family) đến ngày 1/1/2011 Stichoneuron caudatum Ridl 2 Stichoneuron membranaceum Hook f Bảng 3: Bảng phân loài thực vật chi Pentastemona theo WCSP (Word Checklist of Selected Plant family) đến ngày 1/1/2011 Pentastemona egregia (Schott) Steenis Pentastemona sumatrana Steenis Bảng 4: Bảng phân loài thực vật chi Stemona Lour theo WCSP (Word Checklist of Selected Plant family) đến ngày 1/1/2011 Stemona angusta I R H Telford Stemona aphylla Craib Stemona australiana (Benth ) C H Wright4 Stemona burkillii Prain Stemona cochinchinensis Gagnep Stemona collinsiae Craib Stemona curtisii Hook f Stemona griffithiana Kurz Stemona hutanguriana Chuakul 10 Stemona Japonica (blume) Miq 11 Stemona Javanica (Kunth) Engl 12 Stemona kerrii Prain 13 Stemona kurzii Prain 14 Stemona lucida (R Br ) DuyfJes 15 Stemona mairei (H Lév ) K Krause 16 Stemona parviflora C H Wright 17 Stemona phyllantha Gagnep 18 Stemona pierrei Gagnep 19 Stemona prostrata I R H Telford 20 Stemona sessilifolia (Miq ) Miq 21 Stemona squamigera Gagnep 22 Stemona tuberosa Lour 23 Stemona tuberosa var moluccana (Blume) ined 24 Stemona tuberosa var tuberosa 1 Giới thiệu chi Stemona Như giới thiệu, chi Stemona chi lớn họ Bách Bộ với khoảng 30 loài Ở Việt Nam, theo tài liệu [1,6] số lượng lồi Bách Bộ chi Stemona tìm thấy lồi Đó lồi Stemona cochinchinensis Gagnep (Bách Bộ Nam Bộ), Stemona collinsiae Craib (Bách Bộ hoa tím), Stemona pierrei Gagnep (Bách Bộ nhỏ), Stemona phyllantha Gagnep (Bách Bộ hoa lá), Stemona saxorum Gagnep (Bách Bộ đứng, Bách Bộ đá) Stemona tuberosa Lour (Bách Bộ thân leo) [55,71,75] Theo tài liệu [23,24,62] Lào có 11 lồi thuộc chi Stemona là: S tuberosa , S phyllantha Gagnep , S squamigera Gagnep , S cochinchinensis Gagnep , S pierrei Gagnep , S saxorum Gagnep , S collinsae Craib , S aphylla Craib , S burkillii Prain , S griffithiana Kurz S kerrii Craib Các loài phân bố rải rác vùng núi miền bắc, đồng miền trung miền nam nước Lào 1 Công dụng Theo y học cổ truyền [2,5,65], Bách Bộ có vị đắng ngọt, tính ơn Thuốc có khả trị ho hư lao, thường dùng trị lao phổi, khí quản viêm mãn tính, ho gà, nhuận phế, sát trùng, trị giun đũa, giun kim Theo kinh nghiệm dân gian, nhân dân tộc Lào sử dụng toàn Bách Bộ làm thuốc giảm sốt, chữa bệnh bại liệt, tê bệnh sẩy thai cho gia súc, làm tê liệt giun có hiểu Ngồi cịn sử dụng làm thuốc diệt trùng để bảo vệ mùa màng, trồng Thành phần hóa học Bách Bộ Phần lớn nghiên cứu thành phần hóa học Bách Bộ tập trung phần củ Bách Bộ phần chiếm tỷ trọng lớn so với toàn hoạt chất tập trung Các nghiên cứu nước quốc tế rằng, hoạt chất củ Bách Bộ stilbenoit, stemanthren, stemofuran ancaloit [32,58,59,67] Tình hình nghiên cứu Lào Với Bách bộ, hầu hết nghiên cứu Lào dừng lại mức đánh giá hoạt tính sinh học cặn chiết, chưa có tài liệu khoa học cơng bố thành phần hóa học Bách Bộ mọc Lào 2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam Ở Việt Nam năm 1996 TS Vũ Ngọc Kim người nghiên cứu thành phần hóa học lồi S tuberosa, S saxorum, S peirrei chiết tách, xác định cấu trúc alcaloit có cơng thức cấu phân tử C 22 H 33 NO đặt tên chất Tuberostemonine L-G [9] Trong năm 2000, PGS TS Phạm Hữu Điển cộng tập trung nghiên cứu thành phần hóa học loài Bách Bộ Việt Nam: S tuberosa, S collinsae, S saxorum S cochinchinensis phân lập 30 ancaloit, [47,49,51,60,62,79] Trong đó, từ lồi S cochinchinensis, tác giả phân lập ancaloit có cấu trúc khung mới, đặt tên cochinchistemonine [79] Tình hình nghiên cứu giới Cho đến nay, số hợp chất tự nhiên khác gluxit (chiếm 2,3% trọng lượng khô), lipit (0,83%), protit (9%), axit hữu [17,39,61] từ củ Bách Bộ người ta phân lập xác định cấu trúc 100 ancaloit [26, 45,46] Các ancaloit từ Bách Bộ thường đa dạng cấu trúc tính đa dạng lồi, phần khác – điều kiện thổ nhưỡng, khí hậu ảnh hưởng lớn đến đa dạng cấu trúc khung CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng phương pháp nghiên cứu 1 Mẫu thực vật Tên khoa học mẫu thực vật Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thế Anh, Viện Hóa học – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp xác định Các mẫu tiêu lưu giữ Phịng Hóa học hợp chất thiên nhiên, Bộ mơn Hóa hữu cơ, Khoa hóa học, Trường ĐHSP Hà Nội Mẫu Bách Bộ thân đứng Stemona cochinchinensis thu hái tỉnh Savannakhet (CHDCND Lào) vào tháng 10 năm 2010, số tiêu KPN-01 2010 Hình 1: Bách Bộ thân đứng Stemona cochinchinensis Mẫu Bách Bộ nhỏ Stemona pierrei thu hái tỉnh Savannakhet, CHDCND Lào vào tháng năm 2011, mẫu tiêu số KPN-02 2011 Tên khoa học mẫu Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thế Anh, Viện Hóa học – Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam xác định Hình 2: Bách Bộ nhỏ Stemona pierrei Hình 3: Bách Bộ thân leo Stemona tuberosa Mẫu Bách Bộ thân leo Stemona tuberosa thu hái tỉnh Attapu, CHDCND Lào vào tháng năm 2011, mẫu tiêu số KPN03 2011 (tên khoa học mẫu TS Sinh học Nguyễn Thị Liên Khoa Sinh học Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Việt Nam giúp định tên) 2 Phương pháp xử lý chiết mẫu Mẫu củ Bách Bộ làm sạch, thái nhỏ, phơi bóng mát, sấy khơ nhiệt độ 40 C, sau nghiền mịn Bột mẫu củ ngâm chiết hỗn hợp dung môi Me OH: H O (80:20) nhiệt độ phòng (3 lần, 24 giờ/lần) chiết siêu âm nhiều lần (6-8 lần, 45 phút/lần) Dịch chiết sau cất loại dung môi áp suất giảm, thu cặn chiết metanol Sau cặn chiết metanol đem chiết với dung mơi có độ phân cực tăng dần n-hexan, etyl axetat, nbutanol, cất loại dung môi áp suất giảm, thu cặn chiết tương ứng Phương pháp phân tích, chiết tách, phân lập chất Việc phân tích, phân tách phần dịch chiết phân đoạn chiết thực phương pháp sắc kí khác phương pháp sắc kí lớp mỏng (TLC), phương pháp sắc kí cột thường (CC), sắc kí cột đảo pha, sắc kí lỏng điều chế (prep HPLC) Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất Độ quay cực: đo máy Polartronic D (Haensch, Jasco P-2000 series), điểm nóng chảy: đo thiết bị Boetis B-545 Các phương pháp phổ: IR JASCO FT/IR-5300, NMR (1D, 2D) Brucker Avance 500 MHz, MS, Fourier FT-ICR-MS Variance 320-MS Các thiết bị có Trường ĐHSP Hà Nội Viện Hàn Lâm KHCN Việt Nam Ngoài luận án có sử dụng đến thiết bị Phổ khối lượng phân giải cao biến đổi Furie ghi máy Brucker Apex III (FT-ICR-MS) đặt Viện Hóa sinh thực vật Leibniz, Halle, CHLB Đức Phổ tử ngoại khả kiến (Uv-vis) đo thiết bị Shimadzu UV-1650PC Instrument MeOH đặt Bộ mơn Hóa lý, khoa Hóa học, Trường ĐHSP Hà Nội Phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh học * Phương pháp thử hoạt tính gây độc tế bào: Được tiến hành dòng tế bào u ng thư người, gồm tế bào ung thư biểu mô KB, tế bào ung thư phổi Lu, tế bào ung thư vú MCF-7 tế bào ung thư vân tim RD Phép thử gây độc tế bào tiến hành khay 96 giếng; mẫu thử (cao chiết hay hợp chất phân lập từ Bách Bộ) pha loãng nồng độ khác 128µg/ml; 32 µg/ml; µg/ml; 0,5 µg/ml * Phương pháp thử hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn: tiến hành Viện Hàn lâm Khoa học công nghệ Việt Nam theo phương pháp sau: Phương pháp định lượng chất kháng sinh (CKS) vi sinh vật (VSV) Phương pháp xác định hoạt tính kháng sinh: phương pháp đục lỗ (hay gọi khuyếch tán đĩa thạch) phương pháp MIC trình bày CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM Củ Bách Bộ thân đứng (S cochinchinensis) 1 Chiết phân lập chất từ củ Bách Bộ thân đứng 3,0 Kg bột khô từ củ Bách Bộ thân đứng (Stemona cochinchinensis) chiết dung môi hữu sơ đồ Sơ đồ Ngâm chiết củ Bách Bộ thân đứng Stemona cochinchinensis 3,0kg củ BB khô MeOH:H O (80:20) Cặn tổng Cặn EtOAc Cặn n-hexan Cặn n-butanol n-hexane, EtOAc n-buthanol Chạy cột sắc ký để phân lập chất tinh theo sơ đồ sau: Sơ đồ Chiết tách chất từ cặn n-hexane củ Bách Bộ thân đứng S cochinchinensis Sơ đồ 3 Chiết tách hợp chất từ cặn EtOAc củ Bách Bộ of S cochinchinensis SKC / n:E /8:1 Cặn n-hexan (CH: 5,76g) CH1(K1) 1,05g CH2B3(K4) 7mg CH2B2(K3) 4mg CH2B1(K2) 9mg CH2 1,3g SKC / n: E/4:1 CH2B 78mg CH2C 63mg CH2C2(K5) 9mg HPLC/ n:E /1:1HPLC/ n:E /2:1 CE2 165mg SKC / n: E/1:1 CE2B 77mg CE2B1 (K10) 7mg CE2B2 (K11) 9mg CE2B3 (K12) 5mg HPLC / n: E/3:7 Cặn EtOAc (CE:7 67g) SKC/n:E/4:1 CE1 0,61g CE1D1 (K9) 17mg CE1C1 (K8) 4mg SPD /C:M/1:1 HPLC/ n: E/3:2:1 SKC / n: E/ 3:1 CE1A (K6) 88mg CE1B (K7) 83mg CE1C 181mg CE1D 72mg Củ Bách Bộ nhỏ ( S Pierrei) Qui trình ngâm chiết, phân lập chất từ củ Bách Bộ nhỏ (S pierrei) giống mục Sơ đồ Phân lập chất từ cặn n-hexan củ Bách Bộ nhỏ (S pierrei) Sơ đồ Phân lập hợp chất từ cặn EtOAc củ Bách Bộ nhỏ (S pierrei) 3 Củ Bách Bộ thân leo ( S tuberosa) Sơ đồ Phân lập hợp chất từ cặn n-hexan củ Bách Bộ thân leo (S tuberosa) SKC/ n: E/4:1 SKC/ n:E /8:1 Cặn n-hexan PH (3 17g) PH3C 66mg SKC/ n: E/3:1 PH3 322mg PH3C1 (K13) 4mg HPLC n: E/3:2 PH1 414mg PH1B1 (K2) 5mg PH1B 56mg HPLC/ n: E/3:1 PE1 657mg PE3 325mg PE4 233mg SKC n:E/5:1 SKC/n:E/3:1 SKC/n:E/2:1 HPLC/n:E/1:1 HPLC/n:E/1:1 HPLC/n:E/2:1 HPLC/n:E/3:2 PE4A 43mg PE3B 53mg PE1B 83mg PE1D 69mg PE4A2 (K18) 5mg PE3B2 (K17) 5mg PE3B1 (K16) 3mg PE1D2 (K12) 6mg PE1D3 (K15) 7mg PE1D1 (K11) 7mg PE1B1 (K14) 7mg PE1B2 (K7) 5mg Cặn EtOAc (PE: 67g) SKC n:E/ 6:1 TH5 78g SKC/n:E/3:2 HPLC/n:E/1:1 TH5B 57mg TH5B4 (K24) 9mg TH5B1 3mg TH2 27g SKC/ n:E/2:1 HPLC/n:E/3:2 TH2C1 (K19) 4mg TH2C2 (K20) 8mg TH2C 97mg TH2C4 (K22) 12mg TH2C5 (K23) 5mg TH2C3 (K21) 6mg Cặn n-hexan (TH:14 76g) SKC/ n:E/ 10:1 Thử nghiệm hoạt tính sinh học 21 Chất thử hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn; chất thử khả gây độc dòng tế bào ung thư Kết Bảng 18 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC HỢP CHẤT PHÂN LẬP TỪ CỦ BÁCH BỘ THÂN ĐỨNG S COCHICHINENSIS Từ củ Bách Bộ thân đứng S cochinchinensis phân lập 12 hợp chất Cấu trúc chúng xác định sau: O CH OCH H H CH O Maistemonine Isomaistemonine Bảng Các giá trị phổ H 13 C NMR K11 K12 Vị trí H NMR δ (ppm) J (Hz) 13 C NMR δ (ppm) K11 K12 K11 K12 1 88 m; 11 m 85 m; 2,08 m 35 35 50 m; 87 m 42 m; 85 m 26 25 3 39 m 3,36 m 63 63 93 m; 59 m 55 m; 89 m 47 46 46 m 82 m 85 m; 47 m 24 25 50 m; 95 m 35 m; 95 m 25 24 26, m; 89 m 24 m; 88 m 28 27 9 - - 173 172 9a - - 79 78 10 - - 136 135 11 - - 197 179 12 - - 91 91 13 - - 172 172 14 - - 97 96 15 - - 175 174 16 02 s 98 s 17 79 s 77 s 7 18 86 m 83m 85 83 19 45 m, 31 m 45 m; 31 m 34 33 20 57 m 55 m 34 34 21 - - 17 178 22 22 d, J=7 22 d, 7,0 14 14 OCH 00 s 97 s 58 58 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC HỢP CHẤT TỪ CỦ BÁCH BỘ LÁ NHỎ S PIERREI *K13 (Stemobenzofuran A) Phổ NMR K13 hình 12 bảng 17 Hình 12 Phổ H 13 C NMR K13 đo CDCl Bảng Các giá trị phổ H 13 C NMR K13 Vị trí H NMR δ (ppm), J (Hz) 13 C NMR δ (ppm) - 119 6 68, d, J = 103 22, t, J = 124 7 16, d, J = 104 - 153 - 155 1’ - 122 2’ 17, s 106 3’ - 145 4’ - 139 5’ - 121 6’ - 145 1’’ 89, s 101 2’’ - 154 5-OCH 3 97, s 55 3’OCH 3 88, s 60 6’OCH 3 96, s 56 5’-CH 44, s 13 4’-OH 70, s K13 xác định Stemobenzofuran A, stemofuran mới, lần đâu tiên phân lập từ S pierrei ϖ K14 (Stemanthren B) Phổ NMRcủa K14 hình 13 bảng K14 xác định Stemanthrene B 18 O OCH OH CH H CO OMe 1" 2" 1' 3' 5' Hình 13 Phổ H NMR 13 C NMR K14 đo CDCl Hình Các giá trị phổ H 13 C NMR K14 Stemanthrene B No H NMR δ (ppm) 13 C NMR δ (ppm) HMBC K14 [42] K14 [42] - - 131 131 - - 144 144 - - 147 147 90, d, J=8 5Hz 90, d, J=8 5Hz 113 113 C6/C2/C3 71, d, J=8 5Hz 72, d, J=8 5Hz 122 122 C6’/C1/C3 - 126 126 1’ - - 136 136 2’ 43, s 43, s 102 102 C2”/C3’/C 4’ 3’ - - 156 156 4’ - - 110 110 5’ - - 151 151 6’ - - 114 114 1” 77, t, J=13 79, m 30 30 C2” /C2/C 6’ 2” 69, q, J=13 70, m 22 22 C1”/C2’/C 2OCH 3 80, s 80, s 61 61 C2 3-OH 66, s 66, s - C2/C3/C4 3’OCH 3 85, s 85, s 55 55 C3’ 4’-CH 16, s 16, s 8 C3’/C4’/C 19 H CO HO HO CH OCH 3 1" 2" 1' 3' 5' 5’ 5’-OH 36, s 36, s C4’/C5’/C 6’ ϖ K15 (Syringaresinol): Phổ NMR K15 hình 14 bảng 10 K15 xác định syringaresinol Hình 14 Phổ H 13 C NMR K15 đo CDCl Bảng 10 Các giá trị phổ H 13 C NMRcủa K15 so sánh với Syringaresinol (kí hiệu SSn) Vị trí H NMR (CDCl ) 13 C NMR (CDCl ) HMB C K15 SSn K15 SSn 1, 10 dd, 5, 12 m 54 54 2, 73 d, 4 76 d, 86 86 4, 28 dd, 0, 30 m 71 71 2/6 92 m 94 m 1’, 1” - - 132 132 2’, 2”, 6’, 6” 59 s 61 s 102 102 2/6/4’ 4”/3’/3 ” 5’/5” 3’, 3”, 5’, 5” - - 147 147 4’, 4” - - 134 134 3’, 5’, 3”, 5”OCH 3 91 s 92 s 56 56 3’/3” 5’/5” 4’, 4”OH 91 s 57 s - - 20 O O OCH OH OCH H CO H CO HO H H ' ' ' ' ' ' '' '' '' '' '' '' *K16 (Axit benzoic) Dựa vào phổ H NMR (hình 15) xác định K16 axit benzoic C OH O Hình 15 Phổ H NMR K16 ϖ K17 (axit p-anisic) Phổ NMR K17 hình 16 bảng 11 K17 xác định axit p -anisic Hình 16 Phổ H 13 C NMR K17 đo CDCl Bảng 11 Các giá trị phổ H 13 C NMR K17 Vị trí H NMRδ (ppm), J (Hz) 13 C NMR(δ ppm) - 121 2; 06, d, 132 3; 95, d, 113 - 164 -COOH - 173 -OCH 3 88, s 55 * K18 [(Metyl 1’-hydroxy-1’-(4-hydroxy-3-metoxyphenyl)propylat] Phổ NMR K18 hình 17 bảng 12 21 CH O COOH Axit p-anisic Hình 17 Phổ H 13 C NMR K18 đo CDCl Bảng 12 Các giá trị phổ H 13 C NMRcủa K18 Vị trí H NMR δ (ppm), J (Hz) 13 C NMR δ (ppm) - 134 6 95 d, J = 108 - 146 - 145 88 d, J = 114 6 83 dd, J = 0, 118 1’ 08 dd, J = 5, 70 69 dd, J = 5, 16 77 dd, J=8 5, 16 3’ - 172 K18 xác định metyl 1’-hydroxy-1’-(4-hydroxy-3metoxyphenyl) propylat, hợp chất lần phân lập từ S pierrei XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC HỢP CHẤT TỪ CỦ BÁCH BỘ THÂN LEO S TUBEROSA ϖ K19 (Stemophenanthren A) Phổ NMR K19 hình 18 bảng 13 Hình 18 Phổ H 13 C NMR K19 đo CDCl Phân tích phổ 1D, 2D NMR FT-ICR-MS cho thấy K19 hợp chất Chúng đặt tên stemophenantren A 22 H H H H CO OH 1' 3' 2' HO COOCH O O OH Me 1" 2" 1' 3' 5' Bảng 13 Các giá trị phổ H 13 C NMR K19 Vụ trí H NMR δ (ppm), J (Hz) 13 C NMR δ (ppm) HMBC - 129 87, d, J = 128 1,3 70, m 129 2, 4 62, m 128 5 10, d, J = 134 1,4,6’ - 137 1’ - 128 2’ - 130 3’ - 188 4’ - 182 5’ 16, d, J = 121 3’,6’ 6’ - 128 1” 59, d, J = 128 2”,6 2” - 162 2’,6’, 1” 2’-Me 14, s ϖ K20 (Stemophenenthren B) Phổ NMR K20 hình 19 bảng 14 K20 xác định Stemophenanthrene B, stemanthren mới, lần phân lập từ S tuberosa Hình 19 Phổ H 13 C NMR K20 đo CDCl Bảng 14 Các giá trị phổ H 13 C NMR K20 Vị trí H NMR δ (ppm), J (Hz) 13 C NMR δ (ppm) HMBC - 122 - 156 - 147 4 10 s 102 2,3,5 - 135 - 129 23 OMe MeO HO OH 1" 2" 1' 3' 5' 1’ - 100 2’ 51 d, J=8 111 2”,3’ 3’ 23 t, J= 122 2’,4’2’ 4’ 26 m 123 3’,5’ 5’ 55 t, J=7 120 3’,4’ 6’ - 103 1” 91 s 100 2”,2 2” - 154 1”,2’ 2-OMe 00 s 56 2”-OMe 00 s 56 ϖ K21 (Stemophenanthren C) K22 (Stemophenanthren D) Phổ NMR K21 hình 20 bảng 15 K2 xác định stemophenanthren C, hợp chất mới, lần phân lập từ S tuberosa Phổ NMR K22 hình 21 bảng 15 K22 xác định stemophenanthren D, stilbenoit mới, lần phân lập từ S Tuberosa Hình 20 Phổ H 13 C NMR K21 đo CDCl Hình 21 Phổ H 13 C NMR K22 đo CDCl Bảng 15 Các giá trị phổ H 13 C NMR K21 K22 Vị trí H NMR (δ ppm), J (Hz) 13 C NMR(δ ppm) 24 Me OMeHO HO OH 1" 2" 1' 3' 5' OMe OH MeO OMe 1" 2" 1' 3' 5' K21 K22 K21 K22 - - 124 129 2 28 d, J=16 23 m 122 111 51 dd, J=1 5, - 127 142 12 m - 128 146 - - 153 155 - - 138 137 1’ - - 133 128 2’ - - 153 154 3’ 04, d, J= 16 26, m 103 122 4’ 12, m 57, d, J=7 129 120 5’ 04, d, J=16 - 103 154 6’ - - 153 124 1” 94, t, J=7 49, d, J=7 121 111 2” 81, d, J=8 76, m 116 104 5-OMe 87, s 77, s 61 61 2’OMe 91, s - 56 6’OMe 91, s - 56 3-Me - 41, s - 13 ϖ K23 (Stemophenanthren E) Phổ NMR K23 hình 22 bảng 16 Hình 22 Phổ H 13 C NMR K23 đo CDCl K23 xác định Stemophenanthren E,một stilbenoit lần phân lập từ S tuberosa Bảng 16 Các giá trị phổ H 13 C NMR K23 Vị trí H NMR δ (ppm), J (Hz) 13 C NMR δ (ppm) HMBC - 128 - 116 - 51, d, J= 111 2,4,5 25 Me OH HO OH OH Me 1' 3' 5' 1" 2" ... Thành phần hóa học Bách Bộ Phần lớn nghiên cứu thành phần hóa học Bách Bộ tập trung phần củ Bách Bộ phần chi? ??m tỷ trọng lớn so với toàn hoạt chất tập trung Các nghiên cứu nước quốc tế rằng, hoạt. .. khoa học cơng bố thành phần hóa học Bách Bộ mọc Lào 2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam Ở Việt Nam năm 1996 TS Vũ Ngọc Kim người nghiên cứu thành phần hóa học lồi S tuberosa, S saxorum, S peirrei chi? ??t... hoạt chất củ Bách Bộ stilbenoit, stemanthren, stemofuran ancaloit [32,58,59,67] Tình hình nghiên cứu Lào Với Bách bộ, hầu hết nghiên cứu Lào dừng lại mức đánh giá hoạt tính sinh học cặn chi? ??t, chưa