Xây dựng cơ sở dữ liệu sinh học phân tử trong nhận dạng các loài động vật hoang dã phục vụ thực thi pháp luật và nghiên cứu đa dạng sinh học tại việt nam

Xây dựng sở liệu sinh học phân tử nhận dạng loài động vật hoang dã phục vụ thực thi pháp luật nghiên cứu đa dạng sinh học Việt Nam Lê Thị Phương Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn Thạc sĩ ngành: Khoa học Môi trường; Mã số: 60 85 02 Người hướng dẫn: TS Lê Đức Minh Năm bảo vệ: 2012 Abstract: Nêu nguyên nhân gây suy giảm đa dạng Việt Nam tính cấp thiết cần xây dựng sở liệu sinh học phân tử giúp cho nhà quản lý nhà khoa học công tác bảo tồn đa dạng sinh học Việt Nam Tổng quan tài liệu giới để nêu tính ưu việt việc sử dụng ADN đặc biệt gen ty thể việc nhận biết loài phương pháp Tổng hợp tất chuỗi ADN thuộc gen dùng phổ biến gen cyt b gen COI từ ngân hàng gen loài ưu tiên bảo vệ Nghị định 32 phủ Đánh giá khả nhận dạng loài dựa vào khoảng cách di truyền gen COI Cyt b So sánh hiệu nhận dạng hai kiểu gen Cyt b COI Đánh giá khoảng cách di truyền chủng loại hai kiểu gen Cyt b COI Xây dựng phát sinh chủng loại cho tất loài hai kiểu gen COI Cyt b, qua cho thấy liệu ngân hàng gen có nhiều thiếu sót chưa thể sử dụng điều kiện Việt Nam Kiến nghị cần phải có thêm nghiên cứu nhận dạng loài dựa vào đặc điểm di truyền để hoàn thiện sở liệu cho nhận dạng lồi Keywords: Khoa học mơi trường; Bảo tồn sinh học; Quản lý động vật rừng Content Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Việt Nam nước có mức độ đa dạng sinh học cao với nhiều loài đặc hữu Tuy nhiên đa dạng sinh học Việt Nam năm gần phải đối mặt với mối đe dọa vô nghiêm trọng từ hoạt động người khai thác mức, phá hủy làm xuống cấp môi trường tự nhiên, ô nhiễm môi trường, sinh vật ngoại lai gần tác động biến đổi khí hậu Để đối phó với mối đe dọa đa dạng sinh học này, cần có cơng cụ hữu hiệu giúp cho nhà khoa học nhà quản lý kiểm sốt tốt hoạt động gây ảnh hưởng tới loài nguy cấp Một công cụ nước giới phát triển sở liệu sinh học phân tử, cụ thể chuỗi ADN đặc trưng cho loài quan tâm Sử dụng công cụ cho phép tăng cường hiệu công tác thực thi pháp luật, đặc biệt kiểm sốt nạn bn bán diễn tràn lan, giám sát lồi mơi trường sống chúng giúp cho công tác bảo tồn nguyên vị Tuy nhiên nước ta chưa có sở liệu sử dụng vào mục đích nói Chính đề tài luận văn “Xây dựng sở liệu sinh học phân tử nhận dạng loài động vật hoang dã phục vụ thực thi pháp luật nghiên cứu đa dạng sinh học Việt Nam” đem lại ý nghĩa khoa học thực tiễn cao, góp phần bước đầu đánh giá tính khả thi thiếu sót cần phải khắc phục việc xây dựng sở liệu Sự suy giảm đa dạng sinh học Việt Nam Hiện Việt Nam phải đối mặt với nguy suy thoái đa dạng sinh học Trong hội nghị mơi trường tồn quốc diễn Hà Nội, nhà khoa học cho suy thoái đa dạng sinh học thể suy giảm diện tích rừng có hệ sinh thái tự nhiên quan trọng, số lượng cá thể loài sinh vật biển, loài hoang dã, nguồn gen hoang dã Trong bật suy giảm tuyệt chủng loài động thực vật hoang dã Nhiều loài động vật, thực vật hoang dã Việt Nam bị đe dọa nghiêm trọng, ông Đặng Huy Huỳnh, Chủ tịch Hội động vật học Việt Nam, cảnh báo Theo Sách Đỏ Việt Nam 2007, tổng số loại động-thực vật hoang dã thiên nhiên bị de dọa 882 loài (418 loài động vật 464 loại thực vật), tăng 161 loài so với thời điểm năm 1992 Trong Sách Đỏ Việt Nam, phần động vật (1992), mức độ bị đe dọa loài dừng lại hạng “nguy cấp”, đến thời điểm có tới lồi động vật xem tuyệt chủng tự nhiên Việt Nam, cụ thể là: Tê giác sừng (Dicerorhynus sumatrensis), Bò xám (Bos sauveli), Heo vòi (Tapirus indicus), Cầy rái cá (Cynogale lowei), cá Chép gốc (Procypris merus), cá Chình Nhật (Angilla japonica), cá Lợ thân thấp(Cyprinus multitaeniata), Hươu (Cervus nippon), cá Sấu hoa cà (Crocodylus porosus) Trong hệ thực vật, số loài Lan hài Việt Nam tuyệt chủng thiên nhiên Số lượng loài thuỷ sinh vật, đặc biệt lồi tơm, cá có giá trị kinh tế bị giảm sút nhanh chóng Số lượng cá thể lồi cá nước q hiếm, có giá trị kinh tế, lồi có tập tính di cư bị giảm sút Các mối đe dọa đến đa dạng sinh học Việt Nam *Mối đe dọa gián tiếp Sự gia tăng dân số nghèo đói mối đe dọa gián tiếp đến suy giảm đa dạng sinh học Dân số đất nước tăng lên nhanh chóng vào kỷ 20 từ 15,6 triệu người vào năm 1921 đến 54 triệu vào năm 1982, đến gần 80 triệu vào năm 2004; dân số đạt đến số 150 triệu vào năm 2050 Khi dân số đất nước tăng nhu cầu tài nguyên thiên nhiên tăng theo Sự tiêu thụ không bền vững nguồn tài nguyên nước đất liền khắp đất nước thúc đẩy nhu cầu thị trường địa phương, khu vực quốc tế, tạo mối đe dọa to lớn trực tiếp đa dạng sinh học Việt Nam Ngồi ra, nghèo đói yếu công tác quản lý nhà nước (thiếu hệ thống pháp luật, thiếu điều hành nguồn ngân sách) mối đe dọa gián tiếp khác đến suy giảm đa dạng sinh học nước ta.Việt Nam nước phụ thuộc vào nông nghiệp tài nguyên thiên nhiên Trong khu bảo tồn, 90% dân địa phương sống dựa vào nông nghiệp khai thác rừng Đời sống họ thấp, khoảng 50% thuộc diện đói nghèo Họ bắt buộc phải khai thác, bóc lột ruộng đất mình, làm cho tài ngun suy thối cách nhanh chóng *Mối đe dọa trực tiếp Có nhiều mối đe dọa trực tiếp đến suy giảm đa dạng sinh học bao gồm: suy thoái sinh cảnh sống, ô nhiễm môi trường, biến đổi khí hậu, xâm nhập loài ngoại lai…nhưng khai thác mức buôn bán động thực vật hoang dã mối đe dọa nghiêm trọng Khai thác mức có nghĩa khai thác đến số lượng loài thấp mức tối thiểu mà loài phục hồi Vì dẫn đến tuyệt chủng loài, gây suy giảm đa dạng sinh học Các loài bị khai thác mức thường lồi có giá trị kinh tế cao có giá trị sử dụng đặc biệt giá trị thẩm mỹ, giá trị dinh dưỡng …Việc khai thác mức nguồn tài nguyên thiên nhiên Việt Nam liên quan đến nhiều hoạt động có săn bắt, đánh cá, khai thác gỗ săn bắt động vật thu hái thực vật không bền vững Khai thác mức trở thành mối đe dọa nghiêm trọng đa dạng sinh học Việt Nam ngày mở rộng nhiều loài động thực vật khác có hàng trăm lồi bị ảnh hưởng - Khai thác buôn bán thực vật Khu hệ thực vật bị khai thác khắp nơi Quả cây, hoa, vỏ cây, rễ, nhựa, gỗ tồn thu thập nhiều mục đích, từ làm thức ăn thuốc làm thủ công mỹ nghệ, dệt sản xuất đồ đạc phục vụ việc bn bán cảnh Những lồi thực vật bị khai thác nhiều Việt Nam thường lồi có giá trị kinh tế cao như: song mây, sâm, trầm hương, loại gỗ quý Ngoài việc khai thác bn bán loại gỗ trái phép vấn đề nóng Việt Nam Hai loài kim miền Bắc Việt Nam phải chịu sức ép mức độ địa phương: Bách tán Đài Loan (Taiwania cryptomerioides) loài Bách tán vàng Việt Nam đặc hữu (Xanthocyparis vietnamensis) mơ tả vào năm 2002 Cả hai có quần thể nhỏ bị đe dọa xuống cấp sinh cảnh việc khai thác trực tiếp loại gỗ nhiều nhựa có mùi thơm để phục vụ xây dựng, làm áo quan đồ thủ cơng mỹ nghệ IUCN xếp lồi vào nhóm nguy cấp - Đánh bắt thủy sản mức Các hình thức đánh bắt thủy sản mang tính hủy diệt dùng chất nổ, chất độc, sốc điện, lưới mắt nhỏ mức cho phép làm suy giảm đa dạng sinh học nghiêm trọng hệ sinh thái đất ngập nước ven biển, đe dọa tồn 80% rạn san hô Việt Nam, hủy diệt nguồn cá giống, tôm giống vùng đất ngập nước ven bờ nội địa Thậm chí khu bảo tồn biển Khu bảo tồn biển vịnh Nha Trang (Khánh Hòa) khu vực có hệ sinh thái đa dạng phong phú, bảo vệ cấm đánh bắt hải sản hình thức Tuy nhiên, lợi ích cá nhân, nhiều ngư dân khai thác trái phép hải sản đây, họ sử dụng mìn để khai thác, theo ông Eniko d’ La Mancha, chủ trung tâm lặn văn phịng du lịch Amigos Nha Trang, họ dùng loại mìn mà thuyền đánh cá phi pháp thường dùng, loại mìn nổ chìm nước Hay Vườn Quốc gia Đất mũi Cà Mau, theo ông Trần Văn Mến, Phó Ban Quản lý bảo tồn nguồn lợi thủy sản biển: trước người khai thác nghêu, dùng tay cào hay te đẩy họ dùng máy hút thổi nghêu vào lưới - Săn bắn buôn bán trái phép động vật hoang dã Theo thống kê quan chức năng, từ năm 1996 đến 2007, nước phát hiện, xử lý 14.757 vụ việc liên quan, tịch thu 181.670 cá thể với khối lượng 635 Năm 2008 tháng đầu năm 2009, lực lượng kiểm lâm phát hiện, xử lý 1.946 vụ vi phạm quy định quản lý bảo vệ động vật hoang dã Những địa phương, khu vực “nóng” TP Hồ Chí Minh, Đồng Nai, Tây Ninh, Lâm Đồng, Thanh Hóa, Nghệ An, Điện Biên, Bình Phước, Hà Nội Những kẻ chuyên hoạt động săn bắt, buôn bán động vật, thực vật hoang dã quý tổ chức hoạt động chặt chẽ, tinh vi với đường dây quy mô ngày lớn Gần nhất, qua vụ bắt giữ 25 tê tê đông lạnh vẩy tê tê vào tháng 10-2008 vụ bắt 6,2 ngà voi Cảng Hải Phòng cho thấy Việt Nam trở thành nơi trung chuyển động vật hoang dã Nơi tiêu thụ loại động vật, thực vật hoang dã q khơng đâu xa mà cộng đồng dân cư chúng ta, tập trung chủ yếu thành phố, thị xã với nhan nhản cửa hàng ăn “chim trời, thú rừng”, nhiều cửa hàng bày bán hàng trăm bình rượu ngâm thú rừng loại Có “cầu” làm việc “cung” ngày phát triển; làm việc ngăn chặn việc săn bắt, vận chuyển động thực vật hoang dã quý “muối bỏ biển”, rừng ngày bị tàn phá, môi trường tự nhiên ngày xấu từ bàn tay “dạ dày” người.[11] Phần lớn thành phố thị trấn lớn Việt Nam có chợ bn bán động vật hoang dã nơi có nhiều lồi động vật sống đại diện tất nhóm động vật có xương sống chủ yếu, từ tắc kè, rùa ếch đến tê tê, hươu linh trưởng Các quán ăn đặc sản thường xuyên phục vụ thịt động vật hoang dã, quảng cáo ăn với bảng giá đặt cạnh áp phích in nhằm phục vụ mục đích giáo dục bảo tồn Những người đến ăn thường xuyên xem loài động vật bị nhốt chuồng (trong có lồi bị đe dọa tồn cầu) cầy rắn Cùng với loài động vật hoang dã thịt để tiêu thụ, người bán hàng tiếp thị nhiều loại chim sống chợ lớn Hà Nội thành phố Hồ Chí Minh Điều phần ý thức người dân Việt Nam lời Anh Hoàng Mạnh Cường, chủ trang trại nuôi thú quý thành phố Buôn Ma Thuột cho biết: “Người nước ngồi có ý thức điều có sử dụng động vật hoang dã làm thực phẩm Nhưng thói quen Việt Nam hoang dã họ thích dùng làm thực phẩm.” Tổng quan phương pháp sinh học phân tử sử dụng nhận dạng lồi Nhằm tạo cơng cụ hỗ trợ việc nhận dạng loài phục vụ nghiên cứu đa dạng sinh học ngăn chặn buôn bán trái phép động vật hoang dã nhà khoa học thuộc nhóm nghiên cứu dự án Mã vạch sống quốc tế (iBOL) thiết lập thư viện lồi sinh vật có nhân chuẩn dựa dạng phân tích gọi mã vạch ADN Cơng nghệ mã vạch ADN đời hứa hẹn tương lai mới, nơi mà người cập nhật nhanh chóng thơng tin tên, thuộc tính sinh học… loài sinh vật trái đất Phương pháp phân tích mã vạch ADN công cụ quan trọng việc bảo tồn theo dõi lồi có tác động xấu đến sức khỏe người lợi ích kinh tế từ chúng Hiện tại, nhà nghiên cứu thu thập mã ADN 80.000 loài Dự kiến đến năm 2015, thư viện có danh mục ADN khoảng năm triệu mẫu sống, đại diện cho 500.000 loài trái đất Đây nhóm đáng kể tổng số 1,7 triệu loài mà người biết đến Hy vọng công nghệ thúc đẩy việc khám phá nhiều lồi cịn chưa đươ ̣c biết đến trái đấ t Phương pháp mã vạch phân tử kỹ thuật dùng để xác định đặc điểm loài sinh vật cách sử dụng trình tự ADN ngắn từ vị trí gen tiêu chuẩn kiểm chứng Cũng giống mơ hình độc đáo mã vạch nhận dạng sản phẩm, mã vạch ADN mơ hình trình tự ADN sử dụng để nhận diện thực thể sống Mã vạch ADN ngắn, khoảng 700 nucleotit, sản xuất nhanh từ hàng nghìn mẫu vật phân tích rõ ràng phần mềm máy tính Mã vạch ADN cho phép người khơng phải chun gia nhận dạng lồi cách khách quan, chí từ vật liệu nhỏ, bị hư hỏng chế biến công nghiệp Ứng dụng công nghệ dựa ADN vào việc điều tra tội phạm buôn bán tiêu thụ động vật hoang dã mở khả tăng cường hiệu thực thi pháp luật Ví dụ trường hợp sử dụng kính kiển vi để xác định lồi cho Linh dương Tây Tạng từ khăn quàng dệt, việc xác định tới cấp độ lồi thực cách sử dụng việc xác định kiểu ADN nơi mà kết không dựa vào phán đoán chủ quan người kiểm tra *Các bước thực hiện: - Thu thập mẫu vật động vật hoang dã khu vực vùng lân cận - Chiết xuất tinh chế ADN từ mẫu mô vật liệu chế biến - Khuếch đại khu vực cụ thể gen lục lạp ty lạp thể cách PCR phân tích sản phẩm PCR phản ứng điện li keo - Sử dụng Blast (Basic Local Alignment Search Tool ) để nhận diện trình tự sở liệu - Sử dụng cơng cụ xếp nhiều trình tự xây dựng để phân tích mối quan hệ phát sinh lồi * Vai trị ADN Bộ gen ty thể tế bào nhân chuẩn có 37 gen, 22 gen mã hóa ARN vận chuyển (tARN), gen mã hóa ARN ribosomal (rARN) 13 gen khác mã hóa protein chủ yếu liên quan đến q trình hơ hấp oxi hóa Số lượng gen hệ gen ty thể phần lớn bất biến cho tất hệ gen ty thể loài động vật có xương sống thứ tự gen thay đổi Thứ tự vị trí hệ gen ty thể tương tự lồi động vật có vú khác bậc phân loại: ví dụ thứ tự khác gen ty thể gia cầm động vật có vú Một lý cho việc sử dụng ADN ty thể (mtADN) khơng có tái tổ hợp mtADN Với tất thành phần mã hóa hệ gen ty thể mã hóa cho protein phân tử ARN liên quan đến hô hấp, người ta hi vọng có bảo vệ trình tự thay đổi protein phân tử ARN tác động tiêu cực đến sinh vật Không giống hạt nhân, khơng có lỗi xảy việc đọc enzyme tồn ty thể để sữa chữa gốc ADN thêm vào cách khơng xác suốt trình chép Do vậy, tích tụ thay đổi sở riêng lẻ ty thể cao gấp lần so với lỗi chép hạt nhân Ngồi có nhiều ADN ty thể tế bào so với ADN hạt nhân Trong tế bào có nhiều ty thể phụ thuộc vào loại tế bào ty thể có nhiều ADN ty thể Các ty thể có lớp protein để bảo vệ mtADN khỏi phân hủy Các vật liệu sinh học bị phân hủy cao , đó, có khả tuân theo việc xác định kiểu mtADN nhiều cần thiết sinh hồ sơ di truyền từ ADN hạt nhân xác định kiểu răng, xương tóc *Vị trí gen sử dụng phân loại Các vị trí gen lựa chọn cho nhận dạng pháp y loài dựa vào nghiên cứu có nguồn gốc từ phân loại phát sinh lồi chủ yếu tìm thấy gen ty thể Trong phạm vi mtADN số trình tự gen cho thể biến đổi chủng loại (trong thành viên loài) lại thể đầy đủ biến đổi khơng chủng loại (giữa lồi khác nhau) phép ước lượng mức độ liên quan số lần sai khác qua đồng hồ phân tử hiệu chỉnh Vị trí sử dụng nghiên cứu phân loại phát sinh chủng loại gần gen cytocrome b (cyt b) mà xuất hai bazo 14747 15887 mtADN người mã hóa protein có chiều dài 380 amino axit Vị trí cyt b sử dụng rộng rãi nghiên cứu phân loại pháp y, bao gồm phận thể hổ, trứng rùa, vỏ da cá sấu, sừng tê giác, ngà voi, công trống , mật gấu Gần hơn, việc sử dụng gen cytochrome c oxidase I (COI) tăng lên chủ yếu thông qua tổ chức mã vạch sống (Barcod of life consortium- CBOL) COI tìm thấy bazo 5904 7945 mtADN người COI ban đầu sử dụng để nhận dạng lồi động vật khơng xương sống Chẳng sau trở thành vị trí lựa chọn trùng học pháp y để nhận dạng ấu trùng bọ cánh cứng xác chết Vì vị trí nhận dạng lồi này, sử dụng nhiều với mục tiêu trở thành vị trí lựa chọn cho nhận dạng tất lồi động vật Các vị trí gen khác hệ gen ty thể sử dụng nhận dạng số loài Chúng bao gồm vị trí rARN 12s 16s họ gen NDH D- loop (Displacementloop) sử dụng nhận dạng loài nhiều nhận dạng loài chủng loại Bởi biến đổi lớn trình tự khơng mã hóa, sử dụng công cụ để nhận dạng có mặt lồi đặc biệt hỗn hợp nhiều loài khác *Sự biến đổi loài khác loài gen Cyt b COI Bằng cách sử dụng mơ hình2 tham số Kimura (K2P- Kimura 2-parameter model), nhìn chung tác giả nhận định thay đổi loài nằm phạm vi < 2-3% (giữa 7.93% 0.43% với loài chim cho COI; 5.7% 1.5% với loài Stenella cho Cyt b) Khi bất thường nảy sinh, điều hiểu loài ẩn sinh lồi ẩn sinh dựa vào biến đổi loài từ cá thể Đối tượng phương pháp nghiên cứu *Đối tượng nghiên cứu Các loài động vật nghiên cứu đề tài nằm nghị định 32/2006/ND-CP quản lý động vật rừng, thực vật rừng nguy cấp, quí Việt Nam, gồm 62 loài động vật nghiêm cấm khai thác sử dụng 89 loài hạn chế khai thác sử dụng (xem phần Phụ lục) Xác định trình tự gen từ Ngân hàng gen (gen bank) : 112 lồi, 106 lồi có trình tự gen Cyt b 42 lồi có trình tự gen COI - 222 trình tự gen Cytb - 83 trình tự gen COI *Phương pháp nghiên cứu - Sử dụng phần mềm Mega để ước tính sai khác dựa vào khoảng cách trình tự ADN lồi Tất trình tự sau tải từ ngân hàng gen (Genbank) xếp dạng matrix cách sử dụng phần mềm Paup 4.0 beta 10 win Trước xếp thành dạng ma trận chúng xếp thứ tự phần mềm Bioedit để có độ dài đoạn gen Sau đưa liệu trình tự vào phần mềm Mega5.05 trình tự cắt tỉa vị trí có chiều dài 650 nucleotit Thành phần trình tự mơ hình thay cho tồn bộ liệu, số lượng nucleotit vị trí amino axit thay đổi sai lệch cặp trình tự thơng số Kimura (K2P) phạm vi nhóm nhiều mức độ phân loại (trong loài, loài chi loài chi khác họ) tính tốn Mega5.05 Các lồi xếp vào bốn loại sau dựa vào khoảng cách cặp K2P: loại I (khoảng cách loài lớn 50%) Tuy nhiên chiếm tỷ lệ lớn sai lệch loài mức thấp (0 – 2%) Điều cho thấy việc sử dụng mã vạch ADN phân biệt phần lớn lồi Với lồi mà có khoảng cách loài cao như: Hươu xạ (Moschus berezovskii) 43.3%, Gà lơi trắng (Lophura nycthemera) 50.2% cần có thêm phân tích sâu để xác nhận tính xác trình tự đưa lên ngân hàng gen * Về phát sinh loài 16 Qua phát sinh lồi thấy có số lồi bị xác định sai trình tự gen Genbank, tức Genbank hai lồi khác phát sinh lồi lại là lồi Với phát sinh loài Cyt b phát loài bị xác định nhầm Gà lôi mào trắng (Lophura edwardsi) Gà lôi Hà Tĩnh (Lophura hatinhensis) Cịn với phát sinh lồi gen COI khơng có lồi bị xác định nhầm Ngun nhân gây sai sót thiếu cẩn thận trình sequence trình tự gen phần lớn nhầm lẫn khâu định loại Kết luận kiến nghị + Nêu nguyên nhân gây suy giảm đa dạng Việt Nam tính cấp thiết cần xây dựng sở liệu sinh học phân tử giúp cho nhà quản lý nhà khoa học công tác bảo tồn đa dạng sinh học Việt Nam + Tổng quan tài liệu giới để nêu tính ưu việt việc sử dụng ADN đặc biệt gen ty thể việc nhận biết loài phương pháp + Tổng hợp tất chuỗi ADN thuộc gen dùng phổ biến gen cyt b gen COI từ ngân hàng gen loài ưu tiên bảo vệ Nghị định 32 phủ (151 lồi) Xác định trình tự gen từ Ngân hàng gen (gen bank) : 112 lồi, 106 lồi có trình tự gen Cyt b 42 lồi có trình tự gen COI - 222 trình tự gen Cytb - 83 trình tự gen COI + Đánh giá khả nhận dạng loài dựa vào khoảng cách di truyền gen COI Cyt b Nhìn chung, với kiểu gen khoảng cách di truyền trung bình cho tồn loài tương đối lớn: 40.3% với Cyt b 33.6% với COI + So sánh hiệu nhận dạng hai kiểu gen Cyt b COI Cụ thể xét phạm vi 12 họ có tương đồng trình tự gen Cyt b COI khoảng cách di truyền trung bình theo họ lớn nằm gen COI (53% so với 43.3% Cyt b) gen Cyt b thể vượt trội khả nhận dạng loài + Đánh giá khoảng cách di truyền chủng loại hai kiểu gen Cyt b COI Có thể thấy chiếm tỷ lệ lớn khoảng cách chủng loại 0% nhỏ 2% tất loài Chỉ có 25 % số lồi gen Cyt b 18% gen COI có khoảng cách chủng loại lớn (> 2%) + Xây dựng phát sinh chủng loại cho tất loài hai kiểu gen COI Cyt b, qua cho thấy liệu ngân hàng gen cịn có nhiều thiếu sót chưa thể sử dụng điều kiện Việt Nam Vì cần phải chuẩn hóa sở liệu 17 + Kiến nghị cần phải có thêm nghiên cứu nhận dạng lồi dựa vào đặc điểm di truyền để hoàn thiện sở liệu cho nhận dạng loài cần xác định trình tự gen Cytb COI cịn thiếu sở liệu genbank để có đánh giá xác References Tiếng Việt Nguyễn Nghĩa Thìn (2008), “Đa dạng sinh học Việt Nam vấn đề bảo tồn”, Kỷ yếu hội thảo quốc tế Việt Nam học lần thứ ba Pilgrim, J D Nguyễn Đức Tú (2007), “Thông tin sở loài bị đe dọa loài ngoại lai Việt Nam đề xuất cho nội dung Luật Đa dạng Sinh học”, Báo cáo trình Vụ Mơi trường, Bộ Tài nguyên Môi trường, Hà Nội, Chương trình BirdLife Quốc tế Việt Nam Eleanor Jane Sterling, Martha Maud Hurley, Lê Đức Minh (2006), “Lịch sử tự nhiên VN”, NXB Yale University Press, Lon Don Lê Xuân Cảnh, Hồ Thanh Hải (2010), “Hiện trạng suy thoái đa dạng sinh học Việt Nam”, Báo cáo Hội nghị khoa học đa dạng sinh học Việt Nam, Viện tài nguyên sinh thái sinh vật Website 5.http://www.rfa.org/vietnamese/in_depth/Wildlife-trade-and-consumption-in-vietnam-vha07192009110242.html 6.http://www.cpv.org.vn/cpv/Modules/Preview/printPreview.aspx?co_id=10008&cn_id=5341 23 7.http://dangcongsan.vn/cpv/Modules/Preview/PrintPreview.aspx?co_id=7338497&cn_id=35 7168 8.http://baodatviet.vn/Home/congdongviet/10-loai-vat-da-bien-mat-hoan-toan-o-VietNam/201110/174787.datviet 9.http://www.monre.gov.vn/v35/default.aspx?tabid=428&cateID=24&id=103482&code=QC5 C103482 10.http://www.baomoi.com/Home/ThoiSu/www.cpv.org.vn/Tich-cuc-gop-phan-dau-tranhchong-nan-buon-ban-dong-vat-hoang-da 11.http://www.cuuchienbinh.com.vn/index.aspx?Menu=1314&Chitiet=1225&Style=1 12 http://www.thanhniennews.com/2010/Pages/20110605163024.aspx Tiếng Anh 18 13 Adrian Linacre1*, Shanan S Tobe2 (2011), “An overview to the investigative approach to species testing in wildlife forensic science”, Linacre and Tobe Investigative Genetics 2011 (http://www.investigativegenetics.com/content/2/1/2) 14 “A New Tool for Identifying Biological Specimens and Managing Species Diversity” (www.dnabarcodes.org) 15 Using DNA Barcodes to Identify and Classify Living Things (http://www.dnabarcoding101.org/introduction.html) 16 B N REID,* M LE,Đ W P MCCORD,ả J B IVERSON,** A GEORGES,†† T BERGMANN,‡‡G AMATO,§§ R DESALLE§§ and E NAR O- MAC IE L ĐĐảả (2011), Comparing and combining distance-based and character-based approaches for barcoding turtles”, Molecular Ecology Resources 17 Vietnam Biodiversity Report (2005) 18 Nguyen Van Sang, Ho Thu Cuc, Nguyen Quang Truong (2009), “Herpetofauna of Vietnam”, Edition Chimaira, 768 pp 19 ... loài động vật hoang dã phục vụ thực thi pháp luật nghiên cứu đa dạng sinh học Việt Nam? ?? đem lại ý nghĩa khoa học thực tiễn cao, góp phần bước đầu đánh giá tính khả thi thiếu sót cần phải khắc phục. .. giảm đa dạng Việt Nam tính cấp thi? ??t cần xây dựng sở liệu sinh học phân tử giúp cho nhà quản lý nhà khoa học công tác bảo tồn đa dạng sinh học Việt Nam + Tổng quan tài liệu giới để nêu tính ưu việt. .. dụng động vật hoang dã làm thực phẩm Nhưng thói quen Việt Nam hoang dã họ thích dùng làm thực phẩm.” Tổng quan phương pháp sinh học phân tử sử dụng nhận dạng loài Nhằm tạo cơng cụ hỗ trợ việc nhận