(LUẬN văn THẠC sĩ) kết hợp hình thái và sinh học phân tử trong nghiên cứu chẩn loại giống rắn cạp nia bungarus, daudin, 1803 ở việt nam

BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - NGUYỄN QUỐC HUY LUẬN VĂN THẠC SĨ NGÀNH SINH HỌC KẾT HỢP HÌNH THÁI VÀ SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG NGHIÊN CỨU CHẨN LOẠI GIỐNG RẮN CẠP NIA BUNGARUS DAUDIN, 1803 Ở VIỆT NAM Hà Nội – 2021 download by : skknchat@gmail.com BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM VÀ ĐÀO TẠO KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VN HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ NGUYỄN QUỐC HUY KẾT HỢP HÌNH THÁI VÀ SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG NGHIÊN CỨU CHẨN LOẠI GIỐNG RẮN CẠP NIA BUNGARUS DAUDIN, 1803 Ở VIỆT NAM Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 42 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ NGÀNH SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC : Hướng dẫn 1: PGS TS Nguyễn Thiên Tạo Hướng dẫn 2: TS Nguyễn Vĩnh Thanh Hà Nội - 2021 download by : skknchat@gmail.com I LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đề tài nghiên cứu luận văn cơng trình nghiên cứu tơi dựa tài liệu, số liệu tơi tự tìm hiểu nghiên cứu Chính vậy, kết nghiên cứu đảm bảo trung thực khách quan Đồng thời, kết chưa xuất nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực sai tơi hồn chịu trách nhiệm Hà Nơi, ngày tháng năm 2021 Nguyễn Quốc Huy download by : skknchat@gmail.com II LỜI CẢM ƠN Lời cảm ơn đến thầy PGS TS Nguyễn Thiên Tạo, TS Nguyễn Vĩnh Thanh hướng dẫn tận tình, chu đáo, giúp đỡ tơi q trình khảo sát thực địa, phân tích số liệu, cơng bố cơng trình khoa học hồn thiện luận văn Xin trân trọng cảm ơn GS TS Nguyễn Quảng Trường, TS Phạm Thế Cường, TS Lương Mai Anh, ThS Phan Quang Tiến (Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật), NCS Ninh Thị Hịa, NCS Ngơ Ngọc Hải (Bảo tàng Thiên nhiên Việt Nam) đồng nghiệp hỗ trợ trình khảo sát thực địa, cung cấp hình ảnh, số liệu hỗ trợ cơng tác phân tích mẫu phịng thí nghiệm luận văn Xin trân trọng cảm ơn Cán thuộc phòng Bảo tồn Thiên nhiên – Bảo tàng Thiên nhiên Việt Nam Ban lãnh đạo Bảo tàng Thiên nhiên Việt Nam tạo điều kiện thuận lợi cho học tập nghiên cứu Xin trân trọng cảm ơn phòng Động vật – Viện Sinh thái Tài Nguyên Sinh vật hỗ trợ mẫu vật để tơi có nguồn tư liệu thể hồn thành luận văn Xin tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình người thân hết lịng giúp đỡ, động viên tơi q trình thực đề tài hoàn thành luận văn Xin trân trọng cảm ơn ban Lãnh đạo, phòng Đào tạo, phòng chức Học viện Khoa học Cơng nghệ để luận văn hồn thành Nghiên cứu tài trợ đề tài độc lập cấp quốc gia mã số ĐTĐLCN.38/21 Hà Nôi, ngày tháng năm 2021 Nguyễn Quốc Huy download by : skknchat@gmail.com III MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học đề tài Những đóng góp đề tài CHƯƠNG TỔNG QUAN VỀ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU 1.1 Lịch sử nghiên cứu bò sát Việt Nam 1.2 Tổng quan mã vạch ADN (DNA-barcodes) 1.3 Các nghiên cứu bổ sung dẫn liệu phân loại học 1.4 Tổng quan nghiên cứu giống Bungarus 1.4.1 Trên giới 1.4.2 Ở Việt Nam 1.5 Khái quát điều kiện tự nhiên Việt Nam 10 1.5.1 Địa hình 10 1.5.2 Khí hậu 11 1.5.3 Thủy văn 11 1.5.4 Thảm thực vật 12 CHƯƠNG 2: THỜI GIAN, ĐỊA ĐIỂM, PHƯƠNG PHÁP VÀ TƯ LIỆU NGHIÊN CỨU 13 2.1 Đối tượng nghiên cứu 13 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 13 2.3 Phương pháp nghiên cứu 16 2.3.1 Phương pháp tiếp cận giải vấn đề nghiên cứu 16 2.3.2 Phương pháp kế thừa 16 2.3.3 Phương pháp khảo sát thực địa thu thập mẫu vật nghiên cứu 16 2.3.5 Phương pháp phân tích hính thái 17 2.3.6 Phương pháp phân tích sinh học phân tử 19 download by : skknchat@gmail.com IV 2.3.7 Xử lý số liệu 20 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN .22 3.1 Thành phần loài giống Bungarus Việt Nam 22 3.1.1 Danh sách loài Bungarus ghi nhận Việt Nam 22 3.1.2 Đặc điểm hình thái lồi Bungarus ghi nhận Việt Nam 23 3.2 Khóa định loại lồi giống Bungarus Việt Nam 41 3.3 Đặc điểm phân tử vùng gen COI quần thể loài Bungarus 41 3.3.1 Kết tách chiết ADN tổng số mẫu giống Rắn cạp nia Bungarus Việt Nam 41 3.3.2 Nhân trình tự ADN đích vùng gen COI mẫu giống Rắn cạp nia Bungarus Việt Nam 46 3.3.3 Xác định trình tự nucleotide vùng gen COI lồi giống Bungarus Việt Nam 46 a Trình tự đoạn gen COI loài B candidus 46 3.3.4 Mối quan hệ di truyền loài giống Bungarus Việt Nam 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO .55 download by : skknchat@gmail.com V DANH MỤC BẢNG Bảng 2.2 Cặp mồi sử dụng nghiên cứu quan hệ di truyền giống Bungarus 20 Bảng 3.1 Danh sách loài Bungarus ghi nhận Việt Nam 233 Bảng 3.2: Đặc điểm hình thái lồi Bungarus nghiên cứu 399 Bảng 3.3 Độ hàm lượng ADN 09 mẫu giống Rắn cạp nia Bungarus Việt Nam 42 Bảng 3.4 Thơng tin trình tự gen sử dụng nghiên cứu 443 download by : skknchat@gmail.com VI DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Địa điểm thu thập mẫu vật loài thuộc giống Bungarus Việt Nam 144 Hình 2.2 Vị trí vảy toàn thể loài rắn cạp nia 199 Hình 3.1 Rắn cạp nia nam/B candidus: IEBR/NT.2016.94 277 Hình 3.2.Các đặc điểm hình thái B multicinctus lồi B “wanghaotingi” B candidus 278 Hình 3.3 Bản đồ phân bố loài B candidus Việt Nam 288 Hình 3.4 Rắn cạp nia sơng hồng/B slowinskii: ♂IEBR/K233 3131 Hình 3.5 Bản đồ phân bố loài B slowinskii Việt Nam 3232 Hình 3.6 Rắn cạp nong/B fasciatus: ♂ VMNN 07958 355 Hình 3.7 Bản đồ phân bố loài B fasciatus Việt Nam 366 Hình 3.8 Bản đồ phân bố lồi B flaviceps Việt Nam 388 Hình 3.9 Kết điện di DNA tổng số 09 mẫu giống Rắn cạp nia Bungarus Việt Nam gel agarose 1% (các giếng từ 1-9 thứ tự mẫu tương ứng với số thứ tự bảng 3.2) 42 Hình 3.10 Sản phẩm PCR 09 mẫu mẫu giống Rắn cạp nia Bungarus Việt Nam phân tích với cặp mồi COI điện di gel agarose 1% (M: Marker phân tử 100bp; VQN1-9: ký hiệu mẫu) 466 Hình 3.11 Sơ đồ peak giải trình tự vùng gen COI loài Rắn cạp nia nam B candidus 477 Hình 3.12 Sơ đồ peak giải trình tự vùng gen COI lồi Rắn cạp nia sông hồng B slowinskii 488 Hình 3.13 Cây quan hệ di truyền loài thuộc giống Bungarus xây dựng mơ hình BI 52 download by : skknchat@gmail.com VII DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CÁC TỪ VIẾT TẮT Ký hiệu Nội dung cs Cộng NCBI National Center for Biotechnology Information OD Mật độ quang học (Optical Density) PCR Polymerase Chain Reaction bp Cặp bazơ (base pair) BLAST Basic Local Alignment Search Tool TAE Tris Acetate EDTA IEBR Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật IUCN Tổ chức Bảo tồn Thiên nhiên Quốc tế KBTTN Khu Bảo tồn thiên nhiên Max Giá trị lớn Min Giá trị nhỏ VQG Vườn Quốc gia VNMN Bảo tàng Thiên nhiên Việt Nam ♂ Con đực ♀ Con download by : skknchat@gmail.com MỞ ĐẦU TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Việt Nam trong 25 quốc gia có mức độ dạng sinh học cao giới (Myers cs 2000) [Error! Reference source not found.] trong có khu hệ bị sát Số lượng lồi tăng nhanh thập kỷ gần đây: từ ghi nhận 258 vào năm 1996, Nguyễn Văn Sáng Hồ Thu Cúc lên đến 368 loài vào năm 2009 (Nguyễn cs 2009) [2], 420 loài vào năm 2013 Cho tới 500 lồi (tính đến tháng 10-2021 theo Uetz & Hošek 2021 [3] Nhiều lồi phát mơ tả ghi nhận phát Việt Nam hai thập kỷ gần đây, giống Bungarus có loài Bungarus slowinskii Kuch cs phát mô tả năm 2005 [4] Giống rắn cạp nia Bungarus, Daudin 1803 thuộc họ rắn hổ Elapidae, F Boie, 1827 nhóm rắn có nọc độc, ghi nhận 16 lồi giới có vùng phân bố chủ yếu khu vực Đông Nam Á từ Pakistan, Ấn Độ Afghanistan phía tây, phía đơng nhiệt đới Đơng Nam Á, tồn tiểu vùng Ấn Trung phần lại Châu Á (Slowinski, 1994; Kharin cs 2011; Uetz & Hošek, 2020) [5, 6, 3] Ở Việt Nam ghi nhận loài thuộc giống bao gồm: Bungarus bungaroides, B candidus, B fasciatus, B flaviceps, B multicinctus, B slowinskii [3] Về mặt phân loại học, nhiều lồi giống Bungarus có hình thái giống khó định loại (Wall 1907; Slowinski 1994; Kuch 2007; Abtin cs 2014) [7, 5, 8,9], khu vực phân bố lồi chồng chéo, số loài phân biệt dựa vùng địa lý [4, 3] Ví dụ như: khoanh đen, khoanh trắng Rắn cạp nia đông bắc (Bungarus bungaroides), Rắn cạp nia bắc (Bungarus multicinctus), Rắn cạp nia nam (Bungarus candidus) Rắn cạp nia sơng Hồng (Bungarus slowinskii) Ngồi ra, số lồi thường bị nhầm lẫn với giống rắn giả cạp nia Lygodon hình thái [8] Việc định loại xác định phân bố tự nhiên lồi nhóm rắn độc Bungarus sở khoa học quan trọng việc nghiên cứu độc tố độc điều trị rắn độc cắn (Fry cs 2003; Williams cs 2011) [10, 11] Mã vạch ADN (DNA barcoding) sử dụng đoạn ADN ngắn để phân biệt loài [12, 13, Error! Reference source not found.] công cụ phục download by : skknchat@gmail.com 54 lồi B wanghaotingi khơng phân bố Việt Nam Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu khác loài thuộc giống Bungarus Việt Nam, tập trung vào vấn đề sau: Thu thập bổ sung mẫu vật để phân tích đặc điểm hình thái sinh học phân tử loài B flaviceps tự nhiên loài khác giống để làm rõ mối quan hệ quần thể khác loài khác loài giống Tiến hành nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh thái loài thuộc giống Bungarus Việt Nam để phát triển thành cơng điều kiện nuôi nhốt nhằm hạn chế khai thác trực tiếp tự nhiên download by : skknchat@gmail.com 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO Myers, N., Mittermeier, R A., Mittermeier, C G., Da Fonseca, G A., & Kent, J (2000) Biodiversity hotspots for conservation priorities Nature, 403(6772), 853-858 Nguyen, S.V., Ho, C.T and Nguyen, T.Q 2009 Herpetofauna of Vietnam Chimaira, Frankfurt, 768 pp Uetz, P., Freed, P & Hošek, J (eds.) (2021) The Reptile Database, http://www.reptile-database.org, accessed Kuch, U.; Kizirian, D.; Nguyen, Q.T.; Lawson, R.; Donnelly, M.A & Mebs, D 2005 A new species of krait (Squamata: Elapidae) from the Red River System of Nothern Vietnam Copeia 2005 (4): 818-833 Slowinski, J.B (1994) A phylogenetic analysis of Bungarus (Elapidae) based on morphological characters Journal of Herpetology, 28, 440– 446 Kharin V E., Orlov N L., and Ananjeva N B (2011), “New records and redescription of rare and little-known Elapid snake Bungarus slowinskii (Serpentes: Elapidae: Bungari-nae),” Russian Journal of Herpetoly 18(4), 284 – 294 Wall, F (1907) A new krait from Oudh (Bungarus walli) J Bombay Nat Hist Soc, 17, 608-611 Kuch, Ulrich & Dietrich Mebs 2007 The identity of the Javan Krait, Bungarus javanicus Kopstein, 1932 (Squamata: Elapidae): evidence from mitochondrial and nuclear DNA sequence analyses and morphology Zootaxa 1426: 1-26 Abtin, E., Nilson, G., Mobaraki, A., Hosseini, A A., & Dehgannejhad, M (2014) A new species of krait, Bungarus (Reptilia, Elapidae, Bungarinae) and the first record of that genus in Iran Russian Journal of Herpetology, 21(4) 10.Fry, B G., & WinKeL, K D J c WicKramaratna, W c hoDGson, anDW Wüster 2003 Effectiveness of snake antivenom: species and regional venom variation and its clinical impact J Toxicol Toxin Rev, 22, 23-34 download by : skknchat@gmail.com 56 11.Williams, D J (2011) Gutié rrez JM, Calvete JJ, Wü ster W, Ratanabanangkoon K, Paiva O, et al Ending the drought: New strategies for improving the flow of affordable, effective antivenoms in Asia and Africa J Proteomics, 74, 1735-1767 12.Hebert P.D.N., Penton E.H., Burns J.M., Janzen D.H., Hallwachs W (2004) Ten species in one: DNA barcoding reveals cryptic species in the neotropical skipper butterfly Astraptes fulgerator PNAS 101: 1481214817 13.Liu J, Provan J, Gao LM, Li DZ (2012a) Sampling strategy and potential utility of indels for DNA barcoding of closely related plant species: A case study in Taxus Int J Mol Sci, 13: 8740-8751 14.Liu, Z., Zeng, X., Yang, D., Ren, G., Chu, G., Yuan, Z., & Chen, S (2012) Identification of medicinal vines by ITS2 using complementary discrimination methods Journal of Ethnopharmacology, 141(1), 242249 15.Chen S, Yao H, Han J, Liu C, Song J, Shi L, Zhu Y, Ma X, Gao T, Pang X, Luo K, Li Y, Li X, Jia X, Lin Y, Leon C (2010) Validation of the ITS2 region as a novel DNA barcode for identifying medicinal plant species PloS one, (1): e8613 16.Gao, T., Yao, H., Song, J., Liu, C., Zhu, Y., Ma, X., & Chen, S (2010) Identification of medicinal plants in the family Fabaceae using a potential DNA barcode ITS2 Journal of ethnopharmacology, 130(1), 116-121 17.Hollingsworth ML, Clark AA, Forrest L, Richardson J, Pennington R, Long D, Cowan R, Chase M, Gaudeul M, Hollingsworth P (2009) Selecting barcoding loci for plants: evaluation of seven candidate loci with species‐level sampling in three divergent groups of land plants Molecular Ecology Resources, (2): 439-457 18.Group, C P B., Li, D Z., Gao, L M., Li, H T., Wang, H., Ge, X J., & Duan, G W (2011) Comparative analysis of a large dataset indicates that internal transcribed spacer (ITS) should be incorporated into the core download by : skknchat@gmail.com 57 barcode for seed plants Proceedings of the National Academy of Sciences, 108(49), 19641-19646 19.Chen, Z N., Shi, S C., Vogel, G., Ding, L., & Shi, J S (2021) Multiple lines of evidence reveal a new species of Krait (Squamata, Elapidae, Bungarus) from Southwestern China and Northern Myanmar ZooKeys, 1025, 35 20.Nguyen, S N., Nguyen, V D H., Nguyen, T Q., Le, N T T., Nguyen, L T., Vo, B D., & Zhang, Y P (2017) A new color pattern of the Bungarus candidus complex (Squamata: Elapidae) from Vietnam based on morphological and molecular data Zootaxa, 4268(4), 563-572 21.Xie, Y., Wang, P., Zhong, G., Zhu, F., Liu, Q., Che, J., & Guo, P (2018) Molecular phylogeny found the distribution of Bungarus candidus in China (Squamata: Elapidae) 动物分类学报, 43(1), 109117 22.Nguyen, Q T., Nguyen, V S., Dang, T T & Nguyen, T T., 2009 Diversity of venomous snakes in Vietnam, pp 159–167 In: Ngo, D C., 23.Bourret R (1936), “Les serpents de l’Indochine”, H Dasuyau, Toulouse, et 2, pp 141-505 24.Bourret R (1940), Notes Herpộtologiques sur lIndochine franỗaise Vol XXI Reptiles et Batraciens reỗus au Laboratoire des Sciences Naturelles de l’Université au cours de l’année 1940 Description de deux espèces nouvelles, Bulletin général de l’Instruction publique, Hanoi, pp 1-16 25.Đào Văn Tiến (1978), “Về khóa định loại rùa cá sấu Việt Nam”, Tạp chí Sinh vật - Địa học, Hà Nội, XVI(1), tr 1-6 26.Đào Văn Tiến (1979), “Về khóa định loại thằn lằn Việt Nam”, Tạp chí Sinh vật học, Hà Nội, I(1), tr 2-10 27.Đào Văn Tiến (1981), “Về khóa định loại rắn Việt Nam (phần 1)”, Tạp chí Sinh vật học, Hà Nội, III(4), tr 1-6 28.Đào Văn Tiến (1982), “Về khóa định loại rắn Việt Nam (phần 2)”, Tạp chí Sinh vật học, Hà Nội, IV(5), tr 5-9 29.Trần Kiên, Nguyễn Quốc Thắng (1980), Các loài rắn độc Việt Nam, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội download by : skknchat@gmail.com 58 30.Nguyễn Văn Sáng (2007), Động vật chí Việt Nam: Phân rắn, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội 31.Nguyễn Quảng Trường, Nguyễn Vũ Khơi (2005), Nhận dạng số lồi bị sát - ếch nhái Việt Nam, NXB Nông Nghiệp, Chi Cục Kiểm Lâm TP HCM, Tổ Chức Wildlife At Risk Việt Nam, Viện sinh thái Tài Nguyên Sinh Vật, TP Hồ Chí Minh 32.Truong, N Q (2006) Herpetological collaboration in Vietnam In Proceedings of the 13th Congress of the Societas Europaea Herpetologica pp (Vol 233, p 240) 33.Zhao EM (2006) Snakes of China Anhui Science, Technology Publishing House, Hefei, 669 pp 34.Đinh Đoàn Long, Đỗ Lê Thăng (2008) Cơ sở di truyền phân tử tế bào, NXB Đại học Quốc gia, Hà Nội 35.Hebert PD, Cywinska A, Ball SL (2003a) Biological identifications through DNA barcodes Proceedings of the Royal Society of London B: Biological Sciences, 270 (1512): 313-321 36.Hebert PD, Ratnasingham S, De Waard JR (2003b) Barcoding animal life: cytochrome c oxidase subunit divergences among closely related species Proceedings of the Royal Society of London B: Biological Sciences, 270 (Suppl 1): S96-S99 37.Suárez-Díaz E, Anaya-Munoz VH (2008) History, objectivity, and the construction of molecular phylogenies Studies in History and Philosophy of Science Part C: Studies in History and Philosophy of Biological and Biomedical Sciences, 39 (4): 451-468 38.Kress WJ, Erickson DL (2007) A two-locus global DNA barcode for land plants: the coding rbcL gene complements the non-coding trnHpsbA spacer region PLoS one, (6): e508 39.Hollingsworth ML, Clark AA, Forrest L, Richardson J, Pennington R, Long D, Cowan R, Chase M, Gaudeul M, Hollingsworth P (2009) Selecting barcoding loci for plants: evaluation of seven candidate loci download by : skknchat@gmail.com 59 with species‐level sampling in three divergent groups of land plants Molecular Ecology Resources, (2): 439-457 40.Kaur S (2015) DNA Barcoding and Its Applications”, International Journal of Engineering Research and General Science, (2): 602-604 41.CBOL Plant Working Group (2009) A DNA barcode for land plants Proc Natl Acad Sci USA., 106: 12794–12797 42.Lebonah, D E., Dileep, A., Chandrasekhar, K., Sreevani, S., Sreedevi, B., & Pramoda Kumari, J (2014) DNA barcoding on bacteria: a review Advances in Biology, 2014 43.Seifert KA (2009) Progress towards DNA barcoding of fungi Molecular ecology resources, (s1): 83-89 44.Hollingsworth PM, Graham SW, Little DP (2011) Choosing and using a plant DNA barcode PloS one, (5): e19254 45.Li X, Yang Y, Henry RJ, Rossetto M, Wang Y, Chen S (2015) Plant DNA barcoding: from gene to genome Biological Reviews, 90 (1): 157- 166 46.Yu H, Wu K, Song J, Zhu Y, Yao H, Luo K, Dai Y, Xu S, Lin Y (2014) Expedient identification of Magnoliaceae species by DNA barcoding Plant Omics 7, 47 47.Pyron R A., Burbrink F T., Wiens J J (2013), “A phylogeny and revised classification of Squamata, including 4161 species of lizards and snakes”, BMC Evolutionary Biology, pp 1-53 48.Zaher H., Grazziotin F G., Cadle J E., Murphy R W., de Moura-Leite J C., Bonatto S L (2009), “Molecular phylogeny of advanced snakes (Serpentes, Caenophidia) with an emphasis on South American Xenodontines: A revised classification and descriptions of new taxa”, Papéis Avulsos de Zoologia, pp 115-153 49.Conrad J L., Ast J C., Montanari S., Norell M A (2010), “A combined evidence phylogenetic analysis of Anguimorpha (Reptilia: Squamata)”, Cladistics, 26, pp 1-48 50.Guo, P., Zhu, F., Liu, Q., Zhang, L., Li, J X., Huang, Y Y., & Pyron, R A (2014) A taxonomic revision of the Asian keelback snakes, genus download by : skknchat@gmail.com 60 Amphiesma (Serpentes: Colubridae: Natricinae), with description of a new species Zootaxa, 3873(4), 425-440 51.Takeuchi, H., Savitzky, A H., Ding, L., de Silva, A., Das, I., Nguyen, T T., & Mori, A (2018) Evolution of nuchal glands, unusual defensive organs of Asian natricine snakes (Serpentes: Colubridae), inferred from a molecular phylogeny Ecology and evolution, 8(20), 10219-10232 52.Purkayastha, J., Kalita, J., Brahma, R K., Doley, R., & Das, M (2018) A review of the relationships of Xenochrophis cerasogaster Cantor, 1839 (Serpentes: Colubridae) to its congeners Zootaxa, 4514(1), 126136 53.Ren, J L., Wang, K., Guo, P., Wang, Y Y., Nguyen, T T., & Li, J T (2019) On the generic taxonomy of Opisthotropis balteata (Cope, 1985) (Squamata: Colubridae: Natricinae): taxonomic revision of two natricine genera Asian Herpetological Research, 10(2), 105-128 54.Pyron, R A., Kandambi, H K D., Hendry, C R., Pushpamal, V., Burbrink, F T., & Somaweera, R (2013) Genus-level phylogeny of snakes reveals the origins of species richness in Sri Lanka Molecular Phylogenetics and Evolution, 66(3), 969– 978 doi:10.1016/j.ympev.2012.12.004 55.Laopichienpong, N., Muangmai, N., Supikamolseni, A., Twilprawat, P., Chanhome, L., Suntrarachun, S., … Srikulnath, K (2016) Assessment of snake DNA barcodes based on mitochondrial COI and Cytb genes revealed multiple putative cryptic species in Thailand Gene, 594(2), 238–247 doi:10.1016/j.gene.2016.09.017 56.Ashraf, M R., Nadeem, A., Smith, E N., Javed, M., Smart, U., Yaqub, T., & Thammachoti, P (2019) Phylogenetic analysis of the Common Krait (Bungarus caeruleus) in Pakistan based on mitochondrial and nuclear protein coding genes Amphib Reptile Conserv, 13, 203-211 57.Abtin, E., Nilson, G., Mobaraki, A., Hosseini, A A., & Dehgannejhad, M (2014) A new species of krait, Bungarus (Reptilia, Elapidae, Bungarinae) and the first record of that genus in Iran Russian Journal of Herpetology, 21(4) download by : skknchat@gmail.com 61 58.Leviton, A E., Wogan, G., Koo, M., Zug, G R., Lucas, R., & Vindum, J (2003) The dangerously venomous snakes of Myanmar Illustrated key and checklist Proceedings of the California Academy of Sciences 59.Joao S Q., Griswold D., Nguyen D T & Hall P (2013), Vietnam tropical forest and biodiversity assessment United States Agency for International Development 60.Nguyễn Văn Sáng, Hồ Thu Cúc (1996), Danh lục bò sát ếch nhái Việt Nam, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội 61.Averyanov, L V., Loc, P K., Hiep, N T., & Harder, D K (2003) Phytogeographic review of Vietnam and adjacent areas of Eastern Indochina Komarovia, 3, 1-83 62.Sterling, E J., & Hurley, M M (2008) Vietnam: a natural history Yale University Press 63.Nguyễn Khanh Vân, Nguyễn Thị Hiền, Phan Kế Lộc, Nguyễn Tiến Hiệp (2000), Bioclimatic diagrams of Vietnam (Các biểu đồ sinh khí hậu Việt Nam), Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội 64.Vogel, G., & David, P (2010) A new species of the genus Lycodon (Boie, 1826) from Yunnan Province, China (Serpentes: Colubridae) Bonn Zoological Bulletin, 57(2), 289-296 65.Do Thanh Trung, L N N (2009) The species composition of Amphibians and Reptiles in Tua Chua district, Dien Bien Province In Proceedings of the first national scientific workshop “Amphibia and Reptile in Vietnam (pp 153-158) 66.Lưu Quang, V (2017) Cập nhật thành phần lồi bị sát lưỡng cư khu bảo tồn thiên nhiên Hoàng Liên-Văn Bàn, tỉnh Lào Cai 67.Smith, M A (1943) The Fauna of British India, Ceylon and Burma, including the whole of the Indo-Chinese sub-region Reptilia and Amphibia Vol III Serpentes, 1-583 68.Hùng, N N., & Đức, H M (2013) Thành phần lồi lưỡng cư, bị sát Khu Bảo tồn Thiên nhiên Bình Châu-Phước Bửu, tỉnh Bà Rịa-Vũng Tàu Báo cáo khoa học download by : skknchat@gmail.com 62 69.Van Anh, P., & Truong, N Q (2019) New Records of Snakes (Reptilia, Squamata, Serpentes) Distribution in Lai Chau Province, Vietnam VNU Journal of Science: Natural Sciences and Technology, 35(1) 70.Trần Thị Hồng, N., Phạm Thị Kim, D., Hoàng Thị, T., & Lưu Quang, V (2017) Ghi nhận lồi bị sát Quần thể danh thắng Tràng An, tỉnh Ninh Bình 71.Vassilieva A.B (2015) Herpetodiversity of Xuan Son National Park (Phu Tho Province): New findings Proceedings of the 6th National Scientific Conference on Ecology and Biological Resources 72.Pham T C., Ngo N H., Truong, N Q (2019) Đa dạng loài ghi nhận bò sát lưỡng cư khu rừng phòng hộ Động Châu, Tỉnh Quảng Bình Proceedings of the 4th National Scientific Conference on amphibians and reptile 73.Cúc, H T., Trường, N Q (2007) Góp phần nghiên cứu thành phần lồi ếch nhái (amphibians), bị sát (reptiles) khu vực Huyện Hướng Hóa, Tỉnh Quảng Trị Báo cáo khoa học 74.Ngọc, H V., & Anh, P V (2019) Cập nhật thành phần lồi Lưỡng cư (Amphibia) Bị sát (Reptilia) tỉnh Thái Ngun Tạp chí Khoa học cơng nghệ Đại học Thái Nguyên, 194(1), 127-132 75.Le N N., Hoang N V., Nguyen H D., Can T T T (2007) A survey on amphibians and reptiles in Son Duong, Chiem Hoa and Na Hang districts, Tuyen Quang Province Vietnam National Universit Journal of Science 1: 100-106 76.Le, D T., Dao, A N., Pham, D T., Ziegler, T., & Nguyen, T Q (2018) New records and an updated list of snakes from Yen Bai Province, Vietnam Herpetology Notes, 11, 101-108 77.IUCN, 2021: The IUCN Red List of Threatened Species Version 2021.1 Downloaded on 19 August 2021 78.Ziegler, T., Hendrix, R., Vu, N T., Vogt, M., Forster, B., & Dang, N K (2007) The diversity of a snake community in a karst forest ecosystem in the central Truong Son, Vietnam, with an identification key Zootaxa, 1493(1), 1-40 download by : skknchat@gmail.com 63 79.Đinh, T P A., & Lê, N N (2015) Đa dạng thành phần loài rắn Khu Bảo tồn Thiên nhiên Bà Nà – Núi Chúa, Thành Phố Đà Nẵng 80.Nguyen, S N., Luan, T N., Vu, D H N & Robert, W M (2017) Testing an alternative capture-analysis-release approach to document the reptile fauna of Hon Ba Nature Reserve, central Vietnam Rufford Foundation Reports 81.Lê, T T & Đinh, T P A (2019) Giá trị bảo tồn lồi lưỡng cư bị sát Tỉnh Quảng Ngãi Proceedings of the 4th National Scientific Conference on amphibians and reptile 82.Smits, T., & Hauser, S (2019) First Record of the Krait Bungarus slowinskii Kuch, Kizirian, Nguyen, Lawson, Donelly and Mebs, 2005 (Squamata: Elapidae) from Thailand Tropical Natural History, 19(2), 43-50 83.Nguyen, T.V., Pham, C.T & Nguyen, T.Q (2016) New records and an updated list of snakes (Squamata: Serpentes) from Xuan Lien nature reserve, Thanh Hoa province, Vietnam Journal of Biology, 38 (3), 324−332 84.Pope, C H (1935) The reptiles of China The Natural History of Central Asia., 604 85.Hòa, T N T., & Hòa, P V (2014) Thành phần lồi lưỡng cư, bị sát vùng rừng tràm Trà Sư, huyện Tịnh Biên, tỉnh An Giang Tạp chí Khoa học, (64), 110 86.Van Nguyen, T., Duong, L D., & Duong, T T A (2019) New records and updated list of snakes (squamata: serpentes) from Binh Dinh province, central-southern Vietnam Hue University Journal of Science: Natural Science, 128(1B), 35-41 87.Chứng, N Đ., & Nghiệp, H T (2014) Hiện trạng nguồn tài nguyên lưỡng cư, bò sát vườn Quốc gia Tràm Chim Huyện Tam Nông, Tỉnh Đồng Tháp Hue University Journal of Science (HU JOS), 91(3) 88.Nguyen, T Q., Ngo, N Hai., Ziegler, T (2018) Khu hệ bò sát quần đảo Cát Bà: Nguồn tài nguyên sinh vật đặc biệt với tính đặc hữu cao giá trị bảo tồn bật Kỷ yếu Hội thảo Khoa học “Giá trị giải pháp download by : skknchat@gmail.com 64 bảo tồn đa dạng sinh học Vịnh Hạ Long Quần đảo Cát Bà” (2018) IUCN Việt Nam Gland, Thụy Sỹ: IUCN Trang 147-153 89.Orlov, N L (2005) A new species of the genus Vibrissaphora Liu, 1945 (Anura: Megophryidae) from Mount Ngoc Linh (Kon Tum Province) and analysis of the extent of species overlap in the fauna of amphibians and reptiles of the north-west of Vietnam and Central Highlands Russian Journal of Herpetology, 12(1), 17-38 90.Nguyen, T Q & Nguyen, S N (2007) Kết điều tra ếch nhái, bò sát Vườn quốc Gia Núi Chúa, Ninh Thuận Báo cáo khoa học 91.Do D T., Ngo C.D & Nguyen T Q., 2016 New records of Colubridae (Squamata: Serpentes) and an updated list of snakes from Phu Yen Province, Vietnam Hội thảo Quốc gia Lưỡng cư Bò sát lần thứ 3: 25-31 92.Campden-Main, S M (1970) A field guide to the snakes of South Vietnam Smithsonian Institution, Washington, 112, download by : skknchat@gmail.com 65 Phụ lục 1: Khoảng cách di truyền số loài Bungarus dùng nghiên cứu 1 10 11 12 13 14 15 16 17 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 B, candidus IEBR 4057 B, candidus KH 201695 B, candidus NT 201694 B, candidus KY769761 B, candidus KY769760 B, candidus KY769759 B, candidus VNMN 011010 B, candidus VNMN 011012 B, candidus VNMN 011013 B, candidus VNMN 011014 B, candidus VNMN 011015 B, candidus MN165149 B, candidus KY769762 B, candidus MN165148 B, candidus MN165157 B, candidus MN165158 B, candidus MN165159 0,76 1,38 0,77 1,23 0,71 0,00 1,41 0,88 0,18 0,18 0,71 0,53 0,53 0,53 0,71 0,76 0,76 0,92 0,88 1,06 0,35 0,76 0,76 0,92 0,88 1,06 0,35 0,00 0,78 0,78 0,93 0,88 1,06 0,35 0,00 0,00 0,77 0,77 0,93 0,88 1,06 0,35 0,00 0,00 0,00 0,78 0,78 0,94 0,88 1,06 0,35 0,00 0,00 0,00 0,00 0,98 0,98 0,98 1,06 1,23 0,53 0,16 0,16 0,16 0,16 0,16 0,53 0,71 0,71 0,71 0,88 0,18 0,18 0,18 0,18 0,18 0,18 0,35 0,98 0,98 0,98 1,06 1,23 0,53 0,49 0,49 0,49 0,49 0,49 0,65 0,35 0,82 0,82 0,82 0,71 0,88 0,18 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,49 0,00 0,49 0,82 0,82 0,82 0,71 0,88 0,18 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,49 0,00 0,49 0,00 0,82 0,82 0,82 0,71 0,88 0,18 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,49 0,00 0,49 0,00 0,00 download by : skknchat@gmail.com 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 66 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 B, candidus KY769757 B, candidus KY769758 B, candidus MN165147 B, multicinctus KP749805 B, multicinctus KP749806 B, multicinctus KP749814 B, multicinctus KP749815 B, multicinctus KP749818 B, multicinctus KP749821 B, multicinctus KP749820 B, multicinctus MN165153 B, multicinctus MN165154 B, multicinctus MN165150 B, multicinctus MN165151 B, multicinctus MN165152 1,06 1,41 1,59 1,59 1,76 1,06 1,06 1,06 1,06 1,06 1,06 1,23 0,88 1,23 0,88 0,88 0,88 1,23 1,59 1,76 1,76 1,94 1,23 1,23 1,23 1,23 1,23 1,23 1,41 1,06 1,41 1,06 1,06 1,06 0,18 2,45 2,45 2,45 2,12 2,29 1,59 1,96 1,96 1,96 1,96 1,96 2,12 1,41 2,12 1,63 1,63 1,63 0,88 1,06 1,82 2,28 2,60 2,12 2,29 1,59 1,98 1,98 2,02 1,70 1,72 1,96 1,41 1,96 1,79 1,79 1,79 1,23 1,41 2,45 2, 1,67 2,13 2,45 1,94 2,12 1,41 1,82 1,82 1,86 1,55 1,56 1,79 1,23 1,79 1,63 1,63 1,63 1,06 1,23 0,15 1,67 2,13 2,45 1,94 2,12 1,41 1,82 1,82 1,86 1,55 1,56 1,79 1,23 1,79 1,63 1,63 1,63 1,06 1,23 2,28 0,15 0,00 1,67 2,13 2,45 1,94 2,12 1,41 1,82 1,82 1,86 1,55 1,56 1,79 1,23 1,79 1,63 1,63 1,63 1,06 1,23 2,28 0,15 0,00 0,00 1,67 2,13 2,45 1,94 2,12 1,41 1,82 1,82 1,86 1,55 1,56 1,79 1,23 1,79 1,63 1,63 1,63 1,06 1,23 2,28 0,15 0,00 0,00 0,00 1,67 2,13 2,45 1,94 2,12 1,41 1,82 1,82 1,86 1,55 1,56 1,79 1,23 1,79 1,63 1,63 1,63 1,06 1,23 2,28 0,15 0,00 0,00 0,00 0,00 1,67 2,13 2,45 1,94 2,12 1,41 1,82 1,82 1,86 1,55 1,56 1,79 1,23 1,79 1,63 1,63 1,63 1,06 1,23 2,28 0,15 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,47 1,96 2,12 1,94 2,12 1,41 1,63 1,63 1,63 1,63 1,63 1,79 1,23 1,79 1,63 1,63 1,63 1,06 1,23 2,28 0,16 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,47 1,96 2,12 1,94 2,12 1,41 1,63 1,63 1,63 1,63 1,63 1,79 1,23 1,79 1,63 1,63 1,63 1,06 1,23 2,28 0,16 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,31 1,79 1,96 1,76 1,94 1,23 1,47 1,47 1,47 1,47 1,47 1,63 1,06 1,63 1,47 1,47 1,47 0,88 1,06 2,12 0,33 0,16 0,16 0,16 0,16 0,16 0,16 0,16 0,16 1,31 1,79 1,96 1,76 1,94 1,23 1,47 1,47 1,47 1,47 1,47 1,63 1,06 1,63 1,47 1,47 1,47 0,88 1,06 2,12 0,33 0,16 0,16 0,16 0,16 0,16 0,16 0,16 0,16 0,00 1,31 1,79 1,96 1,76 1,94 1,23 1,47 1,47 1,47 1,47 1,47 1,63 1,06 1,63 1,47 1,47 1,47 0,88 1,06 2,12 0,33 0,16 0,16 0,16 0,16 0,16 0,16 0,16 0,16 0,00 0,00 B, 33 magnimaculatus 7,94 7,94 7,58 7,58 7,76 7,76 7,76 7,76 7,76 7,76 7,76 7,94 7,58 7,23 7,58 7,58 7,58 7,76 7,94 8,29 7,76 7,94 7,94 7,94 7,94 7,94 7,94 7,94 7,94 7,76 7,76 7,76 KY769768 B, 34 magnimaculatus 7,58 7,58 7,23 7,23 7,41 7,41 7,41 7,41 7,41 7,41 7,41 7,58 7,23 6,88 7,23 7,23 7,23 7,41 7,58 7,94 7,41 7,58 7,58 7,58 7,58 7,58 7,58 7,58 7,58 7,41 7,41 7,41 0,35 KY769769 download by : skknchat@gmail.com 67 B, 35 magnimaculatus 7,58 7,58 7,23 7,23 7,41 7,41 7,41 7,41 7,41 7,41 7,41 7,58 7,23 6,88 7,23 7,23 7,23 7,41 7,58 7,94 7,41 7,58 7,58 7,58 7,58 7,58 7,58 7,58 7,58 7,41 7,41 7,41 0,35 0,00 KY769770 B, 36 magnimaculatus 6,17 6,17 6,17 6,17 6,35 6,00 6,00 6,00 6,00 6,00 6,00 6,17 5,82 5,82 5,82 5,82 5,82 6,00 6,17 6,53 6,00 6,17 6,17 6,17 6,17 6,17 6,17 6,17 6,17 6,00 6,00 6,00 2,65 2,65 2,65 KY769771 B, 37 magnimaculatus 6,35 6,35 6,35 6,35 6,53 6,17 6,17 6,17 6,17 6,17 6,17 6,35 6,00 6,00 6,00 6,00 6,00 6,17 6,35 6,70 6,17 6,35 6,35 6,35 6,35 6,35 6,35 6,35 6,35 6,17 6,17 6,17 2,47 2,47 2,47 0,18 KY769772 B, 38 magnimaculatus 6,35 6,35 6,35 6,35 6,53 6,17 6,17 6,17 6,17 6,17 6,17 6,35 6,00 6,00 6,00 6,00 6,00 6,17 6,35 6,70 6,17 6,35 6,35 6,35 6,35 6,35 6,35 6,35 6,35 6,17 6,17 6,17 2,47 2,47 2,47 0,18 0,00 KY769773 39 40 41 42 43 B, suzhenae MN165155 B, suzhenae MN165156 B, fasciatus KY769766 B, slowinskii IEBR 3906 Naja naja DQ343648 7,01 7,18 7,18 6,35 6,53 6,17 7,01 7,01 7,01 7,01 7,01 7,18 6,00 6,85 6,69 6,69 6,69 5,82 6,00 7,01 6,36 6,53 6,53 6,53 6,53 6,53 6,53 6,53 6,53 6,36 6,36 6,36 4,06 3,70 3,70 3,17 3,35 3,35 7,01 7,18 7,18 6,35 6,53 6,17 7,01 7,01 7,01 7,01 7,01 7,18 6,00 6,85 6,69 6,69 6,69 5,82 6,00 7,01 6,36 6,53 6,53 6,53 6,53 6,53 6,53 6,53 6,53 6,36 6,36 6,36 4,06 3,70 3,70 3,17 3,35 3,35 0,00 12,8713,2313,4013,4013,2313,2313,0513,0513,0513,0513,0513,0513,0512,7013,0513,0513,0513,2313,40 12,87 13,5813,4013,4013,4013,4013,4013,4013,4013,4013,2313,2313,2312,8713,2313,2312,3512,3512,3513,0513,05 14,1314,4414,5513,0512,8713,2314,5914,5914,9114,4014,7114,0313,2314,1914,0314,0314,0313,5813,76 14,85 15,5015,3515,3515,3515,3515,3515,3515,0115,0114,8514,8514,8513,5813,9313,9313,4013,5813,5815,5015,5014,46 15,9616,4116,2315,3415,5215,1716,2616,2616,4615,9416,2815,6615,1715,9915,5015,5015,5014,8114,64 15,01 15,9615,8115,8115,8115,8115,8115,8115,6615,6615,5015,5015,5016,9316,7516,7516,0515,8715,8715,5015,5016,9317,33 download by : skknchat@gmail.com 68 Phụ lục 2: Hình ảnh thực tế thực địa Thực địa Phú Yên T7/2021 Thực địa Lai Châu T4/2021 download by : skknchat@gmail.com ... VÀ ĐÀO TẠO KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VN HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ NGUYỄN QUỐC HUY KẾT HỢP HÌNH THÁI VÀ SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG NGHIÊN CỨU CHẨN LOẠI GIỐNG RẮN CẠP NIA BUNGARUS DAUDIN, 1803 Ở VIỆT... thống phân loại dựa dẫn liệu hình thái, sinh học phân tử Chính vậy, tơi đề xuất thực đề tài ? ?Kết hợp hình thái sinh học phân tử nghiên cứu chẩn loại giống rắn cạp nia Bungarus Daudin, 1803 Việt Nam? ??... Các nghiên cứu bổ sung dẫn liệu phân loại học Nhiều nghiên cứu phân loại học dựa kết so sánh hình thái sinh học phân tử góp phần hồn thiện hệ thống phân loại, việc hỗ trợ phương pháp phân tích hình