SINH đại CƯƠNG

BÀI GIẢNG THỰC TẬP SINH HỌC ĐẠI CƯƠNG Mã môn học: BIO 101 Đà nẵng, 2017 Bài KÍNH HIỂN VI VÀ CÁCH LÀM TIÊU BẢN VI HỌC A MỤC TIÊU Trình bày ngun lí, cấu tạo, cách sử dụng bảo quản kính hiển vi Làm số loại tiêu hiển vi thông dụng Quan sát khác tiêu tế bào tiền nhân tế bào nhân chuẩn B NỘI DUNG Từ phát minh kính hiển vi lúc nhân loại tiến thêm bước khoa học nghiên cứu sống Đó nghiên cứu sinh vật cấp độ tế bào Theo thời gian, kính hiển vi ngày hoàn thiện chia thành nhiều chủng loại với nhiều tính khác Trong đó, đỉnh cao kính hiển vi điện tử có khả quan sát mức độ phân tử Đi kèm với thiếc bị quan sát, phương pháp xử lí mẫu vật loại thuốc nhuộm ngày đươc hoàn thiện theo, phù hợp với đối tượng mục đích nghiên cứu CHUẨN BỊ THÍ NGHIỆM 1.1 Dụng cụ Kính hiển vi quang học, phiến kính, kính, kim mũi mác, que cấy, khay men, dao, chậu thủy tinh, đũa thuỷ tinh nhỏ, ống nghiệm nhỏ 1.2 Hóa chất Nước cất, dung dịch lugol iốt loãng, hematocylin xanh metylen, cồn ethylic, chất chống đông 1.3 Mẫu vật Hành củ, ếch to, bèo hoa dâu sữa chua (hoặc tiêu vi khuẩn) NỘI DUNG THỰC TẬP 2.1 Kính hiển vi Kính hiển vi dụng cụ quang học dùng để quan sát vật thể nhỏ mà mắt thường không nhìn thấy Có nhiều kính hiển vi hình dạng, kích thước cơng dụng, song cấu tạo nguyên tắc sử dụng kính hiển vi quang học 2.1.1 Nguyên lý Vật quan sát AB (mẫu vật) đạt phía ngồi tiêu điểm (f) vật kính Vật kính tạo nên ảnh thật ngược chiều AB nằm phía ngồi tiêu điểm thị kính (F) Ảnh thật AB qua thị kính lại phóng đại lên lần thứ hai tạo nên ảnh có chiều AB (có nghĩa ngược chiều với vật) ảnh vật mà mắt người quan sát Như qua kính hiển vi, vật đươc phóng đại lên hai lần nhờ vật kính thị kính Độ phóng đại chung kính hiển vi (V) tích độ phóng đại riêng vật kính (Vvk) thị kính (Vtk) V = Vvk x Vtk Hình 1.1 Sơ đồ tạo ảnh kính hiển vi 2.1.2 Cấu tạo Kính hiển vi có phần : Phần học phần quang học (Hình 2) Hình 1.2 Sơ đồ cấu tạo kính hiển vi a Phần học Bao gồm tất phận kim loại với chức giữ cho phận quang học cố định vị trí thuận lợi cho hoạt động toàn hệ thống cho người sử dụng Phần học gồm: - Chân kính (đế kính) để giữ vững kính Ở kính đời mới, đèn gương nằm chân kính - Thân kính gồm phận: + Bộ phận chuyển gồm hai ốc chỉnh lớn nhỏ (đại cấp vi cấp), ốc điều chỉnh lớn dùng cho việc nâng lên hạ xuống mâm kính ống kính làm thay thay đổi khoảng cách vật kính vật cần quan sát, ốc nhỏ dùng để lấy nét hình ảnh + Mâm kính để đặt tiêu (có phận kẹp chặt tiêu vào mâm kính), có lỗ thủng hình trịn ánh sáng từ lên, tiêu di chuyển nhờ ốc gắng mâm kính + Giá tụ quang nằm mâm kính, để thay đổi khoảng cách tụ quang vật quan sát + Cần kính chỗ cầm di chuyển kính, đầu ngang thị kính, có gắng đĩa xoay có gắn vật kính có độ phóng đại khác Ống kính gắng vào đầu cần kính, có chiều dài định (160, 179, 190mm), phía thị kính b Phần quang học Gồm tất phận thủy tinh: Gương, tụ quang, vật kính, thị kính - Gương nằm chân kính hay thân kính, có mặt phẳng mặt lõm (mặt lõm cho cường độ ánh sáng mạnh hơn), xoay theo nhiều hướng khác để hứng ánh sáng Ở kính hiển vi hiên đại, ánh sáng lấy trực tiếp từ bóng đèn điện gắn chân kính Thơng qua chiết áp, người quan sát điều chỉnh để có cường độ ánh sáng thích hợp - Tụ quang hệ thống thấu kính dùng để hội tụ ánh sáng từ gương phản chiếu để tạo thành chùm tia sáng mạnh hơn, di chuyển lên xuống nhờ ốc chuyển Phía có hệ thống chắn sáng, có cần gạt để mở hay đóng lỗ chắn sáng giúp ta điều chỉnh nguồn ánh sáng vào nhiều hay Bên chắn sáng có thêm vịng mang kính lọc sáng (kính lọc màu xanh, vàng) - Vật kính: Là phận quan trọng phức tạp kính hiển vi, bên ngồi vỏ ghi: loại vật kính, độ phóng đại, độ mở, mơi trường soi kính Ví dụ: Vật kính có ghi 40/0,85 160/0,17 có nghĩa vật kính có trị số mở 0,85, độ phóng đại x40, chiều dài ống kính phù hợp 160mm, chiều dày kính trung bình 0,17mm ( 0,02mm) Khi dùng vật kính khơ (độ phóng đại nhỏ) mơi trường soi kính khơng khí (n = 1) Vật kính chia thành hai loại: Vật kính thường vật kính dầu Vật kính thường vật kính có độ phóng đại nhỏ ( ví dụ X10, X20, X40) Khi sử dụng vật kính thường, mơi trường soi kính khơng khí Vật kính dầu vật kính có độ phóng đại lớn (X90, X100) Khi sử dụng, để quan sát tiêu bản, vật kính dầu cần nhúng loại dầu đặc biệt có độ quang gần thủy tinh - Thị kính: có cấu tạo đơn giản vật kính, gồm hai thấu kính có mặt lõm hướng xuống phía dưới, mặt ghi độ phóng đại riêng như: X10, X15 2.2 Cách sử dụng kinh hiển vi 2.2.1 Chuẩn bị Khi quan sát kính hiển vi cần đặt vị trí cố định, có đủ ánh sáng tự nhiên hay ánh sáng điện Người quan sát cần ngồi thoải mái, không cao thấp so với kính lệch sang bên phải Vở vẽ ghi chép đặt phía bên phải kính cịn tiêu để phía bên trái Lau kính khăn mềm Chú ý lau bên ngồi, khơng tháo rời vật kính thị kính 2.2.2 Chiếu sáng Quay vật kính nhỏ (X10) vào vị trí quan sát Đối với kính hiển vi có đèn chiếu sáng chân kính cần cắm điện trực tiếp Đối với kính khơng có đèn nằm chân kính dùng gương hứng ánh sáng tự nhiên hay ánh sáng điện Dùng tụ quang chắn sáng điều chỉnh độ sáng cho thích hợp quan sát 2.2.3 Quan sát Đặt tiêu lên bàn kính kẹp chặt lại Điều chỉnh cho vật quan sát lỗ thủng bàn kính Bao quan sát vật kính nhỏ (X10) trước, mắt nhìn vào thị kính, tay vặn ốc chuyển lớn để nâng từ từ đầu kính lên (hoặc hạ bàn kính xuống) thấy vật kính trường Vặn ốc chuyển nhỏ để thấy vật rõ nét Khi muốn chuyển sang quan sát vật kính lớn ta giữ nguyên kính hiển vi xoay đĩa sang vật kính Khi muốn chuyển sang quan sát vật kính lớn ta nguyên kính hiển vi, xoay đĩa mang vật kính để đưa vật kính cần quan sát (ví dụ X40) vào vị trí làm việc, sau vặn ốc chuyển nhỏ để lấy nét Khi chuyển sang vật kính lớn cần điều chỉnh tụ quang chắn sáng để điều chỉnh độ sáng cho thích hợp Khi muốn quan sát vật kính lớn (X90, X100 – vật kính dầu) cần nhỏ lên tiêu dầu soi kính Khi quan sát xong, phải lau khăn mềm hay khăn bơng có thấm dung mơi thích hợp (toluen, xylen…) Việc sử dụng vật kính theo thứ tự từ nhỏ đến lớn giúp cho người quan sát nhanh chóng tìm đối tượng cần nghiên cứu tiêu vật kính có độ phóng đại nhỏ, phạm vi quan sát lớn Đồng thời, thứ tự giúp người quan sát giảm thiểu va chạm gây hư hỏng cho tiêu vật kính 2.2.4 Bảo quản kính hiển vi: Kính hiển vi dụng cụ quang học xác đắt tiền nên sử dụng bảo quản cần thận trọng Thao tác nhẹ nhàng, thận trọng, tránh va chạm, xơ đẩy làm kính sai lệch Giữ kính sẽ, bẩn ướt phải dùng khăn lâu mềm để lau Chú ý lau phần quang học học hai khăn riêng Tuyệt đối không sờ tay vào phần quang học mồ làm mốc kính Dùng xong xếp kính gọn, chụp túi nilơng chng thủy tinh để tránh bụi Khi di chuyển phải dùng hai tay, tay đỡ phía kính, tay cầm cần kính 2.3 Phương pháp làm số loại tiêu hiển vi 2.3.1 Phương pháp làm tiêu giọt ép Tiêu giọt ép loại tiêu thông dụng để quan sát mẫu vật sống mẫu vật định hình Cách tiến hành: Dùng pipet nhỏ giọt nước (hay dung dịch sinh lý, dịch mô hay thuốc nhuộm tùy trường hợp) lên phiến kính Dùng kim nhọn, kim mũi mác, hay bút lông đặt vật quan sát vào giọt nước Đậy lamen lên cho giọt nước chống hết lamen khơng có bọt khí đạt Có thể đậy lamen theo hai cách: Cách 1: Đặt cạnh lamen xuống cạnh giọt nước, nghiêng 45 o chờ nước giàn theo cạnh lamen hạ lamen xuống Cách 2: Nhỏ giọt nước tròn, gọn lam kính, nhỏ giọt nước lamen Sau đặt ngược lamen lên lam kính cho giọt nước tiếp xúc với nhau, buông tay Cách thường xảy tượng thừa nước chảy ngồi, ta dùng giấy thấm hút nước dư thừa Ngược lại thiếu nước ta dùng pipet đặt vào chỗ tiếp giáp lam kính lamen nơi thiếu nước Theo lực mao dẫn, nước từ pipet bổ sung vào đầy khoảng thiếu hụt cách làm tiêu giọt ép Hình 1.3 Cách làm tiêu giọt ép 2.3.2 Phương pháp làm tiêu vết bôi Loại tiêu thường sử dụng để quan sát vi sinh vật máu Cách tiến hành: Đặt mẫu vật lên phiến kính sạch, dùng đầu kim mũi mác (kim nhọn, que cấy, góc phiến kính) dàn mẫu vật theo vịng trịn có đường kính 0,5 -1,0 cm (dàn mỏng tốt) Sau hong khơ nhiệt độ phịng Cố định: Có thể làm theo cách tùy loại mẫu vật Cách 1: Tiêu cố định cách đưa nhanh qua lửa đèn cồn vài ba lần Cách 2: Tiêu ngâm dung dịch định hình (cồn ethylic, methylic…) khoảng phút Sau rửa nhẹ nước cất Nhuộm: Có nhiều phương pháp chủng loại thuốc nhuộm khác sử dụng trình làm tiêu hiển vi Một số loại thuốc nhuộm thường dùng để nhuộm tế bào sinh vật xanh methylen, fucsin kiềm, timas gentian, hematocylin… Quá trình nhuộm tiến hành sau: Nhỏ thuốc nhuộm trực tiếp cho phủ kín phần tiêu cần quan sát Tiến hành nhuộm khoản thời gian định (tùy loại tế bào sinh vật) Rửa qua nước hong khơ nhiệt độ phịng 2.3.3 Phương pháp làm tiêu dấu quét Phương pháp sử dụng nhiều nghiên cứu máu Cách tiến hành: Nhỏ giọt máu cần nghiên cứu lên đầu phiến kính Dùng ngón tay trỏ tay phải cầm kính đặt mép kính tiếp xúc với mép chất lỏng độ nghiêng góc 40 – 450 Để chất lỏng dàn mép kính Sau ta đẩy kính trượt đoạn phiến kính từ phải sang trái Sau hong khơ nhiệt độ phịng Các bước cố định, nhuộm tiêu tiến hành phương pháp vét bơi Hình 1.4 Cách làm tiêu dấu quét 2.4 Quan sát tế bào tiền nhân Tế bào tiền nhân (Prokaryote) gặp vi khuẩn, thường có kích thước nhỏ, cấu tạo đơn giản, nhân chưa hoàn chỉnh, thiếu hệ thống bào quan tế bào Cách tiến hành: Lấy khuôn bèo hoa đậu úp lên phiến kính chuẩn bị sẵn giọt nước, dùng kim mũi mác ấn nhẹ vài lần vớt bỏ bèo hoa dâu Đậy kính lên phần dịch lại quan sát Hướng dẫn quan sát: Khuẩn lam (Anabaena azollae) sơ thể Procaryote có khả tự dưỡng nhờ quang hóa sống cộng sinh bèo hoa dâu Trong thể đơn bào khuẩn lam có chứa chlorophyll (lục lạp) sắc tố khác thường thấy thực vật Tế bào khuẩn lam có dạng hình cầu, elipsoid, trứng sợi, sống riêng rẽ hay kết hợp thành tập đoàn Ở dạng tập đoàn, tế bào vi khuẩn thường nối với thành chuỗi, chuỗi bắt gặp tế bào dị hình có kích thước lớn tế bào khác 10 Bài NHÂN TẾ BÀO A MỤC TIÊU Làm tiêu máu ếch Quan sát tính đa dạng hình thái nhân tế bào máu người máu ếch Phân biệt loại bạch cầu có máu người B NỘI DUNG Nhân bào quan mang thông tin di truyền điều tiết hoạt động sống tế bào Ở tế bào tiền nhân (Prokaryote) nhân có cấu tạo đơn giản, bao gồm vùng gọi thể nhân màng bao bọc Khác với tế bào Prokaryote, tế bào nhân thật (Eukaryote) có nhân phân lập rõ ràng, bao bọc màng nhân, bên chứa dịch nhân, hạch nhân chất nhiễm sắc Số lượng, hình dạng, vị trí kích thước nhân phụ thuộc vào trạng thái hoạt động chức sinh lý tế bào Thường tế bào có nhân có loại tế bào nhiều nhân hay chí khơng có nhân hồng cầu động vật có vú Nhân tế bào hình trứng hay có dạng phân thùy số loại bạch cầu định CHUẨN BỊ THÍ NGHIỆM 1.1 Dụng cụ Kính hiển vi, phiến kính, kính dụng cụ phục vụ soi tế bào khác 1.2 Hóa chất Cồn ethylic 700, nước cất, xanh methylen, hematocylin – eosin, chất chống đông 1.3 Mẫu vật Tiêu máu người, ếch to NỘI DUNG THỰC TẬP 2.1 Quan sát tế bào bạch cầu máu người Bạch cầu máu tế bào hoàn chỉnh gồm màng tế bào, tế bào chất nhân Số lượng bạch cầu trung bình 6.200 -7.000 mm3 máu Hình dạng 17 chúng ln thay đổi tùy vị trí lịng mạch Chức bạch cầu tham gia vào hệ thống miễn dịch thể Bạch cầu phân thành nhóm Đó bạch cầu khơng hạt hay gọi bạch cầu đơn nhân (agranulocyte) chiếm tỷ lệ 30 – 40%, lại bạch cầu có hạt hay bạch cầu đa nhân (granulocyte) Bạch cầu không hạt gồm loại: Bạch cầu lympho (lymphocyte) Bạch cầu mono (monocyte) Bạch cầu hạt gồm loại: Bạch cầu trung tính (neutrophil) Bạch cầu ưa base (basophil) Bạch cầu ưa acid (eosinophil) Hình 3.1 Các loại bạch cầu: 1- Bạch cầu trung tính (Neutrophil); 2- Bạch cầu ưa acid (Eosinophil); 3- Bạch cầu ưa bazo (Basophil); 4- Bạch cầu Lympho (Lymphocyte); 5- Bạch cầu Mono (Monocyte) 18 Cách thức tiến hành: Lấy giọt máu nhỏ lam kính Làm tiêu dấu quét (xem lại 1) Để tiêu tự khơ, sau định hình cồn Metylic từ 1-3 phút (hoặc định hình hỗn hợp cồn tuyệt đối theo tỷ lệ 1/1) Dấu qt sau định hình để tự khơ (có thể làm khô lửa đèn cồn) Nhuộm tiêu Giemsa (hoặc Xanh methylen, hematocylin ) từ 15-20 phút tráng qua nước cất, chờ khô quan sát kính hiển vi Hướng dẫn quan sát: Ở vật kính 20X ta thấy nhiều tế bào hình cầu, kích thước nhỏ đặc biệt khơng có nhân, bắt màu hồng nhạt với thuốc nhuộm Đó hồng cầu erythrocyte chiếm tỷ lệ đáng kể: 1mm3 máu có từ 4,5 đến triệu hồng cầu chức chủ yếu hồng cầu thể vận chuyển trao đổi khí Xen kẽ tế bào hồng cầu ta thấy rõ số tế bào hình trịn, kích thước lớn hồng cầu, nhân đa dạng bắt màu tím đỏ, bạch cầu Lympho tỷ lệ xuất bạch cầu thường 600 hồng cầu có bạch cầu Quan sát vật kính X40 ta thấy kính trường có nhiều tế bào hình đĩa dẹt, kính thước nhỏ, khơng nhân, bắt màu hồng nhạt, hồng cầu chiếm tỷ lệ đáng kể khoảng – triệu hồng cầu/mm máu Xen kẽ tế bào hồng cầu ta bắt gặp tế bào hình trịn, kích thước lớn hồng cầu, có nhân đa dạng bắt màu tím đỏ - tế bào bạch cầu Sau số nét đặc trưng loại bạch cầu: Tế bào lympho (lymphocyte): Là tế bào hình cầu nhỏ, nhân lớn chốn gần hết khối tế bào chất trung bình, loại chiếm tỷ lệ 20 – 30% tổng số bạch cầu, giữ vai trò quan trọng phản ứng miễn dịch Tế bào mono (monocyte): Là tế bào lớn tổng số bạch cầu Chiếm 38% tổng số bạch cầu Đặc điểm bật nhàn lớn nằm lệch phía tế bào, bắt màu tím nhẹ Loại tế bào mono có khả xuyên qua thành mao mạch tĩnh mạch để xâm nhập vào mô liên kết Khi xâm nhập vào thể, vi sinh vật gây bệnh tạo nên ổ viêm Bạch cầu mono bị thu hút tới ổ viêm nhiễm tiêu diệt vi sinh vật gây bệnh theo phương thức thực bào Bạch cầu trung tính: Là tế bào hình trịn, kích thước khơng lớn so với hồng cầu (đường kính 10-15μm), nhân phân thành nhiều thùy, đoạn nhân 19 nối với sợi mảnh, tế bào chất có nhiều hạt khơng bắt màu Bạch cầu trung tính chiếm tỷ lệ cao 63-70% Chức chủ yếu bắt giữ vật thể lạ lối thực bào Bạch cầu ưa acid: Chiếm tỷ lệ 1-5% tổng số bạch cầu Đường kính 10-15μm nhân phân thành hai thùy rõ rệt sau nhuộm, tế bào chất có nhiều hạt bắt màu đỏ Số lượng máu không đáng kể Bạch cầu ưa base: Chiếm tỷ lệ khoảng 0,5% tổng số bạch cầu Đường kính 10-15μm Nhân có dạng uốn cong hình chữ S Sau nhuộm, tế bào chất có nhiều hạt bắt màu xanh Chức loại bạch cầu có liên quan đến vấn đề dị ứng phản ứng viêm 2.2 Quan sát nhân tế bào máu ếch Cách tiến hành: Lấy giọt máu ếch nhỏ lên phiến kính sạch, làm tiêu dấu quét vét bơi để khơ nhiệt độ phịng Định hình cồn tuyệt đối (hay hốn hợp cồn ether theo tỷ lệ 1:1) khoảng 30 giây Để khơ nhiệt độ phịng Nhuộm xanh methylen hematocylin 15-20 phút, sau rửa nhẹ qua nước cất, chờ khơ quan sát kính hiển vi Hướng dẫn quan sát: Quan sát tiêu ta thấy hầu hết tế bào hình ơvan có nhân bắt màu đỏ (hoặc xanh), tế bào hồng cầu máu ếch Ngồi ra, tiêu cịn có số tế bào bạch cầu tiểu cầu Hình 3.2 Tế bào máu ếch 20 ĐÁNH GIÁ Phân biệt vẽ dạng bạch cầu có máu người Tiêu máu ếch sạch, nhân tế bào bắt màu rõ, tế bào không bị vỡ Chỉ loại tế bào có máu ếch 21 Bài SỰ SINH SẢN CỦA TẾ BÀO A MỤC TIÊU Quan sát phương thức phân bào đặc trưng cho loại tế bào khác nhau: nguyên nhiễm, giảm nhiễm Giải thích chất phương thức ý nghĩa sinh học chúng Phân biệt giai đoạn trình phân bào B NỘI DUNG Mọi tế bào thể đa bào sinh từ kết phân chia liên tiếp từ tế bào Sự phân chia diễn theo phương thức có chất có ý nghĩa sinh học khác là: - Phân bào trực phân (amitosis) phương thức phân bào đơn giản Đặc điểm q trình khơng hình thành sợi nhiễm sắc thể thoi phân bào - Phân bào nguyên nhiễm hay gọi nguyên phân (mitosis) phương pháp phân bào để hình thành tế bào giống hệt tế bào mẹ Phương thức phổ biến đặc trưng cho tế bào soma - Phân bào giảm nhiễm hay giảm phân (meiosis) phương thức phân bào để hình thành giao tử thể sinh sản hữu tính 1.CHUẨN BỊ THÍ NGHIỆM 1.1 Dụng cụ Kính hiển vi, phiến kính, kính, đĩa Petri, pipet 1.2 Hóa chất Cacmin-acetic 45%, hematocylin 1.3 Mẫu vật - Củ hành ta - Tiêu giảm nhiễm châu chấu NỘI DUNG THỰC TẬP 2.1 Quan sát phân bào nguyên nhiễm rễ hành Phân bào nguyên nhiễm trình mà kết từ tế bào mẹ sinh hai tế bào giống chất lượng số lượng nhiễm sắc thể Trong 22 trình phân chia diễn tượng co xoắn sợi nhiễm sắc tạo nên dạng nhiễm sắc thể đặc trưng hình chữ X Nhiễm sắc thể (NST) thành phần cấu trúc mang thông tin di truyền nhân, thấy rõ kỳ trình phân bào NST tế bào Prokaryote có cấu tạo đơn giản, gồm sợi DNA xoắn kép Còn tế bào Eukaryote, NST có cấu tạo phức tạp nhiều Ngồi DNA, NST cịn có protein kiềm Mỗi loại có NST đặc trưng số lượng, hình dáng kích thước Ở người, số lượng NST 2n = 46 Bao gồm 44 NST thường NST giới tính, muỗi 2n = 6; hành 2n= Cách thức tiến hành Chúng ta quan sát mô phân sinh quan sinh dưỡng đầu rễ, phân bào xảy mạnh Sự thu nhận rễ xử lý tiến hành theo bước sau: - Chọn củ hành to, nhánh, khơng có sâu bệnh Bóc lớp vỏ khơ đặt củ hành lưới sắt cho phần rễ mọc rễ tiếp xúc với mặt nước bocan Khi rễ mọc dài độ 1-2 cm cắt phần đầu rễ cách chóp rễ 5mm sau cho vào dung dịch cố định cacnoi đe Sau xử lý đoạn rễ qua hệ thống cồn Cồn 96 0: lần (mỗi lần 10 phút) Cồn 80 0: lần (mỗi lần 10 phút) Lấy đoạn rễ (đã xử lý trên) đặt lên lam kính nhỏ sẵn giọt cacminaxetic 4% Hơ lam kính đèn cồn ( khơng nên để lam kính sát lửa) sau đậy lamen Để vài lượt giấy thấm lên lam kính, dùng ngón tay ấn nhẹ để rễ bẹp xuống, tế bào dàn thành lớp lam kính, nhiều tế bào giai đoạn phân chia ta quan sát kính hiển vi Có thể chuẩn bị tiêu theo cách khác đem ngâm đoạn rễ hành dung dịch cacmin – acetic 45% sau để tủ ấm 30 phút Sau đặt đoạn đầu rễ đặt lên lam kính nhỏ giọt axit acetic 45% để phút, sau đậy lamen nhắc lại động tác dàn tiêu 23 Hướng dẫn quan sát: Quá trình nguyên phân trình phức tạp bao gồm nhiều giai đoạn nối tiếp Đặc điểm hình thái cấu trúc nhiễm sắc thể biểu khác qua kỳ phân chia so với kỳ trung gian Người ta gọi biến đổi tế bào xảy từ lúc bắt đầu lần phân chia bắt đầu lần phân chia chu kỳ tế bào Một chu kỳ tế bào gồm giai đoạn: G1, S, G2, M Ký hiệu M để giai đoạn phân bào, giai đoạn chiếm phần nhỏ chu kỳ sống tế bào, thời gian lại gọi kỳ trung gian Kỳ trung gian chia làm giai đoạn G1, S, G2 Giai đoạn G1: giai đoạn này, tế bào tổng hợp RNA, protein Quan sát kính hiển vi độ phóng đại x40, ta nhìn thấy rõ nhiều tế bào hành xếp xít Mỗi tế bào có nhân (bắt màu đậm), nhân có hạch nhân (màu đỏ thẫm), tế bào chất mầu nhạt Trên kính hiển vi điện tử quan sát thấy nhiễm sắc thể dạng sợi mảnh, vặn xoắn lỏng lẻo Gian đoạn S: tượng quan trọng xảy giai đoạn nhân đôi DNA nhân Từ sợi chromatit ban đầu hình thành hai chromatit giống hệt Sự phân đôi DNA thực đường bán bào toàn, nghĩa chuỗi xoắn kép gồm có mạch cũ mạch tổng hợp hoàn toàn Giai đoạn G2: quãng thời gian từ sau DNA nhân đôi lúc tế bào bắt đầu bước vào phân chia Giai đoạn M: giai đoạn phân bào Ở tế bào ta thấy nhân phồng lên, màng nhân trở nên mỏng, xốp so với tế bào khác, số tế bào khác, ta khơng cịn quan sát thấy màng nhân hạch nhân Trong tế bào chất xuất thể nhiễm sắc dạng sợi, nằm tự chưa định hướng Độ bắt màu độ xoắn chiều dài chúng khơng tế bào Đó tế bào giai đoạn phân chia Đi sâu vào đặc điểm kỳ ta thấy hình dạng cấu trúc nhiễm sắc thể sau: 24 - Kỳ đầu (prophase): nhìn rõ cấu trúc sợi nhiễm sắc thể, chúng bắt màu mạnh kỳ trung gian Cuối kỳ đầu sợi nhiễm sắc thể trở nên dày ngắn, đa số tế bào khơng nhìn thấy màng nhân - Kỳ (metaphase): Nhiễm sắc thể có cấu trúc sợi đơi rõ bắt màu đỏ thẫm, chúng tập trung mặt xích đạo Thời điểm nhiễm sắc thể có độ xoắn tối đa, có độ dài ngắn Thoi vô sắc xuất Cuối kỳ tâm động hướng nhiễm sắc thể cực đối diện tế bào - Kỳ cuối (telophase): thể nhiễm sắc đến hai cực tế bào Chúng bắt đầu duỗi xoắn, màng nhân xuất vạch ngắn để chia tế bào, phân chia tế bào 2.2 Quan sát phân bào nhiễm sắc thể tinh hoàn châu chấu Phân bào giảm nhiễm đặc trưng cho động vật thực vật có sinh sản hữu tính Q trình giảm phân gồm hai lần giảm phân I giảm phân II Kết cuối từ tế bào mẹ số nhiễm sắc thể (2n) cho tế bào có số nhiễm sắc thể giảm nửa (n) Hướng dẫn quan sát Quan sát tiêu mẫu Tinh hoàn châu chấu bao gồm nhiều ống sinh tinh Trong ống phát triển hàng triệu tinh trùng Những tế bào sinh dục gọi tinh nguyên bào Trong trình phát triển, tinh nguyên bào phân chia theo kiểu nguyên phân làm cho số tinh nguyên bào nhiều lên Sự phát sinh tinh trùng lúc tinh nguyên bào lớn trở thành tế bào lớn gọi tinh bào cấp I tinh bào bước vào thời kỳ phân chia giảm nhiễm - Kỳ đầu I giảm phân kéo dài, bao gồm nhiều giai đoạn, nhiều trình phức tạp xảy Nhưng tiêu ta quan sát giai đoạn cuối Lúc nhiễm sắc thể có nhiều hình dạng dấu +, chữ V, số 8, chữ x, chữ o phụ thuộc vào quay nhiễm sắc thể - Ở kỳ I ta không quan sát thấy màng nhân, phân chia xuất tâm động cặp nhiễm sắc thể hướng cực tế bào, nhiễm sắc thể chuẩn bị phân li 25 - Kỳ sau I: Các nhiễm sắc thể cặp tương đồng tách hai cực - Kỳ cuối I: Các nhiễm sắc thể tương đồng giữ nguyên hình thái, nằm hai cực tế bào, hình thành màng nhân bao quanh nhiễm sắc thể Thông thường sau nhân phân chia, tế bào chất phân chia theo tạo nên hai tế bào tiêu giảm nhiễm châu chấu ta thấy tế bào chất không phân chia mà lần phân chia thứ phân bào giảm nhiễm, tế bào chất phân chia Như vậy, sau lần phân chia thứ tạo thành nhân lưỡng bội tế bào tạo thành bốn nhân đơn bội sau lần phân chia thứ ĐÁNH GIÁ - Tiêu rễ hành mỏng, sạch, nhìn thấy rõ tế bào, tiêu có tế bào phân chia kỳ khác - Phân biệt kỳ nguyên phân tế bào rễ hành - Phân biệt kỳ giảm phân tế bào tinh hoàn châu chấu Chú ý: pha hóa chất Cacmin: thứ bột màu đỏ có nguồn gốc động vật tan cồn, axit nước Nồng độ thích hợp: 4-5% axit axetic 45% để nhuộm tế bào thể nhiễm sắc phèn chua để nhuộm màng tế bào thực vật: Pha 10g phèn kali (KAl(SO 4)2.12H2O) hay phèn amoni (NH4Al(SO4)2) 100ml nước cất Thêm vào 1g Cacmin Đun sôi dung dịch khoảng 1h, để nguội lọc Thêm vào 1g phenol để bảo quản 26 Bài 5: SỰ VẬN CHUYỂN CÁC CHẤT QUA MÀNG TẾ BÀO A MỤC TIÊU Quan sát tượng thẩm thấu qua màng dẫn đến co phản co nguyên sinh tế bào thực vật Quan sát tượng tan bào teo bào tế bào động vật B NỘI DUNG DỤNG CỤ, HÓA CHẤT, MẪU VẬT 1.1 Dụng cụ: Kính hiển vi với vật kính X10, X40, lam kính, lamen, kim mũi mác, lưỡi dao cạo, đèn cồn, cốc thủy tinh, đĩa đồng hồ, giấy thấm 1.2 Hoá chất: Nước cất, dung dịch NaCl 10% 0,6% 1.3 Mẫu vật: Lá rong mái chèo tươi, củ hành khô, thân hành ta, ếch sống ( máu tươi ếch) NỘI DUNG THÍ NGHIỆM 2.1 Quan sát tế bào bào quan tế bào rong mái chèo Ngâm rong tươi cốc nước 30 oC thời gian 15 phút Cuộn vào ngón tay trỏ bàn tay trái để làm chỗ tì, tay phải cầm lưỡi dao lam, cạo hớt nhẹ lớp mỏng mặt Đặt miếng lên lam kính, nhỏ giọt nước, đậy lamen, quan sát kính hiển vi Lúc đầu quan sát bội kính bé trước chuyển sang quan sát bội giác lớn Ta thấy tế bào xếp sát nhau, chung quanh có thành, sát mép thành có tế bào chất, tế bào chất có hạt lục lạp màu lục, ta thấy nhân phình to lục lạp Quan sát, vẽ tế bào phận nhỏ tế bào 2.2 Co phản co nguyên sinh tế bào thực vật (củ hành khơ) Dùng kim mũi mác bóc lớp tế bào biểu bì hành Đặt miếng biểu bì lam kính nhỏ sẵn giọt nước, đậy lamen quan sát Ta thấy vô số tế bào hành xếp sát Mỗi tế bào cấu tạo màng, nguyên sinh chất, nhân Các không bào tế bào tương đối lớn chiếm phần lớn thể tích tế bào Nhỏ vào mép lamen giọt nước muối NaCl 10% Dùng miếng giấy thấm đặt phía bên 27 lamen để hút hết phần nước dung dịch muối thay hoàn toàn Sau – phút ta thấy màng tế bào tách khỏi lớp vỏ xenlulozơ → thể tích tế bào chất bị thu hẹp lại Đó tượng co sinh chất Giữ nguyên tiêu vị trí này, dùng ống hút nhỏ vài giọt nước mép lamen mép lamen phía đối diện, dùng giấy thấm hút hết dung dịch muối ra,quan sát thấy tượng ngược lại với co nguyên sinh chất: Thể tích tế bào chất không bào mở rộng trở vị trí ban đầu nước hút ngược trở lại Đó tượng phản co nguyên sinh Nếu giết chết tế bào (hơ lam kính lửa đèn cồn) giữ trạng thái tế bào co nguyên sinh sau thời gian dài Lặp lại thí nghiệm nhận xét tượng Cũng cách làm tương tự trên, ta cho tế bào dung dịch NaCl 0,6% Quan sát tượng xảy tự giải thích 2.3 Co nguyên sinh tế bào thực vật (thân hành) – Cắt đoạn thân hành (phần thân màu trắng) Dùng lưỡi lam bổ dọc thành hai, sau bóc tách – Bóc lớp biểu bì hành đặt lên lam kính – Dùng lamen đặt hai bên miếng biểu bì hành nhỏ vào giọt dung dịch đường 20%, dùng lamen thứ đậy lên mẫu Quan sát kính thời điểm sau nhỏ đung dịch đường, sau 10 phút sau 20 phút Nhận xét kết giải thích 2.4 Hiện tượng tan bào teo bào động vật (tế bào máu người máu ếch) Nhỏ giọt máu người máu ếch lên lam kính, đậy lamen, quan sát kính hiển vi thấy nhiều tế bào hình cầu trơi lơ lửng huyết tương máu, hồng cầu huyết cầu sáng không màu, có hình đĩa với hai mặt lõm Quansát thay đổi hình dạng hồng cầu để chúng dung dịch có áp suất thẩm thấu khác Nhỏ vào mép lamen giọt NaCl 0,6%, quan sát bội giác X 40 thấy hồng cầu bị trương lên, tế bào bị căng phồng vỡ tung tượng tan bào Khi đặt hồng cầu dung dịch nhược trương (NaCl 0,6%) gây trạng thái nước vào tế bào nên tế bào bị trương lên vỡ tung (Trường hợp máu ếch khơng có tượng xảy dung dịch 28 NaCl 0,6% đẳng trương máu ếch) Lấy giọt máu khác, đậy lamen, nhỏ giọt NaCl 10% vào mép lamen Hiện tượng xảy tương tự tế bào vỏ hành Nhưng tế bào hồng cầu có hai lớp màng mỏng nước từ tế bào chảy ngồi làm cho thể tích tế bào bị thu hẹp lại, màng tế bào nhăn nhúm Đó tượng teo bào hồng cầu để dung dịch ưu trương a, Tế bào bình thường; b, tế bào co nguyên sinh Kiểm tra đánh giá kết thực hành Giải thích chế co nguyên sinh tế bào thực vật tượng tan bào teo bào tế bào động vật? 29 Phụ lục Bài .1 KÍNH HIỂN VI VÀ CÁCH LÀM TIÊU BẢN VI HỌC .3 A MỤC TIÊU .3 B NỘI DUNG .3 CHUẨN BỊ THÍ NGHIỆM .3 1.1 Dụng cụ 1.2 Hóa chất 1.3 Mẫu vật NỘI DUNG THỰC TẬP 2.1 Kính hiển vi 2.1.1 Nguyên lý 2.1.2 Cấu tạo 2.2 Cách sử dụng kinh hiển vi 2.3 Phương pháp làm số loại tiêu hiển vi .8 2.4 Quan sát tế bào tiền nhân 10 2.5 Quan sát tế bào nhân thật 11 ĐÁNH GIÁ 12 Bài .13 CÁC BÀO QUAN TRONG TẾ BÀO 13 A MỤC TIÊU .13 B NỘI DUNG .13 CHUẨN BỊ THÍ NGHIỆM .13 NỘI DUNG THỰC TẬP 13 ĐÁNH GIÁ 16 Bài .17 NHÂN TẾ BÀO 17 A MỤC TIÊU .17 B NỘI DUNG .17 CHUẨN BỊ THÍ NGHIỆM .17 NỘI DUNG THỰC TẬP 17 ĐÁNH GIÁ 21 Bài .22 SỰ SINH SẢN CỦA TẾ BÀO 22 A MỤC TIÊU .22 30 B NỘI DUNG .22 1.CHUẨN BỊ THÍ NGHIỆM 22 NỘI DUNG THỰC TẬP 22 ĐÁNH GIÁ 26 Bài 5: SỰ VẬN CHUYỂN CÁC CHẤT QUA MÀNG TẾ BÀO .27 A MỤC TIÊU .27 B NỘI DUNG .27 DỤNG CỤ, HÓA CHẤT, MẪU VẬT .27 NỘI DUNG THÍ NGHIỆM .27 31 ... phóng đại lên lần thứ hai tạo nên ảnh có chiều AB (có nghĩa ngược chiều với vật) ảnh vật mà mắt người quan sát Như qua kính hiển vi, vật đươc phóng đại lên hai lần nhờ vật kính thị kính Độ phóng đại. .. ngồi vỏ ghi: loại vật kính, độ phóng đại, độ mở, mơi trường soi kính Ví dụ: Vật kính có ghi 40/0,85 160/0,17 có nghĩa vật kính có trị số mở 0,85, độ phóng đại x40, chiều dài ống kính phù hợp 160mm,... dùng vật kính khơ (độ phóng đại nhỏ) mơi trường soi kính khơng khí (n = 1) Vật kính chia thành hai loại: Vật kính thường vật kính dầu Vật kính thường vật kính có độ phóng đại nhỏ ( ví dụ X10, X20,