Khảo sát thành phần hóa học cây an xoa (helicteres hirsuta lour) thu hái tại tỉnh bình phước

Khảo sát thành phần hóa học cây an xoa (helicteres hirsuta lour) thu hái tại tỉnh bình phước Khảo sát thành phần hóa học cây an xoa (helicteres hirsuta lour) thu hái tại tỉnh bình phước Khảo sát thành phần hóa học cây an xoa (helicteres hirsuta lour) thu hái tại tỉnh bình phước Khảo sát thành phần hóa học cây an xoa (helicteres hirsuta lour) thu hái tại tỉnh bình phước Khảo sát thành phần hóa học cây an xoa (helicteres hirsuta lour) thu hái tại tỉnh bình phước Khảo sát thành phần hóa học cây an xoa (helicteres hirsuta lour) thu hái tại tỉnh bình phước Khảo sát thành phần hóa học cây an xoa (helicteres hirsuta lour) thu hái tại tỉnh bình phước

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KỸ THUẬT TP HỒ CHÍ MINH  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY AN XOA (HELICTERES HIRSUTA LOUR) THU HÁI TẠI TỈNH BÌNH PHƢỚC MÃ SỐ KHĨA LUẬN: HC.19.18 SVTH: LÊ ĐĂNG KHOA MSSV: 15128031 GVHD: TS HOÀNG MINH HẢO Tp Hồ Chí Minh, tháng năm 2019 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận, ngồi cố gắng, kiên trì thân tơi cịn nhận đƣợc giúp đỡ từ nhiều cá nhân tập thể Đầu tiên, xin chân thành cảm ơn TS Hoàng Minh Hảo - Giảng viên Bộ mơn Cơng nghệ Hóa học - Khoa Cơng nghệ Hóa học Thực phẩm trƣờng Đại học Sƣ phạm Kỹ thuật Tp Hồ Chí Minh, thầy kim nam cho đƣờng nghiên cứu hợp chất tự nhiên ngƣời thầy tận tâm hỗ trợ giúp đỡ tơi suốt q trình thực khóa luận tốt nghiệp Tơi xin gửi lời cảm ơn đến giảng viên Bộ môn Công nghệ Hóa học - Khoa Cơng nghệ Hóa học Thực phẩm trƣờng Đại học Sƣ phạm Kỹ thuật Tp Hồ Chí Minh ln giúp đỡ, đƣa góp ý giúp tơi hồn thiện khóa luận Tơi xin cảm ơn Nguyễn Thị Mỹ Lệ - Chun viên phịng thí nghiệm Bộ mơn Cơng nghệ Hóa học ln giúp đỡ phƣơng diện thiết bị, dụng cụ, số hóa chất suốt trình làm thực nghiệm phịng thí nghiệm Hóa Hữu Cơ Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn với gia đình, cha mẹ, bạn bè ln động viên tinh thần, giúp đỡ tài để tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh, tháng năm 2019 Tác giả Lê Đăng Khoa ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi, số liệu, kết đạt đƣợc hoàn toàn trung thực có sở rõ ràng, số liệu chƣa đƣợc công bố nghiên cứu khác Thành phố Hồ Chí Minh, tháng năm 2019 Tác giả Lê Đăng Khoa iii MỤC LỤC TÓM TẮT ĐỀ TÀI i LỜI CẢM ƠN ii LỜI CAM ĐOAN iii MỤC LỤC iv DANH MỤC CÁC BẢNG .vi DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH vii DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT viii MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm thực vật 1.1.1 Giới thiệu chi Helicteres .2 1.1.2 Loài Helicteres hirsuta L 1.1.3 Ứng dụng chữa bệnh loài thuộc chi Helicteres 1.2 Những nghiên cứu loài thuộc chi Helicteres .4 1.2.1 Thành phần hóa học loài Helicteres angustifolia L 1.2.2 Thành phần hóa học lồi Helicteres isora L 1.3 Những nghiên cứu hoạt tính sinh học lồi thuộc chi Helicteres 1.3.1 Hoạt tính sinh học lồi Helicteres angustifolia L 1.3.2 Hoạt tính sinh học loài Helicteres isora L 1.4 Tình hình nghiên cứu lồi Helicteres hirsuta L 1.4.1 Tình hình nghiên cứu nƣớc 1.4.2 Tình hình nghiên cứu nƣớc .10 CHƢƠNG THỰC NGHIỆM VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Hóa chất thiết bị 17 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Phƣơng pháp trích ly 18 2.2.2 Phƣơng pháp thử nghiệm độ tinh khiết 18 2.2.3 Phƣơng pháp cô lập hợp chất 18 iv 2.2.4 Phƣơng pháp nhận danh giải đoán cấu trúc 19 2.3 Xử lý nguyên liệu 19 2.4 Điều chế cao tổng 19 2.5 Điều chế cao phân đoạn từ cao ethanol 19 2.6 Khảo sát phân đoạn 20 2.6.1 Khảo sát phân đoạn cao HTC 20 2.6.2 Khảo sát phân đoạn cao HTE 22 2.6.3 Khảo sát phân đoạn cao HLH 23 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24 3.1 Khảo sát cấu trúc hợp chất HC-A 24 3.2 Khảo sát cấu trúc hợp chất HC-B 26 3.3 Khảo sát cấu trúc hợp chất HC-C 29 3.4 Khảo sát cấu trúc hợp chất HC-D 31 KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO 35 PHỤ LỤC 38 v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Hoạt tính gây độc tế bào hợp chất Bảng 1.2 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào dịng Hep-G2 .9 Bảng 1.3 Tóm tắt kết lập hợp chất từ An Xoa thu hái Hịn Sơn .9 Bảng 1.4 Hoạt tính gây độc tế bào chất tinh khiết đƣợc cô lập từ Helicteres hirsuta L 10 Bảng 2.1 Kết phân loại cao từ cao tổng 20 Bảng 2.2 Thực nghiệm sắc ký cột cao HTC 20 Bảng 2.3 Thực nghiệm sắc ký cột phân đoạn HC2 21 Bảng 2.4 Thực nghiệm sắc ký cột phân đoạn HC5 22 Bảng 2.5 Thực nghiệm sắc ký cột cao HLH 23 Bảng 3.1 So sánh tín hiệu stigmasterol & β-sitosterol HC-A (CDCl3) 25 Bảng 3.2 So sánh tín hiệu 3β-hydroxyolean-12-en-28-oic acid HC-B (CDCl3) 28 Bảng 3.3 So sánh tín hiệu β-Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranose HC-C (DMSO) 30 Bảng 3.4 So sánh tín hiệu adian-5-en-3β-ol HC-D (CDCl3) 33 vi DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cây An Xoa Hình 1.2 Cấu trúc số hợp chất steroid cô lập từ chi Helicteres 11 Hình 1.3 Một số triterpenoid lập từ chi Helicteres 12 Hình 1.4 Một số ketone lập từ Helicteres 13 Hình 1.5 Cấu trúc hợp chất lignan phenyl pronanoid cô lập từ chi Helicteres .14 Hình 1.6 Cấu trúc số hợp chất flavonoid cô lập từ chi Helicteres 15 Hình 1.7 Cấu trúc hợp chất khác lập từ chi Helicteres .16 Hình 3.1 Stigmast-5,22-dien-3β-ol stigmast-5-en-3β-ol (HC-A) .25 Hình 3.2 3β-Hydroxyolean-12-en-28-oic acid (HC-B) 27 Hình 3.3 β-Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranose (HC-C) .30 Hình 3.4 Adian-5-en-3β-ol (HC-D) 32 vii DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT HEX, CH, EA, n - hexane, chloroform, ethyl acetate, methanol, MeOH, AC, EtOH, acetone, ethanol, dimethyl sulfoxide DMSO ABTS•+ 2,2-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) BHA Butylated hydroxy anisole NMR Nuclear Magnetic Resonance - Cộng hƣởng từ hạt nhân MS-CI Mass Spectrocopy-Chemical Ionization Khối phổ Kỹ thuật ion hóa hóa học HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation - Tƣơng quan dị nhân qua liên kết HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation - Tƣơng quan dị nhân qua nhiều liên kết J (Hz), δ (ppm) Hằng số ghép (đơn vị Herzt), độ dịch chuyển hóa học (phần triệu) br, s, d, t, dd, m Broad (mũi giãn rộng), singlet (mũi đơn), doublet (mũi đôi), triplet (mũi ba), doublet of doublet (mũi đôi đôi), multiplet (mũi đa) TLC, Rf Thin Layer Chromatography - Sắc ký lớp mỏng, Retention factor Lu1 Human lung cancer viii LNCaP Lymph Node Carcinoma of the Prostate MCF-7 Human breast cancer HUVEC Human umbilical vein endothelial cell Hep-G2 Hepatocellular carcinoma SK-LU-1 Human lung carcinoma Hela Human cervix carcinoma SK-Mel-2 Human melanoma COLO 205 Colorectal adenocarcinoma AGS Human stomach gastric adenocarcinoma ED50 Effective dose 50 IC50 Half maximal inhibitory concentration CS% Chỉ số cho biết khả sống sót tế bào nồng độ cao tính theo phần trăm so với đối chứng HTH, HTC, HTE, Phân đoạn cao n-hexane, chloroform, ethyl acetate, HTM methanol thân HLH, HLC, HLE, Phân đoạn cao n-hexane, chloroform, ethyl acetate, HLM methanol HC-A, HC-B, HC-C, hirsuta compound - A (hợp chất A từ loài hirsuta), HC-D tƣơng tự cho HC-B, HC-C, HC-D β-D-Glc β-D-Glucopyranosyl w/w, v/v Tỷ lệ khối lƣợng / khối lƣợng, thể tích / thể tích ix MỞ ĐẦU Từ lâu, ngành Dƣợc liệu cổ truyền đƣợc xem nhƣ nguồn gốc ngành Dƣợc đại Có nhiều chứng cho thấy chế phẩm phục vụ chữa trị Tây y có nguồn gốc từ Đơng y, hay nói cách khác từ cây, cỏ Vì vậy, việc tìm hiểu nhận danh chất hữu loại cây, cỏ điều cần thiết có ý nghĩa khoa học Thực tế cho thấy Việt Nam quốc gia có tỷ lệ dân số mắc ung thƣ cao, ung thƣ gan bệnh phổ biến chƣa có thuốc đặc trị, yếu tố thúc đẩy nhà nghiên cứu ngồi nƣớc ln nỗ lực để tìm phƣơng pháp, thuốc điều trị Trong năm gần đây, xu hƣớng bào chế thuốc từ nguồn gốc thiên nhiên đƣợc ƣa chuộng phƣơng pháp khác, tƣơng tác thành phần tự nhiên với thể êm dịu thƣờng không gây tác dụng phụ ảnh hƣởng đến thể bệnh nhân Theo tìm hiểu, có nhiều bệnh nhân bệnh gan đáp ứng tốt với An xoa nên khóa luận tập trung vào nghiên cứu thành phần hóa học An xoa đƣợc thu hái Xã Bù Nho, Huyện Phƣớc Long, Tỉnh Bình Phƣớc Để góp phần tìm hiểu nhận danh số hợp chất có thành phần An Xoa Helicteres hirsuta Lour tiến hành thực đề tài: “Khảo sát thành phần hóa học An Xoa (Helicteres hirsuta Lour.) thu hái tỉnh Bình Phƣớc” Mục tiêu luận văn: Nghiên cứu chiết tách số hợp chất từ phân đoạn cao thân An Xoa (Helicteres hirsuta L.), thuộc họ Trôm Sterculiaceae đƣợc thu hái Xã Bù Nho Huyện Phƣớc Long, Tỉnh Bình Phƣớc Từ làm sở khoa học cho nghiên cứu sau Nội dung luận văn bao gồm: Trích ly hợp chất từ bột Điều chế loại cao có độ phân cực tăng dần từ cao tổng ethanol Phân lập số hợp chất tự nhiên Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập phổ 1D-NMR (1H,13CNMR), 2D-NMR (HSQC, HMBC), MS [27] P Dais et al, "Complete 1H and 13C NMR assignment and 31P NMR determination of pentacyclic triterpenic acids," Analytical Methods, vol 9, pp 1-25, 2017 [28] H Kojima et al, "Sterol Glucosides from Prunella vulgaris," Phytochemistry, vol 29, pp 2351-2355, 1990 [29] N K Pham et al., "Phytochemical Constituents and Determination of Resveratrol from the Roots of Arachis hypogea L ," American Journal of Plant Sciences, vol 4, pp 2351-2358, 2013 [30] A K Chakravarty et al, "Unambiguous Assignment of 13C Chemical Shifts of Some Hopane and Migrated Hopane Derivatives by 2D NMR " Temhedron vol 50, no 9, pp 2865-2876, 1994 37 PHỤ LỤC Phụ lục Phổ 1H-NMR HC-A 38 Phụ lục Phổ 13C-NMR HC-A 39 Phụ lục Phổ 1H-NMR HC-B 40 Phụ lục Phổ 13C-NMR HC-B 41 Phụ lục Phổ MS HC-B 42 Phụ lục Phổ 1H-NMR HC-C 43 Phụ lục Phổ 13C-NMR HC-C 44 Phụ lục Phổ MS HC-C 45 Phụ lục Phổ 1H-NMR HC-D 46 Phụ lục 10 Phổ 13C-NMR HC-D 47 Phụ lục 11 Phổ DEPT HC-D 48 Phụ lục 12 Phổ MS HC-D 49 Phụ lục 13 Phổ HSQC HC-D 50 Phụ lục 14 Phổ HMBC HC-D 51 ... tài: ? ?Khảo sát thành phần hóa học An Xoa (Helicteres hirsuta Lour.) thu hái tỉnh Bình Phƣớc” Mục tiêu luận văn: Nghiên cứu chiết tách số hợp chất từ phân đoạn cao thân An Xoa (Helicteres hirsuta. .. trung vào nghiên cứu thành phần hóa học An xoa đƣợc thu hái Xã Bù Nho, Huyện Phƣớc Long, Tỉnh Bình Phƣớc Để góp phần tìm hiểu nhận danh số hợp chất có thành phần An Xoa Helicteres hirsuta Lour tiến... sinh học nhƣ thành phần hóa học Thành phần hóa học bao gồm hợp chất thu? ??c họ: steroid, triterpenoid, lignan, phenyl propanoid, flavonoid, alkaloid, Trong loài thu? ??c chi Helicteres, loài: tổ kén (Helicteres