CHẤT LƯỢNG ĐẤT - XÁC ĐỊNH DIOXIN VÀ FURAN VÀ BIPHENYL POLYCLO HÓA GIỐNG DIOXIN BẰNG SẮC KÝ KHÍ DETECTOR CHỌN LỌC KHỐI LƯỢNG ĐỘ PHÂN GIẢI CAO (GC/HRMS

Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 11073:2015 ISO 13914:2013 CHẤT LƯỢNG ĐẤT - XÁC ĐỊNH DIOXIN VÀ FURAN VÀ BIPHENYL POLYCLO HÓA GIỐNG DIOXIN BẰNG SẮC KÝ KHÍ DETECTOR CHỌN LỌC KHỐI LƯỢNG ĐỘ PHÂN GIẢI CAO (GC/HRMS) Soil quality - Determination of dioxins and furans and dioxin-Iike polychlorinated biphenyls by gas chromatography with high-resolution mass selective detection (GC/HRMS) Lời nói đầu TCVN 11073:2015 hồn toàn tương đương với ISO 13914:2013 TCVN 11073:2015 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC 190 Chất lượng đất biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Lời giới thiệu Hai nhóm ete thơm clo hóa có liên quan biết dibenzo-p-dioxin polyclo hóa (PCDD) dibenzofuran polyclo hóa (PCDF) Chúng gồm tổng cộng 210 chất riêng biệt (đồng loại): 75 PCDD 135 PCDF Nhóm hợp chất thơm clor hóa tương tự với dibenzo-p-dioxin polyclo hóa (PCDD) dibenzofuran polyclo hóa (PCDF) biết biphenyl clo hóa (PCB) với gồm 209 chất PCDD PCDF tạo thành trình đốt cháy vật liệu hữu Chúng tạo sản phẩm không mong muốn sản xuất q trình xử lý hóa chất hữu clo hóa PCDD/PCFD vào mơi trường qua đường phát thải qua việc sử dụng vật liệu bị nhiễm bẩn Trong thực tế, chúng thường có mặt nồng độ nhỏ Các đồng loại thay 2,3,7,8- có tính độc đáng kể Độ độc nhỏ nhiều so với tetraclo hóa đến octaclo hóa dibenzo-pdioxin/dibenzofuran 74 monoclo hóa đến triclo hóa dibenzo-p-dioxin/dibenzofuran PCB sản xuất khoảng thời gian năm 50 cuối năm 1990 dùng cho mục đích sử dụng khác hệ thống kín hở, ví dụ chất cách điện chất điện môi tụ điện máy biến thế, dung dịch làm mát đặc biệt, chất làm dẻo vật liệu gắn Trên giới, triệu PCB sản xuất PCDD/PCDF PCB phát thải trình xử lý nhiệt lị đốt chất thải Năm 1997, nhóm chuyên gia tổ chức Y tế giới (WHO) ấn định hệ số độc tương đương (TEF) PCDD 12 PCB, biết PCB giống dioxin (xem Phụ lục A) 12 PCB giống dioxin gồm bốn PCB ortho tám mono-ortho PCB (khơng có có ngun tử clo 2-, 2’-, 6- 6’-vị trí), có cấu trúc phẳng chủ yếu phẳng Các PCB giống dioxin đóng góp đáng kể vào tổng WHO-TEQ Chỉ người vận hành có kỹ đào tạo xử lý hợp chất có độc tính cao nên áp dụng phương pháp trình bày tiêu chuẩn Tiêu chuẩn áp dụng cho vài loại mẫu xác nhận bùn đô thị (xem Phụ lục B kết xác nhận) CHẤT LƯỢNG ĐẤT - XÁC ĐỊNH DIOXIN VÀ FURAN VÀ BIPHENYL POLYCLO HÓA GIỐNG DIOXIN BẰNG SẮC KÝ KHÍ DETECTOR CHỌN LỌC KHỐI LƯỢNG ĐỘ PHÂN GIẢI CAO (GC/HRMS) Soil quality - Determination of dioxins and furans and dioxin-Iike polychlorinated biphenyls by gas chromatography with high-resolution mass selective detection (GC/HRMS) CẢNH BÁO - Người sử dụng tiêu chuẩn cần phải thành thạo với thực hành phòng thí nghiệm thơng thường Tiêu chuẩn khơng đề cập tới vấn đề an toàn liên quan đến người sử dụng Trách nhiệm người sử dụng phải đảm bảo an tồn có sức khỏe phù hợp theo qui định QUAN TRỌNG - Chỉ nhân viên qua đào tạo thích hợp phép tiến hành phép thử theo tiêu chuẩn Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định định lượng 17 dibenzo-p-dioxin dibenzofuran LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn clo vị trí 2,3,7,8 dioxin giống biphenyl polyclo hóa bùn, chất thải sinh học xử lý đất sử dụng phương pháp làm cột sắc ký lỏng GC/HRMS Các chất phân tích xác định tiêu chuẩn liệt kê Bảng Bảng - Chất phân tích chữ viết tắt Chất Chữ viết tắt Tetraclorodibenzo-p-dioxin TCDD Pentaclorodibenzo-p-dioxin PeCDD Hexaclorodibenzo-p-dioxin HxCDD Heptaclorodibenzo-p-dioxin HpCDD Octaclorodibenzo-p-dioxin OCDD Tetraclorodibenzofuran TCDF Pentaclorodibenzofuran PeCOF Hexaclorodibenzofuran HxCDF Heptaclorodibenzofuran HpCDF Octaclorodibenzofuran OCDF Biphenyl polyclo hóa PCB Triclorobiphenyl TCB Tetraclorobiphenyl TeCB Pentaclorobiphenyl PeCB Hexaclorobiphenyl HxCB Heptaclorobiphenyl HpCB Decaclorobiphenyl DecaCB Giới hạn phát phụ thuộc vào loại mẫu, chất đồng loại, thiết bị sử dụng, chất lượng hóa chất dùng chiết làm Dưới điều kiện đặc biệt tiêu chuẩn này, giới hạn phát tốt ng/kg (quy chất khơ) đạt Phương pháp “dựa hiệu năng” Có thể cho phép cải biên phương pháp tất tiêu chí tính nêu phương pháp đáp ứng CHÚ THÍCH Về nguyên tắc, phương pháp áp dụng cho trầm tích, chất thải vơ thực vật Trách nhiệm người sử dụng tiêu chuẩn phải xác nhận ứng dụng mẫu Đối với phép đo mẫu phức tạp tro bay hấp phụ lên thực vật cần cải thiện phương pháp làm Việc áp dụng cho trầm tích chất thải vô Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 8884 (ISO 14507), Chất lượng đất - Xử lý sơ mẫu để xác định chất nhiễm bẩn hữu Chữ viết tắt PCB Biphenyl polydo hóa PCDD/PCDF dibenzo-p-dioxins/dibenzofurans polyclo hóa PCDD/F l-TEF NATO/CCMS Hệ số tương đương độ độc quốc tế, đề xuất NATO-CCMS năm 1988 (về mô tả chi tiết, xem Phụ lục A) I-TEQ Tương đương độ độc quốc tế, thu cách nhân khối lượng xác định với l-TEF tương ứng kể PCDD PCDF (về mô tả chi tiết, xem Phụ lục A) sử dụng cho so sánh với số liệu trước WHO-TEF Hệ số tương đương độ độc, đề xuất WHO năm 2005 (về mô tả chi LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê PCB www.luatminhkhue.vn Biphenyl polydo hóa tiết, xem Phụ lục A) WHO-TEQ Tương đương độ độc, thu cách nhân khối lượng xác định với l-TEF tương ứng kể PCDD PCDF (về mô tả chi tiết, xem Phụ lục A) WHO-TEQPCB, WHO-TEQPCDD/F cần phải dùng để phân biệt loại hợp chất khác Nguyên tắc Tiêu chuẩn dựa sử dụng sắc ký khí/khối phổ kết hợp với kỹ thuật pha loãng đồng vị để đảm bảo việc tách, phát định lượng PCDD/PCDF PCB giống dioxin bùn, chất thải sinh học đất Đối với phương pháp pha loãng đồng vị, sử dụng 17 chuẩn nội đánh dấu PCDD/F 12 chuẩn nội đánh dấu PCB Dịch chiết phép đo GC-MS có chứa hai chuẩn thu hồi Các thơng số sắc ký khí cung cấp thơng tin để đảm bảo cho việc nhận dạng đồng loại (vị trí thay clo) thơng số khối phổ đảm bảo việc phân biệt đồng phân với số nhóm clo khác dibenzo-p-dioxin, furan PCB Các đồng loại PCDD/F PCB đánh dấu 13C12 thêm vào mẫu trước chiết đo GC/HRMS Mất mẫu trình chiết làm phát bù trừ cách sử dụng đồng loại thêm vào chuẩn nội cho việc định lượng với chuẩn thu hồi thêm vào trước phân tích GC/HRMS Để xác định chất này, cần tách PCB khỏi PCDD/PCDF ngược lại Mục đích quy trình làm dịch chiết mẫu thô để loại bỏ thành phần mẫu, làm tải phương pháp tách, làm xáo trộn việc định lượng tác động nghiêm trọng đến tính phương pháp nhận dạng định lượng trình tách PCDD/F khỏi PCB giống dioxin Hơn nữa, làm giàu chất phân tích dịch chiết mẫu cuối Quy trình chiết thường dựa phương pháp chiết Soxhlet phương pháp chiết tương đương với mẫu làm khô, tốt với mẫu làm lạnh Tiến hành làm mẫu thông thường kỹ thuật sắc ký lỏng sử dụng nhiều cột chất hấp phụ khác Phép xác định PCDD/F PCB dựa định lượng kỹ thuật pha loãng đồng vị, sử dụng GC/HRMS Thuốc thử 5.1 Hóa chất Dung mơi dùng cho quy trình chiết làm phải đạt cấp hóa chất bảo vệ thực vật có chất lượng tương đương kiểm tra độ tinh khiết Chất hấp phụ oxit nhôm, silicagel, diatomit chất khác dùng cho quy trình làm phải đạt chất lượng phân tích tốt làm trước hoạt hóa cần CHÚ THÍCH: Xem Phụ lục C danh mục cụ thể dung mơi hóa chất 5.2 Chuẩn - Dung dịch thêm chuẩn 13C12 PCDD/F (chuẩn nội); - Dung dịch thêm chuẩn 13C12 PCB (chuẩn nội); - Dung dịch hiệu chuẩn PCDD/F; - Dung dịch hiệu chuẩn PCB; - Chuẩn thu hồi PCDD/F; - Chuẩn thu hồi PCB CHÚ THÍCH: Xem Phụ lục C ví dụ nồng độ dung dịch chuẩn Thiết bị vật liệu 6.1 Yêu cầu chung Thiết bị vật liệu liệt kê nghĩa yêu cầu tối thiểu việc xử lý mẫu “thông thường” với chiết Soxhlet làm sắc ký cột Có thể cần vật liệu thiết bị bổ sung phương pháp chiết mẫu phương pháp làm khác 6.2 Thiết bị dùng cho chuẩn bị mẫu 6.2.1 Tủ hút phịng thử nghiệm, có kích thước đủ để chứa thiết bị chuẩn bị mẫu nêu LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 6.2.2 Bình hút ẩm 6.2.3 Cân, gồm loại cân phân tích xác đến 0,1 mg loại cân có khả cân đến 10 mg 6.3 Bộ chiết Soxhlet 6.3.1 Bình Soxhlet, đường kính 50 mm, dung tích 150 ml đến 250 mL có bình đáy trịn 500 mL 6.3.2 Ống đỡ, 43 mm x 123 mm, lắp vừa bình Soxhlet 6.3.3 Bếp điện hình bán cầu, lắp vừa với bình đáy trịn 500 mL 6.4 Thiết bị dùng cho quy trình làm 6.4.1 Pipet dùng lần, pipet Pasteur dùng lần pipet huyết dùng lần 6.4.2 Cột sắc ký thủy tinh, có kích thước sau: - Dài 150 mm x đường kính mm, có vịng thủy tinh nhám nút bơng thủy tinh, bình chứa 250 mL; khóa vòi thủy tinh polytetrafluoetylen (PTFE); - Dài 200 mm x đường kính 15 mm, có vịng thủy tinh nhám nút bơng thủy tinh, bình chứa 250 mL; khóa vịi thủy tinh PTFE; - Dài 300 mm x đường kính 25 mm, có vịng thủy tinh nhám nút bơng thủy tinh, bình chứa 300 mL; khóa vịi thủy tinh polytetrafluoetylen (PTFE); 6.4.3 Tủ sấy, có khả trì nhiệt độ không đổi khoảng từ 105 °C đến 450 °C (± °C) để nung bảo quản chất hấp phụ 6.5 Thiết bị làm giàu 6.5.1 Máy quay, có bể cách thủy điều chỉnh nhiệt độ khác và: - Nguồn chân không cho máy cô quay có van tắt máy quay đồng hồ đo chân khơng; - Bơm tuần hồn nước máy làm lạnh, cung cấp nước lạnh (9 ± 4) °C (sử dụng nước vòi cho việc làm mát lượng nước thải lớn máy quay dẫn đến tính khơng tương ứng nhiệt độ nước thay đổi áp suất); - Bình đáy trịn, 100 mL 500 mL lớn hơn, thủy tinh nhám lắp vừa với máy làm bay dạng quay 6.5.2 Thiết bị thổi khí nitơ, trang bị bể cách thủy điều chỉnh khoảng nhiệt độ từ 30 °C đến 60 °C cung cấp dịng khí nitơ nóng, lắp đặt tủ hút 6.5.3 Bình ngưng Kuderna-Danish1) 6.5.4 Lọ đựng mẫu, loại sau: - Thủy tinh hổ phách, thể tích danh định mL đến mL, có nắp vặn PTFE; - Thủy tinh, 0,3 mL, hình nón, có nắp vặn PTFE nắp xoắn 6.6 Thiết bị khác 6.6.1 Sắc ký khí, trang bị cổng bơm mẫu khơng ngắt dịng liên tục theo chương trình nhiệt độ chương trình nhiệt độ sấy đảm bảo giữ đẳng nhiệt 6.6.2 Cột GC dùng cho PCDO/PCDP dùng cho đồng phân đặc trưng 2,3,7,8-TCDD (ví dụ cột mao quản silica nung chảy, pha liên kết có % phenyl, 94 % metyl, % vinyl silicon) dài 60 m x đường kính 0,32 mm; 0,25 µm) 6.6.3 Máy khối phổ, ion hóa điện tử 28 eV đến 80 eV, có khả giám sát lựa chọn 12 khối lượng xác với độ phân giải cao (>10 000 khoảng thời gian s) 6.6.4 Hệ thống xử lý số liệu, có khả thu thập, ghi lại lưu giữ số liệu phổ khối lượng Bảo quản mẫu xử lý mẫu sơ 7.1 Bảo quản mẫu Mẫu phải bảo quản bình chứa phù hợp với vật liệu đóng kín phù hợp polytetrafluoetylen (PTFE) Mẫu đơng lạnh bảo quản bình chứa nhơm Kuderna Danish ví dụ sản phẩm phù hợp có bán sẵn Thông tin tạo thuận lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn xác nhận tiêu chuẩn sản phẩm 1) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn làm trước cách nung 450 °C tối thiểu h cách tráng dung mơi khơng clo hóa Mẫu giữ lạnh (< °C) tối Xử lý sơ mẫu cần phải tiến hành khoảng thời gian ngày kể từ lấy mẫu Cách khác, mẫu làm đơng lạnh (-18 °C) trực tiếp sau lấy mẫu giữ đông lạnh trước xử lý mẫu sơ 7.2 Xử lý sơ mẫu Cần phải tiến hành làm khô đồng mẫu theo TCVN 8884 (ISO 14507), khơng có quy định khác Bảo quản mẫu bình hút ẩm bình chứa thủy tinh đậy kín Chiết làm 8.1 Yêu cầu chung Trong tiêu chuẩn này, trình bày yêu cầu tối thiểu trình chiết làm cần đáp ứng, ví dụ vận hành Người phân tích sử dụng quy trình đưa Phụ lục C quy trình thay phù hợp Việc xác định PCDD/PCDF dựa phép định lượng kỹ thuật pha loãng đồng vị sử dụng GC/HRMS Đồng loại PCDD/PCDF có nhóm clo 2,3,7,8- đánh dấu 13C12 cho thêm vào giai đoạn khác toàn phương pháp Sự mẫu trình chiết làm phát bù trừ cách sử dụng đồng loại thêm vào chuẩn nội để định lượng với chuẩn thu hồi thêm vào trước phân tích GC/HRMS Tuy nhiên, khác xảy đặc tính liên kết đặc tính hấp phụ PCDD/PCDF tự nhiên đồng loại đánh dấu 13C12, thêm vào phân tích, nên khơng đảm bảo chứng minh hoàn toàn hiệu suất chiết bù trừ mẫu trình làm Do vậy, phương pháp áp dụng phải xác nhận kỹ, ví dụ phương pháp chiết làm chứng minh tốt nêu Phụ lục C Mục đích quy trình làm dịch chiết mẫu thơ loại bỏ thành phần mẫu, làm tải phương pháp tách, cản trở việc định lượng không thực tác động nghiêm trọng đến tính phương pháp nhận dạng định lượng đến trình tách PCB giống dioxin khỏi PCDD/F Hơn nữa, làm giàu chất phân tích dịch chiết mẫu cuối Thường sử dụng quy trình chiết dựa trình chiết Soxhlet với mẫu đất khơ, mẫu rắn qua rây kích thước < mm Thường tiến hành làm mẫu kỹ thuật sắc ký lỏng nhiều cột sử dụng chất hấp phụ khác Về nguyên tắc, phương pháp làm sử dụng cho việc phát chất phân tích với lượng đủ lớn Hơn nữa, dịch chiết mẫu cuối không tác động bất lợi đến tính hệ thống phân tích phép định lượng Tuy nhiên, tất phương pháp áp dụng phải thử nghiệm kỹ phải đáp ứng yêu cầu xác nhận phương pháp, trước chúng sử dụng Ngồi ra, kiểm định tính phương pháp mẫu riêng lẻ phải phần quy định đảm bảo chất lượng áp dụng 8.2 Chiết Lượng mẫu dùng để chiết thay đổi từ g đến 50 g tùy thuộc vào mức nồng độ dự kiến chất nhiễm bẩn Chuẩn nội gồm có đồng loại đánh dấu 13C12 nêu Bảng phải bổ sung trực tiếp vào mẫu trước chiết Quy trình chiết tiến hành quy trình chiết Soxhlet dùng toluen Cần phải điều chỉnh khoảng thời gian chiết theo loại lượng mẫu dùng Yêu cầu tối thiểu 50 chu kì chiết xấp xỉ 12 h Có thể dùng dung mơi khác phương pháp khác chiết lỏng áp suất phải có tính tương đương chứng minh Bảng - Đồng loại đánh dấu 13C12 đưa vào chuẩn nội Dung dịch thêm chuẩn- 13C12 - Chuẩn nội Đồng loại PCDD/F Đồng loại PCB 2,3,7,8-13C12-TCDD 13 C12-PCB-77 1,2,3,7,8-13C12-PeCDD 13 C12-PCB-81 1,2,3,4,7,8-13C12-HxCDD 13 C12-PC8-126 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Dung dịch thêm chuẩn- 13C12 - Chuẩn nội 1,2,3,6,7,8-13C12-HXCDD 13 C12-PCB-169 13 C12-PCB-105 13 C12-PCB-114 13 C12-PCB-118 2,3,7,8-13C12-TCDF 13 C12-PCB-123 1,2,3,7,8-13C12-PeCDF 13 C12-PC8-156 2,3,4,7,8-13C12-PeCDF 13 C12-PCB-157 1,2,3,4,7,8-13C12-HxCDF 13 C12-PCB-167 1,2,3,6,7,8-13C12-HxCDF 13 C12-PCB-189 1,2,3,7,8,9-13C12-HxCDD 1,2,3,4,6,7,8-13C12-HpCDD 13 C12-OCDD 2,3,4,6,7,8-13C12-HxCDF 1,2,3,7,8,9-13C12-HxCDF 1,2,3,4,6,7,8-13C12-HpCDF 1,2,3,4,7,8,9-13C12-HpCDF 13 C12-OCDF 8.3 Làm 8.3.1 Yêu cầu chung Phương pháp làm phải chuẩn bị dịch chiết mẫu theo cách phù hợp cho phép xác định định lượng Quy trình làm phải làm giàu PCDD/F PCB giống dioxin dịch chiết loại bỏ thành phần mẫu gây cản trở có dịch chiết thơ Cần phải sử dụng quy trình làm chứng minh kể hai nhiều kỹ thuật kết hợp theo mức độ khác Mô tả chi tiết số quy trình đưa Phụ lục C Cũng dùng phương pháp khác phải có tính tương đương chứng minh kỹ thuật mô tả 8.3.2 Sắc ký thấm gel Khoảng khối lượng phân tử quan tâm PCDD/F PCB giống dioxin từ 200 g/mol đến 500 g/mol tách biệt khỏi phân tử polyme lớn làm tải mà phương pháp làm khác không thực Có thể dùng phương pháp để loại bỏ lưu huỳnh 8.3.3 Cột nhiều lớp Sắc ký lỏng cột nhiều lớp sử dụng silica với cấp hoạt tính khác cải biên bề mặt Hợp chất có đặc tính hóa học khác với PCDD/F PCB giống dioxin loại bỏ 8.3.4 Xử lý axit sunphuric Có thể xử lý trực tiếp dịch chiết mẫu axit sunphuric không khuyến nghị rủi ro tai nạn Nếu áp dụng, cần tiến hành cẩn thận phương pháp để tránh PCDD/F PCB giống dioxin bề mặt có hình thành cacbon 8.3.5 Cột cacbon hoạt tính Cột sắc ký hấp phụ sử dụng cacbon hoạt tính dùng để tách phân tử PCDD/F phẳng phân tử PCB đồng phẳng khỏi mono-ortho PCB phân tử không phẳng gây cản trở khác 8.3.6 Cột oxit nhôm Cột sắc ký lỏng oxit nhơm có cấp hoạt tính độ axit/bazơ khác Có thể loại bỏ hợp chất gây cản trở với khác biệt nhỏ tính phân cực cấu trúc so sánh với PCDD/F PCB giống dioxin Ngồi ra, sử dụng cột oxit nhơm để tách PCDD/F khỏi PCB giống dioxin 8.3.7 Loại bỏ lưu huỳnh LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Loại bỏ lưu huỳnh đạt cách cất hồi lưu dịch chiết với bột đồng cách sắc ký thấm gel 8.4 Nồng độ cuối dịch chiết mẫu làm Để đạt giới hạn phát đủ lớn, dịch chiết mẫu làm phải làm giàu đến thể tích yêu cầu từ 25 µL đến 100 µL trước định lượng Dung môi cuối phải nonan, toluen, dung mơi khác có nhiệt độ sơi cao Mặc dù PCDD/F có nhiệt độ sơi cao (>320 °C), chế chuyển pha tạo thành sol khí trình bay dung mơi dẫn đến đáng kể thể tích làm giàu nhỏ 10 mL Tùy thuộc vào phương pháp dùng để giảm thể tích dung mơi, phải xem xét biện pháp phịng ngừa sau đây; a) Máy quay Sự mẫu đáng kể giảm thể tích dung môi 10 mL Các biện pháp chống mẫu bao gồm việc sử dụng điều kiện chân khơng kiểm sốt theo áp suất nhiệt độ sơi dung mơi, thêm dung mơi có nhiệt độ sôi cao làm chất giữ, sử dụng bình có hình dạng đặc biệt (ví dụ hình chữ V) b) Máy làm bay dịng khí đếm ngược Thể tích khơng giảm xuống nhỏ mL c) Dòng nitơ Cần phải tránh dòng dư nitơ làm xáo trộn bề mặt dung mơi Hình dạng lọ có số ảnh hưởng lên mẫu Phải sử dụng lọ hình chữ V lọ chèn thêm để giảm thể tích xuống khoảng 200 µL d) Kudema Danish Để tránh mát mẫu ban đầu, làm ẩm trước cột khoảng mL dung môi Hạt sôi cần phải thêm vào phải điều chỉnh vị trí thẳng đứng thiết bị Ở tốc độ chưng cất phù hợp, hạt cột chuyển động, buồng không ngập tràn Điều chỉnh nhiệt độ bể cách thủy thích hợp Khi đạt thể tích dịch chiết mL, tháo bình bay hơi, thay cột Snyder cột khác nhỏ tiếp tục làm bay 8.5 Thêm chuẩn thu hồi Bước cuối trước định lượng thêm chuẩn thu hồi để tính tỉ lệ thu hồi chuẩn nội Chuẩn thu hồi phải điều chỉnh trước quy trình định lượng Mẫu có chuẩn thu hồi thêm vào khơng phân tích lý vận hành (sai hỏng thiết bị) phải bảo quản ngắn tốt cần phải tránh trình làm bay thêm dung mơi khơng kiểm sốt Cần phải thêm chuẩn thu hồi sau giảm thể tích cuối Phải tránh quy trình giảm thể tích trực tiếp Việc làm bay chậm nhiệt độ phịng từ lọ mẫu mở đến thể tích khoảng 25 µL chấp nhận Phân tích GC/HRMS 9.1 Khái quát Cần phải tiến hành phân tích PCDD/F PCB giống dioxin GC-MS thiết bị GC-MS độ phân giải cao trang bị sắc ký khí phân giải cao, lấy mẫu tự động, máy khối phổ phân giải cao hệ thống xử lý số liệu để kiểm soát thiết bị, thu thập xử lý liệu 9.2 Phân tích sắc ký khí Phân tách sắc ký khí phải tiến hành theo cách để phân tách tất PCDD/P đồng loại PCB giống dioxin đáp ứng tiêu chí chất lượng quy định 9.4 9.5 Đối với PCDD/F, cột mao quản có sẵn cho phép việc tách tất đồng loại có nhóm 2,3,7,8- khỏi tất đồng loại khơng có nhóm 2,3,7,8- khác Chỉ đạt việc tách hồn tồn cách phân tích mẫu cột mao quản khác cực khác Đối với phân tích PCB giống dioxin, vấn đề tương tự xuất tách tất đồng loại đồng phẳng mono-ortho Hiện tại, khơng có cột mao quản có sẵn cho phép việc tách tất 12 đồng loại PCB giống dioxin khỏi tất đồng loại khác không giống dioxin 9.3 Phát khối phổ Máy đo phổ khối lượng độ phân giải cao, độ phân giải tối thiểu 10000 dùng để phát LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn PCDD/F dioxin giống PCB Điều cho phép sử dụng đồng loại đánh dấu 13C12 làm chuẩn nội cho tất 17 đồng loại PCDD/F 12 PCB giống dioxin quan tâm Máy đo phổ khối lượng dùng chế độ MID (phát nhiều ion) Cột GC ghép cặp trực tiếp với máy đo phổ khối lượng Nhiệt độ nguồn ion phải nằm khoảng từ 250 °C đến 270 °C tùy thuộc vào loại thiết bị Để đạt độ nhạy phù hợp, khả phát phải 200 fg 2,3,7,8-TCDD Để nhận dạng định lượng, khối lượng nêu Bảng Bảng phải ghi lại chế độ MID Đối với đồng loại PCDD/F PCB quan tâm, phải ghi lại hai ion cụm đồng vị phân tử đồng loại tự nhiên đồng loại đánh dấu 13C12 bổ sung thêm Ngồi ra, khối lượng để kiểm sốt chất lượng hiệu chuẩn khối lượng phải đo phụ thuộc vào loại thiết bị, ví dụ khối lượng khóa, khối lượng hiệu chuẩn, kiểm tra khối lượng khóa Khe thời gian cho cửa sổ MID phải xác định chuẩn hiệu chuẩn theo cách tất đồng loại quan tâm rửa giải cửa sổ MID liên quan Trong trường hợp cần tổng nồng độ nhóm đồng phân, cửa sổ thời gian lưu cho tất đồng phân nhóm đồng phân phải nhận dạng cách đo hỗn hợp chuẩn có chứa đồng phân rửa giải cuối nhóm đồng phân tương ứng với cột GC dùng Như thay thế, dùng dịch chiết tro bay dung dịch khác có chứa tất đồng loại PCDD/F tự nhiên Bảng - Khối lượng để phát định lượng PCDD/F Chất Dibenzofuran 12 13 C Tetra-CDD/F Penta-CDD/F Hexa-CDD/F Hepta-CDD/F Octa-CDD/F Dibenzo-p-dioxin 12 C 13 C C 303,901 315,941 319,896 331,936 305,898 317,938 321,893 333,933 339,859 351,900 355,854 367,894 341,856 353,897 357,851 369,891 373,820 385,861 389,815 401,855 375,817 387,858 391,812 403,852 407,781 419,822 423,776 435,816 409,778 421,819 425,773 437,814 441,742 453,783 457,737 469,777 443,739 455,780 459,734 471,775 Bảng 4- Khối lượng để phát định lượng PCB Nhóm đồng đẳng Tricloro-PCB Tetracloro-PCB Pentacloro-PCB Hexacloro-PCB Heptacloro-PCB Octacloro-PCB Nonacloro-PCB 12 C 13 C 255,961 268,001 257,958 269,998 289,922 301,962 291,919 303,959 325,880 337,920 327,877 339,917 359,841 371,881 361,838 373,878 393,802 405,842 395,799 407,839 427,763 439,803 429,760 441,800 461,724 473,764 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 12 Nhóm đồng đẳng 13 C Decacloro-PCB C 463,721 475,761 497,682 509,722 499,679 511,719 9.4 Yêu cầu tối thiểu nhận dạng PCDF/PCDD PCB 9.4.1 Tỉ số đồng vị hai ion cụm đồng vị phân tử ghi lại phải khớp với giá trị lý thuyết nằm khoảng ± 15 % (xem Bảng 5) Bảng - Giới hạn tỉ số đồng vị Giới hạn tỉ lệ đồng vị Giá trị lý thuyết tỉ lệ đồng vị Giới hạn tỉ lệ đồng vị TCDD/F 0,65 0,77 (M/M+2) 0,88 PeCDD/F 0,55 0,64 (M+4/M+2) 0,75 HxCDD/F 0,69 0,81 (M+4/M+2) 0,94 HpCDD/F 0,83 0,96 (M+4/M+2) 1,13 OCDD/F 0,74 0,89 (M+2/M+4) 1,009 Chất 9.4.2 Thời gian lưu đồng phân có nhóm thay clo 2,3,7,8- tự nhiên (đồng loại C 14- đến C16) phải nằm khoảng cửa sổ thời gian từ +3 đến -3 dựa thời gian lưu đồng phân đánh dấu 13 C12 tương ứng mẫu Để nhận dạng nồng độ thấp (S/N 20:1 9.5.6 Khoảng đo phải tuyến tính (ít bao trùm khoảng nồng độ hệ số 100) Độ lệch chuẩn hệ số đáp ứng tương đối phải không vượt 15 % phải dựa tối thiểu năm điểm đo tồn khoảng 9.5.7 Cần phải phân tích mẫu trắng nêu 9.6 Giá trị mẫu trắng tất đồng loại quan tâm phải nhỏ giới hạn phát phương pháp Cách khác, mức tìm phải hệ số 10 nồng độ đo thấp dãy mẫu 9.6 Hiệu chuẩn hệ thống GC/HRMS 9.6.1 Yêu cầu chung Hiệu chuẩn tiến hành với năm dung dịch hiệu chuẩn Các dung dịch chứa tất đồng loại tự nhiên quan tâm với lượng xác định xác khác tất chuẩn đánh dấu 13C12 (chuẩn nội chuẩn thu hồi) nồng độ dự kiến dung dịch mẫu thêm chuẩn coi thu hồi 100 % Khoảng hiệu chuẩn phải bao trùm nồng độ mẫu 9.6.2 Hiệu chuẩn đồng loại 2,3,7,8Đường hiệu chuẩn dùng để tính hệ số đáp ứng tương đối đồng loại quan tâm Hệ số đáp ứng tương đối dùng với đồng loại đánh dấu 13C12 bổ sung vào mẫu để định lượng khối lượng đồng loại tự nhiên quan tâm phương pháp pha loãng đồng vị Tần suất hiệu chuẩn phụ thuộc vào độ ổn định thiết bị Cần phải thực kiểm tra hiệu chuẩn hàng ngày Ngoài ra, hiệu chuẩn đầy đủ phải lặp lại sau thay đổi như: a) Sử dụng thiết bị sửa chữa thiết bị; b) Thay cột GC; c) Sau làm hệ thống tách phát hiện; d) Nếu độ lệch chuẩn hiệu chuẩn bơm lớn 20 % Hệ số đáp ứng tương đối đồng loại / nhận dạng tính tốn theo Cơng thức (1): (1) Trong rrfi hệ số đáp ứng tương đối đồng loại tự nhiên i tương ứng với đồng loại đánh dấu 13C12 i; Ai[12C] diện tích đồng loại tự nhiên i; Ai[13C] diện tích đồng loại đánh dấu 13C12 i; ci[12C] nồng độ đồng loại tự nhiên i dung dịch hiệu chuẩn; ci[13C] nồng độ đồng loại đánh dấu 13C12 i dung dịch hiệu chuẩn 9.6.3 Hiệu chuẩn tổng nhóm đồng đẳng Hiệu chuẩn máy khối phổ thực theo cách sử dụng dung dịch hiệu chuẩn giống đồng loại riêng lẻ Hệ số đáp ứng tương nhóm đồng đẳng tính cách cộng tất diện tích pic tất đồng loại tự nhiên nhóm đồng đẳng bao gồm dung dịch hiệu chuẩn tương ứng với đồng loại đánh dấu 13C12 Bảng trình bày mối liên quan đồng loại tự nhiên đồng loại đánh dấu 13C12 Bảng - Mối liên quan hiệu chuẩn nhóm đồng đẳng Chất Hiệu chuẩn nhóm đồng đẳng PCDD Đồng phân tự nhiên Đồng đẳng 2,3,7,8 13 Đồng phân C 2,3,7,8 Hiệu chuẩn nhóm đồng đẳng PCDF Đồng phân tự nhiên 2,3,7,8 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Đồng phân 13C 2,3,7,8 Cơng ty luật Minh Kh www.luatminhkhue.vn (4) Trong rrfi hệ số đáp ứng tương đối đồng loại tự nhiên i tương ứng với đồng loại đánh dấu 13C12 i; Ai[12C] tổng diện tích tất đồng loại tự nhiên nhóm đồng đẳng; Ai[13C] diện tích đồng loại đánh dấu 13C12 i, Ch[12C] tổng nồng độ tất đồng loại tự nhiên nhóm đồng đẳng mẫu; ci[13C] nồng độ đồng loại đánh dấu 13C12 i dung dịch mẫu 9.7.4 Tính tốn tương đương độ độc Tổng nồng độ TEQ PCDD/F tính tốn sử dụng Cơng thức (5) cách cộng nồng độ 17 PCDD/F có nhóm clo 2,3,7,8- nhân với TEF tương ứng (xem Phụ lục A) Tổng nồng độ TEQ PCB giống dioxin tính sử dụng Công thức (5) cách cộng nồng độ 12 đồng loại PCB đồng phẳng mono-ortho nhân với TEF tương ứng (xem Phụ lục C) (5) Trong TEQ tổng nồng độ tất đồng loại quan tâm nhân với hệ số tương đương độ độc tương ứng; ci[12C] nồng độ đồng loại tự nhiên i mẫu; TEFi hệ số độc tương đương đồng loại i 9.7.5 Tính giới hạn phát giới hạn định lượng 9.7.5.1 Tính giới hạn phát Nếu khơng có giá trị trắng phân tích phát hiện, giới hạn phát (XLD) tính cách định lượng pic ảo nhỏ xác định yêu cầu tối thiểu nhận dạng định lượng (xem 9.4.3) Mặt khác giá trị trung bình phân tích mẫu trắng cộng với ba lần độ lệch chuẩn phân tích mẫu trắng xác định XLD CHÚ THÍCH: Đối với PCDD/F, thơng thường khơng có giá trị trắng phân tích phát bình thủy tinh thiết bị phòng thử nghiệm khác làm phù hợp sử dụng hóa chất có chất lượng cao Đối với PCB, khơng thể loại bỏ hồn tồn giá trị trắng phân tích việc sử dụng rộng rãi toàn giới khoảng thời gian dài với ứng dụng khác dẫn đến mức phổ biến Do vậy, dung mơi chất hấp phụ khơng khí nhà bị nhiễm bẩn với nồng độ phát dẫn đến giá trị trắng phổ biến 9.7.5.2 Tính giới hạn định lượng Nếu khơng có giá trị trắng phân tích phát hiện, giới hạn định lượng (LOQ) tính cách định lượng pic nhỏ nhìn thấy nêu 9.4.3 sử dụng tỉ lệ tín hiệu nhiễu đến 10 thay cho 3, tùy thuộc vào độ khơng đảm bảo đo chấp nhận kết Nếu khơng, LOQ xác định trung bình giá trị trắng phân tích cộng với đến 10 lần độ lệch chuẩn giá trị trắng phân tích Hệ số đến 10 tùy thuộc vào độ không đảm bảo chấp nhận kết 10 Độ chụm Đặc tính kết số liệu phương pháp đánh giá (xem Phụ lục B) 11 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm bao gồm thông tin sau: a) Viện dẫn tiêu chuẩn này; b) Đặc điểm nhận dạng đầy đủ mẫu đất; c) Báo cáo xử lý sơ bộ; LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn d) Mô tả ngắn gọn phương pháp dùng để chiết làm mẫu; e) Kết phân tích bao gồm mức đồng loại PCDD/F PCB; f) Độ thu hồi chuẩn nội; g) Mọi chi tiết không quy định tiêu chuẩn tự chọn, yếu tố ảnh hưởng đến kết PHỤ LỤC A (Tham khảo) Hệ số độc tương đương Dioxin furan với nguyên tử clo vị trí 2,3,7 xem độc Trong loại này, 2,3,7,8- clorodibenzo-p-dioxin (TCDD) đến có độc tính cao nhất, nghiên cứu biết đến nhiều Nghiên cứu động vật cho thấy 2,3,7,8-TCDD gây chết với nồng độ nhỏ Trong dòng chất độc biết, chất độc Đồng loại PCDD/F khác có nhiều hiệu ứng sinh học với cường độ khác Trong môi trường, PCDD/F thực tế không xuất hợp chất đơn lẻ mà luôn hỗn hợp phức tạp gắn với hợp chất khác có liên quan cấu trúc (“giống dioxin”) PCB Hệ thống TEQ sử dụng 2,3,7,8-TCDD làm chuẩn với tính độc hợp chất khác lượng hóa làm tương đương độ độc (TEQs) Việc chuẩn hóa dựa giả thiết PCDD/F hợp chất giống dioxin hoạt động qua chế hoạt động Đánh giá hiệu ứng độc qua nghiên cứu tính độc mãn tính từ đặc tính hóa sinh khả thụ cảm Ah Tiềm độc đồng loại đơn lẻ thị qua hệ số tương đương độc (TEF) mô tả tính độc liên quan đến hiệu ứng độc 2,3,7,8-TCDD Đối với tính tốn TEQ, lượng nồng độ đồng loại tương ứng nhân với TEF tương ứng Khi tất đồng loại nêu “tương đương 2,3,7,8-TCDD”, đơn giản chúng cộng thêm vào kết TEQ đại diện cho tổng độ độc hỗn hợp Đối với PCDD/F, hai khái nhiệm TEF khác sử dụng Khái niệm l-TEF NATOCCMS đưa năm 1988 khái niệm WHO-TEF WHO công bố năm 1998 Đối với PCB giống dioxin, khái niệm WHO-TEF bao gồm hệ số tương đương độc Giá trị TEF cho hai nêu Bảng A.1 Bảng A.1 - Giá trị TEF đồng loại 2,3,7,8 PCDD/F đồng loại PCB giống dioxin theo khái niệm l-TEF WHO-TEF TEF WHO 2005 l-TEF WHOcon người NATO-CCMS 2,3,7,8-TCDD 1 1,2,3,7,8-PeCDD 0,5 1,2,3,4,7,8-HxCDD 0,1 0,1 1,2,3,6,7,8-HxCDD 0,1 0,1 1,2,3,7,8,9-HxCDD 0,1 0,1 1,2,3,4,6,7,8-HpCDD 0,01 0,01 OCDD 0,0001 0,001 2,3,7,8-TCDF 0,1 0,1 1,2,3,7,8-PeCDF 0,05 0,05 2,3,4,7,8-PeCDF 0,5 0,5 1,2,3,4,7,8-HxCDF 0,1 0,1 1,2,3,6,7,8-HxCDF 0,1 0,1 1,2,3,7,8,9-HxCDF 0,1 0,1 Đồng loại LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn TEF WHO 2005 l-TEF 0,1 0,1 1,2,3,4,6,7,8-HpCDF 0,01 0,01 1,2,3,4,7,8,9-HpCDF 0,01 0,01 OCDF 0,000 0,001 3,4,4’,5-TCB (81) 0,000 — 3,3’,4,4’-TCB (77) 0,0001 — 3,3’,4,4’,5-PeCB (126) 0,1 — 3,3’,4,4’,5,5’-HxCB (169) 0,01 — 2,3,3’,4,4’-PeCB (105) 0,000 — 2,3,4,4’,5-PeCB (114) 0,000 — 2,3’,4,4’,5-PeCB (118) 0,000 — 2’,3,4,4’,5-PeCB (123) 0,000 — 2,3,3’,4,4’,5-HxCB (156) 0,000 — 2,3,3’,4,4’,5’-HxCB (157) 0,000 — 2,3,4,4’,5,5’-HxCB (167) 0,000 01 — 2,3,3’,4,4’,5,5’-HpCB (189) 0,0001 — Đồng loại 2,3,4,6,7,8-HxCDF PHỤ LỤC B (Tham khảo) Số liệu độ lặp lại độ tái lập B.1 Vật liệu dùng nghiên cứu so sánh liên phòng thử nghiệm So sánh liên phòng dioxin, furan biphenyl polyclo giống dioxin sắc ký khí khối phổ phân giải cao (GC-HRMS) bùn, chất thải sinh học xử lý đất tiến hành với bốn đến sáu phòng thử nghiệm châu Âu ba mẫu Thông tin chi tiết tìm thấy báo cáo cuối nghiên cứu so sánh liên phòng đề cập tài liệu tham khảo [6] Bảng B.1 cung cấp danh mục vật liệu thử hợp phần lựa chọn Bảng B.1 - Vật liệu thử thành phần phân tích phép so sánh liên phòng phương pháp xác định dioxin, furan biphenyl polyclo giống dioxin sắc ký với khối phổ phân giải cao (GC-HRMS) bùn, chất thải sinh học xử lý đất Cỡ hạt Bùn Mẫu Vật liệu thử Thành phần/đồng loại phân tích Bùn Hỗn hợp bùn nhà máy xử lý nước thải từ Bắc Rhin Westphalia, Đức 1,2,3,7,8-PeCDD; 1,2,3,4,7,8-HxCDD; 1,2,3,7,8,9-HpCDD; OCDD; 1,2,3,7,8PeCDF; 1,2,3,4,7,8-PeCDF; 1,2,3,6,7,8HxCDF; 2,3,4,6,7,8-HxCDF; 1,2,3,4,6,7,8HpCDF; 1,2,3,4,7,8,9-HpCDF; OCDF; PCB77; PCB-81; PCB-105; PCB-114; PCB-118; PCB-126; PCB-156; PCB-157 Compost Compost tươi từ Vien, Áo 1,2,3,7,8,9-HxCDD; 1,2,3,4,6,7,8-HpCDD; OCDD; 2,3,4,6,7,8-HxCDP; OCDF; PCB-77; PCB-105; PCB-118; PCB-156; PCB-157; PCB-189 Đất Bùn-đất từ Barcelona, Tây Ban Nha 1,2,3,4,7,8,-HxCDD; 1,2,3,4,6,7,8-HpCDD; OCDD; 2,3,4,6,7,8-HxCDF; 1,2,3,4,6,7,8- (