Nghiên cứu đã thực hiện khảo sát các hoạt tính sinh học có tác dụng điều trị đái tháo đường type 2 và ngăn ngừa một số biến chứng, trên lá của các cây sake (Artocarpus altilis (Park.) Fosb.), ổi (Psidium guajava L.) và nở ngày đất (Gomphrena celosioides Mart.). Ổi cho giá trị IC50 ức chế enzyme α-glucosidase thấp nhất (1,98 µg/mL) và cũng là cây có khả năng kháng oxy hóa tôt nhất với IC50 là 17,23 µg/mL.
Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần 20 năm 2018 Kỷ yếu khoa học NGHIÊN CỨU KẾT HỢP MỘT SỐ THẢO DƯỢC NHẰM ĐIỀU TRỊ ĐÁI THÁO ĐƯỜNG TYPE 2, NGĂN NGỪA BIẾN CHỨNG VÀ ỨNG DỤNG TRONG BÀO CHẾ THỰC PHẨM CHỨC NĂNG Nguyễn Ngọc Đoan Trinh* Trường Đại học Bách Khoa – Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh *Tác giả liên lạc: 1414190@hcmut.edu.vn TÓM TẮT Nghiên cứu thực khảo sát hoạt tính sinh học có tác dụng điều trị đái tháo đường type ngăn ngừa số biến chứng, sake (Artocarpus altilis (Park.) Fosb.), ổi (Psidium guajava L.) nở ngày đất (Gomphrena celosioides Mart.) Ổi cho giá trị IC50 ức chế enzyme α-glucosidase thấp (1,98 µg/mL) có khả kháng oxy hóa tơt với IC50 17,23 µg/mL Trong đó, nở ngày đất thể khả kháng viêm tốt ba dược liệu với IC20 5,13 µg/mL Kết nghiên cứu cho thấy, tỷ lệ theo khối lượng (1:3:1) (sake: ổi: nở ngày đất) cho hoạt tính sinh học tốt, giá trị IC50 ức chế enzyme α-glucosidase, kháng oxy hóa và IC20 kháng viêm 6,32 µg/mL, 27,95 µg/mL 92,61 µg/mL Từ thấy tiềm mẫu kết hợp (1:3:1) việc áp dụng vào bào chế trà túi lọc nhằm điều trị bệnh ngăn ngừa biến chứng bệnh đái tháo đường type Từ khóa: Đái tháo đường type 2, thực phẩm chức năng, sake, ổi, nở ngày đất, αglucosidase, kháng oxy hóa, kháng viêm HERBAL COMBINATION IN TREATMENT OF DIABETES TYPE 2, PREVENTION OF ITS COMPLICATIONS AND DIETARY SUPPLEMENTS APPLICATION Nguyen Ngoc Doan Trinh* University of Technology – VNU Ho Chi Minh City *Corresponding Author: 1414190@hcmut.edu.vn ABSTRACT Some biological activities of leaves of Artocarpus altilis (Park.) Fosb., Psidium guajava L and Gomphrena celosioides Mart were investigated The results showed that while Psidium guajava L exhibits the strongest inhibition of αglucosidase activity (IC50=1,98 µg/mL) and also the strongest antioxidant activity (IC50=17,23 µg/mL); Gomphrena celosioides Mart displays the strongest anti-inflammatory activity (IC20=5,13 µg/mL) The next results showed that the combined ratio by mass (1:3:1), with three parts of Psidium guajava L., obtaines the best biological activities; whose IC50 values of inhibition of αglucosidase activity, antioxidant activity and IC20 value of anti-inflammatory activity, in order, were 6,32 µg/mL, 27,95 µg/mL and 92,61 µg/mL These results suggest that sample (1:3:1) has a potential dietary supplements application to tea bags used in treatment of diabetes type and prevention of its complications Keywords: Diabetes type 2, dietary supplements, Artocarpus altilis (Park.) Fosb., Psidium guajava L., Gomphrena celosioides Mart., α-glucosidase, antioxidant, anti-inflammatory 259 Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần 20 năm 2018 TỔNG QUAN Đái tháo đường (ĐTĐ) bệnh nguy hiểm, có diễn biến âm thầm phức tạp Ở Việt Nam, khoảng triệu người mắc bệnh ĐTĐ 60% chưa chẩn đóa n Tuy nhiên, số chưa dừng lại, có xu hướng tăng cao Hiện nay, thị trường có nhiều loại thuốc chữa ĐTĐ hiệu insulin, sulfonylurea, biguanit,… Tuy nhiên, chúng lại có số tác dụng phụ với chi phí điều trị đắt đỏ Lá khô sa kê phân lập chín hợp chất, có sáu hợp chất nhóm flavonoid ba thuộc nhóm tecpenoid thiên nhiên Các kết thử hoạt tính cho thấy dịch chiết hợp chất phân lập từ sa kê có tác dụng chống oxy hóa tốt, ức chế enzyme αglucosidase α-amylase, enzyme liên quan đến chuyển hóa glucose gây bệnh tiểu đường (PGS.TS Trần Thu Hương, 2014) Đối với ổi, hoạt tính chống oxy hóa (IC50) dịch chiết thu điều kiện chiết thích hợp đánh giá dựa vào khả khử gốc tự ABTS tổng lực khử 1,95 508 µg/mL (Hồ Bá Vương et al., 2015) NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu Sau thu hái, đối tượng nghiên cứu (sake, ổi, nở ngày đất) sấy thơng gió đến đạt độ ẩm thích hợp, sau xay thành bột bảo quản điều kiện tiêu chuẩn Tiếp đến, tiến hành khảo sát hoạt tính sinh học đối tượng nghiên cứu, sử dụng cao chiết từ bột nguyên liệu Phương pháp nghiên cứu Hàm lượng polyphenol tổng (TPE) Kỷ yếu khoa học đối tượng khảo sát xác định theo phương pháp Folin – Ciocalteau Singleton (1999), dựa trao đổi điện tử mơi trường kiềm hợp chất phenolic bị oxy hóa thuốc thử Folin – Ciocalteau tạo thành hợp chất có màu xanh (molydenium) Tiến hành đo độ hấp thu bước sóng 760nm kết hợp với đồ thị đường chuẩn theo acid gallic, tính hàm lượng tổng hợp chất phenolic có mẫu phân tích Định lượng flavonoid (TFE) theo phương pháp aluminum chloride – AlCl3, dựa phản ứng tạo phức nhóm flavonoid với muối nhôm chloride môi trường methanol, cho phức chất màu vàng Tiến hành đo độ hấp thu bước sóng 425nm kết hợp với đồ thị đường chuẩn theo quercetin, tính hàm lượng flavonoid có mẫu phân tích Phương pháp đánh giá hoạt tính ức chế enzyme α–glucosidase in vitro dựa phản ứng thủy phân chất paranitrophenyl α-D-glucopyranoside (pNPG) có mặt enzyme αglucosidase, tạo sản phẩm paranitrophenol (p-NP) α-D-glucose Khi có mặt chất ức chế, enzyme αglucosidase giảm phần hoạt tính, lượng p-nitrophenol sinh dẫn đến việc làm giảm độ hấp thu bước sóng 405nm Thơng qua việc so sánh độ hấp thu mẫu cao với chứng âm, xác định lượng enzyme bị cao ức chế Đánh giá hoạt tính kháng oxy hóa theo phương pháp DPPH (1,1-Diphenyl-2picrylhydrazyl) Khi điện tử lẻ gốc tự DPPH kết hợp với hydro từ chất chống oxy hóa màu sắc mẫu khảo sát chuyển từ màu tím sang màu vàng Thông qua việc so sánh độ hấp thu mẫu cao với mẫu trắng, xác định lượng gốc tự DPPH 260 Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần 20 năm 2018 bị bắt Đánh giá hoạt tính kháng viêm theo phương pháp ức chế biến tính albumin Gây biến tính albumin cách ủ hỗn hợp 70oC vòng phút Làm nguội hỗn hợp phản ứng đo độ hấp thu bước sóng 660nm KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Định lượng polyphenol tổng flavonoid Nhóm chất polyphenol số thực vật nhà khoa học chứng minh có khả ức chế hoạt động enzyme α-glucosidase, giúp Kỷ yếu khoa học hạn chế hấp thu glucose vào máu sau ăn Polyphenol cho thấy tiềm kháng oxy hóa thơng qua khả tiêu diệt gốc tự do, có vai trị quan trọng việc phòng ngừa biến chứng Flavonoid polyphenol điển hình có khả ức chế enzyme α-glucosidase cách hiệu Việc xác định hàm lượng polyphenol flavonoid sake, ổi, nở ngày đất cách gián tiếp để đánh giá khả điều trị tiểu đường chúng Hàm lượng polyphenol tổng flavonoid đối tượng khảo sát thể Hình Hình Hàm lượng polyphenol tổng flavonoid đối tượng nghiên cứu Hình cho thấy hàm lượng polyphenol lượng polyphenol tổng ổi cao (224,14 Khảo sát hoạt tính ức chế enzyme αmgGAE/g), gấp 1,93 lần hàm lượng glucoidase polyphenol nở ngày đất (115,86 Enzyme α-glucosidase có vai trị xúc mgGAE/g) gấp 16,79 lần so với tác cho phản ứng chuyển oligosacarid sake (13,35 mgGAE/g) Ngoài ra, thành phân tử đường nhỏ để flavonoid nhóm chất thuộc hấp thu vào máu Việc ức chế polyphenol cho nên, dự đóa n hai hoạt động enzyme α-glucosidase số TPE TFE tỷ lệ với Ở ổi làm giảm thủy phân nở ngày đất, số TFE gần TPE, carbohydrat, dẫn đến việc trình cụ thể, TFE ổi 197,39 mgQUE/g hấp thu glucose vào máu xảy chạm nở ngày đất 111,741 hơn, nhờ kiểm sóa t lượng mgQUE/g Tuy nhiên, kết định glucose máu sau ăn Phương pháp lượng lại cho thấy hai số TPE khảo sát hoạt tính ức chế enzyme αTFE sake khơng tỷ lệ thuận với nhau: glucoidase dựa phản ứng thủy số TFE cao (487,10 phân chất para-nitrophenyl α-DmgQUE/g), gấp gần 40 lần số TPE glucopyranoside (p-NPG) có mặt (13,35 mgGAE/g) Điều enzyme α-glucosidase, tạo sản phẩm giải thích số flavonoid para-nitrophenol (p-NP) α-Dkhơng có nhóm –OH vòng thơm nên glucose Kết khảo sát hoạt tính ức khơng cho kết phản ứng định chế enzyme α-glucoidase mẫu 261 Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần 20 năm 2018 Kỷ yếu khoa học thí nghiệm thể qua Hình Hình Khả ức chế enzyme α-glucosidase đối tượng khảo sát Kết khảo sát cho thấy, khả ức cộng chọn mức hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase ổi tốt chế biến tính albumin nhiệt với giá trị IC50 1,98 μg/mL, tốt 20% làm ngưỡng đánh giá tiềm chứng dương acarbose (IC50 kháng viêm chất khảo sát Như 9,32 μg/mL) Chỉ số sake nở vậy, dựa vào nồng độ ức chế biến ngày đất gần nhau, tính 20% albumin (IC20) dự 35,55 μg/mL 31,42 μg/mL Kết đóa n khả kháng viêm phù hợp với kết định lượng đối tượng khảo sát polyphenol, nhiên giá trị IC50 Khảo sát hoạt tính sinh học hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase mẫu trà túi lọc không tỷ lệ với số TPE không Mẫu kết hợp (sake: ổi: nở ngày đất) với phù hợp với số TFE Do vậy, đề tài tỷ lệ (1:3:1) có tiềm cao không sử dụng phương pháp định việc điều trị ĐTĐ type hỗ trợ điều lượng flavonoid cho nghiên cứu trị biến chứng bệnh Ở nghiên cứu này, mẫu (1:3:1) chiết hai dung môi ethanol tuyệt đối nước, Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa Hiện nay, cách nhằm khảo sát so sánh hoạt tính sinh nghiên cứu hoạt tính kháng oxy hóa học hai cao chiết Từ đó, đề tài sử dụng phổ biến phương hướng tới việc xác định tính khả thi pháp dựa khả đối tượng việc ứng dụng vào bào chế thực phẩm nghiên cứu việc khử gốc tự chức năng, cụ thể trà DPPH Đầu tiên, hàm lượng pholyphenol tổng mẫu (1:3:1) cao chiết nước Khảo sát hoạt tính kháng viêm Các thuốc kháng viêm không steroid xác định so sánh với cao chiết (NSAIDs – Non-steroidal anti ethanol tuyệt đối Kết cho thấy, inflammatory drugs) diclofenac có khả ức chế enzyme α-glucosidase khả làm giảm biến tính của cao ethanol cao nước xấp xỉ albumin tác nhân nhiệt Những nhau, cụ thể, IC50 cao ethanol cao chiết từ số thực vật (6,32 μg/mL) gần 97% IC50 hợp chất có khả kháng cao nước (6,54 μg/mL) Khả viêm có hoạt tính Chính kháng oxy hóa mẫu kết hợp (1:3:1) vậy, biến tính protein nước thấp ethanol xem phương pháp hữu tuyệt đối Cụ thể, giá trị IC50 mẫu hiệu để tiến hành khảo sát khả nước 49,46 μg/mL, gấp 1,77 kháng viêm Trên sở này, Williams lần giá trị mẫu ethanol 262 Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần 20 năm 2018 Kỷ yếu khoa học Khả kháng viêm mẫu kết hợp (1:3:1) nước cao KẾT LUẬN ethanol tuyệt đối, với giá trị IC20 Hoạt tính ức chế enzyme 𝛼mẫu nước 75,05 μg/mL, thấp glucosidase khả kháng oxy 1,23 lần giá trị mẫu hóa ổi cao với IC50 ethanol Như vậy, kết luận việc 1,98 μg/mL 17,23 μg/mL kết hợp sake, ổi nở ngày đất Đối với hoạt tính kháng viêm, nở ngày sản phẩm trà có triển vọng ứng đất có giá trị IC20 thấp (5,13 dụng điều trị ĐTĐ type μg/mL) Khảo sát đặc tính hoạt Kết cho thấy khơng có chênh tính sinh học trà cho thấy trà kết lệch đáng kể phần trăm ức chế hợp có khả điều trị bệnh ĐTĐ enzyme mẫu trà túi lọc mẫu trà ngăn ngừa biến chứng triển pha loãng 50, 100 200 lần nồng vọng, có tiềm cao việc sử độ trà từ dịch ban đầu (2,00g trà ngâm dụng thực phẩm chức Theo phút 80mL nước nóng) Khi đó, tìm tỷ lệ kết hợp theo khối pha loãng, I% trà túi lọc từ 99,57% lượng (sake: ổi: nở ngày đất) thích hợp giảm xuống 96,22%, (1:3:1) cho IC50 ức chế enzyme trà 99,14% giảm 95,54% Quy α-glucosidase 6,32 μg/mL, kháng cách bào chế không ảnh hưởng đến oxy hóa 27,95 μg/mL IC20 kháng hoạt tính sinh học trà, cụ thể khả viêm 92,61 μg/mL ức chế enzyme α-glucosidase TÀI LIỆU THAM KHẢO HỒ BÁ VƯƠNG, NGUYỄN XUÂN DUY, NGUYỄN ANH TUẤN Ảnh hưởng điều kiện chiết đến hàm lượng polyphenol đánh giá hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết từ ổi (Psidium guajava L.) Tạp chí Dược học, tr 55, 2015 LLUVIA ARTEAGA FIGUEROA, LETICIA BARBOSA NAVARRO, MARTIN PATIÑO VERA, VERA L PETRICEVICH Antioxidant activity, total phenolic and flavonoid contents, and cytotoxicity evaluation of Bougainvillea xbuttiana, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, vol 6, issue 5, 2014 NEHA SHARMA, REKHA VIJAYVERGIA Study of primary metabolites and antimicrobial activity of Gomphrena celosioides Mart International Journal of Pharma and Bio Sciences, 2011 NGÔ QUÝ CHÂU Bệnh học nội khoa – Tập Nhà xuất Y học, 2015 TRẦN THU HƯƠNG Nghiên cứu quy trình chiết tách phân đoạn có hoạt tính sinh học từ sa kê (Artocarpus altilis, Moraceae) măng cụt (Garcinia mangostana Linn., Clussiaceae) Healthplus, 2014 263 ... chiết Từ đó, đề tài sử dụng phổ biến phương hướng tới việc xác định tính khả thi pháp dựa khả đối tượng việc ứng dụng vào bào chế thực phẩm nghiên cứu việc khử gốc tự chức năng, cụ thể trà DPPH... kết hợp (sake: ổi: nở ngày đất) với phù hợp với số TFE Do vậy, đề tài tỷ lệ (1:3:1) có tiềm cao không sử dụng phương pháp định việc điều trị ĐTĐ type hỗ trợ điều lượng flavonoid cho nghiên cứu trị. .. tính hoạt Kết cho thấy khơng có chênh tính sinh học trà cho thấy trà kết lệch đáng kể phần trăm ức chế hợp có khả điều trị bệnh ĐTĐ enzyme mẫu trà túi lọc mẫu trà ngăn ngừa biến chứng triển pha