CHIẾT TÁCH và PHÂN TÍCH PHỔ xác ĐỊNH cấu TRÚC một số SAPONIN TRONG lá cây bùi BA HOA ILEX TRIFLORA BL

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC ĐÀ LA ̣T TRẦN THỊ NGA CHIẾT TÁCH VÀ PHÂN TÍCH PHỔ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ SAPONIN TRONG LÁ CÂY BÙI BA HOA ILEX TRIFLORA BL LUẬN VĂN THẠC SĨ NGÀNH HĨA PHÂN TÍCH Lâm Đồng–2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC ĐÀ LA ̣T CHIẾT TÁCH VÀ PHÂN TÍCH PHỔ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ SAPONIN TRONG LÁ CÂY BÙI BA HOA ILEX TRIFLORA BL Chun ngành:Hóa phân tích Mã số:8440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ NGÀNH HĨA PHÂN TÍCH Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS Trịnh Thị Điệp Học viên thực hiện: Trần Thị Nga Lâm Đồng– 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi hướng dẫn PGS.TS Trịnh Thị Điệp Những kết nghiên cứu người khác số liệu trích dẫn luận văn thích đầy đủ Tơi hồn tồn chịu trách nhiệm trước nhà trường cam đoan Lâm Đồng, ngày 29 tháng 11 năm 2019 Tác giả Trần Thị Nga LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời tri ân sâu sắc đến PGS.TS Trịnh Thị Điệp, người đưa đến với lĩnh vực Hóa học hợp chất thiên nhiên Cô dạy, hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận văn Xin gửi lời cảm ơn đến: - Các thầy giáo giảng dạy suốt khóa học Cao học Khoa Sau đại học – Trường Đại học Đà Lạt - PGS.TS Nguyễn Văn Hạ ThS Nguyễn Thị Tố Uyên giúp đỡ nhiều làm việc phịng thí nghiệm - Các anh chị, bạn bè lớp HHK25BCH – Khoa Sau đại học – Trường Đại học Đà Lạt Và đặc biệt, xin bày tỏ lịng biết ơn gia đình ln động viên, nhắc nhở để có thành ngày hôm MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN .2 1.1 Giới thiệu chi Ilex 1.1.1 Vài nét chi Ilex .2 1.1.2 Vài nét loài Ilex triflora Bl .2 1.1.3 Tác dụng dược lí số lồi Ilex 1.1.3.1 Theo kinh nghiệm dân gian 1.1.3.2 Một số nghiên cứu hoạt tính sinh học .3 1.2 Những nghiên cứu thành phần hóa học chi Ilex 1.2.1 Flavonoid 1.2.2 Triterpenoid triterpenoid saponin 1.2.3 Acid phenolic 10 1.2.4 Các nhóm hợp chất khác 11 1.2.5 Những nghiên cứu thành phần hóa học lồi Ilex triflora Bl 12 1.3 Các phương pháp chiết xuất cô lập hợp chất thiên nhiên 13 1.3.1 Phương pháp chiết 13 1.3.1.1 Kĩ thuật chiết lỏng – lỏng 13 1.3.1.2 Kĩ thuật chiết rắn – lỏng 14 1.3.2 Các phương pháp sắc kí 14 1.3.2.1 Phân loại theo chất hai pha sử dụng .15 1.3.2.2 Phân loại theo chất tượng xảy trình tách chất 16 1.3.2.3 Phân loại theo hình dạng pha tĩnh .17 1.4 Phương pháp chiết xuất phân lập saponin 18 1.4.1 Phương pháp chiết xuất 18 1.4.2 Phương pháp phân lập 18 CHƢƠNG 2: PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Đối tượng nghiên cứu .19 2.2 Phương pháp chiết xuất phân lập .19 2.2.1 Phương pháp chiết 19 2.2.2 Phương pháp sắc ký cột 19 2.2.3 Phương pháp sắc ký mỏng 20 2.2.4 Phương pháp tinh chế sản phẩm .20 2.3 Phương pháp xác định cấu trúc .20 CHƢƠNG 3: THỰC NGHIỆM .21 3.1 Điều chế dịch chiết từ bùi ba hoa Ilex triflora Bl .21 3.2 Phân lập hợp chất từ bùi ba hoa Ilex triflora Bl .21 3.2.1 Quy trình phân lập .21 3.2.2 Thông số vật lý số liệu phổ hợp chất phân lập .22 3.2.2.1 ITS01 22 3.2.2.2 ITS02 23 3.2.2.3 ITS03 24 3.2.2.4 ITS05 25 CHƢƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 4.1 Quy trình phân lập 26 4.2 Xác định cấu trúc hợp chất .27 4.2.1 Hợp chất ITS01: Ilekudinoside R .27 4.2.2 Hợp chất ITS02 35 4.2.3 Hợp chất ITS03: Kudinoside A 44 4.2.4 Hợp chất ITS05: Latifoloside A .54 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 DANH MỤC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN 69 PHỤ LỤC Error! Bookmark not defined DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT δ Độ chuyển dịch hóa học v Số sóng brs Peak đơn loang rộng (Broad single) CC Sắc ký cột (Column Chromatography) 13 C-NMR Cộng hưởng từ hạt nhân carbon -13 (13C Nuclear Magnetic Resonance) COSY Correlated Spectroscopy d Peak đôi (Doublet) dd Peak đôi peak đôi (Doublet of doublet) ESI-MS Phổ khối phun mù điện tử (Electrospray Ionization Mass Spectrometry) EtOAc Ethyl acetate EtOH Ethanol HMBC Tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết (Heteronuclear Multiple Bond Coherence) H-NMR Cộng hưởng từ hạt nhân proton (Proton Nuclear Magnetic Resonance) HSQC Tương tác dị hạt nhân qua liên kết (Heteronuclear Single Quantum Correlation) HPLC Sắc kí lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) Hz Hertz IR Phổ hồng ngoại (Infrared Spectrometry) J Hằng số tương tác m Peak đa (Multiplet) M Khối lượng phân tử MeOH Methanol MHz Megahertz MS Phổ khối lượng (Mass Spectrometry) m/z Tỉ lệ khối lượng điện tích ion NMR Cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance) s Peak đơn (Singlet) t Peak ba (Triplet) TLC Sắc ký mỏng (Thin Layer Chromatography) UV-Vis Phổ tử ngoại khả kiến (Ultra Violet – Visible Spectrometry) DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 Thành phần hóa học số loàiIlex dùng làm thức uống Bảng 1.2 Thành phần tinh dầu có Ilex paraguariensis 11 Bảng 1.3 Phân loại sắc ký theo chất pha động pha tĩnh 15 Bảng 4.1 Số liệu phổ NMR ITS01 33 Bảng 4.2 Số liệu phổ NMR ITS02 42 Bảng 4.3 Số liệu phổ NMR ITS03 51 Bảng 4.4 Số liệu phổ NMR ITS05 60 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cây bùi ba hoa Ilex triflora Bl .3 Hình 4.1 Sơ đồ quy trình phân lập saponin từ Ilex triflrora Bl .26 Hình 4.2 Phổ IR hợp chất ITS01 27 Hình 4.3 Phổ 1H-NMR ITS01 28 Hình 4.4 Phổ 13C-NMR ITS01 .29 Hình 4.5 Phổ DEPT ITS01 29 Hình 4.6 Phổ khối hợp chất ITS01 .30 Hình 4.7 Phổ HSQC ITS01 31 Hình 4.8 Phổ HMBC ITS01 31 Hình 4.9 Cấu trúc hóa học ITS01 32 Hình 4.10 Một số tương tác HMBC quan trọng ITS01 33 Hình 4.11 Phổ IR ITS02 .36 Hình 4.12 Phổ 1H-NMR ITS02 37 Hình 4.13 Phổ 13C-NMR ITS02 37 Hình 4.14 Phổ DEPT ITS02 38 Hình 4.15 Phổ khối lượng ITS02 38 Hình 4.16 Phổ HSQC ITS02 39 Hình 4.17 Phổ HMBC ITS02 .40 Hình 4.18 Cấu trúc hóa học ITS02 41 Hình 4.19 Một số tương tác HMBC quan trọng ITS02 41 Hình 4.20 Phổ IR ITS03 .44 Hình 4.21 Phổ 1H-NMR ITS03 45 Hình 4.22 Phổ 13C-NMR ITS03 46 Hình 4.23 Phổ DEPT ITS03 46 Hình 4.24 Phổ HSQC ITS03 47 Hình 4.25 Phổ HMBC ITS03 .48 Hình 4.26 Phổ COSY ITS03 48 ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC ĐÀ LA ̣T CHIẾT TÁCH VÀ PHÂN TÍCH PHỔ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ SAPONIN TRONG LÁ CÂY BÙI BA HOA ILEX TRIFLORA BL Chun ngành:Hóa phân tích Mã số: 8440118... 1.1.2 Vài nét lồi Ilex triflora Bl Cây bùi ba hoa có tên khoa học Ilex triflora Bl hay gọi bùi ba hoa Về thực vật, bùi ba hoa Ilex triflora Bl mô tả sau [5]: Thân: cao – m, nhánh non có lơng mịn Lá: ... Do đó, chúng tơi thực đề tài ? ?Chiết tách phân tích phổ xác định cấu trúc số saponin bùi ba hoa Ilex triflora Bl. ”nhằm góp phần làm rõ thành phần saponin có lồi Trong suốt thời gian thực đề tài,