Nghiên cứu tính đa hình thái đơn nucleotid (SNP) và đột biến một số gen trong ung thư buồng trứng TT

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI LÊ NGUYỄN TRỌNG NHÂN NGHIÊN CỨU TÍNH ĐA HÌNH THÁI ĐƠN NUCLEOTID (SNP) VÀ ĐỘT BIẾN MỘT SỐ GEN TRONG UNG THƯ BUỒNG TRỨNG Chuyên ngành : Sản phụ khoa Mã số : 9720105 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2022 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI Người hướng dẫn khoa học: GS.TS NGUYỄN VIẾT TIẾN Phản biện 1: GS.TS Cao Ngọc Thành Phản biện 2: PGS.TS Lương Thị Lan Anh Phản biện 3: TS Trịnh Hùng Dũng Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án Tiến sĩ cấp Trường, họp Trường Đại học Y Hà Nội Vào hồi…… giờ…… ngày…… tháng…… năm 2022 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia Việt Nam - Thư viện Trường Đại học Y Hà Nội ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày tỉ lệ mắc tử vong bệnh lý ung thư (UT) giới có xu hướng gia tăng nhanh chóng Trong bệnh lý ung thư buồng trứng (UTBT) loại ung thư thường gặp phụ nữ Giai đoạn sớm, bệnh thường diễn biến âm thầm với triệu chứng khơng đặc hiệu khơng có triệu chứng nên thường bị bỏ sót, chẩn đốn muộn Tuy nhiên phát điều trị bệnh kịp thời giai đoạn sớm tiên lượng tốt nhiều so với giai đoạn tiến triển Hầu hết ung thư buồng trứng phát triển tự nhiên Khoảng 10% trường hợp ung thư buồng trứng có liên quan đến yếu tố di truyền Đa số có liên quan đến Hội chứng ung thư vú – buồng trứng di truyền (Hereditary Breast and Ovarian Cancer- HBOC) đột biến (ĐB) hai gen áp chế ung thư BRCA1 BRCA2, dẫn tới giảm khả sửa chữa DNA Nguy mắc ung thư buồng trứng đời người phụ nữ 1,22% tỷ lệ tăng lên tới 27-63% bệnh nhân mang ĐB gen BRCA1/2 Phụ nữ gia đình có nguy cao nên tư vấn làm xét nghiệm di truyền để cá thể hóa phương pháp sàng lọc, chẩn đốn, dự phịng điều trị kịp thời Bên cạnh đó, đa hình đơn nucleotide (Single nucleotide polymorphism-SNP) gen sửa chữa tổn thương DNA RAD51 XRCC3 không gây bệnh thông qua thay đổi biểu protein mã hóa, ảnh hưởng tới chức sửa chữa DNA, từ liên quan đến nguy mắc ung thư có ung thư buồng trứng Các SNP liên quan tới ung thư buồng trứng nghiên cứu nhiều rs861539, rs1799794, rs1799796 gen XRCC3 rs1801320, rs1801321 gen RAD51 kết nghiên cứu bệnh nhân chủng tộc khác chưa thống Để hiểu rõ mối liên quan dạng đột biến hai gen BRCA1 BRCA2, đa hình thái đơn nucleotide (SNP) gen XRCC3, RAD51 với nguy ung thư buồng trứng, đề tài “Nghiên cứu tính đa hình thái đơn nucleotid (SNP) đột biến số gen ung thư buồng trứng” tiến hành với mục tiêu: Xác định đột biến gen BRCA1, BRCA2 bệnh nhân ung thư buồng trứng mối liên quan với mô bệnh học Xác định số đa hình thái đơn nucleotid (SNP) gen XRCC3, RAD51 có liên quan đến nguy mắc ung thư buồng trứng NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN Đây nghiên cứu khoa học Việt Nam tính đa hình thái đơn nucleotide đột biến gen ung thư buồng trứng Xác định đột biến gen BRCA1, BRCA2 vừa mang lại lợi ích cho bệnh nhân ung thư buồng trứng để định hướng sử dụng liệu pháp điều trị đích với chất ức chế PARP mang lại hiệu điều trị cao, vừa có lợi cho người nhà bệnh nhân tư vấn xét nghiệm di truyền nhằm phát khả mang đột biến gen BRCA1, BRCA2 để có hướng dẫn tầm sốt, dự phịng ung thư vú, ung thư buồng trứng thích hợp Kết nghiên cứu xác định đột biến bao gồm gen BRCA1 gen BRCA2 20 bệnh nhân ung thư buồng trứng liên quan Hội chứng ung thư vú- ung thư buồng trứng di truyền Cả đột biến kiểm định sở liệu di truyền cơng cụ tin sinh học dự đốn khả gây bệnh ĐB gây bệnh làm tăng nguy ung thư vú ung thư buồng trứng Có 01 đột biến BRCA2: c.4022delC Áp dụng ứng dụng sở liệu lớn để cá thể hóa tư vấn tầm sốt, dự phòng ung thư cho người nhà mang đột biến gen BRCA1, BRCA2 Các đa hình đơn nucleotide hai gen sửa chữa tổn thương DNA RAD51 XRCC3 xác định đóng góp thơng tin vào sở liệu di truyền người Việt Nam Xác định bốn đa hình đơn nucleotide gen RAD51 XRCC3 có liên quan đến nguy mắc ung thư buồng trứng: rs1801320 rs1801321 gen RAD51, rs1799794 rs1799796 gen XRCC3 Đa hình đơn nucleotide rs861539 gen RAD51 không liên quan đến nguy mắc ung thư buồng trứng CẤU TRÚC CỦA LUẬN ÁN Luận án dày 135 trang không kể phụ lục, tài liệu tham khảo, bao gồm chương, 33 bảng, biểu đồ, 46 hình, sơ đồ, 157 tài liệu tham khảo Bố cục luận án gồm: đặt vấn đề trang, tổng quan 36 trang, đối tượng phương pháp nghiên cứu 15 trang, kết 37 trang, bàn luận 42 trang, kết luận 02 trang, khuyến nghị 01 trang Cơng trình liên quan đến luận án: 05 báo công bố CHƯƠNG – TỔNG QUAN 1.1 Ung thư buồng trứng Ung thư buồng trứng (UTBT) bệnh tế bào buồng trứng bình thường phát triển cách bất thường, khơng kiểm sốt tạo khối u ác tính bên buồng trứng Nguyên nhân UTBT chưa làm rõ Yếu tố ảnh hưởng đến nguy mắc UTBT bao gồm yếu tố thay đổi liệu pháp nội tiết thay thế, dinh dưỡng, lối sống (hút thuốc lá, thức uống có cồn, tập luyện thể chất), môi trường sống song song với yếu tố khơng thể thay đổi tiền sử gia đình, chu kỳ kinh nguyệt không gián đoạn, lạc nội mạc tử cung, sắc tộc, đặc biệt yếu tố di truyền ĐB gen BRCA1/2, UTBT thường diễn biến âm thầm, triệu chứng không đặc hiệu nên thường chẩn đoán muộn Chẩn đoán UTBT tập hợp từ kết thăm khám lâm sàng, cận lâm sàng siêu âm (hệ thống đánh giá độ ác tính IOTA index), xét nghiệm (CA125, HE4, ROMA index, RMI…), sinh thiết mơ bệnh học Ngồi phương pháp điều trị thơng thường phẫu thuật, hóa trị, xạ trị, điều trị nội tiết, điều trị miễn dịch, bệnh nhân mang ĐB gen BRCA1/2 sử dụng liệu pháp điều trị đích với chất ức chế PARP (Poly ADP ribose polymerase) 1.2 Đột biến gen BRCA1/2 liên quan đến UTBT Gen BRCA1 gen áp chế khối u liên quan đến UT vú UTBT xác định tách dòng lần đầu năm 1994, nằm cánh dài NST 17 (17q21) BRCA1 chứa 24 exon, 22 exon mã hóa, dài khoảng 100kb Alen bình thường tạo mRNA 7,8kb, mã hóa protein BRCA1 với 1863 acid amin Gen BRCA2 nằm nhánh dài NST 13, vị trí 13q12.3 chứa 27 exon xác định vào năm 1994 Alen bình thường BRCA2 tạo mRNA kích thước 10,4kb, mã hóa protein BRCA2 gồm 3418 aa Trong tế bào bình thường, protein BRCA1 BRCA2 đóng vai trị quan trọng việc trì ổn định di truyền thông qua sửa chữa DNA apotosis Nếu chức protein BRCA1 BRCA2 dẫn đến tăng sinh bất thường tế bào, chế dẫn đến hình thành tế bào UT Ngồi ra, protein BRCA1 cịn có hoạt tính ubiquitin ligase nội sinh có nhiều chức năng, bao gồm hoạt tính ức chế khối u UT vú UTBT Hội chứng ung thư vú – buồng trứng di truyền (Hereditary Breast & Ovarian Cancer syndrome - HBOC) hội chứng tăng nguy phát triển UT vú UTBT có tính chất gia đình ĐB gen BRCA1 BRCA2 tế bào mầm di truyền alen sau trạng thái dị hợp mô sinh dưỡng Các dấu hiệu hội chứng bao gồm nhiều thành viên gia đình mắc UT vú và/hoặc UTBT, mắc UT vú/BT sớm, tiền sử cá nhân mắc UT vú BT, tiền sử gia đình có UT vú nam Theo Cơ sở liệu BRCA Exchange, ghi nhận 33 684 biến thể gen BRCA1, 32 973 biến thể BRCA2 Tỉ lệ biến thể có liên quan đến hội chứng UT vú UTBT di truyền (HBOC) 66% gen BRCA1 34% gen BRCA2 Tần số ĐB gây bệnh BRCA1/2 dân số chung khoảng 1/400-1/800 Riêng tỉ lệ mang ĐB BRCA1/2 bệnh nhân UTBT khoảng từ 5% đến 30% thay đổi phụ thuộc cộng đồng ĐB gen BRCA1/2 gây tăng nguy mắc UTBT UT khác Bảng 1.1 Nguy mắc UT người mang đột biến gen BRCA1/2 Nguy mắc UT Cộng đồng Đột biến BRCA1 Đột biến BRCA2 UT vú 12% 46%-87% 38%-84% UT vú bên lại 2% năm 21,1% 10 năm 10,8% 10 năm UTBT 1%-2% 37%-63% 16,5%-27% UT vú nam 0,1% 1,2% Đến 8,9% UT tuyến tiền liệt 6% đến 69 tuổi 8,6% đến 65 tuổi 15% đến 65 tuổi UT tụy 0,5% 1%-3% 2%-7% Melanoma 1,6% Tăng Vị trí UT Quần thể người Do Thái có nguy mắc HBOC cao tần suất mang ĐB BRCA1/2 cao phần lớn ba ĐB nghiên cứu nhiều: ĐB BRCA1 (187delAG 5385insC) BRCA2 (6174delT) Trong quần thể khác có ĐB BRCA1/2 đặc trưng khác nhau, có tần số phát cao, giới hạn quần thể hệ hiệu ứng “người sáng lập” (founder effect – di truyền quần thể) gọi ĐB “người sáng lập” (founder mutation) 1.3 Đa hình đơn nucleotide RAD51, XRCC3 liên quan đến UTBT Đa hình đơn nucleotide (single nucleotid polymorphisms – SNP) loại biến đổi di truyền phổ biến nhất, có thay nucleotide đơn vị trí cụ thể gen cá thể loài Điều tạo nên đa hình thái gen Ví dụ, vị trí đoạn DNA lại Adenin (A), Guanine (G) hay Thymine (T) Gen RAD51 XRCC3 đóng vai trị quan trọng chế sửa chữa tổn thương DNA tái tổ hợp tương đồng Các SNP hai gen thay đổi biểu gen ảnh hưởng lên tính nhạy cảm với UT nói chung Một số nghiên cứu gần báo cáo số SNP gen RAD51 gen XRCC3 ảnh hưởng đến nguy mắc UTBT 1.3.1 Đa hình đơn nucleotide gen RAD51 liên quan đến UTBT Gen RAD51 có vị trí 15q15.1 (cánh dài NST 15, vùng 1, băng 5, băng phụ 1), cặp base 40.694.774 kết thúc cặp base 40.732.340 Gen gồm 37.567 cặp base có 14 exon mRNA gen RAD51 có kích thước 2255 bp Protein RAD51 có 339 acid amin, khối lượng phân tử 36.966Da Hai SNP phổ biến RAD51 rs1801320 rs1801321 nghiên cứu yếu tố nguy cho bệnh UT khác vú, quản, UT đại trực tràng UTBT… Cả hai SNP nằm vùng giới hạn không phiên mã hóa đầu 5’ (5’UTR), báo cáo có liên quan đến thay đổi trình phiên mã gen biểu mRNA - SNP RAD51-rs1801320 (135G>C) nằm vùng 5’UTR (untranslated region – vùng không phiên mã) exon 1, có biến đổi Guanine (G) sang Cytosine (C) vị trí 40.695.330 SNP RAD51rs1801321 (172G>T) nằm vùng 5’UTR exon 1, có biến đổi Guanine (G) sang Thymine (T) vị trí 40.695.367 1.3.2 Đa hình đơn nucleotide gen XRCC3 liên quan đến UTBT Gen XRCC3 nằm vị trí 14q32.33 (cánh dài NST 14, vùng 3, băng 2, băng phụ 33), cặp base 103.697.611 kết thúc cặp base 103.715.486 với kích thước 17.896 bp, có 10 exon quy định tổng hợp phân tử mRNA 2574 bp mRNA sau trình dịch mã tạo phân tử protein XRCC3 với 346 acid amin, trọng lượng 37850Da Protein tham gia vào trình tái tổ hợp tương đồng trì ổn định hệ gen Các SNP gen XRCC3 rs861539, rs1799794 1799796 nhiều nghiên cứu báo cáo có liên quan đến nguy mắc UT UT đại trực tràng, UTBT, UT vùng đầu cổ, UT vú Các SNP ảnh hưởng trực tiếp lên cấu trúc protein XRCC3 gián tiếp điều hòa biểu gen XRCC3, dẫn đến thay đổi trình tái tổ hợp tương đồng sửa chữa tổn thương DNA SNP XRCC3-rs861539 nằm exon 8, vị trí 103699416 có Cytosine (C) biến đổi thành Thymine (T) làm biến đổi Threonine thành Methionine protein XRCC3 SNP XRCC3-rs1799794 nằm vùng 5’UTR exon vị trí 103712930 có Adenin (A) biến đổi thành Guanine (G) SNPXRCC3-rs1799796 nằm intron vị trí 103699590, có Adenine (A) biến đổi thành Guanine (G) CHƯƠNG - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Mục tiêu - Xác định dạng ĐB gen BRCA1, BRCA2 UTBT Bệnh nhân UTBT chẩn đoán xác định UTBT có hai tiêu chí Hội chứng ung thư vú – ung thư buồng trứng di truyền sau: (1) có kèm ung thư vú, (2) có người thân gia đình mắc UTBT hoặc/và ung thư vú Mục tiêu - Xác định số dạng đa hình thái đơn nucleotid (SNP) gen XRCC3, RAD51 có liên quan đến nguy mắc UTBT a Nhóm bệnh : Bệnh nhân UTBT Bệnh viện Phụ Sản Trung Ương chẩn đoán xác định kết mô bệnh học, không mắc UT khác, đồng ý tham gia nghiên cứu b Nhóm chứng: Những phụ nữ có tiền sử khơng mắc UTBT hay bệnh UT khác đến khám sức khỏe đến thăm khám điều trị bệnh lành tính Bệnh viện Phụ Sản Trung Ương Có độ tuổi tương đồng với nhóm bệnh 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu a Mục tiêu 1- Xác định dạng ĐB gen BRCA1, BRCA2 UTBT Phương pháp nghiên cứu mô tả cắt ngang Chọn 20 bệnh nhân thỏa điều kiện lấy mẫu làm xét nghiệm Sau bệnh nhân có phát ĐB gen, mời thành viên gia đình tham gia nghiên cứu để xác định ĐB gen bệnh nhân Lập sơ đồ phả hệ b Mục tiêu - Xác định số SNP gen RAD51, XRCC3 có liên quan đến nguy mắc UTBT Phương pháp nghiên cứu bệnhchứng Dựa theo kết nghiên cứu Quaye (2009) cơng thức tính cỡ mẫu cho nghiên cứu bệnh chứng có ước tính tỉ số nguy (OR): Với sai sót loại α=0,05 sai sót loại β=0,02 số C=7,85 OR=0,65, p=0,351, ta N= 743 Cho nên nhóm nghiên cứu nên chọn tối thiểu 372 người Chúng tơi chọn 380 người cho nhóm 2.2.2 Quy trình nghiên cứu: a Xác định ĐB gen BRCA1, BRCA2 bệnh nhân UTBT - Lấy mẫu máu bệnh nhân UTBT - Tách chiết DNA từ máu toàn phần - Giải trình tự gen hệ NGS - Phân tích xác định ĐB gen phần mềm CLC Main Workbench - Thiết kế mồi, kiểm định lại giải trình tự gen theo Sanger - Dựa vào hệ thống liệu di truyền BRCA Exchange, ClinVar, ENIGMA…, cơng cụ tin sinh học dự đốn khả gây bệnh để xác định khả gây bệnh ĐB - Lấy mẫu máu người nhà bệnh nhân mang ĐB để giải trình tự gen theo Sanger - Lập phả hệ di truyền ĐB b Xác định đa hình thái đơn nucleotide gen RAD51, XRCC3: - Lấy mẫu máu nhóm bệnh nhân nhóm chứng - Tách chiết DNA từ máu toàn phần - Khuếch đại đoạn gen chứa đa hình đơn nucleotide phương pháp PCR - Xác định đa hình đơn nucleotide gen RAD51 XRCC3 phương pháp RFLP (đa hình độ dài đoạn giới hạn) Giải trình tự Sanger kiểm tra đại diện kiểu gen - Dùng phương pháp thống kê xác định tỉ lệ đa hình đơn nucleotide mối liên quan chúng với nguy mắc UTBT, yếu tố khác UTBT 2.3 Thời gian địa điểm nghiên cứu - Địa điểm nghiên cứu: Bệnh viện Phụ sản Trung Ương, Trung tâm Nghiên cứu Gen - Protein Trường Đại học Y Hà Nội - Thời gian nghiên cứu: Từ tháng 01/2017 đến 10/2020 2.4 Xử lý số liệu Sử dụng phần mềm phân tích SPSS 20.0 để phân tích thống kê Các biến số lượng kiểm tra phân bố theo phân phối chuẩn kiểm định Kolmogorov - Smirnov So sánh giá trị trung bình biến theo phân phối chuẩn kiểm định Student T-test Sau kiểu gen mẫu xác định, tần số kiểu gen alen nhóm bệnh nhóm chứng so sánh cách sử dụng kiểm định Chi bình phương kiểm định Phi and Cramer’s tính tỷ số odd (OR) với khoảng tin cậy 95% (CI) Với giá trị p < 0.05 coi có ý nghĩa thống kê 2.5 Đạo đức nghiên cứu đề tài Đề tài Hội đồng Đạo đức trường Đại học Y Hà Nội chấp thuận theo chứng nhận số 107/HĐĐĐĐHYHN ngày 30/5/2017 Các đối tượng tham gia hồn tồn tự nguyện có quyền rút lui khỏi nghiên cứu Các thông tin liên quan đến bệnh nhân đảm bảo bí mật Các kỹ thuật thao tác bệnh nhân đảm bảo chuyên mơn Đề tài nghiên cứu thực mục đích khoa học khơng mục đích khác 2.6 Kinh phí: Đề tài hỗ trợ kinh phí từ đề tài cấp “Nghiên cứu xây dựng quy trình xác định đột biến đa hình thái đơn nucleotid số gen liên quan đến ung thư vú ung thư buồng trứng” GS.TS Nguyễn Viết Tiến chủ trì CHƯƠNG – KẾT QUẢ 3.1 Xác định đột biến gen BRCA1 BRCA2 bệnh nhân UTBT Toàn mẫu DNA bệnh nhân sau tách chiết từ mẫu máu thực giải trình tự hệ cho kết có 20 bệnh nhân có mang ĐB BRCA1 BRCA2 Các mẫu mang ĐB kiểm định giải trình tự Sanger với cặp mồi thiết kế đặc hiệu (40%) bệnh nhân mang ĐB bệnh nhân mang ĐB BRCA1 bệnh nhân mang ĐB BRCA2 12 (60%) bệnh nhân không mang ĐB 3.1.1 Đặc điểm tuổi mắc bệnh bệnh nhân Bảng 3.1 Đặc điểm tuổi mắc UTBT bệnh nhân Có ĐB Khơng Tổng ĐB ĐB có ĐB Tổng p BRCA1 BRCA2 N=06 N=02 N=8 N=12 N=20 Trung bình tuổi 47,67 63,50 51,63 50,58 51,00 0,147 ± 5,99 ±19,09 ±11,46 ±9,37 ±9,97 chẩn đốn Trung bình tuổi mắc bệnh bệnh nhân mang ĐB gen BRCA1 47,67, ĐB gen BRCA2 63,5 Trung bình tuổi mắc bệnh bệnh nhân có mang ĐB gen BRCA1/2 51,63 khơng khác biệt với trung bình tuổi mắc bệnh bệnh nhân không mang ĐB 50,58 3.1.2 Kết xác định ĐB gen BRCA1 BRCA2 Kết giải tình tự so sánh với trình tự chuẩn GeneBank phần mềm CLC Main Workbench, phân tích đặc điểm vị trí ĐB gen BRCA1 BRCA2, phân tích khả gây bệnh sở liệu ĐB gen BRCA1/2 cho kết thể Bảng 3.2 11 ĐB, xác định (35,3%) 17 người thân bệnh nhân xét nghiệm có mang ĐB bệnh nhân Kết đại diện ĐB BRCA1:c.1621C>T xác định bệnh nhân KBT2 có mẹ 01 chị gái mắc UT vú Những người thân bệnh nhân KBT2 bao gồm gái, chị gái, em gái cháu gái thu thập mẫu máu để xác định ĐB Chị gái mắc UT vú KBT2.2 em gái KBT2.3 không mắc UT mang ĐB Con gái KBT2 (KBT2.5), chị gái KBT2.1 gái người KBT2.4 khơng mang ĐB Hình 3.1 Sơ đồ phả hệ di tuyền ĐB BRCA1:c.1621C>T bệnh nhân KBT2 Hình vng: Nam Hình trịn: nữ Mũi tên: Bệnh nhân nghiên cứu Màu nâu: UTBT Màu xám: UT vú CĐ UTV: Tuổi chẩn đoán UT vú CĐ UTBT: Tuổi chẩn đoán UTBT BRCA+: Mang ĐB BRCA-: Không mang ĐB KBT: mã bệnh nhân người nhà bệnh nhân ĐB BRCA1:c.1621C>T có người mắc UT vú, người mắc UTBT người chưa mắc loại UT Đột biến KBT2 thể dị hợp, không di truyền cho gái 3.2 Xác định SNP RAD51, XRCC3 mối liên quan với UTBT 380 bệnh nhân UTBT 380 đối chứng phù hợp thực PCR-RFLP xác định 05 đa hình đơn nucleotid gen RAD51, XRCC3 phân tích mối liên quan với ung thư buồng trứng Các đại diện kiểu gen đa hình đơn nucleotid kiểm tra giải trình tự Sanger 12 3.2.1 Đặc điểm chung lâm sàng nhóm UTBT nhóm chứng Bảng 3.4 Các đặc điểm chung nhóm UTBT nhóm chứng Đặc điểm ≤ 39 40-59 ≤ 60 Tuổi trung bình Trung bình tuổi có kinh Cịn kinh Mãn kinh Mãn kinh Nhóm tuổi UTBT n=380 100% 93 24,5 173 45,5 114 30,0 49,80± 15,50 Đối chứng n=380 100% 102 26,8 170 44,7 108 28,4 49,26± 13,88 0,739 0,610 15,22±1,77 15,01±1,85 0,096 166 214 43,7 56,3 177 203 46,6 53,4 P 0,423 Phân bố nhóm tuổi hai nhóm bệnh nhân UTBT nhóm đối chứng tương đồng, nhiều độ tuổi từ 40-59 thấp độ tuổi 40 Tuổi trung bình nhóm bệnh nhân UTBT 49,8 nhóm chứng 49,26, khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê Trung bình tuổi có kinh trạng thái mãn kinh hai nhóm không khác biệt 3.2.2 Xác định SNP RAD51- rs1801320 mối liên quan với UTBT Bảng 3.5 Tỉ lệ kiểu gen/ alen SNP rs1801320 mối liên quan nguy UTBT RAD51rs1801320 G Kiểu alen C Kiểu gen Nhóm UTBT Nhóm chứng Tổng n % n % N % 586 77,1 638 83,9 1224 80,5 174 22,9 122 16,1 GG 242 63,7 264 69,5 GC 102 26,8 110 28,9 CC 36 9,5 1,6 344 90,5 374 98,4 36 9,5 1,6 242 63,7 264 69,5 138 36,3 116 30,5 GG + GC Di truyền CC lặn GG Di truyền GC + CC trội p OR (CI95%) 1,0 1,553 296 19,5 (1,201-2,008) 506 66,6 1,0 1,012 212 27,9 0,000 (0,734-1,394) 6,545 42 5,5 (2,710-15,807) 1,0 0,000 6,523 (2,715-15,673) 1,0 0,091 1,298 (0,959-1,756) 0,001 Trong tổng nhóm nghiên cứu tỉ lệ alen C (19%) thấp alen G Kiểu gen GG có tần suất cao nhất, CC thấp Alen C có nguy 13 UTBT cao alen G 55% (ORC/G=1,55, CI95% 1,201-2,008) Tỉ lệ kiểu gen CC nhóm UTBT cao nhóm chứng, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p1, CI95% chứa 16 3.2.6 Xác định SNP XRCC3-rs1799796 mối liên quan với UTBT Bảng 3.9 Tỉ lệ kiểu gen/alen SNP rs1799796 mối liên quan với nguy UTBT XRCC3- rs1799796 A Kiểu alen Kiểu gen Di truyền lặn Nhóm UTBT Nhóm chứng Tổng n % n % N % 451 59,3 418 55,0 869 57,2 G 309 40,7 342 45,0 651 GG 60 15,8 89 23,4 149 AG 189 49,7 164 43,2 353 AA 131 34,5 127 33,4 258 AG + GG 249 65,5 253 66,6 AA 131 34,5 127 33,4 60 15,8 89 23,4 320 84,2 291 76,6 GG Di truyền trội AA + AG p OR (CI95%) 1,0 0,837 42,8 (0,683-1,026) 19,6 1,0 1,709 46,4 0,024 (1,159-2,521) 1,530 33,9 (1,017-2,302) 1,0 0,759 1,048 (0,776-1,415) 1,0 0,008 1,631 (1,134-2,347) 0,087 Trong tổng nhóm tỉ lệ alen G (42,8%) thấp tỉ lệ alen A kiểu gen GG có tần suất thấp nhất, kiểu gen AG có tần suất cao Tỉ lệ alen G nhóm UTBT (40,7%) thấp nhóm chứng (45,0%) Alen G mang nguy mắc UTBT thấp alen A với ORG/A=0,837, nhiên chưa đủ ý nghĩa thống kê, CI95% chứa (p=0,656) Tỉ lệ kiểu gen AA AG nhóm UTBT cao nhóm chứng, GG lại thấp hơn, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p=0,024) Kiểu gen AG AA có nguy UTBT cao GG 70% 53% với ORAG/GG = 1,709, ORAA/GG=1,530 CI95% khơng chứa Trong phân tích mơ hình di truyền trội nhóm kiểu gen chứa alen A (AA+AG) mang nguy UTBT cao kiểu gen GG 63% với ORGG/(AA+AG)=1,631 CI95% không chứa CHƯƠNG - BÀN LUẬN 4.1 Xác định đột biến gen BRCA1 BRCA2 bệnh nhân UTBT 4.1.1 Kết xác định ĐB gen BRCA1/2 Quy trình giải trình tự gen xác định ĐB BRCA1 BRCA2 thiết kế chuyên gia Trung tâm Gen-Protein, Đại học Y Hà Nội nghiệm thu đề tài cấp “Nghiên cứu xây dựng quy trình xác định đột biến đa hình thái đơn nucleotid số gen liên quan đến ung thư vú ung thư buồng trứng” GS.TS Nguyễn Viết Tiến 17 Nghiên cứu tiến hành 20 mẫu bệnh nhân UTBT có hai yếu tố (1) mắc kèm UT vú (2) có người thân gia đình mắc UT vú hoặc/và UTBT Trong 20 bệnh nhân UTBT giải trình tự gen BRCA1 BRCA2 giải trình tự hệ mới, xác định ĐB kiểm định lại giải trình tự Sanger, bao gồm (30%) bệnh nhân mang ĐB gen BRCA1, (10%) bệnh nhân mang ĐB gen BRCA2 Tỉ số ĐB BRCA1:ĐB BRCA2 = 3:1 tương đồng với tỉ lệ số ĐB BRCA1/số ĐB BRCA2 có liên quan hội chứng HBOC 66%:34% tổng quan hai gen Trung tâm thông tin công nghệ sinh học quốc gia (National Center Biotechnology Information - NCBI) Ginburg (2010) nghiên cứu 292 bệnh nhân UT vú Việt Nam không chọn lọc tiền sử gia đình với có bệnh nhân có hội chứng HBOC, xác định tỉ lệ mang ĐB BRCA1/2 0,68%, có ĐB BRCA1 ĐB BRCA2, nhiên hai bệnh nhân khơng liên quan hội chứng HBOC Hồng Anh Vũ (2020) 101 bệnh nhân UTBT không chọn lọc xác định bệnh nhân mang ĐB BRCA1 (7,9%) không ĐB BRCA2 Trong sở liệu Trung tâm xét nghiệm di truyền Myriad, Hoa kỳ quan sát 162 914 bệnh nhân với hai tiêu chí nghiên cứu tơi tỉ lệ mang ĐB gen BRCA1/2 từ 12,1% đến 64,5% Độ tuổi trung bình thời điểm chẩn đốn bệnh nhóm bệnh nhân mang ĐB (51,63) không mang ĐB (50,58) tương đồng (p=0,826) (Bảng 3.1) Tuổi chẩn đốn nhóm bệnh nhân mang ĐB BRCA1 (47,67) thấp bệnh nhân có ĐB BRCA2 51,63, tương đồng với nhận định trước UTBT người mang ĐB BRCA2 xuất muộn trung bình 8-10 năm so với người mang ĐB BRCA1 Sản phẩm khuếch đại gen BRCA1 BRCA2 giải tình tự so sánh kết với trình tự chuẩn GeneBank (BRCA1: NM_007294.3 NG_005905, BRCA2: NM_000059.3 NG_012772) phần mềm CLC Main Workbench Kết phân tích thể Bảng 3.2 khái quát lại Sơ đồ 3.1 Sơ đồ 3.2 Tên ĐB theo thay đổi nucleotide thay đổi cấp độ protein dựa theo nguyên tắc ký hiệu Hiệp hội biến thể gen người (Human Genome Variation Society) Trong ĐB gen BRCA1 có ĐB exon 11 (c.1016del A, c.1621C>T c.2760-2763delACAG), ĐB intron 16 (c.4986+4A>T), ĐB exon 17 (c.4997dupA) ĐB exon 22 (c.5335delC) Hai ĐB gen BRCA2 nằm exon 11, 18 c.4022delC ĐB chưa báo cáo, c5453C>A báo cáo trước Trong ĐB BRCA1 BRCA2 có ĐB vô nghĩa (N) làm xuất mã ba kết thúc sớm vị trí ĐB, ĐB dịch khung (F) làm xuất mã ba kết thúc sớm sau vị trí ĐB số ba ĐB vị trí cắt (Ss) intron 16 gen BRCA1 Tất ĐB sở liệu phần mềm tin sinh học dự đoán khả gây bệnh, đánh giá ĐB gây bệnh, tăng khả mắc bệnh UT liên quan HBOC Có ĐB nằm vùng cụm UTBT (OCCR) (BRCA1:c.1621C>T, BRCA1:c.2760-2763delACAG OCCR3 gen BRCA1 BRCA2:c.4022delC, BRCA2:c.5453C>A OCCR1 gen BRCA2) cho có nguy UTBT cao nguy UT vú thấp so với ĐB vùng Ngược lại ĐB BRCA1 c.4986+4A>T, c.4997dupA c.5335delC nằm vùng cụm UT vú (BCCR2) lại mang nguy UT vú cao nguy UTBT thấp so với ĐB vùng Và đồng thời ĐB vùng cụm UT vú nằm vùng chức BRCT gắn với protein BACH1, cho mang nguy UT vú cao người không mang ĐB 26%, cịn nguy UTBT thấp người khơng mang ĐB chưa có ý nghĩa thống kê khoảng 14% 4.1.2 Mối liên quan đột biến BRCA1/2 mô bệnh học Kết mô bệnh học bệnh nhân UTBT chủ yếu UT biểu mô BT dạng dịch (16 người chiếm 80%), có bệnh nhân mang ĐB gen BRCA1/2 chiếm 75% bệnh nhân mang ĐB gen (Bảng 3.3) Dù khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê mơ bệnh học nhóm bệnh nhân UTBT mang ĐB BRCA1/2 nhóm khơng mang ĐB (p=0,358), nhiên kết tương đồng với nghiên cứu trước báo cáo tỉ lệ UTBT dịch chiếm 75-100% bệnh nhân UTBT mang ĐB gen BRCA1/2 Khơng có mối liên quan kiểu đột biến với mô bệnh học 4.1.3 Xác định ĐB BRCA1/2 người thân bệnh nhân lập phả hệ Trong số 17 người nhà bệnh nhân có mang ĐB gen BRCA1/2 thu thập mẫu để giải trình tự có (35,3%) người mang ĐB gen giống bệnh nhân ĐB BRCA1:c.1621C>T xác định bệnh nhân UTBT KBT2 có mẹ chị gái bị UT vú độ tuổi 50, đặc điểm đặc trưng hội chứng HBOC Kết giải trình tự gen người nhà bệnh nhân cho thấy có chị gái (mắc UT vú) em gái (chưa 19 phát UT) có mang ĐB Sơ đồ phả hệ di truyền ĐB BRCA1:c1621C>T gia đình bệnh nhân KBT2 lập dựa kết xét nghiệm ĐB thơng tin thu thập (Hình 3.1) Nhận thấy ĐB có người mắc UT vú 50 tuổi, người mắc UTBT người chưa mắc loại UT này, nhiên ĐB bệnh nhân KBT2 thể dị hợp không di truyền cho gái Các bệnh nhân người nhà tư vấn kết xét nghiệm Đối với bệnh nhân UTBT xét nghiệm xác định có mang ĐB gen gây bệnh tư vấn bác sĩ lâm sàng chọn lựa liệu pháp điều trị đích với thuốc ức chế PARP, đánh giá nguy mắc UT khác, đồng thời tư vấn cho người thân bệnh nhân đánh giá nguy mang ĐB gen BRCA1/2 nguy mắc UTBT UT vú Áp dụng ứng dụng dựa sở liệu lớn, tin cậy để cá thể hóa tính nguy mang ĐB BRCA1/2 cho người có đặc điểm hội chứng HBOC, ước tính nguy mắc ung thư người mang ĐB gen chưa mắc ung thư, tác động biện pháp tầm sốt dự phịng Thí dụ áp dụng CanRisk Tool nhóm nghiên cứu BOADICEA, Đại học Cambridge, Anh với liệu cá nhân, gia đình đối tượng KBT2.3 (em gái bệnh nhân KBT2) mang ĐB chưa mắc ung thư để đưa sơ đồ minh họa trực quan nguy mắc ung thư theo độ tuổi đến 80 tuổi Biểu đồ 4.1 Nguy mắc UT vú (A) UTBT (B) theo tuổi KBT2.3 Biểu đồ 4.1 thể trực quan nguy mắc UT vú UTBT tăng lên theo độ tuổi đến 80 tuổi cao nhiều so với nguy dân số chung 20 Hình 4.2 Nguy mắc UT vú (A) UTBT (B) đến 80 tuổi KBT2.3 Công cụ Decision Tool Viện Ung thư quốc gia, Đại học Standford, Hoa kỳ (brcatool.stanford.edu/brca.html) hỗ trợ tư vấn cụ thể cho người mang ĐB gen BRCA1/2 chưa mắc UT vú hay UTBT lợi ích biện pháp sàng lọc dự phòng UT vú, UTBT, so sánh biện pháp thời điểm thực khác Bảng 4.1 Ước tính khả kết cục KBT2.3 Biện pháp sàng lọc, dự phòng (tuổi) Sàng lọc PT cắt vú PT cắt BT -VTC bên Mất, nguyên nhân khác Khả Mất UTBT Mất UT vú đến 70 tuổi Sống sau UTBT(a) (trên 100 Sống sau UT vú(b) người) Sống, không mắc UT vú/ UTBT(c) Sống đến 70 tuổi (trên 100 người) =(a)+(b)+(c) NA+ - MRI - 45 - NA+ MRI So với - 45 không ĐB - 50 45 45 - NA - - - - - 11 17 18 11 25 11 18 15 11 27 12 18 10 12 31 12 18 13 12 15 13 24 14 16 14 18 18 17 38 24 40 53 79 54 56 60 63 62 67 74 85 11 19 33 - (-) không thực NA-nhũ ảnh hàng năm MRI-chụp cộng hưởng từ vú hàng năm Số người sống sót đến 70 tuổi (trên 100 người) tăng lên áp dụng kết hợp biện pháp sàng lọc phẫu thuật dự phòng; hiệu việc sàng lọc kết hợp nhũ ảnh MRI cao dùng nhũ ảnh; phẫu thuật dự phòng cắt buồng trứng vòi tử cung bên đơn hiệu cao phẫu thuật dự phòng cắt hai bên vú đơn thuần; thời điểm thực phẫu thuật dự phòng sớm tốt 21 4.2 Xác định SNP XRCC3, RAD51 mối liên quan với UTBT Những tiến đáng kinh ngạc di truyền học đại, đặc biệt thành nghiên cứu tế bào gốc đồ gene người giúp nhà khoa học dự đoán phản ứng thể nhờ phân tích gene người bệnh Căn vào đồ gene người, y học cá thể hóa sử dụng chẩn đốn chi tiết tinh tế để đưa phác đồ điều trị xác, phù hợp đặc điểm di truyền người cấp độ phân tử nên gọi “y học dựa chứng” hay “y học xác” Khoa học chứng minh nhiều bệnh có nguồn gốc từ kiểu gene nên bước tiến quan trọng hướng đến việc điều trị hiệu với tác dụng phụ 4.2.1 Đặc điểm chung lâm sàng nhóm UTBT nhóm chứng Những đặc điểm chung tuổi trung bình, phân bố nhóm tuổi, trung bình tuổi có kinh tình trạng mãn kinh tương đồng nhóm bệnh nhóm chứng, khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê (p>0,05) Ở bệnh nhân UTBT, nhóm tuổi từ 40 đến 60 tuổi nhiều chiếm 45,5% nhóm tuổi 0,05 cho thấy đa hình khơng liên quan với nguy mắc UTBT Alen C có nguy mắc UTBT cao alen T với ORC/T=1,241, nhiên CI95% lại chứa Kiểu gen CC nguy cao kiểu gen TT so sánh đồng hợp mơ hình di truyền trội, di truyền lặn nhiên khơng có ý nghĩa thống kê CI95% OR chứa Smolarz (2019) báo cáo đa hình có liên quan đến nguy UTBT kiểu gen CC nguy cao TT Nghiên cứu Cheng (2012) bệnh nhân UTBT Trung Quốc nhận định kiểu gen CC có nguy tử vong cao so với TT Trong tác giả khác Auranen (2005), Monteiro (2014) Webb (2005) nghiên cứu họ khơng tìm thấy mối liên quan đa hình với nguy mắc UTBT 4.2.5 Xác định SNP XRCC3-rs1799794 mối liên quan với UTBT Trong tổng hai nhóm alen G chiếm tỉ lệ 46,3% thấp alen A, theo liệu NCBI tỉ lệ alen G từ 15,9% đến 59,1% tùy chủng tộc Sự phân bố kiểu alen hai nhóm nghiên cứu khơng khác biệt có ý nghĩa 23 thống kê (p=0,837), phân bố kiểu gen có khác biệt với p =0,022, cho thấy có mối liên quan đa hình với nguy UTBT Alen G có nguy UTBT cao so với alen A với ORG/A=1,012, nhiên khoảng tin cậy 95% lại chứa 1, chưa đủ ý nghĩa thống kê Kiểu gen dị hợp AG có nguy UTBT cao kiểu gen AA GG khoảng 33% với ORAA/AG=0,675, CI95%=0,483-0,943 ORGG/AG=0,663, CI95%=0,458-0,960 Trong mơ hình di truyền trội di truyền lặn nhóm có AG có nguy UTBT cao kiểu gen lại, nhiên chưa đủ ý nghĩa thống kê CI95% OR chứa Các nghiên cứu Auranen (2005), Quaye (2009) Yuan (2014) báo cáo có mối liên quan đa hình với nguy UTBT, người mang kiểu gen GG có nguy mắc UTBT thấp kiểu gen lại 4.2.6 Xác định SNP XRCC3-rs1799796 mối liên quan với UTBT Trong tổng hai nhóm alen G chiếm tỉ lệ 42,8% thấp alen A, theo liệu NCBI tỉ lệ alen G từ 11,42% đến 61,1% tùy chủng tộc Kiểu gen GG có tỉ lệ thấp nhiều so với kiểu gen AA AG Sự phân bố kiểu alen hai nhóm nghiên cứu khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê (p=0,837), phân bố kiểu gen khác biệt nhóm với p =0,022 Cho thấy có mối liên quan SNP với nguy mắc UTBT Alen G có nguy mắc UTBT thấp alen A với ORG/A =0,837, nhiên chưa có đủ ý nghĩa thống kê CI95% OR chứa Các kiểu gen AA AG có nguy UTBT cao GG 71% 53% với ORAG/GG=1,709, ORAA/GG=1,530, CI95% OR khơng chứa Trong mơ hình di truyền trội, nhóm kiểu gen chứa alen A (AG+AA) có nguy mắc UTBT cao kiểu gen GG 63% với ORAG+AA/GG=1,631, CI95%=1,134-2,347 Các nghiên cứu Auranen (2005), Yuan (2014) báo cáo có mối liên quan đa hình với nguy UTBT, nghiên cứu Quaye (2009) Nguyễn Thị Hải Phương (2018) chưa tìm thấy mối liên quan KẾT LUẬN ❖ Xác định đột biến gen BRCA1 BRCA2 liên quan đến ung thư buồng trứng: - Trong 20 bệnh nhân, có (40%) bệnh nhân mang đột biến, (20%) đột biến BRCA1 (10%) đột biến BRCA2 Các ĐB kiểm định sở liệu di truyền cơng cụ tin sinh học dự đốn khả gây bệnh có kết đột biến gây bệnh, làm tăng nguy mắc ung thư buồng trứng ung thư vú Một đột biến 24 mới, chưa cơng bố: BRCA2: c.4022delC Có 6/8 bệnh nhân mang đột biến có mơ bệnh học ung thư biểu mơ dịch Chưa tìm thấy mối liên quan đột biến gen BRCA1/2 với mô bệnh học ❖ Xác định đa hình đơn nucleotide gen RAD51 XRCC3 : - Bốn đa hình có liên quan đến nguy mắc ung thư buồng trứng + RAD51-rs1801320: Alen C 19,5% Tỉ lệ kiểu gen CC:GC:GG= 5,5%:27,9% : 66,6% Alen C có nguy ung thư buồng trứng cao alen G 55% kiểu gen CC có nguy ung thư buồng trứng cao kiểu gen lại 6,5 lần với ORCC/(GG+GC)=6,523, CI95%=(2,715-15,673) + RAD51-rs1801321: Alen T 19,5% Tỉ lệ kiểu gen TT: GT:GG=12,9%: 35,5% :51,6% Kiểu gen GT có nguy ung thư buồng trứng thấp GG 65% với ORGG/GT=1,653, CI95%=(1,208-2,261), nửa nguy TT với ORTT/GT=2,167, CI95%=(1,352-3,473) + XRCC3-rs1799794: Alen G 46,3% Tỉ lệ kiểu gen GG:AG:AA=21,2%:50,3%:28,6% Kiểu gen AG có nguy ung thư buồng trứng cao AA 32,5% với ORAA/AG=0,675, CI95%=0,4830,943 GG 33,7% với ORGG/AG=0,663, CI95%=0,458-0,960 + XRCC3-rs1799796: Alen G 42,8% Tỉ lệ kiểu gen GG:AG:AA=19,6%:46,4%:33,9% Nhóm kiểu gen chứa alen A (AA AG) có nguy ung thư buồng trứng cao GG 63% với OR(AG+AA)/GG=1,631, CI95%=1,134-2,347 - Chỉ 01 đa hình XRCC3-rs861539 không liên quan nguy ung thư buồng trứng Tỉ lệ alen T 5,9% Tỉ lệ kiểu gen TT:CT:CC=0,7%: 10,4% :88,9% KHUYẾN NGHỊ Đột biến gen BRCA1 gen BRCA2 có ảnh hưởng lên nguy mắc ung thư buồng trứng Đối với phụ nữ có đặc điểm hội chứng ung thư vú, ung thư buồng trứng di truyền cần phải xác định đột biến BRCA1, BRCA2 Đối với bệnh nhân ung thư buồng trứng mang đột biến gen nên định hướng điều trị đích với thuốc ức chế PARP Đối với phụ nữ mang đột biến BRCA1, BRCA2 chưa mắc ung thư vú ung thư buồng trứng cần tư vấn tầm sốt, dự phịng ung thư vú ung thư buồng trứng CÁC CƠNG TRÌNH LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Lê Nguyễn Trọng Nhân, Nguyễn Thu Thúy, Vương Vũ Việt Hà, Nguyễn Quý Linh, Trần Vân Khánh, Trần Huy Thịnh, Tạ Thành Văn, Nguyễn Viết Tiến (2020) Mối liên quan đa hình rs1801320 gen RAD51 nguy mắc ung thư buồng trứng Tạp chí nghiên cứu y học Tập 128 (4), trang 1-9 Lê Nguyễn Trọng Nhân, Nguyễn Thu Thúy, Đặng Thùy Trang Nguyễn Quý Linh, Trần Vân Khánh, Trần Huy Thịnh, Tạ Thành Văn, Nguyễn Viết Tiến (2020) Mối liên quan đa hình rs1799796 gen XRCC3 nguy mắc ung thư buồng trứng Tạp chí y dược học Cần Thơ Số 28/2020, trang 16-23 Lê Nguyễn Trọng Nhân, Nguyễn Thu Thúy, Đặng Thùy Trang, Vương Vũ Việt Hà, Nguyễn Quý Linh, Trần Vân Khánh, Trần Huy Thịnh, Tạ Thành Văn, Nguyễn Viết Tiến (2020) Mối liên quan đa hình đơn rs861539 gen XRCC3 nguy mắc ung thư buồng trứng Tạp chí nghiên cứu y học Tập 130, số 6, trang 48-56 Lê Nguyễn Trọng Nhân, Nguyễn Thu Thúy, Nguyễn Quý Linh, Trần Vân Khánh, Trần Huy Thịnh, Tạ Thành Văn, Nguyễn Viết Tiến (2021) Mối liên quan đa hình rs1801321 gen RAD51 nguy mắc ung thư buồng trứng Bản B Tạp chí khoa học công nghệ Việt Nam Tập 63, số 5, trang 1-5 Lê Nguyễn Trọng Nhân, Nguyễn Thu Thúy, Nguyễn Quý Linh, Trần Vân Khánh, Trần Huy Thịnh, Tạ Thành Văn, Nguyễn Viết Tiến (2021) Mối liên quan đa hình đơn rs1799794 gen XRCC3 nguy mắc ung thư buồng trứng Tạp chí nghiên cứu y học Tập 137, số 1, trang 181-189 ... dạng đột biến hai gen BRCA1 BRCA2, đa hình thái đơn nucleotide (SNP) gen XRCC3, RAD51 với nguy ung thư buồng trứng, đề tài ? ?Nghiên cứu tính đa hình thái đơn nucleotid (SNP) đột biến số gen ung thư. .. đến nguy mắc ung thư buồng trứng 2 NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN Đây nghiên cứu khoa học Việt Nam tính đa hình thái đơn nucleotide đột biến gen ung thư buồng trứng Xác định đột biến gen BRCA1,... đột biến gen BRCA1, BRCA2 để có hướng dẫn tầm sốt, dự phịng ung thư vú, ung thư buồng trứng thích hợp Kết nghiên cứu xác định đột biến bao gồm gen BRCA1 gen BRCA2 20 bệnh nhân ung thư buồng trứng