Di truyén hoc va ung dung — Chuyên san Công nghệ sinh học Số 8~ 2012 NGHIEN CUU DIEU KIEN LEN MEN XOP VA DAC TINH PHYTASE BEN NHIET TU CHUNG VI KHUAN BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS SUBSP PLANTARUM B16 PHAN LAP Ở ĐẤT VƯỜN QUOC GIA TRUNG KHANH -
CAO BANG
Trần Thị Lệ Quyên, Đào Thị Lương, Dương Văn Hợp
Viện Vi sinh vật và Công nghệ Sinh học, DHOGHN
Ngày nhận bài 11-3-2012/ Ngày sửa bài 27-3-2012/ Ngày đồng ý đăng bài 5-4-2012
TOM TAT
Phytate là một trong những nguồn phosphate hữu cơ phổ biến giải phóng ra phosphate vô cơ nhờ các vi sinh vật sinh phytase khoáng hóa Chủng vi khuẩn B16 có tiềm năng để sản xuat phytase ngoại bào được chọn từ bộ giống Bacillus phân lập từ đất Vườn Quốc gia Trùng Khánh - Cao Bằng Chúng B16 được định danh thuộc loài Bzcil/us amyloliquefaciens subsp plantarum dia vao 6 trinh tw cdc gen gyrA, rpoB, purH, polC, groEL va 16S rRNA Diéu kién lên men xốp thích hợp cho sản sinh phytase của chủng này là cơ chất bột ngô làm 4m 80% bằng dung dịch khoáng sau khi nuôi cấy 3 ngày ở 40°C, sử dụng 10% (v/w) giống khởi động được hoạt hóa trong 16 - 24 giờ trên môi trường Luria Broth (LB) Ở điều kiện này, hoạt tính phytase đạt cao nhất là 7,7 U/gam cơ chất khô tuyệt đối Phytase thô từ chúng B16 có hoạt lực cao nhất ở nhiệt d6 65°C trong pH 7,0 Hoat tinh phytase tăng lên 14% khi có mặt CaCl; ở nồng độ 5 mM Trái lại, sự có mặt của BaCl›, MgSO¿, ZnSO¿, FeSO¿, MnSO, làm giảm hoạt
tính của phytase từ 30-60% ngay ở nồng độ 1 mM Sự có mặt của EDTA ở nồng độ 1mM ức chế 60% hoạt tính của phytase va hau như làm mắt hoàn toàn hoạt tính ở nồng độ 5mM
Phytase từ chủng B16 thể hiện tính bền nhiệt đến 50% ở 70°C, pH 7.0 trong 30 phút khi có mặt CaC]; 5mM Phytase này không mất hoạt tính khi xử lý với enzyme tiêu hóa pepsin nhưng bị mất 30% hoạt tính với trypsm
Tw khéa: phytase, Bacillus, én men xốp GIỚI THIỆU Phytase (E.C.3.1,3.3 inositol hexaphosphate phosphohydrolase) là một enzyme thủy phân axit phytic (myo-inositol 1, 2, 3, 4, 5, 6-hexakis-dihydrogen phosphate)
thanh myo-inositol va axit phosphoric theo
kiều bậc thang tạo ra các hợp chất trùng gian phosphate myo-inositol Axit phytic hay phytate là một dạng dự trữ photpho chủ yếu trong các hạt cây, nó là một nguồn phosphate
quan trọng trong thức ăn chăn nuôi Tuy
nhiên, phosphate không có sẵn trong các động vật dạ dày đơn như lợn và gia cầm vì không có phytase trong đường tiêu hóa của chúng Sự có mặt của axit phytic trong thức ăn có thể
làm cản trở tiêu hóa do tính chất liên kết của
nó với các cation hóa trị 2 có vai trò dinh
dưỡng quan trọng (Ca”° Zn” và Fe?) và một
số protein, theo cách đó, các khoáng chất và
protein không được động vật tiêu hóa Do vậy,
thức ăn chăn nuôi thường được bổ sung
phosphate dưới dạng phosphate canxi Tỉ lệ
cao axit phytic va phosphate vô cơ dư thừa
trong phân của động vật dạ dày đơn, lắng đọng trong môi trường góp phần vào sự ô
nhiễm phosphate dẫn đến hiện tượng phú dưỡng của lớp nước bề mặt Do đó, việc làm
giảm hàm lượng axit phytic trong khẩu phần an ngũ côc thông qua sự thủy phân nhờ
enzyme là điều được mong đợi Người ta ước
tính cứ 10 kg phosphate canxi thì có thể được
thay thê bởi 250g enzyme phytase Phytase trong suôt quá trình chế biến thức ăn chăn
nuôi được làm khô trước khi ép viên, điều này
pint Teen Wek ch ia 20
J Genetics and Applications — Special Issue: Biotechnology