XÁC ĐỊNH DIOXIN VÀ FURAN CLO HÓA TỪ TETRA ĐẾN OCTA TRONG ĐẤT VÀ TRONG TRẦMTÍCH BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ - KHỐI PHỔ PHÂN GIẢI CAO PHA LOÃNG ĐỒNG VỊ

Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 10883:2016 XÁC ĐỊNH DIOXIN VÀ FURAN CLO HÓA TỪ TETRA ĐẾN OCTA TRONG ĐẤT VÀ TRONG TRẦM TÍCH BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ - KHỐI PHỔ PHÂN GIẢI CAO PHA LOÃNG ĐỒNG VỊ Determination of tetra-through octa-chlorinated dioxins and furans in soil sediment by isotope dilution high resolution gas chromatography-high resolution mass spectrometry Lời nói đầu TCVN 10883:2016 xây dựng sở tham khảo EPA Method 1613B Cơ quan bảo vệ môi trường Hoa Kỳ TCVN 10883:2016 Văn phòng Ban Chỉ đạo 33 biên soạn, Bộ Tài nguyên Môi trường đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Lời giới thiệu Tiêu chuẩn không nhằm để hướng dẫn đào tạo phân tích Vì vậy, quy trình phân tích tiêu chuẩn sử dụng cho người phân tích đào tạo tối thiểu nguyên lý phân tích hóa học sử dụng thiết bị phân tích phịng thí nghiệm hóa học Tiêu chuẩn đưa phương pháp phân tích chất dioxin/furan (PCDD/PCDF) đất, trầm tích, gồm nội dung xử lí mẫu sơ (phơi mẫu, nghiền), chiết mẫu, làm dịch chiết, cô đặc làm giàu mẫu, tách phân tích thiết bị HRGC/HRMS, định tính dựa thời gian lưu ion m/z đặc trưng, định lượng phương pháp nội chuẩn pha loãng đồng vị XÁC ĐỊNH DIOXIN VÀ FURAN CLO HÓA TỪ TETRA ĐẾN OCTA TRONG ĐẤT VÀ TRONG TRẦM TÍCH BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ - KHỐI PHỔ PHÂN GIẢI CAO PHA LOÃNG ĐỒNG VỊ Determination of tetra-through octa-chlorinated dioxins and furans in soil sediment by isotope dilution high resolution gas chromatography-high resolution mass spectrometry Phạm vi áp dụng 1.1 Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định policlodibenzo-p-dioxin (PCDD) policlodibenzofuran (PCDF) mẫu đất, trầm tích sử dụng thiết bị sắc ký khí phân giải cao ghép nối khối phổ phân giải cao (HRGC/HRMS) 1.2 Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định mười bảy chất đồng loại PCDD/PCDF liệt kê Bảng A.1 (xem Phụ lục A) Các chi tiết kỹ thuật cung cấp để xác định riêng chất đồng loại 2,3,7,8-tetraclodibenzo-p-dioxin (2,3,7,8-TCDD) 2,3,7,8-tetraclodibenzofuran (2,3,7,8TCDF) 1.3 Giới hạn phát giới hạn định lượng phương pháp PCDD/PCDF phụ thuộc vào chất cản trở mẫu giới hạn thiết bị Mức tối thiểu (ML) đưa Bảng mức nồng độ PCDD/PCDF thấp xác định với giả thiết bỏ qua ảnh hưởng mẫu Giá trị ML phương pháp 2,3,7,8-TCDD mẫu rắn ng/kg 1.4 Những người áp dụng tiêu chuẩn phải thơng thạo thao tác thí nghiệm thơng thường Tiêu chuẩn không đề cập đến vấn đề an toàn mà chủ yếu tập trung vào cách sử dụng Người áp dụng tiêu chuẩn có trách nhiệm thiết lập thao tác thích hợp, an tồn, khơng gây hại cho sức khỏe đảm bảo phù hợp với quy định luật pháp hành Thuật ngữ, định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ, định nghĩa sau 2.1 Chất phân tích (analyte) Các chất PCDD PCDF xác định phương pháp này, liệt kê Bảng A.1 (Phụ lục A) 2.2 Dung dịch chuẩn để đánh giá độ thu hồi độ chụm (precision and recovery standard) PAR Dung dịch chuẩn trung gian pha loãng thêm chuẩn để tạo mẫu chuẩn đánh giá độ thu hồi độ chụm lần phân tích thực LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 2.3 Dung dịch chuẩn pha loãng cấp (primary dilution standard) Dung dịch có chứa chất phân tích cụ thể mua chuẩn bị từ dung dịch gốc pha loãng từ dung dịch chuẩn gốc đến mức cần thiết để chuẩn bị dung dịch chuẩn để dựng đường chuẩn dung dịch khác 2.4 Dung dịch chuẩn để dựng đường chuẩn (calibration standard) Dung dịch chuẩn bị từ dung dịch chuẩn trung gian dung dịch chuẩn gốc dùng để thiết lập phụ thuộc đáp ứng thiết bị (thường diện tích chiều cao pic) vào nồng độ chất phân tích 2.5 Dung dịch chuẩn để hiệu chuẩn đường chuẩn (calibration verification standard) VER Dung dịch chuẩn có nồng độ điểm đường chuẩn (CS3) dùng để hiệu chỉnh đường chuẩn Xem Bảng 2.6 Dung dịch gốc (stock solution) Dung dịch chứa chất phân tích chuẩn bị cách sử dụng vật liệu có nguồn gốc xác minh, có độ tinh khiết chứng nhận 2.7 Lượng đáp ứng tương đối (relative response) RR Lượng tương ứng tương đối PCDD/PCDF so với nồng độ chất đánh dấu dung dịch chuẩn tính theo phép hồi quy tuyến tính (12.6.2) 2.8 Độ chụm độ thu hồi ban đầu (initial precision and recovery) IPR Phân tích bốn mẫu chuẩn pha lỗng từ dung dịch chuẩn PAR để thiết lập giá trị cho độ chụm độ thu hồi chấp nhận IPR thực trước phương pháp áp dụng lần phương pháp thiết bị có thay đổi 2.9 Độ độc tương đương (toxic equivalence quantity) TEQ Tổng nồng độ 17 đồng loại độc dioxin, tính nồng độ chúng nhân với hệ số độc tương ứng, chất động quy ước (Hệ số TEQ tính theo TEQWHO, 2005) Xem Bảng A.2 (Phụ lục A) 2.10 Độ lệch chuẩn tương đối (relative standard deviation) RSD Bằng độ lệch chuẩn nhân với 100 chia cho giá trị trung bình Cịn gọi hệ số biến thiên 2.11 Mẫu chuẩn đánh giá độ thu hồi độ chụm lần phân tích thực (ongoing precision and recovery standard) OPR Một mẫu trắng phòng thí nghiệm thêm lượng chất phân tích biết nồng độ Mẫu OPR phân tích với quy trình giống mẫu thật Mục đích phân tích mẫu OPR để đảm bảo kết phân tích phịng thí nghiệm cịn nằm giới hạn quy định độ chụm độ thu hồi phương pháp 2.12 Mẫu kiểm sốt phịng thí nghiệm (laboratory control sample) LCS Một mẫu trắng phịng thí nghiệm thêm lượng chất phân tích biết nồng độ nhằm mục đích kiểm tra song song kết phân tích phịng thí nghiệm Xem mẫu chuẩn OPR 2.13 Mẫu trắng (blank sample) Một phần nước thuốc thử mẫu đối chứng khác chứa bình chứa mẫu, đặt phịng thí nghiệm trường, xử lý mẫu thật tất công đoạn, bao gồm tất tiếp xúc điều kiện vị trí lấy mẫu, lưu trữ, bảo quản tất bước quy trình phân tích Mục đích việc phân tích mẫu trắng để phát nhiễm bẩn vào mẫu từ trường qui trình vận chuyển mẫu mơi trường phịng thí nghiệm LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 2.14 Mẫu trắng phương pháp (method blank) Một phần nước thuốc thử xử lý giống mẫu thật bao gồm tiếp xúc với tất dụng cụ thủy tinh, thiết bị, dung môi, thuốc thử, chất nội chuẩn, chất đồng hành dùng để phân tích mẫu thật Mẫu trắng phương pháp sử dụng để phát có mặt chất phân tích hay chất cản trở có mặt mơi trường phịng thí nghiệm, thuốc thử thiết bị 2.15 Mẫu kiểm tra chất lượng (quality control check sample) QCS Một mẫu có chứa tất nhóm chất phân tích biết nồng độ Mẫu QCS có từ nguồn bên ngồi phịng thí nghiệm điều chế từ chất chuẩn có nguồn gốc khác với chất chuẩn dùng để dựng đường chuẩn Mẫu sử dụng để kiểm tra lực phịng thí nghiệm kiểm tra vật liệu chuẩn bị khác so với q trình chuẩn bị thơng thường 2.16 Mức nồng độ tối thiểu (minimum level) ML Mức nồng độ mà tồn hệ thống phân tích phải đưa tín hiệu nhận biết điểm chuẩn chấp nhận cho chất phân tích Mức tương đương với nồng độ điểm chuẩn thấp đường chuẩn, giả thiết tất chi tiết kĩ thuật trọng lượng mẫu, thể tích, qui trình làm áp dụng 2.17 Nước thuốc thử (reagent water) Nước chứng minh khơng có chất phân tích hợp chất cản trở có nồng độ mức giới hạn phát phương pháp phân tích Các từ viết tắt 3.1 CDD: Clodibenzo-p-dioxin Các đồng phân đồng loại tetra- đến octaclodibenzo-p-dioxin 3.2 CDF: Clodibenzofuran Các đồng phân đồng loại tetra- đến octa clodibenzofuran 3.3 CS1, CS2, CS3, CS4, CS5 (Calibration standards): Các dung dịch chuẩn để dựng đường chuẩn ghi Bảng 3.4 GC (Gas Chromatography): Sắc ký khí 3.5 TEF (Toxic Equivalence Factor): Hệ số độc tương đương (Xem Phụ lục A, Bảng A.2) 3.6 RF (Response factor): Các hệ số đáp ứng yêu cầu đường chuẩn 3.7 HRGC (High Resolution Gas Chromatography): Sắc ký khí phân giải cao 3.8 HRMS (High Resolution Mass Spectrometry): Khối phổ phân giải cao 3.9 K-D (Kudema-Danish Concentrator): Thiết bị cô đặc Kudema-Danish, sử dụng để cô đặc chất phân tích dung mơi 3.10 MS (Mass Spectrometry): Khối phổ 3.11 PFK (Perfluorokerosene): Hỗn hợp hợp chất sử dụng để hiệu chỉnh thang m/z xác HRMS 3.12 SDS (Soxhlet/Dean-Stark Extractor): Thiết bị chiết Soxhlet/Dean-Stark, sử dụng để chiết mẫu rắn bán rắn 3.13 SICP (Selected Ion current profile): Sắc đồ dòng ion chọn lọc Sắc đồ ghi tín hiệu giá trị m/z xác 3.14 TCDD: Tetraclodibenzo-p-dioxin 3.15 TCDF: Tetraclodibenzo-furan Tóm tắt phương pháp 4.1 Xử lý mẫu Xử lý mẫu bao gồm bước chiết mẫu, làm giàu làm mẫu Mẫu sau làm khơ nghiền đến kích thước phù hợp chiết Soxhlet với dung môi phân hủy HCI chiết lỏng - rắn Trước chiết, bổ sung dung dịch chuẩn đánh dấu vào mẫu để đánh giá hiệu suất thu hồi trình chiết Sau chiết, thêm vào dịch chiết dung dịch chuẩn làm 37Cl4-2,3,7,8TCDD để đánh giá hiệu trình làm Quá trình làm mẫu bao gồm việc xử lý mẫu axit, bazơ, muối, silicagel, nhơm oxit than hoạt tính LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Cơng ty luật Minh Kh www.luatminhkhue.vn 4.2 Phân tích máy sắc ký khối phổ (GC-MS) Sau làm sạch, cô cạn dịch chiết gần khô Cho vào dịch chiết chất nội chuẩn trước phân tích GC, thể tích dịch chiết định bơm vào máy sắc ký khí Các chất phân tích tách phát thiết bị sắc kí khí - khối phổ Hai mảnh ion m/z ghi cho chất phân tích Các PCDD/PCDF nhận biết cách so sánh thời gian lưu sắc kí khí tỷ số cường độ ion hai m/z xác có thời gian lưu tương ứng chất chuẩn kiểm tra tỷ số cường độ ion hai m/z xác thu hay dựa lý thuyết chất chuẩn kiểm tra Các đồng phân đồng loại khơng có clo vị trí 2,3,7,8 nhận biết thời gian lưu tỷ số cường độ ion trùng với giới hạn định rõ từ trước Đặc trưng đồng loại cho 2,3,7,8-TCDD 2,3,7,8-TCDF xác định sử dụng cột GC, tách đồng loại khỏi đồng phân tetra khác 4.3 Tính tốn kết Phân tích định lượng thực cách sử dụng diện tích pic sắc đồ dòng ion chọn lọc (SICP) theo cách sau: Đối với 15 PCDD/PCDF có clo vị trí 2,3,7,8 có chất chuẩn đánh dấu tương ứng (Bảng A.1), hệ thống GC/MS hiệu chuẩn, nồng độ hợp chất xác định cách sử dụng pha loãng đồng vị Đối với 1,2,3,7,8,9-HxCDD, OCDF hợp chất đánh dấu, hệ thống GC/MS hiệu chuẩn, nồng độ hợp chất xác định cách sử dụng nội chuẩn Đối với đồng phân khơng có clo vị trí 2,3,7,8 tất đồng phân có mức clo hóa (ví dụ tổng TCDD), nồng độ xác định sử dụng hệ số đáp ứng từ đường chuẩn PCDD/PCDF có mức clo hóa 4.4 Chất lượng phép phân tích đảm bảo thơng qua đường chuẩn tái lập phép kiểm tra trình chiết, làm hệ thống GC/MS Quy trình phân tích xem Hình Hình - Sơ đồ khối qui trình phân tích PCDD/PCDF đất trầm tích thiết bị HRGC/HRMS Các chất nhiễm bẩn cản trở 5.1 Khái qt Trong q trình phân tích siêu vi lượng (cỡ ng/kg) chất PCDD/PCDF đối tượng môi trường cần phải kiểm soát nhiễm bẩn loại bỏ chất cản trở có mặt chất dung dịch phân tích làm cho tín hiệu đường cao phức tạp, cản trở việc phát định LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn lượng chất phân tích Các mục từ 5.2 đến 5.10 sau đưa nguồn gây nhiễm bẩn mẫu cách loại bỏ chất cản trở 5.2 Dung mơi, hóa chất, dụng cụ thủy tinh dụng cụ xử lý mẫu chứa chất cản trở làm cho tín hiệu đường dâng cao gây sai số cho phép phân tích, cần phải lựa chọn hóa chất có độ tinh khiết đạt yêu cầu tinh chế dung môi cách chưng cất lại hệ dụng cụ thủy tinh Khi cần thiết, hóa chất dụng cụ phải làm cách chiết hay tráng rửa với dung môi 5.3 Làm dụng cụ thủy tinh quan trọng, dụng cụ thủy tinh khơng làm nhiễm bẩn mẫu mà cịn lấy chất cần phân tích q trình hấp phụ bề mặt thủy tinh 5.4 Dụng cụ thủy tinh nên tráng rửa với dung môi rửa dung dịch chất tẩy rửa sớm tốt sau sử dụng Rung siêu âm dụng cụ thủy tinh dung dịch chất tẩy rửa khoảng 30 s giúp để làm chúng Các van, khóa teflon cần phải tháo khỏi dụng cụ thủy tinh, phiễu chiết trước rửa chất tẩy rửa 5.5 Sau rửa dung dịch chất tẩy rửa, nên tráng rửa dụng cụ thủy tinh lập tức, trước tiên với metanol, sau với nước nóng Rửa nước máy sau rửa metanol lần nữa, sau axeton cuối diclometan 5.6 Không nên nung thủy tinh sử dụng lị Việc nung cần gặp phải mẫu bẩn việc nên hạn chế Việc nung dụng cụ thủy tinh nhiều lần tạo vị trí hoạt động bề mặt thủy tinh hấp phụ bất thuận nghịch PCDD/PCDF 5.7 Ngay trước sử dụng, thiết bị Soxhlet nên làm cách chiết với toluen khoảng h Phễu chiết nên lắc với diclometan/toluen (80/20,v/v) hai phút, tháo bỏ, sau lắc với diclometan tinh khiết 5.8 Tất vật liệu sử dụng trình phân tích phải chứng minh khơng bị nhiễm bẩn cách chạy mẫu trắng với mẫu đối chứng từ đầu mẻ phân tích mẫu thời gian 12 h, tối đa 20 mẫu 5.8.1 Nền mẫu đối chứng phải mô giống với mẫu thật tốt Một cách lý tưởng, mẫu đối chứng không chứa PCDD/PCDP hàm lượng phát hiện, phải chứa tạp chất nồng độ định tìm thấy mẫu phân tích 5.8.2 Khi khơng có mẫu đối chứng giống với mẫu thật, lấy cát thạch anh trắng sử dụng để mô mẫu trầm tích 5.9 Các tạp chất chiết với chất phân tích từ mẫu cho thấy ảnh hưởng đáng kể phụ thuộc vào phức tạp vị trí lấy mẫu Hợp chất cản trở phát mức nồng độ cao nồng độ PCDD/PCDF Những chất cản trở thường gặp kể polyclo biphenyl (PCBs), polymethoxy biphenyl (PMBs), hydroxydlphenyl ether, benzylphenyl ether, hợp chất thơm đa vịng (PAHs) hóa chất bảo vệ thực vật Vì PCDD/PCDF tồn mẫu hàm lượng thấp nên để phân tích tiêu PCDD/PCDF phương pháp này, việc loại bỏ chất ảnh hưởng cần thiết Các bước làm đưa 8.4 áp dụng để làm giảm hay loại bỏ chất ảnh hưởng cho phép xác định PCDD/PCDF xác với mức nồng độ Bảng 5.9 Mỗi dụng cụ thủy tinh dùng lại nên đánh dấu cho loại mẫu riêng Điều giúp phịng thí nghiệm việc theo dõi nguồn nhiễm bẩn xảy loại mẫu cụ thể Dụng cụ thủy tinh dùng cho mẫu có hàm lượng chất phân tích cao cần đánh dấu để làm kĩ hơn, định nên bỏ dụng cụ thủy tinh Bảng - Chất tham khảo thời gian lưu định lượng, thời gian lưu tương đối mức tối thiểu cho PCDD/PCDF PCDD/PCDF Chất tham khảo thời gian Thời gian lưu lưu định lượng tương đối Mức tối thiểu1 Mẫu Dịch chiết (ng/kg;ppt) (pg/μL;ppb) 13 Các hợp chất sử dụng chất nội chuẩn C12 -1,2,3,4-TCDD 2,3,7,8-TCDF 13 0,999-1,003 0,5 2,3,7,8-TCDD 13 0,999-1,002 0,5 1,2,3,7,8-PeCDF 13 0,999-1,002 2,5 2,3,4,7,8-PeCDF 13 0,999-1,002 2,5 C12-2,3,7,8-TCDF C12-2,3,7,8-TCDD C12-1,2,3,7,8-PeCDF C12-2,3,4,7,8-PeCDF LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê PCDD/PCDF www.luatminhkhue.vn 1,2,3,7,8-PeCDD Chất tham khảo thời gian Thời gian lưu lưu định lượng tương đối 13 C12-1,2,3,7,8-PeCDD 0,999-1,002 13 C12-2,3,7,8-TCDF 13 0,923-1,103 0,976-1,043 13 C12-1,2,3,4-TCDD C12-2,3,7,8-TCDD 13 34 Cl4-2,3,7,8-TCDD 13 0,989-1,052 13 C12-1,2,3,7,8-PeCDF 13 1,000-1,425 C12-2,3,4,7,8-PeCDF 13 1,011-1,526 C12-1,2,3,7,8-PeCDD 13 1,000-1,567 13 13 C12-1,2,3,4-TCDD C12-1,2,3,4-TCDD C12-1,2,3,4-TCDD C12-1,2,3,4-TCDD C12-1,2,3,4-TCDD Mức tối thiểu1 2,5 2,5 Các hợp chất sử dụng chất nội chuẩn 13C12-1,2,3,7,8,9-HxCDD 1,2,3,4,7,8-HxCDP 13 0,999-1,001 2,5 1,2,3,6,7,8-HxCDF 13 0,997-1,005 2,5 1,2,3,7,8,9-HxCDF 13 0,999-1,001 2,5 2,3,4,6,7,8-HxCDF 13 0,999-1,001 2,5 1,2,3,4,7,8-HxCDD 13 0,999-1,001 2,5 1,2,3,6,7,8-HxCDD 13 0,998-1,004 2,5 1,2,3,7,8,9-HxCDD - 1,000-1,019 2,5 1,2,3,4,6,7,8-HpCDF 13 0,999-1,001 2,5 1,2,3,4,7,8,9-HpCDF 13 0,999-1,001 2,5 1,2,3,4,6,7,8-HpCDD 13 0,999-1,001 2,5 OCDF 13 0,999-1,008 10 5,0 OCDD 13 0,999-1,001 10 5,0 13 C12-1,2,3,4,7,8-HxCDF 13 0,944-0,970 0,949-0,975 13 C12-1,2,3,4,7,8-HxCDF C12-1,2,3,6,7,8-HxCDF C12-1,2,3,7,8,9-HxCDF C12-2,3,4,6,7,8,-HxCDF C12-1,2,3,4,7,8-HxCDD C12-1,2,3,6,7,8,-HxCDD C12-1,2,3,4,6,7,8-HpCDF C12-1,2,3,4,7,8,9-HpCDF C12-1,2,3,4,6,7,8-HpCDD C12-OCDD C12-OCDD C12-1,2,3,7,8,9-HxCDD C12-1,2,3,6,7,8-HxCDF 13 13 C12-1,2,3,7,8,9-HxCDF 13 0,977-1,047 13 C12-2,3,4,6,7,8-HxCDF 13 0,959-1,021 13 C12-1,2,3,4,7,8-HxCDD 13 0,977-1,000 13 C12-1,2,3,6,7,8-HxCDD 13 0,981-1,003 1,043-1,085 13 C12-1,2,3,7,8,9-HxCDD C12-1,2,3,7,8,9-HxCDD C12-1,2,3,7,8,9-HxCDD C12-1,2,3,7,8,9-HxCDD C12-1,2,3,7,8,9-HxCDD C12-1,2,3,4,6,7,8-HpCDF 13 13 C12-1,2,3,4,7,8,9-HpCDF 13 1,057-1,151 13 C12-1,2,3,4,6,7,8-HpCDD 13 1,086-1,110 C12-OCDD 13 13 C12-1,2,3,7,8,9-HxCDD C12-1,2,3,7,8,9-HxCDD C12-1,2,3,7,8,9-HxCDD C12-1,2,3,7,8,9-HxCDD 1,032-1,311 13 Chất tham khảo thời gian lưu cho 1,2,3,7,8,9-HxCDD C12-1,2,3,6,7,8-HxCDD; 1,2,3,7,8,9-HxCDD định lượng cách sử dụng đáp ứng trung bình 13C12-1,2,3,4,7,8-HxCDD 13C121,2,3,6,7,8-HxCDD Thuốc thử dung dịch chuẩn 6.1 Hóa chất điều chỉnh pH chiết rửa mẫu 6.1.1 Kali hydroxit: Hòa tan 20 g KOH (tinh khiết cấp thuốc thử) 100 mL nước thuốc thử 6.1.2 Axit sulfuric: tinh khiết thuốc thử (tỉ trọng 1,84) 6.1.3 Natri clorua: tinh khiết thuốc thử, chuẩn bị dung dịch % (w/v), nước thuốc thử 6.2 Hóa chất loại nước đuổi dung mơi 6.2.1 Làm khô dung dịch: natri sunfat, tinh khiết thuốc thử, dạng hạt, khan, rửa diclometan (20 mL/g), nung 400 °C h, để nguội bình hút ẩm, giữ chai thủy tinh có nắp vặn để ngăn ẩm Nếu sau nung natri sunfat có màu xám (do xuất cacbon LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Cơng ty luật Minh Kh www.luatminhkhue.vn tinh thể) phải bỏ chuẩn bị mẻ natri sunfat khác Cũng chuẩn bị natri sunfat cách chiết với diclometan nung nhiệt độ thấp 6.2.2 Khí nitơ tinh khiết 6.3 Hóa chất để chiết mẫu 6.3.1 Dung môi: axeton, toluen, xyclohexan, hexan, metanol, diclometan nonan, cất thiết bị thủy tinh, độ tinh khiết thuốc trừ sâu, chứng nhận khơng có chất cản trở 6.3.2 Cát thạch anh trắng: kích thước 60/70 mesh, dùng cho thiết bị chiết Soxhlet/Dean Stark Nung 450 °C h 6.4 Chất hấp phụ để làm mẫu 6.4.1 Silicagel 6.4.1.1 Silicagel hoạt hóa: kích thước hạt 100 mesh đến 200 mesh, rửa với diclometan, nung 180 °C h, để nguội bình hút ẩm, giữ chai thủy tinh có nắp vặn để ngăn ẩm 6.4.1.2 Silicagel tẩm axit (30 % w/w): trộn kỹ 44 g axit sunfuric đặc với 100 g silica gel hoạt hóa bình chứa Dùng que khuấy, khuấy thu hỗn hợp đồng Giữ chai có nắp vặn lót teflon 6.4.1.3 Silicagel tẩm kiềm: trộn kỹ 30 g natri hydroxit N với 100 g silicagel hoạt hóa bình chứa Dùng que khuấy khuấy thu hỗn hợp đồng Giữ chai nắp vặn lót teflon 6.4.1.4 Kalisilicat 6.4.1.4.1 Hịa tan 56 g kali hydroxit 300 mL methanol bình cầu đáy dung tích 750 ml - 1000 mL 6.4.1.4.2 Thêm 100 g silica gel khuấy, khuấy đĩa nóng 60 °C đến 70 °C h đến h 6.4.1.4.3 Gạn chất lỏng rửa kali silicat hai lần, lần với 100 mL metanol, sau rửa tiếp 100 mL diclometan 6.4.1.4.4 Trải kali silicat giấy nhôm tráng dung môi làm khô h đến h tủ hút 6.4.1.4.5 Hoạt hóa qua đêm nhiệt độ từ 200 °C đến 250 °C 6.4.2 Nhơm oxit: hai loại nhơm oxit có tính axit nhơm oxit có tính bazơ sử dụng để làm dịch chiết mẫu phải đáp ứng yêu cầu kĩ thuật độ thu hồi hợp chất đánh dấu đề cập 6.3 Phải sử dụng loại nhôm oxit cho tất mẫu, bao gồm mẫu đánh giá độ thu hồi độ chụm 6.4.2.1 Nhơm oxit có tính axit: Hoạt hóa cách nung nóng tới 130 °C 12 h 6.4.2.2 Nhơm oxit có tính bazơ: Hoạt hóa cách nung nóng tới 600 °C 24 h Ngồi ra, cịn hoạt hóa cách nung nóng lị ống 650 °C đến 700 °C dịng khơng khí 400 ml/min Khơng hoạt hóa nhiệt độ 700 °C, điều dẫn đến làm giảm dung lượng hấp phụ nhơm oxit Giữ 130 °C bình kín Sử dụng vòng năm ngày kể từ ngày nung 6.4.3 Than hoạt tính 6.4.3.1 Than hoạt tính: Carbopak C (Supelco 1-0258 tương đương) 6.4.3.2 Chất trợ lọc: Celite 545 (Supelco 2-0199 tương đương) 6.4.3.3 Trộn kỹ g Carbopak C 41 g Celite 545 để tạo hỗn hợp có tỉ lệ 18 % w/w Hoạt hóa hỗn hợp 130 °C h, Giữ bình hút ẩm 6.4.4 Cột đa lớp: nhồi cột 6.4.2.3 theo thứ tự từ lên trên: g silicagel (6.4.1.1), g silicagel tẩm kiềm (6.4.1.3), g silicagel (6.4.1.1), g silicagel tẩm axit (6.4.1.2), g silicagel (6.4.1.1) g natri sunfat khan (6.2.1) Dung môi sử dụng để nhồi cột hexan 6.5 Nền mẫu đối chứng: Nền mẫu đối chứng đảm bảo khơng phát PCDD/PCDF hợp chất cản trở phương pháp 6.5.1 Nền mẫu đối chứng có tỉ lệ chất rắn cao: Cát vật liệu tương tự Chuẩn bị cách chiết với diclometan và/hoặc nung 450 °C h LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 6.5.2 Các mẫu khác: phương pháp kiểm tra mẫu đối chứng thử nghiệm 8.2 Nền mẫu lý tưởng phải khơng có PCDD/PCDF, khơng mức PCDD/PCDF mẫu không vượt lần mức thấp đưa Bảng A.2 Nếu PCDD/PCDF có mặt mẫu đối chứng mức thấp mức thêm chuẩn chất phân tích sử dụng 8.2 phải tăng lên tỷ lệ thêm mức nằm khoảng từ 1:1 đến 5:1 6.6 Dung dịch chuẩn: Cần mua dung dịch hỗn hợp có chứng nhận độ tinh khiết, nồng độ, độ tin cậy chuẩn bị từ vật liệu có độ tinh khiết thành phần biết Nếu độ tinh khiết hóa học lớn 98 % lượng cân khơng cần hiệu chỉnh lại tính nồng độ chất chuẩn Khi chưa sử dụng, chất chuẩn phải lưu giữ chỗ tối nhiệt độ phịng lọ có nắp vặn lót lớp teflon phải đánh dấu mức dung dịch có lọ để phát dung dịch bay Nếu dung mơi bị bay dung dịch phải thay 6.7 Các dung dịch gốc 6.7.1 Chuẩn bị: Chuẩn bị nonan theo bước mua dung dịch loãng 6.7.2 Hòa tan lượng phù hợp chất đối chứng thử nghiệm dung mơi Ví dụ, cần khoảng mg đến mg 2,3,7,8-TCDD xác đến ba chữ số bình định mức 10 mL có nút nhám định mức đến vạch mức nonan Sau TCDD tan hoàn toàn chuyển dung dịch vào lọ 15 mL có nắp lót teflon 6.7.3 Kiểm tra dấu hiệu phân hủy dung dịch chuẩn gốc trước chuẩn bị dung dịch chuẩn để đảm bảo dựng đường chuẩn dung dịch chuẩn hóa khác Các chuẩn đối chứng sử dụng để xác định độ chụm dung dịch dùng để dựng đường chuẩn mà hóa chất mua từ hãng hóa chất khác 6.8 Dung dịch gốc PAR 6.6.1 Tất PCDD/PCDF: Dùng dung dịch 6.7, chuẩn bị dung dịch gốc PAR có chứa PCDD/PCDF nồng độ ghi Bảng Dung dịch pha loãng dung dịch trở thành PAR (6.13) 6.6.2 Nếu xác định 2,3,7,8-TCDD 2,3,7,8-TCDF chuẩn bị dung dịch gốc PAR chứa hai hợp chất 6.9 Dung dịch chuẩn chất đánh dấu 6.9.1 Tất PCDD/PCDF: Từ dung dịch gốc từ hỗn hợp mua sẵn, chuẩn bị dung dịch có chứa chất đánh dấu nonan theo nồng độ Bảng Những dung dịch pha loãng axeton trước dùng (6.9.3) 6.9.2 Nếu xác định 2,3,7,8-TCDD 2,3,7,8-TCDF chuẩn bị dung dịch chứa hai hợp chất Dung dịch pha loãng axeton trước dùng (6.9.3) 6.9.3 Pha lỗng thể tích phù hợp dung dịch chất đánh dấu (xem 6.9.1 6.9.2) theo hệ số 1:50 axeton để chuẩn bị dung dịch thêm chuẩn Mỗi mẫu cần thêm chuẩn mL dung dịch loãng Chỉ nên chuẩn bị lượng dung dịch đủ để sử dụng ngày 6.10 Dung dịch chuẩn đánh giá trình làm sạch: Chuẩn bị dung dịch 37CI4-2,3,7,8-TCDD nonan theo nồng độ Bảng Dung dịch chuẩn thêm vào tất dịch chiết trước làm để đánh giá hiệu trình làm 6.11 Chất nội chuẩn 6.11.1 Để xác định tất chất PCDD/PCDF: Chuẩn bị dung dịch nội chuẩn 13C12-1,2,3,4-TCDD 13 C12-1,2,3,7,8,9-HxCDD nonan theo nồng độ ghi Bảng 6.11.2 Nếu xác định 2,3,7,8-TCDD 2,3,7,8-TCDF chuẩn bị dung dịch nội chuẩn chứa 13 C12-1,2,3,4-TCDD Bảng - Nồng độ dung dịch chuẩn gốc, dung dịch chuẩn để thêm chuẩn chứa PCDD/PCDF hợp chất đánh dấu đồng vị PCDD/PCDF 2,3,7,8-TCDD Dung dịch hợp Dung dịch gốc hợp chất đánh dấu chất đánh dấu đồng vị thêm đồng vị1 chuẩn2 (ng/mL) (ng/mL) — Dung dịch Dung dịch PAR gốc PAR3 để thêm chuẩn4 — LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 (ng/mL) (ng/mL) 40 0,8 Công ty luật Minh Khuê PCDD/PCDF www.luatminhkhue.vn Dung dịch hợp Dung dịch gốc hợp chất đánh dấu chất đánh dấu đồng vị thêm đồng vị chuẩn2 (ng/mL) (ng/mL) Dung dịch Dung dịch PAR gốc PAR3 để thêm chuẩn4 (ng/mL) (ng/mL) 2,3,7,8-TCDF — — 40 0,8 1,2,3,7,8-PeCDD — — 200 1,2,3,7,8-PeCDF — — 200 2,3,4,7,8-PeCDF — — 200 1,2,3,4,7,8-HxCDD — — 200 1,2,3,6,7,8-HxCDD — — 200 1,2,3,7,8,9-HxCDD — — 200 1,2,3,4,7,8-HxCDF — — 200 1,2,3,6,7,8-HxCDF — — 200 1,2,3,7,8,9-HxCDF — — 200 2,3,4,6,7,8-HxCDF — — 200 1,2,3,4,6,7,8-HpCDD — — 200 1,2,3,4,6,7,8-HpCDF — — 200 1,2,3,4,7,8,9-HpCDP — — 200 OCDD — — 400 OCDF — — 400 100 — — 13 C12-2,3,7,8-TCDF 100 — — C12-1,2,3,7,8-PeCDD 100 — — 13 C12-2,3,7,8-TCDD 13 13 C12-1,2,3,7,8-PeCDF 100 — — 13 C12-2,3,4,7,8-PeCDF 100 — — 13 C12-1,2,3,4,7,8-HxCDD 100 — — 13 C12-1,2,3,6,7,8-HxCDD 100 — — 13 100 — — 13 100 — — 13 100 — — 13 C12-2,3,4,6,7,8-HxCDF 100 — — C12-1,2,3,4,6,7,8-HpCDD 100 — — C12-1,2,3,4,7,8-HxCDF C12-1,2,3,6,7,8-HxCDF C12-1,2,3,7,8,9-HxCDF 13 13 C12-1,2,3,4,6,7,8-HpCDF 100 — — 13 C12-1,2,3,4,7,8,9-HpCDF 100 — — 200 — — 13 C12-OCDD Chất chuẩn làm sạch5 37 Cl4-2,3,7,8-TCDD 0,8 Chất nội chuẩn6 13 13 C12-1,2,3,4-TCDD 200 C12-1,2,3,7,8,9-HxCDD 200 6.9 - chuẩn bị nonan pha loãng để chuẩn bị dung dịch thêm chuẩn LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê PCDD/PCDF www.luatminhkhue.vn Dung dịch hợp Dung dịch gốc hợp chất đánh dấu chất đánh dấu đồng vị thêm đồng vị chuẩn2 (ng/mL) (ng/mL) Dung dịch Dung dịch PAR gốc PAR3 để thêm chuẩn4 (ng/mL) 6.9.3 - chuẩn bị hàng ngày axeton từ dung dịch gốc 6.8 - chuẩn bị nonan pha loãng để chuẩn bị dung dịch thêm chuẩn 6.13 - chuẩn bị hàng ngày axeton từ dung dịch gốc 6.10 - chuẩn bị nonan thêm chuẩn vào dịch chiết trước làm (ng/mL) 6.11 - chuẩn bị dung dịch nội chuẩn nonan thêm vào dịch chiết cô đặc trước phân tích GC (9.2) 6.12 Các dung dịch chuẩn để dựng đường chuẩn (CS1 đến CS5): Sử dụng dung dịch chuẩn bị 6.8 đến 6.11 để chuẩn bị dung dịch chuẩn nonan, cụ thể xem Bảng Những dung dịch dùng để tìm hàm số biểu diễn phụ thuộc đáp ứng tương đối (chất đánh dấu với chất chuẩn thường) hệ số đáp ứng vào nồng độ chất phân tích Dung dịch chuẩn CS3 sử dụng để hiệu chuẩn lại đường chuẩn (VER) Nếu xác định 2,3,7,8-TCDD 2,3,7,8-TCDF chuẩn bị dung dịch chuẩn tương ứng với chất Bảng - Nồng độ PCDD/PCDF đường chuẩn dung dịch hiệu chuẩn đường chuẩn CS1 (ng/mL) CS2 (ng/mL) CS3 (ng/mL) CS4 (ng/mL) CS5 (ng/mL) 2,3,7,8-TCDD 0,5 10 40 200 2,3,7,8-TCDF 0,5 10 40 200 1,2,3,7,8-PeCDD 2,5 10 50 200 1000 1,2,3,7,8-PeCDF 2,5 10 50 200 1000 2,3,4,7,8-PeCDF 2,5 10 50 200 1000 1,2,3,4,7,8-HxCDD 2,5 10 50 200 1000 1,2,3,6,7,8-HxCDD 2,5 10 50 200 1000 1,2,3,7,8,9-HxCDD 2,5 10 50 200 1000 1,2,3,4,7,8-HxCDF 2,5 10 50 200 1000 1,2,3,6,7,8-HxCDF 2,5 10 50 200 1000 1,2,3,7,8,9-HxCDF 2,5 10 50 200 1000 2,3,4,6,7,8-HxCDF 2,5 10 50 200 1000 1,2,3,4,6,7,8-HpCDD 2,5 10 50 200 1000 1,2,3,4,6,7,8-HpCDF 2,5 10 50 200 1000 1,2,3,4,7,8,9-HpCDF 2,5 10 50 200 1000 OCDD 5,0 20 100 400 2000 OCDF 5,0 20 100 400 2000 13 C12-2,3,7,8-TCDD 100 100 100 100 100 13 C12-2,3,7,8-TCDF 100 100 100 100 100 13 C12-1,2,3,7,8-PeCDD 100 100 100 100 100 13 C12-PeCDF 100 100 100 100 100 13 C12-2,3,4,7,8-PeCDF 100 100 100 100 100 13 C12-1,2,3,4,7,8-HxCDD 100 100 100 100 100 13 C12-1,2,3,6,7,8-HxCDD 100 100 100 100 100 PCDD/PCDF LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê CDD/CDF www.luatminhkhue.vn IPR2,3 Nồng độ OPR VER (ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) 2,3,7,8-TCDD 10 2,7 8,7-12,4 7,3-14,6 8,2-12,3 2,3,7,8-TCDF 10 2,0 9,1-13,1 8,0-14,7 8,6-11,6 13 C12-2,3,7,8-TCDD 100 35 32-115 25-141 85-117 13 C12-2,3,7,8-TCDF 100 34 35-99 26-126 76-131 37 Cl4-2,3,7,8-TCDD 10 3,4 4,5-13,4 3,7-15,8 8,3-12,1 Tất thông số nồng độ dịch chiết cuối cùng, giả sử thể tích 20 μL s = độ lệch chuẩn nồng độ X = nồng độ trung bình 9.5 Thời gian lưu độ phân giải GC 9.5.1 Thời gian lưu 9.5.1.1 Thời gian lưu tuyệt đối: Thời gian lưu tuyệt đối chất nội chuẩn 13C12-1,2,3,4-TCDD 13 C12-1,2,3,7,8,9-HxCDD phép kiểm tra hiệu chuẩn phải nằm khoảng ± 15 s so với thời gian lưu thu đường chuẩn 9.5.1.2 Thời gian lưu tương đối: Thời gian lưu tương đối PCDD/ PCDF hợp chất đánh dấu phép kiểm tra hiệu chuẩn phải nằm giới hạn đưa Bảng 9.5.2 Độ phân giải GC 9.5.2.1 Phân tích chuẩn kiểm tra đặc trưng đồng phân ) cột tương ứng chúng 9.5.2.2 Độ xen phủ 2,3,7,8-TCDD đồng phân tetra-dioxin khác m/z = 319,8965; 2,3,7,8-TCDF đồng phân tetra-furan khác m/z = 303,9016 không vượt 25 % cột tương ứng chúng (Hình Hình 3) 9.5.3 Nếu thời gian lưu tuyệt đối hợp chất không nằm giới hạn quy định đồng phân 2,3,7,8 không tách được, điều kiện GC không phù hợp Trong trường hợp này, điều chỉnh điều kiện máy GC lặp lại phép kiểm tra hiệu chuẩn (9.4.3) Có thể dựng lại đường chuẩn thay cột GC khác Thời gian lưu (min) Hình - Sắc đồ tách đồng phân TCDD cột DB-5 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Thời gian lưu (min) Hình - Sắc đồ tách đồng phân TCDF cột DB-5 9.6 Độ chụm độ thu hồi lần phân tích thực 9.6.1 Phân tích dịch chiết mẫu đánh giá độ chụm độ thu hồi lần phân tích thực (OPR) trước mẻ phân tích 9.6.2 Tính nồng độ PCDD/PCDF phương pháp pha loãng đồng vị cho hợp chất có chất đánh dấu tương ứng (12.6) Tính nồng độ 1,2,3,7,8,9-HxCDD, OCDF hợp chất đánh dấu theo phương pháp nội chuẩn (12.7) 9.6.3 Đối với hợp chất PCDD/PCDF hợp chất đánh dấu, so sánh nồng độ với giới hạn OPR cho Bảng Nếu xác định 2,3,7,8-TCDD 2,3,7,8-TCDF, so sánh nồng độ với giới hạn Bảng 5A Nếu tất hợp chất đáp ứng tiêu chí chấp nhận được, hiệu lực hệ thống xác nhận bắt đầu tiến hành phân tích mẫu Tuy nhiên, nồng độ chất không nằm phạm vi cho phép, q trình xử lí mẫu khơng thực cho hợp chất Trong trường hợp này, tiến hành lại bước chiết tách làm mẫu đánh giá lại độ chụm độ thu hồi lần phân tích thực (9.6) 9.6.4 Bổ sung kết đáp ứng yêu cầu kỹ thuật 9.6.3 vào liệu ban đầu lần phân tích thực trước cho hợp chất loại mẫu Cập nhật biểu đồ QC để biểu diễn dạng đồ thị hiệu lực phịng thí nghiệm liên tục Tăng cường độ chụm phịng thí nghiệm cho PCDD/PCDF loại mẫu cách tính tốn phần trăm độ thu hồi trung bình (R) độ lệch chuẩn phần trăm độ thu hồi (S R) Biểu thị độ chụm khoảng độ thu hồi từ R - 2SR đến R + 2SR Ví dụ, R = 95 % SR = %, độ chụm 85 % đến 105 % 9.7 Mẫu trắng: Mẫu trắng phương pháp phân tích mẻ mẫu sau phân tích mẫu OPR để chứng minh khơng có nhiễm bẩn nhiễm chéo từ mẫu OPR Các kết phân tích mẫu trắng phải đáp ứng thông số kỹ thuật 11.5.2 trước tiến hành phân tích mẫu thật 10 Tính tốn kết 10.1 Phân tích định tính: Một hợp chất PCDD/PCDF hợp chất đánh dấu nhận biết chuẩn, mẫu trắng, mẫu thực phải thỏa mãn tất tiêu chí sau 10.1.1 Các tín hiệu cho hai m/z xác Bảng phải có mặt phải có thời gian lưu nằm khoảng không s 10.1.2 Tỷ lệ tín hiệu/nhiễu (S/N) cho pic GC m/z xác phải lớn 2,5 cho CDD CDF phát dịch chiết mẫu, lớn 10 cho tất PCDD/PCDF dung dịch chuẩn (12.3.3 12.5.3.3) 10.1.3 Tỷ lệ diện tích tích phân hai m/z xác định Bảng phải nằm giới hạn Bảng 10, khoảng ± 10 % tỷ lệ trung điểm (CS3) hiệu chuẩn đường chuẩn (VER) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Bảng - Độ thu hồi hợp chất đánh dấu tất PCDD/PCDF Hợp chất Nồng độ kiểm tra Độ thu hồi (ng/mL) (ng/mL)1 (%) 13 100 25-164 25-164 13 100 24-169 24-169 13 100 25-181 25-181 13 100 24-185 24-185 13 100 21-178 21-178 13 100 32-141 32-141 13 100 28-130 28-130 13 100 26-152 26-152 13 100 26-123 26-123 13 100 29-147 29-147 13 100 28-136 28-136 13 100 23-140 23-140 13 100 28-143 28-143 13 100 26-138 26-138 13 200 34-313 17-157 10 3,5-19,7 35-197 C12-2,3,7,8-TCDD C12-2,3,7,8-TCDF C12-1,2,3,7,8-PeCDD C12-1,2,3,7,8-PeCDF C12-2,3,4,7,8-PeCDF C12-1,2,3,4,7,8-HxCDD C12-1,2,3,6,7,8,-HxCDD C12-1,2,3,4,7,8-HxCDF C12-1,2,3,6,7,8-HxCDF C12-1,2,3,7,8,9-HxCDF C12-2,3,4,6,7,8,-HxCDF C12-1,2,3,4,6,7,8-HpCDF C12-1,2,3,4,6,7,8-HpCDF C12-1,2,3,4,7,8,9-HpCDF C12-OCDD 37 Cl4-2,3,7,8-TCDD Tất thông số nồng độ dịch chiết cuối cùng, giả sử thể tích 20 μL Bảng 6A - Độ thu hồi hợp chất đánh dấu hợp chất tetra Hợp chất Nồng độ kiểm tra Hợp chất đánh dấu (ng/mL) (ng/mL)1