Nuôi cấy vi sinh vật

BÀI 1 CHUẨN BỊ DỤNG CỤ PHA CHẾ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY VI SINH VẬT I Mục đích Bao gói dụng cụ Biết cách bao gói ,làm nút bông ,khử trùng dụ cụ bằng nồi hấp khử trùng ở áp suất cao và bằng tủ sấy Nắm vững yêu cầu ,nguyên tắc ,các bước thực hiện pha chế và khử trùng môi trường nuôi cấy vi sinh vật Phương pháp khử trùng Làm chết hoàn toàn mọi mầm mống vi sinh vật, kể cả các vi sinh vật có bào tử Đây là khâu quan trọng nhất Khi nghiên cứu vi sinh vật, cần thiết phải khử trùng môi trường, dụng cụ, thiết.

BÀI CHUẨN BỊ DỤNG CỤ - PHA CHẾ MÔI TRƯỜNG NI CẤY VI SINH VẬT I Mục đích: Bao gói dụng cụ: Biết cách bao gói ,làm nút bơng ,khử trùng dụ cụ nồi hấp khử trùng áp suất cao tủ sấy Nắm vững yêu cầu ,nguyên tắc ,các bước thực pha chế khử trùng môi trường nuôi cấy vi sinh vật Phương pháp khử trùng: Làm chết hoàn toàn mầm mống vi sinh vật, kể vi sinh vật có bào tử Đây khâu quan trọng Khi nghiên cứu vi sinh vật, cần thiết phải khử trùng môi trường, dụng cụ, thiết bị để tránh phát triển lẫn lộn hệ vi sinh vật ngoại lai vào giống vi sinh vật nghiên cứu Pha môi trường: Là hỗn hợp gồm chất dinh dưỡng chất có nhiệm vụ trì oxi hóa khử ,áp suất thẩm thấu tế bào ổn định độ pH môi trường II Nguyên tắc: Bao gói dụng cụ: để ni cấy vi sinh vật phải đạt độ trung tính, phải thật khơ, không bị nứt mẻ Cần cẩn thận để dụng cụ sau khử trùng đảm bảo vô trùng lớp giấy gói lấy sử dụng dễ dàng Phương pháp khử trùng:  Tiêu diệt toàn vi sinh vật ngoại lai diện môi trường  Tạo điều kiện vô trùng cho môi trường để kết phân lập, ni cấy xác  Khơng làm biến tính mơi trường, khơng làm biến tính số chất môi trường  Sau khử trùng, môi trường không sản sinh chất độc gây chết vi sinh vật nuôi cấy  Phải đảm bảo điều kiện vô trùng tuyệt đối sau khử trùng  Bảo đảm an toàn người sử dụng Phương pháp làm môi trường:  Dựa sở nhu cầu chất dinh dưỡng khả đồng hóa chất dinh dưỡng loại vi sinh vật  Đảm bảo cân áp suất thẩm thấu môi trường tế bào vi sinh vật nên cần điều chỉnh tỷ lệ nồng độ chất thành phần môi trường  Đảm bảo điều kiện hóa lý cần thiết cho hoạt động trao đổi chất vi sinh vật III Tiến hành phương pháp: Cách làm nút bông: Dùng miếng không thấm nước cuộn lại, nhét vào miệng ống nghiệm co vừa đủ chặt Cách làm nút gịn áp dụng cho chai lọ, bình cầu, bình tam giác, cách làm tương tự ống nghiệm Nhưng lượng gòn sử dụng phải nhiều bọc lớp vải gạc Về u cầu:  Nút gịn có kích thước độ chặt vừa phải  Đầu nút phải trịn, gọn, phần ngồi lớn phần ống nghiệm  Lấy nút hay đóng vào dễ dàng Cách bao gói dụng cụ: Với dụng cụ sau làm nút bơng ,cần bao gói phần có nút giấy dầu hay giấy báo để hấp khử trùng nút không bi ướt đảm bảo điều kiện vô trùng tốt Cách làm sau:  Cắt mãnh giấy hình chữ nhật với kích thước tùy theo dụng cụ cần bao gói  Quấn giấy quanh phần đầu nút  Gập ống giấy sát vào nút mặt trước hai bên  Gập nốt phần giấy lại cài sâu vào hai bên  Khử trùng dụng cụ thủy tinh phương pháp nhiệt khô Các hộp petri , ống hút thủy tinh bền với nhiệt dược khử trùng phương pháp sấy 170°trong tủ sấy Trong trường hợp này, ống hút cần nhét nút không thấm nước đầu hút Hợp petri ,ống hút ,các dụng cụ cần khử trùng khác gói kín giấy giấy nhôm trước sấy Khử trùng dụng cụ, môi trường nồi áp lực: Phương pháp thực nồi vô trùng áp suất cao Là thiết bị làm kim loại, chịu nhiệt độ v áp suất cao, có khả tự động điều chỉnh áp suất thời gian khử trùng theo yêu cầu người sử dụng Pha chế môi trường (môi trường PGA,môi trường pepton lỏng ,môi trường Gause): Cân, đong xác thành phần mơi trường pha chế theo trình tự hướng dẫn o Với mơi trường lỏng: chất cân đong xong cho hịa tan vào nước o Với môi trường đặc: môi trường lỏng có bổ sung thêm agar (1,5-2,5%) Cân hóa chất hòa tan vào nước, bổ sung lượng nước vừa đủ theo công thức Cho agar vào, đun sôi khuấy agar vừa tan Khử trùng mơi trường: Tùy theo tính chất điều kiện cụ thể loại môi trường mà chế độ phương pháp khử trùng khác Bảo quản kiểm tra môi trường: Môi trường chưa dùng cần bảo quản chỗ mát, hạn chế tác dụng ánh sáng, nhiệt độ từ 0-5°C không để môi trường bị khô Trước sử dụng, để kiểm tra độ vô khuẩn môi trường người ta thường đặt chúng vào tủ ấm 37°C, 48-72h Sau lấy quan sát loại bỏ mơi trường có vi sinh vật phát triển sử dụng ống nghiệm, đĩa petri có mơi trường đạt u cầu IV Thực hành, kết nhận xét: (Mỗi tổ pha mơi trường để thực hành sau dùng chung mơi trường với nhau)  Thực hành bao gói khử trùng loại dụng cụ: ống nghiệm ,ống hút,que gạt,đĩa petri,bình tam giác ,…  Thực hành pha môi trường dinh dưỡng nuôi cấy vi sinh vật:  Môi trường PGA (potato glucose agar) dùng nuôi cấy nấm mốc Dùng 60g khoai tây,6g glucose ,6g agar,300ml nước cất,pH=6.5 Cân lượng cần thiết cho môi trường đủ cho 300ml ,môi trường PGA Khoai tây gọt vỏ ,dùng dao cắt lát ,nấu sôi lọc lấy nước khiết Cho glucose vào dung dịch chiết khoai tây làm tan hoàn toàn Bổ sung lượng nước cho đủ theo công thức Dùng agar vào ,đun sôi khuấy agar tan hoàn toàn Dùng phễu thủy tinh rót mơi trường vào ống nghiệm để làm thạch nghiêng Đậy ống nghiệm nút Khử trùng 1atm/15 phút Sau hấp vô trùng xong , lấy để nghiêng góc 20° Để nguội cho mơi trường đặc lại  Môi trường pepton lỏng: nuôi cấy vi khuẩn Dùng cao thịt 1.5g ,pepton 3g ,nước cất 300ml Cân thành phần cho vào cốc chứa 300ml nước cất Đem đun nhẹ cho tan Dùng phễu thủy tinh rót vào ống nghiệm(25 ống nghiệm ).Đậy nút bơng, gói giấy hấp vô trùng 1atm/15 phút  Môi trường Gause: để nuôi cấy xạ khuẩn Dùng 6g tin bột tan ,0.15g K 2HPO4 ,0.15g MgSO4.7H2O ,0.3g KNO3,0.15g NaCl , 0.03g FeSO4 Pha bình tam giác 150ml Đậy nút bơng ,gói giấy hấp vơ trùng KÊT QUẢ VÀ NHẬN XÉT: Mơi trường PGA nghiêng (potato glucose agar) Hình PGA thạch nghiêng BÀI NUÔI CẤY, QUAN SÁT SỰ PHÁT TRIỂN CỦA VI SINH VẬT I Mục đích: - Nắm vững ngun tắc mục đích việc ni cấy vi sinh vật - Thực thao tác cấy truyền từ ống giống sang loại môi trường thạch nghiêng, thạch đứng, thạch đĩa - Theo dõi, quan sát ghi nhận phát triển vi sinh vật loại môi trường nuôi cấy Dụng cụ: - Bút ghi ống nghiệm, gòn thấm - Que cấy vịng, que cấy móc - Đèn cồn, giá để ống nghiệm - Các ống môi trường thạch nghiêng (Pepton, Hansen, PGA), thạch đĩa ( Pepton, Hansen, PGA), môi trường lỏng ( Pepton, Hansen,PGA) - Các ống giống vi khuẩn ( E Coli, Bac Subtilis, Streptococus), nấm men (Saccharomyces ), nấm sợi (Aspergillus, Penicillium, Mucor, Rhizopus ) II Nguyên Tắt Mọi thao tác nuôi cấy phải thực điều kiện vô trùng để tránh tạp nhiễm Môi trường dụng cụ nuôi cấy phải khử trùng triệt để Duy trì tốt điều kiện ni cấy để vi sinh vật phát triển: Để đảm bảo vi sinh vật phát triển tốt, sau cấy xong phải quan tâm đến điều kiện ni dưỡng Có nhiều điều kiện ảnh hưởng đến phát triển vi sinh vật, đáng ý điều kiện sau Nhiệt độ Tùy loài vi sinh vật, chọn nhiệt độ tối thích cho phát triển chúng trì ổn định nhiệt độ Dựa vào nhiệt độ tối thích cho phát triển vi sinh vật, người ta chia chúng làm nhóm sau đây: Vi sinh vật ưa ấm có nhiệt độ tối thích 20-30ºC Vi sinh vật ưa nóng có nhiệt độ tối thích 55-60ºC Vi sinh vật ưa lạnh có nhiệt độ tối thích 10-15ºC Để trì nhiệt độ thích hợp, ta sử dụng tủ phịng ấm có phận điều chỉnh nhiệt độ tự dộng ln ln trì nhiệt độ mức định Độ ẩm Để đảm bảo độ ẩm cho vi sinh vật phát triển ta thực cách sau: Khi chuẩn bị môi trường phải đảm bảo đủ lượng nước Phun nước vơ khuẩn vào phịng nuôi để nước bốc tủ ấm Điều kiện hiếu khí yếm khí: Ni hiếu khí Cung cấp thường xuyên đầy đủ oxy cho vi sinh vật thực biện pháp: Lớp mơi trường ni cấy có độ dày vừa phải ( 2-8cm) ni ống nghiệm, khay, bình tam giác Các bình chứa canh trường lắc thường xuyên q trình ni để cung cấp thêm oxy cho vi sinh vật Nếu nuôi cấy sâu môi trường lỏng, phải tiến hành sục khí thường xun hay định kỳ Ni kỵ khí Ngăn cách khơng cho vi sinh vật tiếp xúc với oxy cách: Sau cấy xong ta đổ lên bề mặt môi trường lớp dầu paraphin, dầu vazolin lớp thạch dày khoảng 2cm Cách đơn giản dễ áp dụng Chú ý: dầu thạch phải vơ khuẩn, dầu phải trung tính Cấy đâm sâu môi trường đặc Nuôi cấy bình hút chân khơng, dùng ống nghiệm đặc biệtgieo cấy xong hút hết khơng khí hàn kín lại Đun sơi mơi trường 20-30 phút làm nguội nhanh để đuổi hết oxy Dùng hóa chất để loại trừ oxy khơng khí dụng cụ ni Có thể ni vi sinh vật hiếu khí vi sinh vật kỵ khí Phương pháp khó áp dụng III Tiến Hành Phương Pháp Phương pháp chung việc cấy chuyền ví dụ: cấy chuyền từ ống nghiệm chứa giống sang ống nghiệm chứa môi trường gồm thao tác sau: Đốt đèn cồn lên Tay trái cầm ống nghiệm: ống giống nằm ngồi, ống mơi trường trong, giữ ống nghiêng Tay phải cầm que cấy khử trùng đèn cồn nóng đỏ dây cấy Dùng ngón út ngón áp út kẹp nút bơng vào lịng bàn tay xoay nhẹ, kéo nút giữ tay đến đậy lại Hơ nóng để khử trùng khơng khí miệng ống nghiệm Đợi que cấy vừa nguội, khéo léo đưa que cấy tiếp xúc với khuẩn lạc ống giống Rút que cấy ra, không để que cấy chạm vào thành ống nghiệm đưa vào ống nghiệm môi trường để thực thao tác cấy chuyền Rút que cấy ra, khử trùng lại phần khơng khí nơi miệng ống nghiệm đậy nút lại Để ống nghiệm vào giá, đốt lại que cấy đèn cồn để vào chỗ cũ Dán nhãn ghi tên giống vi sinh vật, ngày cấy, tên môi trường vào thành ống nghiệm Chú ý: Cách cấy chuyền tiến hành từ canh trường đặc ( lỏng) sang môi trường đặc (hoặc lỏng) Nếu ống giống canh trường lỏng, ngồi việc dùng que cấy cịn dùng pipet để hút canh trường Pipet phải chuẩn bị làm vô khuẩn trước ( rửa sạch, sấy khô, bọc giấy, khử trùng) Khi dùng tháo giấy dùng Dùng xong cắm pipet vào dung dịch khử khuẩn Phương pháp cấy thạch nghiêng Phương pháp dùng để cấy vi sinh vật hiếu khí Thơng thường dùng que cấy vịng, trình tự tiến hành giống Nhưng sau lấy giọt canh trường vi sinh vật vào đầu que cấy rồi, ta tiếp tục sau: Đưa đầu que cấy vào tận đáy ống nghiệm Nhẹ nhàng hòa giọt canh trường vi sinh vật vào giọt nước ngưng tụ đáy ống nghiệm Nhẹ nhàng từ từ kéo đầu que cấy mặt thạch từ đáy lên theo kiểu sau: Theo kiểu hình chữ chi Theo hình vịng xoắn Theo đường vạch ngang song song Một số kiểu cấy ống thạch nghiêng Phương pháp cấy đĩa petri Có thể cấy đĩa petri theo hai cách: dùng que cấy vòng, dùng pipet Trong phạm vi thực theo cách dùng que cấy vịng trình tự thực sau: Để đĩa petri lên bàn Dùng que cấy lấy canh trường vi sinh vật theo thư tự yêu cầu vô trùng nêu phần Tay trái mở nắp hộp vừa đủ đầu que cấy vào Nhẹ nhàng nhanh chóng lướt que cấy mặt thạch theo kiểu: Theo hình chữ chi toàn bề mặt thạch Theo đường song song Theo hình chữ chi bốn góc đĩa thạch Trong trình cấy, lượng vi sinh vật bị giảm dần theo đường cấy nên vi sinh vật phát triển, gần cuối đường số khuẩn lạc thưa dần Các kiểu cấy thạch đĩa IV Thực hành, kết nhận xét: 5.1 E.coli E.coli sau ngày nuôi cấy phương pháp cấy ria đĩa thạch ống nghiệm nghiên môi peptone, khuẩn lạc bắt đầu phát triển thành đóm trịn trắng đục phát triển theo ria cấy khơng có dấu hiệu nhiễm sinh vi sinh vật bên ngồi hình dạng khuẩn lạc E.coli trịn khơng bề mặc khuẩn bóng mép khuẩn lạc phẳng kích thước khuẩn lạc từ đến mm , tốc độ sinh trưởng vừa, môi trường Suy ống giống tốt, thao tác trình ni cấy đảm bảo vơ trùng E.coli sau ngày nuôi cấy phương pháp cấy ria đĩa thạch ống nghiệm nghiên môi peptone, khuẩn lạc bắt đầu phát triển thành đóm trịn trắng đục đậm ngày đầu phát triển theo ria cấy khơng có dấu hiệu nhiễm sinh vi sinh vật bên ngồi hình dạng khuẩn lạc E.coli khơng đều, bề mặc khuẩn bóng mép khuẩn lạc phẳng kích thước khuẩn lạc từ đến mm, bào tử E.coli bị rơi xuống q trình ni cấy bắt đầu phát triển , tốc độ sinh trưởng vừa, môi trường bị đục dần Suy ống giống tốt, thao tác q trình ni cấy đảm bảo vơ trùng Hình ảnh E.coli đèn sau ngày nuôi cấy 5.2 Aspergillus Aspergillus sau ngày nuôi cấy phương pháp cấy điểm đĩa thạch ống nghiệm nghiên mơi trường thích hợp PGA, sợi nấm bắt đầu phát triển mạnh, dạng hình sợi khơng đồng đều, có màu xám đen kích thước khoảng đến cm bề sợi nấm xù xì gấp nếp, mép khuẩn lạc gợn sóng Mơi trường phát triển nấm sợi bị đục, nấm phát triển nhanh môi trường, không tạo ván mơi trường.Khơng có tượng nhiễm vi sinh vật khác ngồi mơi trường ni cấy Suy mơi trường nuôi cấy ổn định ống giống tốt, thao tác q trình ni cấy đảm bảo vơ trùng Hình ảnh Aspergillus ni cấy qua ngày Aspergillus sau ngày nuôi cấy phương pháp cấy điểm đĩa thạch ống nghiệm nghiên môi trường thích hợp PGA , sợi nấm phát triển mạnh ổn định, dạng hình sợi khơng đồng đều, khuẩn lạc có màu xanh đen kích thước khoảng đến cm phát triển khắp đĩa petri, bề sợi nấm xù xì gấp nếp, mép khuẩn lạc gợn sóng Mơi trường phát triển nấm sợi bị đục, nấm phát triển nhanh môi trường, không tạo ván mơi trường Khơng có tượng nhiễm vi sinh vật khác ngồi mơi trường ni cấy Suy môi trường nuôi cấy ổn định ống giống tốt, thao tác q trình ni cấy đảm bảo vơ trùng 5.2 Nấm men Saccharomyces Sau ngày nuôi cấy nấm men Saccharomyces bắt đầu có dấu hiệu bị nhiễm, xuất hình dạng khuẩn lạc, hình dạng nấm men có khuẩn lạc hình trịn bán kinh khoản đến mm, kích thước khơng khuẩn lạc có màu trắng đục bề mặc gồ gề, mép khuẩn lạc mịn, dạng mỡ, hình dạng thứ vi sinh vật bị nhiễm có màu đèn khuẩn lạc có hình sợi, mép khuẩn lạc có sợi, bề mặc gồ gề, kích thước khuẩn lạc từ đến cm nghi ngờ nấm mốc Môi trường phát triển trong, không bị vấn đục Tốc độ phát triển vừa Suy môi trường nuôi cấy ổn định, thao tác nuôi cấy môi trường nuôi cấy không đảm bảo kỹ thuật dẫn đến nhiễm nấm mốc Hình ảnh Nấm men Saccharomyces sau ngày ni cấy Sau ngày nuôi cấy nấm men Saccharomyces bị nhiễm, xuất hình dạng khuẩn lạc, hình dạng nấm men có khuẩn lạc hình trịn bán kinh khoản đến mm bị nấm mốc cạnh tranh chất dinh dưỡng, kích thước khơng khuẩn lạc có màu trắng đục bề mặc gồ gề, mép khuẩn lạc mịn, dạng mỡ, hình dạng thứ vi sinh vật thứ nghi ngờ nấm mốc có màu đèn khuẩn lạc có hình sợi, mép khuẩn lạc có sợi, bề mặc gồ gề, kích thước khuẩn lạc từ đến cm, mốc bắt đầu phát triển dày lên hút hết chất dinh dưỡng môi trường dẫn đến khuẩn lạc nấm men không phát triển Môi trường phát triển trong, không bị vấn đục Tốc độ phát triển vừa Suy môi trường nuôi cấy ổn định, thao tác nuôi cấy môi trường nuôi cấy không đảm bảo kỹ thuật dẫn đến nhiễm nấm móc BÀI QUAN SÁT HÌNH THÁI VI SINH VẬT DƯỚI KÍNH HIỂN VI I Mục đích: -Nắm vững cách sử dụng kinh hiển vi quang học, đặc biệt kỹ sử dụng vật kinh dầu -Biết cách làm tiêu ( tạm thời) quan sát số đặc điểm vi sinh vật kính hiển vi - Nắm vững phương pháp làm tiêu phòng ẩm quan sát cuống sinh bào tử nấm mốc -Nắm vung nguyên tắc, bước thực làm tiêu cố định nhuộm màu quan sát đặc điểm sinh học vi sinh vật kính hiển vi Chuẩn bị dụng cụ: -Kính hiển vi, dầu soi -Đèn cồn, cồn 700 , 900 -Gịn thấm -Que cấy vịng,Que cấy móc -Phiến kinh kinh -Hộp petri có chứa phiến kinh kinh vô trùng -Ống nghiệm chứa nước cất vô trùng -200 ml môi trường PGA vô trùng -Thuốc nhuộm xanh metylen 0,001% -Mẫu cấy vi khuẩn, nấm men, nấm mốc môi trường thạch đĩa -Tiêu nhuộm đơn vi khuẩn E.coli,nấm men, -Tiêu phòng ẩm nấm sợi Aspergillus -Thuốc nhuộm đơn, nhuộm bào tử, nhuộm gram -Giá mâm nhuộm -Bình tia, giấy lọc, giấy thấm -Đèn cồn, que cấy vòng -Cồn 950 , HCL 0,5%, H2SO4 1% -Dịch nuôi cấy tế bào vi khuẩn E.coli, nấm men II Nguyên tắc Nắm vững nguyên tắc, bước thực làm tiêu cố định nhuộm màu quan sát vi sinh vật kính hiển vi Nguyên tắc tiêu tạm thời có nhuộm màu: phương pháp sử dụng thuốc nhuộm khơng độc với sinh vật pha loãng nồng độ đảm bảo cho tế bào sống hoạt động sau nhuộm Nguyên tắc nhuộm màu tiêu :sử dụng thuốc có khả thẩm thấu qua màng tế bào kết hợp với thành phần khác tế bào thành hợp chất màu đặc trưng bền vững Tùy theo mục đích nguyên cứu khả bắt màu khác thành phần tế bào mà chọn loại thuốc cho phù hợp Có cách nhuộm : + Nhuộm đơn giản: dùng loại thuốc nhuộm tiêu + Nhuộm phức tạp (nhuộm kép): dùng đồng thời hai hay nhiều loại thuốc nhuộm tiêu Nguyên tắc nhuộm gram: dựa khả bắt màu thuốc nhuộm tím kết tinh iod mà chia thành nhóm lớn Nhóm giữ phưc chất tạo thành tím kết tinh iod xử lí cồn Nhóm vi khuẩn có tính chât gọi vi khuẩn gram dương Nhóm khơng giữ phức chất tạo thành tím kết tinh iod xử lí cồn Nhóm vi khuẩn có tính chất gọi vi khuẩn gram âm Nguyên tắc nhuộm bào tử: dựa cấu trúc màng bào tử dày ,chắc,khó bắt màu nên nhuộm cần phải dùng nhuộm thuốc nhuộm đặc ,xử lý tế bào chất bào tử dễ bắt màu hồng nhiệt axit III CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH Đối với vi khuẩn nấm men Cho giọt nước vô trùng lên phiến kính Dùng que cấy vịng lấy vòng dịch vi khuẩn nấm men hòa vào giọt nước Đậy kính lên giọt canh trường thật nhẹ để thật nhẹ để tránh khơng tạo bọt khí Đặt tiêu lên bàn kính hiển vi Quan sát vật kính 10x 40x Đối với nấm sợi xạ khuẩn: Cho vào đĩa petri tờ giấy thấm ,rồi đặt vào phiến kính Đậy lại ,gói giấy đem khử trùng ống nghiệm Mở nắp petri gần lửa đèn cồn , đổ thạch ống nghiệm lên phiến kính chờ đông lại Lấy nước cất vô trùng đổ vào phần giấy thấm , để nước thấm tờ giấy Dùng que cấy móc , khều nhẹ vào khuẩn lạc nấm mốc chấm lên phần thạch phiến kính phịng ẩm Gói hai hộp lại nuôi ủ nhiệt độ thường 2-3 ngày(nấm mốc) ,5-7 ngày (xạ khuẩn ) Mở hộp petri lấy phiến kính bên Dùng giấy thấm lau mặt đáy phiến kính Đậy kính lên chỗ có khuẩn lạc mọc đặt kính hiển vi để quan sát Tiêu giọt treo: Dùng phiến kính đặc biệt có phần lõm hình trịn Bơi vazolin quanh phần lõm phiến kính Cho giọt canh trường lên kính Cẩn thận úp ngược kính lên chỗ lõm phiến kính Được quan sát kính hiển vi Nhuộm màu tiêu bản: Chọn phiến kính khơ Nếu chưa phải đem rửa lại Lấy bút màu khoanh vòng tròn (1-2cm2)lên phía phiến kính ,quay ngược phiến kính lại để lên giá Dùng que cấy dòng lấy giọt canh trường để vào vòng khoanh Nếu canh trường đặc dùng que cấy lấy giọt nước vơ trùng để lên vịng khoanh, sau lấy khuẩn lạc vi sinh vật hịa tan với nước Nghiêng que cấy 10-15 độ , nhẹ nhàng dàn giọt canh trường khắp diện tích khoanh ,không sát mạnh Khử trùng que cấy để vào giá Để vết bôi khô tự nhiên Đặc tiêu có vết bơi lên cầu thủy tinh Đặt miếng giấy lọc phủ lên tồn vết bơi Dùng ống nhỏ giọt nhỏ thuốc nhuộm phủ vết bôi (chú ý không cho vết nhuộm nhiều thời gian nhuộm vết bơi ln ln có phủ lớp thuốc nhuộm ) Thời gian nhuộm tùy tính chất tiêu thuốc nhuộm Thường nhuộm nhiệt độ phòng Để tăng cường tác dụng thuốc nhuộm rút ngắn thời gian ta hơ nóng đèn cồn Khi nhuộm xong , rửa vết bôi cách nghiêng phiến kính ,dùng bình xịt cho nước chảy nhẹ qua vết bôi nước chảy khơng cịn màu Dùng giấy thấm khơ tiêu hơ nhẹ tiêu đèn cồn Quan sát tiêu vật kính 40x chuyển sang vật kính 100x có dầu Nhuộm Gram: Đặt giấy lọc lên vết bơi nhuộm tiêu tím kết tinh 1-2 phút Đổ hết thuốc , nhỏ dung dịch lugol lên để phút sau rửa thấm khô Nhúng vào cồn 95°trong 30 giây Cần làm cẩn thận kết phụ thuộc nhiều vào động tác Rửa nước ,thấm khô Xem tiêu vật kính dầu IV Kết nhận xét 4.1 Nấm mốc 4.2 Nấm men: Hình ảnh nấm men kinh hiển vi 40x, nhuộm gram (bên phải) chưa nhuộm gram( bên trái) Nấm men nhuộm gram 4.3 Tiêu phòng ẩm nấm mốc Hình ảnh nấm mốc làm tiêu phòng ẩm kinh hiển vi 40x cho thấy khuẩn lạc có màu xanh, có bào tử bụi có hình dạng khác xếp thành chuỗi 4.4 E.coli ... tạp nhiễm Môi trường dụng cụ nuôi cấy phải khử trùng triệt để Duy trì tốt điều kiện nuôi cấy để vi sinh vật phát triển: Để đảm bảo vi sinh vật phát triển tốt, sau cấy xong phải quan tâm đến điều... agar) Hình PGA thạch nghiêng BÀI NI CẤY, QUAN SÁT SỰ PHÁT TRIỂN CỦA VI SINH VẬT I Mục đích: - Nắm vững nguyên tắc mục đích vi? ??c ni cấy vi sinh vật - Thực thao tác cấy truyền từ ống giống sang loại... Phương pháp cấy thạch nghiêng Phương pháp dùng để cấy vi sinh vật hiếu khí Thơng thường dùng que cấy vịng, trình tự tiến hành giống Nhưng sau lấy giọt canh trường vi sinh vật vào đầu que cấy rồi,