nghiên cứu phát triển bộ dữ liệu chuẩn của một số dược liệu thường dùng phục vụ công tác giám sát chất lượng dược liệu và thuốc đông dược

ĐỖ THỊ THANH THUỶ - Luận văn thạc sĩ dược học – Chuyên ngành KIỂM NGHIỆM THUỐC – ĐỘC CHẤT- 2008 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI - - ĐỖ THỊ THANH THUỶ NGHIÊN CỨU THIẾT LẬP CHẤT CHUẨN EMODIN TỪ ĐẠI HỒNG PHỤC VỤ CƠNG TÁC KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG THUỐC LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI - 2008 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI -   - ĐỖ THỊ THANH THUỶ NGHIÊN CỨU THIẾT LẬP CHẤT CHUẨN EMODIN TỪ ĐẠI HỒNG PHỤC VỤ CƠNG TÁC KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG THUỐC LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Chuyên ngành : Kiểm nghiệm thuốc - độc chất Mã số : 60 73 15 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS.Trịnh Văn Lẩu ThS Phạm Thị Giảng Hà Nội - 2008 LỜI CẢM ƠN Với lịng biết ơn sâu sắc kính trọng xin chân thành cảm ơn: PGS TS Trịnh Văn Lẩu - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Thạc sĩ Phạm Thị Giảng - Khoa Kiểm nghiệm Đông dược - Dược liệu, Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Những người tận tình, trực tiếp hướng dẫn tơi suốt q trình thực hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lịng cảm ơn chân thành tới: Thạc sĩ Nguyễn Tuấn Anh, dược sĩ Trần Thị Thu Hương – Khoa Kiểm nghiệm Đông dược - Dược liệu - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương PGS.TS Chu Đình Kính - Viện Hố học- Viện Khoa học cơng nghệ Việt Nam Tiến sĩ Trần Việt Hùng – Khoa Vật lý đo lường - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Thạc sĩ Lê Thị Hường Hoa - Khoa Kiểm nghiệm Mỹ phẩm - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Đã giúp đỡ tơi q trình thực luận văn Nhân dịp xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, Phòng quản lý sau Đại học, thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà nội, bạn đồng nghiệp khoa Kiểm nghiệm Mỹ phẩm, khoa Kiểm nghiệm Đông dược Dược liệu, khoa Vật lý đo lường viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi, gia đình bạn bè động viên, khích lệ tơi suốt trình học tập trình thực luận văn Hà nội, ngày tháng năm 2008 Dược sĩ: Đỗ Thị Thanh Thuỷ MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vài nét chất đối chiếu (chất chuẩn) 1.2 Tổng quan vị dược liệu dùng nghiên cứu đề tài 1.2.1 Đại hồng (Rhizoma Rhei) 1.2.2 Cốt khí củ (Radix Polygoni cuspidati) 1.3 Khái niệm chung anthranoid 1.4 Emodin 1.4.1 Đặc điểm tính chất Emodin 1.4.2 Tác dụng dược lý Emodin 1.5 Tổng quan chiết xuất dược liệu, chiết xuất tinh chế anthranoid 1.5.1 Chiết xuất dược liệu 1.5.2 Chiết xuất tinh chế anthranoid 1.6 Tổng quan số phương pháp hoá lý sử dụng nghiên cứu đề tài 10 1.6.1 Phương pháp sắc ký lớp mỏng (SKLM) 10 1.6.2 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 12 1.6.3 Phương pháp đo nhiệt độ nóng chảy 16 1.6.4 Phương pháp đo phổ hồng ngoại (phổ IR) 16 1.6.5 Phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 17 1.6.6 Phương pháp phân tích khối phổ (MS) 18 1.7 Nhận xét chung 20 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG TIỆN, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Nguyên liệu 21 2.2 Phương tiện nghiên cứu 21 2.2.1 Thiết bị, dụng cụ 21 2.2.2 Hố chất, dung mơi 22 2.3 Nội dung nghiên cứu 22 2.4 Các phương pháp dùng để nghiên cứu 23 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 25 3.1 Chiết xuất tinh chế Emodin từ vị dược liệu Đại hoàng 25 3.1.1 Chiết xuất Emodin 25 3.1.2 Tinh chế Emodin 32 3.2 Định tính Emodin tinh chế SKLM, xác định nhiệt độ nóng chảy đo phổ IR 41 3.2.1 Định tính Emodin tinh chế SKLM 41 3.2.2 Xác định nhiệt độ nóng chảy Emodin tinh chế 44 3.2.3 Đo phổ hồng ngoại Emodin tinh chế 45 3.3 Xác minh cấu trúc Emodin tinh chế 46 3.3.1 Phân tích khối phổ 46 3.3.2 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 46 3.4 Định tính, định lượng Emodin tinh chế xác định giới hạn tạp chất liên quan Emodin tinh chế HPLC 49 3.4.1 Xây dựng quy trình kỹ thuật để định tính, định lượng Emodin tinh chế xác định giới hạn tạp chất liên quan Emodin tinh chế phương pháp HPLC với detector UV 49 3.4.2 Định tính Emodin tinh chế 52 3.4.3 Định lượng Emodin tinh chế 55 3.4.4 Xác định giới hạn tổng cộng tạp chất chất liên quan Emodin tinh chế 56 3.5 Thẩm định phương pháp HPLC sử dụng để định lượng Emodin tinh chế 59 3.5.1 Tính xác 59 3.5.2 Tính tuyến tính 60 3.5.3 Tính 61 3.5.4 Tính đặc hiệu 63 3.6 Xây dựng tiêu chuẩn dự thảo cho chất chuẩn phịng thí nghiệm Emodin 65 3.7 Sử dụng Emodin tinh chế làm chất chuẩn phịng thí nghiệm để định tính, định lượng Emodin hai vị dược liệu: Đại hồng, Cốt khí củ 67 3.7.1 Định tính định lượng Emodin vị dược liệu Đại hồng 67 3.7.2 Định tính định lượng Emodin vị dược liệu Cốt khí củ 76 CHƯƠNG BÀN LUẬN 88 4.1 Về chiết xuất tinh chế 88 4.2 Về định tính Emodin tinh chế SKLM, xác định nhiệt độ nóng chảy đo phổ IR 88 4.3 Về việc xác minh cấu trúc Emodin tinh chế 88 4.4 Về định tính, định lượng Emodin tinh chế được, xác định giới hạn tạp chất liên quan Emodin tinh chế HPLC 88 4.5 Về việc sử dụng Emodin tinh chế làm chất chuẩn phịng thí nghiệm để định tính, định lượng Emodin hai vị dược liệu: Đại hồng, Cốt khí củ 90 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 91 KẾT LUẬN 91 KIẾN NGHỊ 92 TÀI LIỆU THAM KHẢO 93 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT 13 C-NMR : Carbon (13) Nuclear magnetic resonance C : Chuẩn C+T : Chuẩn + Thử H-NMR : Proton nuclear magnetic resonance DĐVN III : Dược điển Việt Nam III DEPT : Distotionless enhancement by polarization transfer ĐT : Định tính GLP : Good laboratory practice HMBC : Heteronuclear multiple bond correlation HMQC : Heteronuclear multiple quantum correlation HPLC : High performance liquid chromatography HQ : Huỳnh quang HSQC : Heteronuclear single quantum correlation IEC : International electrotechnical commission IR : Infrared ISO : International organization for standardization MS : Mass spectrum NMR : Nuclear magnetic resonance PA : Pure analysis PĐ : Phân đoạn RSD : Relative standard deviation SKLM : Sắc ký lớp mỏng T : Thử TB : Trung bình TCKC1 : Thử cốt khí củ TCKC2 : Thử cốt khí củ TT : Thứ tự UV : Ultra violete VIS : Visible DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Độ tan Emodin số dung môi hữu 250C Bảng 3.1 Giá trị Rf màu sắc vết sắc ký cắn - Hệ I 29 Bảng 3.2 Giá trị Rf màu sắc vết sắc ký cắn - Hệ I 30 Bảng 3.3 Giá trị Rf màu sắc vết sắc ký cắn - Hệ I 31 Bảng 3.4 Giá trị Rf màu sắc vết sắc ký phân đoạn khảo sát với hệ dung môi I 35 Bảng 3.5 Giá trị Rf màu sắc vết sắc ký phân đoạn khảo sát với hệ dung môi II III 39 Bảng 3.6 Giá trị Rf màu sắc vết sắc ký cắn Emodin khảo sát với hệ dung môi I, II III 42 Bảng 3.7 Kết đo nhiệt độ nóng chảy cắn Emodin 45 Bảng 3.8 Số liệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân cắn Emodin 48 Bảng 3.9 Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc ký định lượng Emodin tinh chế Bảng 3.10 Kết định lượng Emodin tinh chế 50 56 Bảng 3.11 Một số thông số pic phụ sắc ký đồ dung dịch thử xác định giới hạn tạp chất liên quan Emodin tinh chế 58 Bảng 3.12 Kết xác định giới hạn tạp chất liên quan Emodin tinh chế 59 Bảng 3.13 Kết khảo sát khoảng tuyến tính 60 Bảng 3.14 Kết khảo sát độ phương pháp 63 Bảng 3.15 Kết định tính Emodin vị dược liệu Đại hồng SKLM 69 PHỤ LỤC SẮC KÝ ĐỒ KHẢO SÁT ĐỘ ĐÚNG CỦA PHƯƠNG PHÁP HPLC ĐÃ DÙNG ĐỊNH LƯỢNG EMODIN TINH CHẾ ĐƯỢC ... tài cấp ? ?Nghiên cứu phát triển liệu chuẩn số dược liệu thường dùng phục vụ công tác giám sát chất lượng dược liệu thuốc đông dược ” Khoa kiểm nghiệm Đông dược Dược liệu - Việm kiểm nghiệm thuốc. .. Xuất phát từ nhu cầu cần có chất chuẩn để phục vụ công tác kiểm tra chất lượng thuốc tiến hành đề tài ? ?Nghiên cứu thiết lập chất chuẩn Emodin từ Đại hồng phục vụ cơng tác kiểm tra chất lượng thuốc? ??... trăm chất chuẩn, chủ yếu chất chuẩn hố học có nguồn gốc tổng hợp phục vụ đắc lực cho công tác kiểm tra chất lượng thuốc Tuy nhiên nhiều chất chuẩn đặc biệt chất chuẩn có nguồn gốc dược liệu chưa