Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu thân và lá cây Lá đắng BỘ GIÁO VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NAM CẦN THƠ KHOA DƯỢC – BM DƯỢC LIỆU PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU DƯỢC LIỆU Hibiscus sabdariffa L – Malvaceae BỘ GIÁO VÀ ĐÀO TẠO CẦN THƠ – 2022 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NAM CẦN THƠ KHOA DƯỢC – BM DƯỢC LIỆU PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU DƯỢC LIỆU (Hibiscus sabdariffa Malvaceae) GVHD Th S Thái Thị Cẩm Người thực hiện Huỳnh Thị Ngọc Mỹ Lớp DH17DUO03 MSSV 176175 Email ngocmy ngocmy 336gmail com Số điện thoại 0901071497 CẦN THƠ – 2022 m.
BỘ GIÁO VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NAM CẦN THƠ KHOA DƯỢC – BM DƯỢC LIỆU PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU DƯỢC LIỆU Hibiscus sabdariffa L – Malvaceae CẦNVÀ THƠ – 2022 BỘ GIÁO ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NAM CẦN THƠ KHOA DƯỢC – BM DƯỢC LIỆU PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU DƯỢC LIỆU (Hibiscus sabdariffa - Malvaceae) GVHD: Th.S Thái Thị Cẩm Người thực hiện: Huỳnh Thị Ngọc Mỹ Lớp: DH17DUO03 MSSV: 176175 Email: ngocmy.ngocmy.336@gmail.com Số điện thoại: 0901071497 CẦN THƠ – 2022 LỜI CẢM ƠN “Để hoàn thành đề tài nghiên cứu này, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: Ban giám hiệu trường Đại Học NAM CẦN THƠ tạo điều kiện sở vật chất với hệ thống thư viện đại, đa dạng loại sách, tài liệu thuận lợi cho việc tìm kiếm, nghiên cứu thơng tin Xin cảm ơn giảng viên môn – cô Thái Thị Cẩm, cô Nguyễn Thị Mỹ Hạnh tận tình giảng dạy để em có đủ kiến thức vận dụng nghiên cứu Cảm ơn bạn nhóm cho em ý kiến hữu dụng nhất, cảm ơn bạn Dương Thị Thùy Dương, Huỳnh Minh Nhật Nguyễn Ánh Hồng đồng hành để nghiên cứu hoàn thành tiến độ Rất mong nhận nhận xét, ý kiến đóng góp, phê bình từ phía Cơ để nghiên cứu hồn thiện Lời cuối cùng, em xin kính chúc Cơ bạn thật nhiều sức khỏe, thành công hạnh phúc.” Cần Thơ, ngày tháng năm 2021 SV thực Huỳnh Thị Ngọc Mỹ iii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN iii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.TỔNG QUAN VỀ THỰC VẬT HỌC 1.1 Tên khoa học 1.2 Phân loại 1.3 Đặc điểm 1.4 Bộ phận dùng - thu hái - chế biến - bảo quản 1.5 Nguồn gốc 1.6 Thành phần hóa học 1.7 Công dụng 1.7.1 Theo Đông y 1.7.2 Theo Tây y 1.7.3 Các công dụng khác TÌNH HÌNH PHÁT TRIỂN SẢN XUẤT CÂY BỤP GIẤM TRÊN THẾ GIỚI VÀ Ở VIỆT NAM 10 2.1 Trên giới 10 2.2 Tình hình nghiên cứu phát triển Bụp giấm Việt Nam 10 2.3 Những thuốc phổ biến Bụp giấm 11 2.4 Một số lưu ý sử dụng hoa bụp giấm 13 CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 ĐỐI TƯỢNG 14 DỤNG CỤ, MÁY MÓC VÀ THIẾT BỊ, HÓA CHẤT 14 2.1 Kiểm nghiệm dược liệu phương pháp vi học 14 2.2 Kiểm nghiệm dược liệu phương pháp phân tích vi hóa 14 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 3.1 Bóc tách biểu bì 15 3.2 Vi phẫu, rễ, thân, cuống 16 3.3 Khảo sát bột dược liệu 17 4.PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN HĨA THỰC VẬT 19 4.1 Phân tích sơ hóa thực vật 19 4.1.1 Nguyên tắc 19 4.1.2 Chuẩn bị dịch chiết 19 4.2Xác định nhóm hoạt chất có dịch chiết 21 4.2.1 Xác định chất tan dịch chiết ether dầu : 21 4.2.2 Xác định chất tan dịch chiết cồn: 21 4.2.3 Xác định chất tan dịch chiết nước: 22 4.3 Sắc ký lớp mỏng 22 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24 1.Mô tả thực vật 24 2.Bóc tách biểu bì 24 3.Đặc điểm vi phẫu 25 3.1 Vi phẫu rễ: 25 3.2Vi phẫu thân: 26 3.3 Vi phẫu cuống lá: 28 3.4 Vi phẫu lá: 30 4.Khảo sát bột dược liệu 32 4.1 Bột rễ Bụp giấm: 32 4.2 Bột thân Bụp giấm: 32 4.3 Bột Bụp giấm: 33 4.4 Bột cuống Bụp giấm: 33 4.5 Bột hoa Bụp giấm: 34 5.Phân tích sơ hóa thực vật 35 5.1 Xác định chất tan dịch ether 35 5.1.1 Xác định tinh dầu 35 5.1.2 Xác định chất béo 35 5.1.3 Định tính carotenoid: 36 5.1.4 Định tính triterpenoid: 36 5.1.5 Định tính alkaloid: 37 5.1.6 Định tính coumarin: 37 5.1.7 Định tính anthraquinon: 38 5.1.8 Định tính flavonoid: 38 5.2 Dịch chiết cồn 39 5.2.1 Định tính alkaloid: 39 5.2.2 Định tính coumarin: 39 5.2.3 Định tính glycosid tim: 40 5.2.4 Định tính flavonoid: 41 5.2.5 Định tính anthocyanosid: 41 5.2.6 Định tính proanthocyanidin: 42 5.2.7 Định tính tanin: 42 5.2.8 Định tính saponin: 43 5.2.9 Định tính chất khử: 43 5.2.10 Định tính acid hữu cơ: 44 5.3 Dịch chiết nước 44 5.3.1 Định tính alkaloid: 44 5.3.2 Định tính glycosid tim: 45 5.3.3 Định tính flavonoid: 46 5.3.4 Định tính anthocyanosid: 46 5.3.5 Định tính proanthocyanidin: 47 5.3.6 Định tính tanin: 47 5.3.7 Định tính saponin: 48 5.3.8 Định tính chất khử: 48 5.3.9 Định tính acid hữu cơ: 49 6.Sắc ký lớp mỏng: 51 CHƯƠNG IV: XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN DƯỢC LIỆU CÂY BỤT GIẤM 53 1.Định nghĩa 53 2.Đặc điểm cảnh quan 53 3.Đặc điểm vi sinh 53 4.Đặc điểm soi bột 54 5.Chỉ số vật lý 55 6.Thử tinh khiết 55 7.Định tính coumarin 55 8.Săc ký lớp mỏng 55 9.Tính vị, quy kinh 56 10.Công chủ trị 56 11.Chế biến 56 12.Tương kỵ 56 CHƯƠNG V: KẾT LUẬN 57 Tài liệu tham khảo 58 DANH MỤC HÌNH CHƯƠNG I TỔNG QUAN Hình Lá mặt trên, mặt Hình Chiều dài Hình Hoa bụp giấm Hình Hoa mọc nách Hình Hoa thức - hoa đồ Hình Quả hạt Bụp giấm ( tươi khô) Hình Rễ thân bụt giấm ( khô ) Hình Mơ hình trồng Bụp giấm Tuy Hịa – Bình Thuận Hình Cây sống khu vực ẩm thấp Hình 10 Cây mọc nơi khơ Hình 11 Một số cơng thức hóa học có Hình 12 Một số cơng thức hóa học có đài hoa Hình 13 Một số cơng thức hóa học có Hình 14 Sản phẩm trà bụt giấm HIBISCUS TEA by leo Quốc Việt Hình 15 Trà hoa Bụp giấm 11 Hình 16 Hoa bụp giấm ngâm đường 12 Hình 17 Hoa bụp giấm ngâm rượu 12 CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Hình 2.1 Khí khổng lỗ khí kiểu song bào 24 Hình 2.2 Hình vẽ mơ khí khổng có lỗ khí kiểu song bào 24 Hình 3.1.1 Vi phẫu rễ chụp kính hiển vi 25 Hình 3.1.2 Hình vẽ mơ vi phẫu rễ 25 Hình 3.1.3 Bó libe – gỗ cấp ( chụp kính hiển vi ) 26 Hình 3.2.1 Vi phẫu thân (chụp kính hiển vi) 26 Hình 3.2.2 Các tế bào thân vật kính 10X 27 Hình 3.2.3 Các tế bào thân vật kính 40X 27 Hình 3.2.4 Hình vẽ mơ sơ đồ cấu tạo thân Bụp giấm 27 Hình 3.3.1 Vi phẫu cuống ( chụp kính hiển vi) 28 Hình 3.3.2 Bó lipe – gỗ cấp 29 Hình 3.3.3 Lơng che chở đơn bào 29 Hình 3.3.4 Hình vẽ mơ cấu tạo cuống Bụp giấm 29 Hình 3.4.1 Vi phẫu Bụp giấm ( chụp kính hiển vi ) 30 Hình 3.4.2 Lơng tiết đầu trịn ( kính 40X) 31 Hình 3.4.3 Mơ giậu ( kính 40X) 31 Hình 3.4.4 Hình vẽ mơ sơ đồ cấu tạo Bụp giấm 31 Hình 4.1.1 Các tế bào có bột rễ Bụp giấm 32 Hình 4.2.1 Các tế bào có bột thân Bụp giấm 32 Hình 4.3.1 Các tế bào có bột Bụp giấm 33 Hình 4.4.1 Các tế bào có bột cuống Bụp giấm 34 Hình 4.5.1 Các tế bào có bột hoa Bụp giấm 34 Hình Cắn có mùi thơm nhẹ 35 Hình Có vết mờ 35 Hình Khơng màu xanh 36 Hình Nơi tiếp xúc lớp dung dịch có màu vàng tím đỏ 36 Hình Các ống mẫu chứng, TT Mayer, TT Bouchardat, TT Dragendorff 37 Hình Ống có huỳnh quang mạnh ống 37 Hình Lớp kiềm khơng đổi màu 38 Hình Khơng đổi màu 38 Hình Dung dịch không đục, không tủa 39 Hình 10 Ống ống 2, phát huỳnh quang soi đèn 365 nm 39 Hình 11 Khơng có màu tím 40 Hình 12 Khơng có màu hồng đến đỏ mận 40 Hình 13 Khơng có màu hồng tới đỏ 41 Hình 14 Khơng chuyển sang màu xanh 41 Hình 15 Khơng có màu hồng đỏ đến đỏ 42 Hình 16 Ống có màu xanh rêu, ống không tủa 42 Hình 17 Khơng có bọt bền 43 Hình18 Có tủa đỏ gạch 43 Hình 19 Khơng có bọt khí sủi lên 44 Hình 20 Dung dịch khơng có tủa 44 Hình 21 Khơng xuất màu tím 45 Hình 22 Khơng có màu hồng đến đỏ mận 45 Hình 23 Dung dịch khơng có màu hồng đến đỏ 46 Hình 24 Dung dịch khơng đổi màu xanh sau kiềm hóa 46 Hình 25 Dung dịch khơng có màu hồng đỏ tới đỏ 47 Hình 26 a Có màu xanh rêu b Khơng có tủa 47 Hình 27 Có bọt bền 15 phút 48 Hình 28 Khơng có kết tủa đỏ gạch 48 Hình 29 Khơng có bọt khí sủi lên 49 Hình 30 Có nhiều kết tủa bơng tạo thành 49 Hình 31 Kết sắc ký lớp mỏng 51 CHƯƠNG IV KẾT LUẬN DANH MỤC BẢNG VÀ SƠ ĐỒ Bảng Bảng phân loại khoa học Bảng Tóm tắt kết phân tích sơ thành phần hóa thực vật 51 Sơ đồ Chuẩn bị dịch chiết 20 Sơ đồ Chiết dịch chiết ether 21 Sơ đồ Chiết dịch chiết cồn 21 Sơ đồ Chiết dịch chiết nước 22 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Bụp Giấm Huỳnh Thị Ngọc Mỹ - 176175 5.2.10 Định tính acid hữu cơ: Lấy 2ml dịch chiết cho vào ống nghiệm Pha loãng với 1ml nước thêm vào dung dịch tinh thể natri carbonat Nếu có bọt khí nhỏ sủi lên từ tinh thể Na2CO3: có acid hữu Kết quả: Hình 19 Khơng có bọt khí sủi lên Kết luận: khơng có acid hữu Bụp giấm 5.3 Dịch chiết nước 5.3.1 Định tính alkaloid: Lấy khoảng 10ml dịch nước cho vào bình lắng gạn 50ml, kiềm hóa dịch chiết tới pH 10 dung dịch NH4OH 10% với dịch chiết ether ethylic cloroform (10ml x lần) Gộp chung rửa lớp dung môi hữu với 10ml nước cất Lắc lớp ether với dung dịch acid hydrocloric 5% (2ml x lần) Chia dung dịch acid vào ống nghiệm nhỏ Định tính Alkaloid thuốc thử: Mayer, Bertrand, Bouchardat - Thuốc thử Valse- Mayer: tủa trắng – vàng nhạt - Thuốc thử Bertrand: tủa trắng - Thuốc thử Bouchardat: tủa đỏ cam So sánh với ống mẫu khơng có thuốc thử Nếu dung dịch đục có tủa: có alkaloid Kết quả: Hình 20 Dung dịch khơng tủa Kết luận: khơng có alkaloid Bụp giấm 44 Huỳnh Thị Ngọc Mỹ - 176175 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Bụp Giấm 5.3.2 Định tính glycosid tim: a Định tính vịng lacton cạnh: Lấy 5ml dịch nước cho vào chén sứ bốc cắn Hòa lại cắn với 2ml cồn 25%, gạn dịch cồn vào ống nghiệm nhỏ Cho vào 2-3 giọt dung dịch 1% m-dinitrobenzen cồn 96% thêm vào giọt KOH 5% Nếu xuất màu tím: Có cardenolid Kết quả: Hình 21 Khơng xuất màu tím Kết luận: khơng có cardenolid Bụp giấm b Định tính đường 2- desoxy: Lấy 5ml dịch nước cho vào chén sứ bốc tới cắn Hòa lại cắn với 5ml thuốc thử xanthydrol khuấy cho tan hết cắn, đậy ống nghiệm nút bơng gịn, cách thủy phút Nếu có màu hồng đến đỏ mận: Có đường 2- desoxy Kết quả: Hình 22 Khơng có màu hồng đến đỏ mận Kết luận: khơng có đường - desoxy Bụp giấm 45 Huỳnh Thị Ngọc Mỹ - 176175 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Bụp Giấm 5.3.3 Định tính flavonoid: Lấy khoảng 5ml dịch chiết nước cho vào chén sứ, bốc tới cắn Hòa tan cắn khoảng 2ml cồn 25% lọc vào ống nghiệm nhỏ Thêm vào dung dịch bột Magnei kim loại 0,5ml HCL đậm đặc Nếu dung dịch có màu hồng tới đỏ: có flavonoid Kết quả: Hình 23 Dung dịch khơng có màu hồng đến đỏ Kết luận: khơng có flavonoid Bụp giấm 5.3.4 Định tính anthocyanosid: Lấy 1ml dịch chiết nước cho vào ống nghiệm nhỏ Thêm 2-3 giọt acid hydrocloric 10% Nếu dung dịch có màu hồng đỏ tới đỏ chuyển sang màu xanh kiềm hóa dung dịch Natri hydroxic 10%: Có anthocyanosid Kết quả: Hình 24 Dung dịch khơng đổi màu xanh sau kiềm hóa Kết luận: khơng có anthocyanosid Bụp giấm 46 Huỳnh Thị Ngọc Mỹ - 176175 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Bụp Giấm 5.3.5 Định tính proanthocyanidin: Lấy 5ml dịch chiết nước cho vào ống nghiệm Thêm 2ml acid hydrocloric 10% đun bếp cách thủy 10 phút Nếu dung dịch có màu hồng đỏ tới đỏ: Có proanthocyanidin Kết quả: Hình 25 Dung dịch khơng có màu hồng đỏ tới đỏ Kết luận: khơng có proanthocyanidin Bụp giấm 5.3.6 Định tính tanin: a Lấy 0,5 ml dịch chiết cho vào ống nghiệm Thêm 2-3 giọt thuốc thử FeCl3 5%, lắc Nếu dung dịch có màu xanh đen hay xanh rêu: Có polyphenol b Lấy 2ml dịch chiết, thêm vào giọt dung dịch gelatin-muối, lắc đều, so sánh với dung dịch ban đầu Nếu có tủa bơng trắng Có tannin Kết quả: a b Hình 26 a Có màu xanh rêu b Khơng có tủa Kết luận: a Có polyphenol Bụp giấm b Khơng có tannin Bụp giấm 47 Huỳnh Thị Ngọc Mỹ - 176175 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Bụp Giấm 5.3.7 Định tính saponin: Lấy khoảng 5ml dịch nước cho vào chén sứ, đun cách thủy tới cắn Hòa cắn với 5ml cồn 25%, lọc vào ống nghiệm Pha loãng với 5ml nước, lắc mạnh theo chiều dọc ống nghiệm 15 giây Nếu có cột bọt bền 15 phút: có saponin Kết quả: Hình 27 Có bọt bền 15 phút Kết luận: có saponin Bụp giấm 5.3.8 Định tính chất khử: Lấy 5ml dịch chiết cách thủy tới khơ, hịa cắn cồn 25%, lọc Cho dịch lọc vào ống nghiệm, thêm 0,5 ml dung dịch Fehling A 0,5 ml dung dịch Fehling B đun cách thủy phút Nếu có kết tủa đỏ gạch nặng đáy ống nghiệm: có chất khử Kết quả: Hình 28 Khơng có kết tủa đỏ gạch Kết luận: khơng có chất khử Bụp giấm 48 Huỳnh Thị Ngọc Mỹ - 176175 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Bụp Giấm 5.3.9 Định tính acid hữu cơ: Lấy 2ml dịch chiết cho vào ống nghiệm Thêm vào dung dịch tinh thể Natri carbonat Nếu có bọt khí nhỏ sủi lên từ tinh thể Na2CO3: có acid hữu Kết quả: Hình 29 Khơng có bọt khí sủi lên Kết luận: khơng có acid hữu Bụp giấm 5.3.10 Định tính polyuronid: Nhỏ giọt 2ml dịch chiết nước cho vào ống nghiệm có chứa 10ml cồn 95% (hoặc aceton) Nếu có nhiều tủa bơng tạo thành: có polyuronid Kết quả: Hình 30 Có nhiều kết tủa bơng tạo thành Kết luận: có polyuronid Bụp giấm 49 BẢNG TĨM TẮT KẾT QUẢ PHÂN TÍCH SƠ BỘ THÀNH PHẦN HĨA THỰC VẬT Nhóm hợp chất Tinh dầu Chất béo Carotenoid Triterpenoid Alkaloid Coumarin Anthraquinon Flavonoid Glycosid tim Anthocyanosid Proanthocyanidin Tannin Saponin Acid hữu Chất khử Hợp chất polyuronid Kết định tính dịch chiết Phản ứng dương tính Dịch chiết Dịch chiết Dịch chiết ete cồn nước Phương pháp cất kéo nước Có mùi thơm nhẹ đặc trưng + Nhỏ dd lên giấy Có vết mờ + H2SO4 Xanh dương hay lục→ xanh dương Liebermann-Burchard Đỏ nâu-tím, lớp có màu xanh lục + TT chung alkaloid Kết tủa Phát quang kiềm Phát quang mạnh + + NaOH 10% Màu hồng→ đỏ Mg/HCl đđ Dd có màu hồng tới đỏ TT vịng lacton cạnh Tím TT đường 2-desoxy Đỏ mận HCl 10% Hồng đỏ → đỏ chuyển màu xanh o HCl/t Hồng đỏ → đỏ Dd FeCl3 Xanh rêu hay xanh đen + + Dd gelatin muối Tủa trắng Lắc mạnh dd nước Có bọt bền + Na2CO3 Sủi bọt TT Fehling Tủa đỏ gạch + Pha loãng với cồn 90% Tủa trắng – vàng nâu + Thuốc thử Cách thực Khơng có mặt nhóm hợp chất dịch chiết Ghi nhận kết định tính 50 Kết định tính chung Có Có Khơng Có Khơng Có Khơng Khơng Khơng Khơng Khơng Khơng Có Khơng Nghi ngờ Khơng Nghi ngờ Có (+) Có (-) Khơng (+/-) Nghi ngờ Huỳnh Thị Ngọc Mỹ -176175 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Bụp giấm Sắc ký lớp mỏng: Quá trình xử lý mẫu: Lấy 50 g dược liệu Bụp giấm khô cho cồn vào lắc cho dung môi thấm vào dược liệu từ 15 -20 phút Đun cách thủy phút sau lọc bơng gịn để loại tạp Cơ dịch chiết thu đến cắn Hòa tan cắn với CHCl3 dùng dịch tiến hành chấm sắc ký Pha tĩnh: mỏng sắc ký Silicagel tráng sẵn GF245 Hệ dung môi triển khai: Hexan : EtOAc (9:1) Tiến hành chấm sắc ký: dùng mao quản hút dịch chiết, chấm lên mỏng thành vạch – 3mm cách mép 1,5cm Đặt mỏng vào bình săc ký bão hòa tư nghiêng 450 đậy nắp bình Khi dung mơi cịn cách mép 0,5cm lấy mỏng để bay dung môi nhiệt độ phòng Quan sát ánh sáng thường, soi UV 254nm 356 nm Thuốc thử: VS Hiện màu: Nhúng VS, sấy phút Sắc ký đồ Kết quả: a4 a3 a2 a1 Soi đèn 365 nm Soi đèn 254 nm Đã nhúng TT VS Hình 31 Kết sắc ký lớp mỏng 51 Huỳnh Thị Ngọc Mỹ -176175 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Bụp giấm Kết luận: sau chạy săc ký lớp mỏng, soi đèn UV 365 nm 254 nm nhúng thuốc thử VS mỏng xuất vết màu Giá trị Rf = a/b o Rf1 = 5,6/7,6 = 0,73 o Rf2 = 5/7,6 = 0,65 o Rf3 = 4,2/7,6 = 0,55 o Rf4 = 3,5/7,6 = 0,46 52 Huỳnh Thị Ngọc Mỹ -176175 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Bụp giấm CHƯƠNG IV: XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN DƯỢC LIỆU CÂY BỤT GIẤM Định nghĩa Tên gọi: Bụp Giấm Tên gọi khác: Atiso đỏ, Đay Nhật, Lạc thần hoa, Quế mầu, Tên khoa học: Hibiscus sabdariffa L Họ: Thuộc họ Cẩm quỳ (Malvaceae) Tên tiếng Anh: Roselle, rosella /rosella fruit (Australian Eng.) Đặc điểm cảnh quan Cây bụp giấm loại thân thảo, mọc dựng đứng Là loại sống năm, cao 1,5 – 2m Thân có màu tím đỏ tím, phân nhánh từ gốc Lá bụp giấm ngun có hình trứng, mép có hình cưa khơng đều, cuống có màu từ xanh đậm đến đỏ Hoa mọc đơn độc nách lá, cuống hoa ngắn, gần khơng có cuống Tràng hoa màu vàng hồng hay tía, có trắng.Quả hình trứng có lơng thơ Quả bụp giấm bao bọc đài hoa màu đỏ tươi Hạt có màu đen, gần trịn thô, chứa nhiều tinh dầu Thời điểm hoa thường diễn từ tháng đến tháng 10 năm Trồng trọt: Cây trồng cách nhân giống từ hạt Cây nhạy cảm với sướng giá Đối với lấy sợi, hạt gieo gần nhau, tạo cao từ đến mét (10 đến 16 feet), phân nhánh Sau trồng khoảng 15 – 20 ngày, tiến hành bón lót đợt Bảo quản dược liệu bụp giấm nơi khơ thống, sẽ, tránh ẩm thấp Đặc điểm vi sinh Vi phẫu rễ: Tiết diện tròn, bần gồm nhiều lớp tế bào hình chữ nhật, vách mỏng uốn lượn xếp xuyên tâm, bong tróc nhiều Mơ mềm hình chữ nhật hay đa giác gần trịn, 3-5 lớp tế bào xếp lộn xộn kích thước không Các cụm mô cứng to nhỏ không nhau, 3-7 tế bào Libe tế bào hình chữ nhật xếp thẳng hàng, 2-3 lớp tế bào, gỗ chiếm tâm xếp lộn xộn mạch gỗ tế bào đa giác trịn, kích thước khơng Tinh thể calci oxalat hình cầu gai nhiều mơ mềm vỏ libe 53 Huỳnh Thị Ngọc Mỹ -176175 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Bụp giấm Vi phẫu thân: Tiết diện trịn, biểu bì gồm tế bào, mơ dày góc 5-7 lớp tế bào, kích thước to nhỏ khơng nhau, trịn gần trịn xếp lộn xộn Mơ mềm đạo 3-4 lớp tế bào hình trịn gần trịn xếp lộn xộn Cụm mơ cứng từ 3-7 tế bào kích thước nhỏ Libe tế bào nhỏ xếp lộn xộn mô cứng Gỗ xếp thẳng hàng hình đa giác Mơ mềm tủy tế bào hình đa giác kích thước khơng Tinh thể canxi oxlat hình cầu gai nằm rải rác libe mô mềm tủy Vi phẫu lá: Biểu bì biểu bì gồm tế bào hình chữ nhật kích thước không Mô giậu nằm hai bên phiến tế bào hình chữ nhật thẳng đứng, xếp thẳng hàng, mơ dày góc tế bào trịn gần trịn nằm biểu bì Mơ mền đạo tế bào đa giác gần tròn kích thước khơng Gỗ xếp thằng hàng Libe tế bào đa giác xếp lộn xộn Tinh thể canxi oxalat hình cầu gai xếp lộn xộn gần libe Vi phẫu cuống lá: Tiết diện tam giác đỉnh, đáy phình to, biểu bì lớp tế bào, mơ dày góc tế bào trịn gần trịn Mơ mềm đạo tế bào đa giác gần trịn kích thước không Gỗ xếp thằng hàng, libe tế bào đa giác xếp lộn xộn tạo thành 11 bó gỗ - lipe Tinh thể canxi oxalat hình cầu gai nằm rải rác biểu bì Lông che chở đơn bào nằm phần đỉnh Đặc điểm soi bột - Bột rễ: Màu vàng nhạt Thành phần gồm: mạch điểm, tinh thể canxi oxalat hình cầu gai, - Bột thân: Màu vàng sậm Thành phần gồm: mạch điểm, mạch vịng, mạch xoắn, lơng hút, - Bột lá: Màu vàng đậm, có mùi thơm nhẹ, vị chua Thành phần gồm: khí khổng, mạch vịng, mạch xoắn, lơng che chở đơn bào, biểu bì, - Bột cuống lá: Màu vàng trắng nhạt Thành phần gồm: mạch xoắn, mạch vịng, lơng che chở đơn bào, tinh thể canxi oxalat hình cầu gai, - Bột hoa: Màu vàng, đỏ nhạt, vị chua, mùi thơm nhẹ Thành phần gồm: mạch mạng, mạch xoắn, mạch điểm, tinh thể canxi oxalat hình cầu gai, 54 Huỳnh Thị Ngọc Mỹ -176175 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Bụp giấm Chỉ số vật lý Yêu cầu số vật lý, hóa học nguyên liệu thay cho đặc điểm vi học phần tiêu chuẩn thử tinh khiết dược liệu quan thực vật Thử tinh khiết Mô tả yêu cầu độ tinh khiết dược liệu: tạp chất, độ ẩm, độ tro,… Độ ẩm Không 14,0 % (Phụ lục 9.6) Tạp chất Không q % (Phụ lục 12.11) Tro tồn phần Khơng 12,0 % (Phụ lục 9.8) Định tính coumarin Lấy khoảng 5ml dịch cồn cho vào chén sứ, bốc tới cắn Hòa cắn 2ml cồn 70% Chia dịch chiết vào ống nghiệm nhỏ Thêm vào ống thứ 0,5ml KOH 10% ống thứ hai lượng nước cất tương đương Đun cách thủy ống nghiệm phút, để nguội soi đèn tử ngoại 365nm Sự xuất huỳnh quang mạnh ống thứ chứng tỏ có mặt coumarin Thêm vào ống nghiệm, ống 2,5ml nước cất Nếu dung dịch ống dung dịch ống Săc ký lớp mỏng Quá trình xử lý mẫu: Lấy 50 g dược liệu Bụp giấm khô cho cồn vào lắc cho dung môi thấm vào dược liệu từ 15 -20 phút Đun cách thủy phút sau lọc bơng gịn để loại tạp Cơ dịch chiết thu đến cắn Hòa tan cắn với CHCl3 dùng dịch tiến hành chấm sắc ký Pha tĩnh: mỏng sắc ký Silicagel tráng sẵn GF245 Hệ dung môi triển khai: Hexan : EtOAc (9:1) Tiến hành chấm sắc ký: dùng mao quản hút dịch chiết, chấm lên mỏng thành vạch – 3mm cách mép 1,5cm Đặt mỏng vào bình săc ký bão hòa tư nghiêng 450 đậy nắp bình Khi dung mơi cịn cách mép 0,5cm lấy mỏng để bay dung môi nhiệt độ phòng Quan sát ánh sáng thường, soi UV 254nm 356 nm Thuốc thử: VS Hiện màu: Nhúng VS, sấy phút Sắc ký đồ 55 Huỳnh Thị Ngọc Mỹ -176175 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Bụp giấm Tính vị, quy kinh Vị chua, tính mát Quy vào Can, đại trường 10.Cơng chủ trị Tác dụng lợi tiểu, lọc máu, giải rượu, kích thích nhu động ruột, kháng khuẩn, lợi mật, giảm huyết áp nhuận tràng Cải thiện khả tiêu hóa, hỗ trợ điều trị bệnh mật, xơ cứng động mạch, số vấn đề thần kinh tim 11.Chế biến Người dân thu hái hoa sử dụng tươi phơi khô bảo quản dùng dần 12.Tương kỵ Trước trình sử dụng hoa bụp giấm, bạn cần lưu ý đến số vấn đề sau: Các đối tượng dị ứng mẫn cảm với số thành phần có hoa bụp giấm tuyệt đối khơng nên sử dụng chưa có cho phép; Không sử dụng hoa bụp giấm cho phụ nữ mang thai cho bú Bởi loại dược liệu có chứa số thành phần hoạt chất làm ảnh hưởng đến sức khỏe thai nhi nhỏ; Không nên lạm dụng hoa bụp giấm Liều lượng sử dụng theo chuyên gia đề nghị không vượt 2g / ngày; Khi chế biến hoa bụp giấm, không nên chế biến nhiệt độ cao Điều làm giảm giá trị công dụng dược liệu; Không sử dụng đồng thời hoa bụp giấm lúc với số thuốc tân dược Nếu sử dụng song song lúc gây tượng tương tác thuốc làm gia tăng tác dụng phụ 56 Huỳnh Thị Ngọc Mỹ -176175 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Bụp giấm CHƯƠNG V: KẾT LUẬN Qua trình thực tập Phịng thí nghiệm Dược Liệu - Mơn Phương pháp nghiên cứu Dược Liệu - Trường Đại Học Nam Cần Thơ, nhóm sơ xây dựng tiêu chuẩn để kiểm nghiệm dược liệu Bụp giấm, loại dược liệu phổ biến người dân Việt Nam mang đến nhiều công dụng quý báu việc trì sức khỏe điều trị bệnh Mặc dù tiêu chuẩn xây dựng nhiều điểm chưa hồn chỉnh (các phản ứng định tính chưa thực đặc hiệu, chưa xây dựng qui trình định lượng,.v.v…) tính đơn giản có ích trường hợp cần xác định chống nhầm lẫn, giả mạo hay phân biệt dược liệu chất lượng phịng thí nghiệm với quy mô nhỏ Đồng thời, tiêu chuẩn tiền đề hay mang giá trị tham khảo cho việc xây dựng tiêu chuẩn cao với quy mô trang thiết bị tân tiến đại 57 Huỳnh Thị Ngọc Mỹ -176175 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Bụp giấm Tài liệu tham khảo Tài liệu tiếng Việt [1] Trương Thị Đẹp (2007), Thực vật dược, NXB Giáo dục Hà Nội [2] Ths Thái Thị Cẩm, giảng môn Phương pháp nghiên cứu dựơc liệu khoa Dựơc - BM Dược liệu, trường Đại học Nam Cần Thơ [3] Gs Đỗ Tất Lợi (2011), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, NXB thời đại Internet [4] https://www.thuocdantoc.org/duoc-lieu/cay-bup-giam [5] https://tracuuduoclieu.vn/bup-giam.html [6] https://raubanoi.blogspot.com/2014/09/cay-hoa-bup-giam.html [7] https://baokhuyennong.com/cay-bup-giam/ Tài liệu nước [8] https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S030881461400692X [9] https://www.britannica.com/plant/roselle-plant [10] Hui-Hsuan Lin, Jing-Hsien Chen and Chau-Jong Wang Chemopreventive Properties and Molecular Mechanisms of the Bioactive Compounds in Hibiscus Sabdariffa Linne Volume 18 , Issue , 2011 [11] Inês Da - Costa - Rocha , Bernd Bonnlaender , Hartwig Sievers , Ivo Pischel , Michael Heinrich Hibiscus sabdariffa L – A phytochemical and pharmacological review 2014 [12] Aiman Shalgurn, Manoj Govindarajulu, Mohammed Majrashi , Sindhu Ramesh Willard E Collier, Gerald Griffin , Rajesh Amin Chastity Bradford Timothy Moore, Muralikrishnan Dhanasekaran Neuroprotective effects of Hibiscus Sabdariffa against hydrogen peroxideinduced toxicity 2019 [13] K Clegg and A D Morton, “The phenolic compounds of blackcurrant juice and their protective effect on ascorbic acid,” Int J Food Sci Technol., vol 3, no 3, pp 277–284, 1968 [14] J F Morton, Fruits of warm climates JF Morton, 1987 [15] H D Neuwinger, African traditional medicine: a dictionary of plant use and applications With supplement: search system for diseases Medpharm, 2000 [16] I Jabeur et al., “Hibiscus sabdariffa L as a source of nutrients, bioactive compounds and colouring agents,” Food Res Int., vol 100, pp 717–723, 2017 [17] I A Ross, “Hibiscus sabdariffa,” in Medicinal plants of the world, Springer, 2003, pp 267–275 [18] I G Bako, M A Mabrouk, and A Abubakar, “Antioxidant effect of ethanolic seed extract of hibiscus sabdariffa linn (Malvaceae) alleviate the toxicity induced by chronic administration of sodium nitrate on some haematological parameters in wistars rats,” Adv J Food Sci Technol., vol 1, no 1, pp 39–42, 2009 58 ... - 176175 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Bụp Giấm 1.3 Đặc điểm Cây bụp giấm loại thân thảo, mọc dựng đứng Là loại sống năm, cao 1,5 – 2m Thân có màu tím đỏ tím, phân nhánh từ gốc Lá bụp giấm ngun... dựng tiêu chuẩn dược liệu Bụp Giấm Hoa bụp giấm ngâm đường giúp phòng ngừa ho, hỗ trợ q trình tiêu hóa Ngun liệu: Hoa bụp giấm tươi với đường Cách thực hiện: Rửa toàn hoa bụp giấm vừa chuẩn bị... 30ml [5] Hình 17 Hoa bụp giấm ngâm rượu 12 Huỳnh Thị Ngọc Mỹ - 176175 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Bụp Giấm 2.4 Một số lưu ý sử dụng hoa bụp giấm Trước trình sử dụng hoa bụp giấm, bạn cần lưu ý