Đang tải... (xem toàn văn)
ScanGate document
sHi KHOA HỌC ĐHQGHN, KHTN, t.XII, n°2- 1996 TINH SACH VA MOT VAI DAC TRUNG CUA LECTIN TU HAT CHAY (ARTOCARPUS TONKINENSIS) Trần Thị Long, Nguyễn Quốc Khang Đại học Khoa học tự nhién - ĐHQGHN ĐẶT VẤN ĐỀ Lectin từ loài Artocarpus quan tâm nghiên cứu, Ártocarpus integrifolia dứa lectin phản ứng mạnh mế với IgA người [1] HCG (2| Nhiều lectin loài Irapus tỉnh nghiên cứu đặc trưng cấu trúc phân tử tính đặc hiệu với atcarbon [3-6] Đặc trưng phân tử cửa lectin Artocarpus nghiên cứu có cấu trúc sốn từ đến đơn vị đồng hình hay dị hình [3,7,8] chúng có phản ứng đặc trưng &c mono- hay disaccharide kiểu Galactoside |9] Nhưng Artocarpus tonkinensis (cay Chay) tó Việt Nam chưa có cơng trình đề cập tới lectin đối tượng Do đó, chúng Bn hành đề tài “Tinh nghiên cứu vài tính chất đặc trưng cửa lectin từ hạt Chay ‘carpus tonkinensis)” ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHAP NGHIÊN CỨU Hat Chay (Artocarpus tonkinensis) thu mua ¢ chợ vùng Hà Nội mùa hè 1994 Hạt mang c vỏ cứng, thái nhỏ sấy khô 40-50°C Hạt khô đem nghiền nhỏ thành bột mịn, dùng xấu nghiên cứu Hồng cầu nhóm máu A, B, O người khoa Huyết học truyền máu, bệnh viện Mai Hà Nội cung cấp Các hóa chất khác dùng dạng tỉnh khiết phân tích từ hãng Sigma (Mỹ) Merck „ Các protein khác, chế phẩm phịng thí nghiệm lectin, Đại học Tổng hợp Hà Nội ấp Xác định mức độ ngưng kết hồng cầu theo nguyên tắc Gebauer [10] mô tả Tỉnh lectin từ hạt Chay theo phương pháp Nguyễn Quốc Khang [11] Xác định hàm lượng protein hịa tan theo Lowry [12], có albumine huyết bị làm chất Điện di ga ~ polyacrylamide có khơng có SDS theo ngun tắc cla Weber va Osborn rong hệ đệm Laemmii [14] KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN finh lectin tiển hành tỉnh lectin từ hạt Chay, thử nghiệm việc chiết rút lectin 15 dung dịch có chất pH khác (trong hệ thống đệm phosphate) Các kết qui ghi tóm tắt bảng đây: Bảng Ảnh hưởng chất dung dịch đến khả chiết rút hoat tính lectin tir hat Chay (Artocarpus tonkinensis) „r mm Bictelh Hoạt động gây ngưng kết (mg/g) | Nhóm máu | ĐV.103/g | ĐV/ng Pr HạO 149,57 A B Ø 40960 5120 5120 273851,70 34231,46 34231,46 NaCl 0,9% 152,83 A 10240 67002,55 B oO 5120 5120 33501,28 33501,28 Phosphate pH 5,0 132,67 A B oO 40960 40960 10240 308735,96 308735,96 77183,99 PBS - pH 7,2 155,33 A 10240 65924,16 | Phosphate pH 8,0 | 148,03 A 5120 34587,58 B oO | Phosphate pH9,0 | 144,20 5120 5120 B oO 2560 2560 B oO 5120 5120 A 10240 | 32962,08 32962,08 17293,79 17293,79 71017,41 35508,70 35508,70 Nhìn vào bảng nhận thấy: - Các dung dịch khác nhau, protein hạt Chay chiết rút với lượng khác nhau: đệm phosphatè pH 5,0 (132,67 mg/q hạt) cao đệm PBS có pH 7,2 Đáng « dung dịch có chứa muối hàm lượng protein rút tương tự (như & Nal PBS) - Tương tự protein, hoạt tính lectin chiết rút dung dịch khác ch Hoạt tinh lectin cao dung dịch phosphate có pH 5,0, cịn thấp đệm có pH Sau thăm đò chất dung dich ảnh hưởng đến khả chiết rút tính chat ca] từ hạt Chay, lựa chọn dung dịch chiết rút lectin hạt Chay đệm phosphate có pr Dịch chiết rút, ly tâm 10.000 vòng / phút, 10 phút Dịch ly tâm đem sắc ký trao để qua cột CM- cellulose Rửa cột bing dém phosphate pH 5,0 Tach chiết lectin khỏi cột đệm phosphate pH 8,0 Dich lectin tiếp tục đem sắc ký trao đổi ion qua cột DEAE- cellulo tái sẮc ký trao đổi ion qua DEAE-cellulose tonkinenais) tóm tắt bảng Kết tỉnh lectin từ hạt Chay (Artoc Bằng phương pháp tỉnh lectin từ hạt Chay mồ tả trên, chế phẩm lecti có đệ khoảng gần lần so với dịch thô ban đầu điện di SDS-Polyacrylamide ch vết protein với trọng lượng tương ứng 14 17 + kDa Hiệu suất khai thác 55% tính 16 vị hoạt độ 11,42% tính theo hàm lượng protein, hoạt động riêng tới 864135,02 đơn vị ¡ protein Đảng Các bước tỉnh sach lectin tir hat Chay (Artocarpus tonkinensis) Gk Bade | Pe mg/g | T % Dịch thô 145,33 | 100,00 CM - cellulose 109,18 | 75,13 DEAE-cellulose | 40,16 | 27,63 DEAE-cellulose | 16,59 | 1142 Hoạt động chung ĐV.103/g % 26214,4 19860,8 16384,0 14336,0 100,00 75,76 62,50 54,69 Hoạt động riêng DV/mgP | Độ 180378 181908 407968 864135 1,00 1,01 2,26 4,79 Một vài tính chất đặc trưng, Lectin hạt Chay, giống lectin từ Artocarpus khác không đặc hiệu tuyệt đối hồng cầu nhóm máu A, B O Tuy nhiên nhiều có ưu phản ứng mạnh với nhóm A, tay chất dung dịch chiết rút, bảng cho thấy dịch chiết rút nước có pH 5,0 Từ kết đặc hiệu nhóm máu thể qua tính đặc hiệu đường ratcarbon) sau: Đảng Nồng độ đường (mM) kìm hãm hoạt tính lectin Chay cr Các loại đường D-Galactose NAc-D-Galactosamine D-Galactosamine D(+)-Glucosamine D-Mannose mM 12,50 - TT | Các loại đường mM 11 100 a-L(-) Fucose 12 D-Sorbose 13 D-Arabinose 16 Saccharose as | Me-a-D-Galactoside | D-Glucose 1,56 - 14 D-Ribose 15 | Lactose 200 | NAc-D-Glucosamine 100 17 | Maltose - 10 Me-a-D-Mannoside D-Fructose - - 18 Melibiose 100 19 NAc-axit-Neuraminic = 20 = - 25,00 0,78 s Tir két qua bang cho thấy lectin từ hạt Chay bị kìm hãm mạnh đường Galactoside ương tự kiểu Galactoside Methyl-a-D-Galactoside (1,56 mM) N-Acetyl axit Neuraminic 8mM) Kết phù hợp với lectin có wu thé đặc hiệu nhóm máu A Như nói trên, Artocarpus integrifolia [1] đặc hiệu với Globulin miễn dịch IgA, theo thăm dị phịng hóa miễn dịch Viện Vệ sinh dịch tế Hà Nội cho biết: Lectin Chay tocarpug tonkinensts) - tỉnh phản ứng với lgA tương đối mạnh Dựa đó, chúng tơi thử nghiệm phản ứng cửa lectin Chay với protien khác trình bày tắt bảng 17 Bảng Nồng 46 (mg/ml) protein khác kìm hãm hoạt động lectin Chay TT Protein mg/ml HCG - nước tiểu 0,022 Trypxin - Inhibitor đậu tương Huyết ngựa chửa Lectin Sam (Tachypleus tridentatus) - œ-Phetoprotein người - Lectin nhi Sen (Nelumbo nuctfera) - Lectin chai Tai tượng ( Tridacna elongata) - Lectin Mwép ding (Momordica charantia) - Huyết nhóm máu A người 0070 10 Huyết nhóm máu B người 0,084 11 Huyết nhóm máu O cửa người 0,056 12 Mucine cừu 0,039 0,060 Như lectin hạt Chay phản ứng mạnh với nhiều loại protein có kiểu Glycoprotein n HCG, kích dục tố từ huyết ngựa chửa, Mucine protein huyết nh máu A, B, O Nhưng lại không phản ứng với tất lectin khác thí nghiệm (bảng 4) Ì biệt lectin Chay khơng phản ứng với a-phetoprotein Để tÌm hiểu ảnh hưởng pH đến hoạt tính lectin hạt Chay, chúng tơi sử dụng hệ đệm PBS (Phoaphate-Buffer-Salz) có pH từ 4,5 đến 9,5 Kết thí nghiệm mơ tả Hoạt độ 6,6 1280 tóm tắt hình Đường cong biểu diễn tốc độ hoạt động lectin hạt Chay phụ thuộc pH cho thấy: vùng pH axit yếu có độ đốc thấp, đến pH 640 6,5 - 7,0 xuất “vai”, sau tăng nhanh đến điểm tối thích pH 8,6; sau giảm đột ngột hẳn hoạt động pH 9,5 Như lectin Chay mẫn cảm với pH cao có đồng phân Đó điều cần kiểm tra nghiên cứu tiếp tục để giải thích thỏa đáng a 5ì ae a Hình Ảnh hưởng pH đến hoạt tí lectin hat Chay (A tonkinensis) KẾT LUẬN — Leetin hạt Chay tỉnh theo quy trình đơn giản: từ chiết rút đệm có 5,0, sắc ký trao đổi ion qua CM-cellulose, DEAE- cellulose tái sắc ký DEAE-cellalose C phẩm thu có độ gần lần so với dịch thô ban đầu có hoạt động riêng 864135,02 ‹ vị mg protein ~ Lectin hạt Chay đặc hiệu với đường kiểu Galactoside Lectin hat Chay bj kim him mạnh protein HCG, nhóm máu người Mucine huyết ngựa chửa, Lectin hạt Chay hoạt động mạnh vùng pH 8,6 TÀI LIỆU THAM KHẢO oque-Barreira M Ơ., Campos-Neto A - J Immunol., 184 (1985), 1740- 1743 guyễn Quốc Khang Trần Thị Long Tạp chí Khoa học, ĐHQG Hà Nội, Tập XI, số 1996) 'e Azevedo-Moreira R., De Lima-Airouz I - Biol Plant., 28 (1981), 186 - 192 'e Asevedo-Moreira R., De Oliveira J.T A - Biol Plant., 25 (1983), 343-348, Namjuntra, P Muanwongyathi, M Chulavatuatal Biochem Biophys Res Comm., 128 1983), 833-348, B Hunter, M.K (1986), 319-328 Aucouturier, 03-511 Suresh, E Keshavarz, W.M Wenman, K.G Micetich E, Mihaesco, C Mihaesco, J.L Preud’homme Mol Biochem Arch., Immunol., 24 (1987), ° S Appukutan and D, Basu FEBS - Letters, 180 (1985), 331-334 I.V.K Sastry, P Banarjee, S.R Patanjali, M.J Swamy J Biol Chem., 261 (1986), 1726-1733 { Fleish and J Maider Biochem ' Q Khang, et al Lectins: Hoppe-Seyler, 836 (1985), 1029 - 1032 Sigma Chem Company, (1988), 341-348 '.H Lowry, N J Rosebrough, and J Rondall J Biol Chem., 193 (1951), 256 : Weber and M Osborn J Biol Chem., 244 (1969), 4406, K Laemmli and M Farve J Mol Diol., 80 (1977), 455-465, JOURNAL OF SCIENCE, Nat Sci., t.XII, n°2, 1996 PURICATION AND SOME CHARACTERIZATIONS OF LECTIN FROM SEEDS OF ARTOCARPUS TONKINENSIS Tran Thi Long, Nguyen Quoc Khang College of Natural Sciences - VNU ‘he Lectin from Artocarpus tonkinensis was extracted by phosphate - buffer 0.02 M at pH 5.0 urified by ion-exchange on CM -cellulose, DEAE-cellulose and Re-chromatography on the }-cellulose The products of lectin have high purity (846135 IU/mg protein) ; was noted that lectin from Artocarpus tonkinensis have not specificity for blood groups, ave specificity for sugars and glycoproteins very different H- optimum of the lectin from Artocarpus tonkinensis is pH 8.6 19 ... | Độ 180378 181908 407968 864135 1,00 1,01 2,26 4,79 Một vài tính chất đặc trưng, Lectin hạt Chay, giống lectin từ Artocarpus khác không đặc hiệu tuyệt đối hồng cầu nhóm máu A, B O Tuy nhiên... 864135,02 ‹ vị mg protein ~ Lectin hạt Chay đặc hiệu với đường kiểu Galactoside Lectin hat Chay bj kim him mạnh protein HCG, nhóm máu người Mucine huyết ngựa chửa, Lectin hạt Chay hoạt động mạnh vùng... tính lectin chiết rút dung dịch khác ch Hoạt tinh lectin cao dung dịch phosphate có pH 5,0, cịn thấp đệm có pH Sau thăm đị chất dung dich ảnh hưởng đến khả chiết rút tính chat ca] từ hạt Chay,