SENIMER báo cáo kỹ THUẬT KIỂM NGHIỆM dược chủ đề PHƯƠNG PHÁP điện DI

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN SENIMER BÁO CÁO KỸ THUẬT KIỂM NGHIỆM DƯỢC Chủ đề: PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI SINH VIÊN THỰC HIỆN Lê Thị Ngọc Trâm B1806589 Nguyễn Thị Kim Ngân B1806546 Hồ Thị Yến Nhi B1907335 Trần Khánh Tiên B1907369 GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN TS Nguyễn Quốc Châu Thanh NỘI DUNG KHÁI NIỆM NGUYÊN TẮC CÁC PHƯƠNG PHÁP ỨNG DỤNG KHÁI NIỆM Hiện tượng liên quan đến di chuyển protein, phân tử hay tiểu phân tích điện hịa tan phân tán dung dịch điện giải có dịng điện qua 2 NGUYÊN TẮC Khi phân tử tích điện đặt điện trường, chúng dịch chuyển cực (+) (-) tùy theo điện tích chúng  Protein có điện tích thực dương âm, cịn nucleic acid có điện tích âm khơng đổi nhờ khung phosphate dịch chuyển hướng đến cực dương 3 CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI a Điện di dung dịch tự b Điện di chất giá (điện di vùng) PHƯƠNG PHÁP a Điện di dung dịch tự  Nguyên tắc: Dung dịch đệm Protein ống hình chữ U tác dụng dịng điện hình thành nên lớp Protein có linh độ giảm dần KẾT QUẢ Các thơng Kiểm tra tinh mặt dịch chuyển định tính Phần di lớp biên định lượng chuyển hệ nhanh thành phần thống quang Protein Protein tách rõ học cho liệu để tính rệt khỏi Protein khác toán linh độ điện di b Điện di chất giá (điện di vùng) Giấy Polyacry lamid Agarose CÁC CHẤT GIÁ Acetat cellulose Gel tinh bột Thạch agaragar Chất giá thường dùng Agarose: polysaccharide tự nhiên, phân lập từ tảo biển, kích thước lỗ gel lớn, thích hợp phân tách phân tử kích thước lớn Dùng để phân tách Protein > 500 kDa DNA có kích thước > 2000 bp (base pair) Agarose gel Phân lập Điện di agarose gel Thiết bị điện di agarose gel gồm phận bản: nắp, khay vận hành buồng điện di + Nắp: nắp có đầu dây cáp điện nối điện cực buồng điện di với nguồn điện + Khay vận hành bao gồm: khay đổ gel, khuôn đổ gel, lược + Buồng điện di: nơi đặt gel trình điện di Buồng có rãnh để cài lược, hai điện cực tạo điện trường dung dịch Điện di agarose gel QUY TRÌNH ĐIỆN DI Polyacryamid Được hình thành trình đồng trùng hợp acrylamide cross linker, thông thường N,N’ methylenebisacrylami de N,N’methylenebisacrylamide acrylamide Điện di Polyacrylamide gel ỨNG DỤNG Phân tách acid amin, protein, DNA dung dịch cần phân tách Trong Y học: Điện di phân tách Protein huyết Điện di phân tách hemoglobin Điện di phân tách isoenzyme huyết Điện di Protein Trong dd đệm có pH khác với pHi Protein, phân tử Protein tích điện chuyển dịch điện cực trái dấu có dịng điện chiều chạy qua dd Điện di Protein Tốc độ di chuyển protein điện trường V = E.Q/f Trong đó: V: tốc độ di chuyển E:Cường độ điện trường Q: Điện tích protein f: hệ số ma sát, tùy thuộc vào khối lượng, hình dạng protein độ nhớt mơi trường Các yếu tố ảnh hưởng đến điện di Protein Dung dịch đệm Tiểu phân protein Nhiệt độ Điện Loại chất giá a Điện di protein huyết giấy Sơ đồ chậu điện di protein huyết giấy a Điện di protein huyết giấy Kết quả: Điện di protein huyết giấy tách 5-6 thành phần: albumin, globulin 1, 2, 1, a Điện di protein huyết giấy b Điện di protein huyết pp SDS - Polyacrylamide Nguyên tắc Protein gấp với điện tích thực Protein biến tính với điện tích âm đồng b Điện di protein huyết pp SDS - Polyacrylamide b Điện di protein huyết pp SDS Polyacrylamide w w w y o u r w e b s i t e c o m ... 3 CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI a Điện di dung dịch tự b Điện di chất giá (điện di vùng) PHƯƠNG PHÁP a Điện di dung dịch tự  Nguyên tắc: Dung dịch đệm Protein ống hình chữ U tác dụng dịng điện hình... gel Phân lập Điện di agarose gel Thiết bị điện di agarose gel gồm phận bản: nắp, khay vận hành buồng điện di + Nắp: nắp có đầu dây cáp điện nối điện cực buồng điện di với nguồn điện + Khay vận... khuôn đổ gel, lược + Buồng điện di: nơi đặt gel trình điện di Buồng có rãnh để cài lược, hai điện cực tạo điện trường dung dịch Điện di agarose gel QUY TRÌNH ĐIỆN DI Polyacryamid Được hình thành