ĐÁNH GIÁ SINH HỌC ĐỐI VỚI TRANG THIẾT BỊ Y TẾ - PHẦN 11: PHÉP THỬ ĐỘC TÍNH TOÀN THÂN

Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn TCVN 7391-11:2007 ISO 10993-11:2006 ĐÁNH GIÁ SINH HỌC ĐỐI VỚI TRANG THIẾT BỊ Y TẾ - PHẦN 11: PHÉP THỬ ĐỘC TÍNH TỒN THÂN Biological evaluation of medical devices - Part 11: Tests for systemic toxicity Lời nói đầu TCVN 7391-11:2007 hồn tồn tương đương với ISO 10993-11:2006 TCVN 7391-11:2007 Tiểu ban Kỹ thuật Tiêu chuẩn TCVN/TC210/SC2 “Trang thiết bị y tế” biên soạn, sở dự thảo đề nghị Viện Trang thiết bị Cơng trình y tế - Bộ Y tế, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Bộ TCVN 7391 (ISO 10993) với tên chung Đánh giá sinh học trang thiết bị y tế, gồm tiêu chuẩn sau: - TCVN 7391-1:2004 (ISO 10993-1:2003) Phần 1: Đánh giá thử nghiệm - TCVN 7391-2:2005 (ISO 10993-2:1992) Phần 2: Yêu cầu sử dụng động vật - TCVN 7391-3:2005 (ISO 10993-3:2003) Phần 3: Phép thử độc tính di truyền, khả gây ung thư độc tính sinh sản - TCVN 7391-4:2005 (ISO 10993-4:2002) Phần 4: Chọn phép thử tương tác với máu - TCVN 7391-5:2005 (ISO 10993-5:1999) Phần 5: Phép thử độc tính tế bào in vitro - TCVN 7391-6:2007 (ISO 10993-6:1994) Phần 6: Phép thử hiệu ứng chỗ sau cấy ghép - TCVN 7391-7:2004 (ISO 10993-7:1995) Phần 7: DƯ lượng sau tiệt trùng etylen oxit - TCVN 7391-11:2007 (ISO 10993-11:2006) Phần 11: Phép thử độc tính tồn thân - TCVN 7391-12:2007 (ISO 10993-12:2002) Phần 12: Chuẩn bị mẫu vật liệu chuẩn Bộ ISO 10993 với tên chung Biological evaluation of devices, có phần sau: - Part 9: Framework for identification and quantification of quantification of potential degradation products - Part 10: Tests for irritation and delayed -type hypersensitivity - Part 13: Identification and quantification of degradation products from polymeric medical devices - Part 14: Identification and quantification of degradation products from ceramics - Part 15: Identification and quantification of degradation products from metals and alloys - Part 16: Toxicokinetic study design for degradation products and leachables - Part 17: Establishment of allowable limits for leachable substances - Part 18: Chemical characterization of materials - Part 19: Physico-chemical, morphological and topographical characterization - Part 20: Principles and methods for immunotoxicology testing of medical devices Lời giới thiệu Độc tính tồn thân tác động có hại tiềm ẩn sử dụng trang thiết bị y tế Các tác động khái quát hóa tác động quan hệ quan xảy hấp thụ, phân bố trao đổi chất chất tiết từ trang thiết bị vật liệu thiết bị đến phận thể mà khơng có tiếp xúc trực tiếp Tiêu chuẩn đánh giá độc tính tồn thân khái qt hóa, khơng phải độc tính tồn thân nhằm vào hệ quan quan đích cụ thể nào, tác động hấp thụ toàn thân phân bố chất độc vào thể Do tính đa dạng trang thiết bị y tế, vật liệu làm chúng mục đích sử dụng chúng, nên tiêu chuẩn không vào chi tiết Mặc dù tiêu chuẩn đề cập đến vấn đề phương pháp luận cụ thể đặc trưng xem xét thiết lập phép thử độc tính tồn thân, LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn thiết lập nghiên cứu phù hợp phải thích ứng với chất vật liệu làm trang thiết bị ứng dụng lâm sàng dự định Các yếu tố khác tiêu chuẩn chất đề quy tắc, bao gồm khía cạnh phù hợp với kỹ thuật phịng thí nghiệm chuẩn yếu tố cần đề cập đến báo cáo Trong số phép thử độc tính tồn thân (ví dụ nghiên cứu cấy ghép lâu dài độc cho da) thiết kế để nghiên cứu tác động toàn thân tác động chỗ, khả gây ung thư độc tính sinh sản tiêu chuẩn tập trung vào khía cạnh nghiên cứu dự định đề cập đến tác động toàn thân Các nghiên cứu đề cập đến tác động cuối gây độc khác trình bày TCVN 7391-3 (ISO 10993-3), TCVN 7391-6 (ISO 10993-6), ISO 10993-10 ISO/TS 10993-20 Khả gây sốt (xem Phụ lục F) tác động toàn thân bổ sung mà trước đưa vào tiêu chuẩn Tuy nhiên, nỗ lực thực để xem xét khả gây sốt theo tiêu chuẩn riêng biệt sâu Cuối cùng, nghiên cứu độc học khoa học không hoàn hảo Kết phép thử sở để xác định liệu thiết bị có an tồn với mục đích sử dụng hay khơng ĐÁNH GIÁ SINH HỌC ĐỐI VỚI TRANG THIẾT BỊ Y TẾ - PHẦN 11: PHÉP THỬ ĐỘC TÍNH TỒN THÂN Biological evaluation of medical devices - Part 11: Tests for systemic toxicity Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định yêu cầu đưa hướng dẫn quy trình đánh giá khả gây phản ứng bất lợi toàn thân vật liệu trang thiết bị y tế Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm ban hành áp dụng nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm ban hành áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi (nếu có) TCVN 7391-1 (ISO 10993-1) Đánh giá sinh học trang thiết bị y tế - Phần 1: Đánh giá thử nghiệm TCVN 7391-2 (ISO 10993-2) Đánh giá sinh học trang thiết bị y tế - Phần 2: Yêu cầu sử dụng động vật TCVN 7391-12 (ISO 10993-12) Đánh giá sinh học trang thiết bị y tế - Phần 12: Chuẩn bị mẫu vật liệu chuẩn Thuật ngữ, định nghĩa Tiêu chuẩn áp dụng thuật ngữ định nghĩa TCVN 7391-1 (ISO 10993-1) định nghĩa sau 3.1 Liều (dose) Liều lượng (dosage) Số lượng mẫu thử dùng (ví dụ khối lượng, thể tích) biểu thị đơn vị khối lượng thể diện tích bề mặt 3.2 Liều tác động (dose-effect) Tương quan liều lượng khả tác động sinh học xác định cá thể mẫu quần thể 3.3 Liều đáp ứng (dose-response) Quan hệ liều lượng với phổ tác động liên quan đến việc tiếp xúc CHÚ THÍCH Có hai dạng quan hệ liều đáp ứng Dạng thứ phản ứng cá thể với dải liều lượng Dạng thứ hai phân bố phản ứng quần thể cá thể với dải liều lượng 3.4 Chất tiết (leachable substance) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Cơng ty luật Minh Kh www.luatminhkhue.vn Hóa chất giải phóng từ trang thiết bị vật liệu tác động nước chất lỏng khác liên quan đến việc sử dụng thiết bị CHÚ THÍCH Các ví dụ chất tiết phụ gia, dư lượng chất tiệt trùng, dư lượng trình xử lý, sản phẩm phân huỷ, dung môi, chất làm dẻo, chất bôi trơn, chất xúc tác, chất ổn định, chất chống ơxi hóa, chất tạo màu, chất nhồi đơn thể 3.5 Phép thử giới hạn (limit test) Sử dụng nhóm đơn xử lý với liều lượng thích hợp mẫu thử để có khơng có nguy độc hại 3.6 Độc tính tồn thân (systemic toxicity) Độ độc không bị giới hạn với tác động bất lợi vị trí tiếp xúc thể trang thiết bị CHÚ THÍCH Độc tính tồn thân phụ thuộc vào hấp thụ phân bố chất độc từ điểm đầu vào đến vị trí xa xảy tác động độc hại 3.7 Độc tính tồn thân cấp tính (acute systemic toxicity) Các tác động bất lợi xảy lần sau tiếp xúc lần, nhiều lần liên tục với mẫu thử vịng 24 3.8 Độc tính tồn thân bán cấp tính (subacute systemic toxicity) Các tác động bất lợi xảy sau tiếp xúc nhiều lần liên tục từ 24 đến 28 ngày CHÚ THÍCH Vì thuật ngữ khơng mặt ngữ nghĩa, nên tác động bất lợi xảy giai đoạn thời gian quy định mơ tả nghiên cứu độc tính tồn thân tiếp xúc lặp lại ngắn hạn Chọn khoảng thời gian từ 14 ngày đến 28 ngày phù hợp với hầu hết các hướng dẫn quy định quốc tế xem thích hợp Các nghiên cứu tĩnh mạch bán cấp tính thường xác định giai đoạn xử lý lớn 24 nhỏ 14 ngày 3.9 Độc tính tồn thân bán mãn tính (subchronic systemic toxicity) Các tác động bất lợi xảy sau đưa vào thể lặp lại liên tục mẫu thử phần qng đời CHÚ THÍCH Các nghiên cứu độc tính tồn thân bán mãn tính thường 90 ngày lồi gặm nhấm không vượt 10 % tuổi thọ loài khác Các nghiên cứu tĩnh mạch bán mãn tính thường xác định giai đoạn xử lý từ 14 ngày đến 28 ngày 3.10 Độc tính tồn thân mãn tính (chronic systemic toxicity) Các tác động bất lợi xảy sau đưa vào thể lặp lại liên tục mẫu thử phần lớn quãng đời CHÚ THÍCH Các nghiên cứu độc tính tồn thân mãn tính thường từ tháng đến 12 tháng 3.11 Mẫu thử (test sample) Vật liệu, trang thiết bị, phận trang thiết bị, thành phần, chất chiết phần chiết từ trang thiết bị dùng để thử nghiệm đánh giá sinh học hóa học Xem xét chung 4.1 Quy định chung Chọn phép thử thích hợp cho trang thiết bị phải tuân theo TCVN 7391-1 (ISO 10993-1), cân nhắc kỹ cách thức thời gian tiếp xúc Thử nghiệm phải tiến hành sản phẩm thành phẩm và/hoặc mẫu thử thành phần đại diện sản phẩm thành phẩm và/hoặc vật liệu Các mẫu thử phải phản ánh điều kiện trang thiết bị thường chế tạo xử lý Nếu cần độ lệch phải ghi lại độ lệch báo cáo thử với lập luận giải thích Do mục đích để xác định nguy nên phải tăng cường tiếp xúc với mẫu thử Các đặc điểm lý hóa mẫu thử, ví dụ độ pH, độ ổn định, độ nhớt, độ thẩm thấu, dung tích đệm, độ hịa tan độ vơ trùng, nhân tố cần xem xét thiết kế nghiên cứu Khi xem xét phép thử động vật, để thỏa mãn điều khoản TCVN 7391-2 (ISO 109932), phải xác định tiến hành tất lựa chọn thay thế, giản lược tinh lọc hợp lý có sẵn thực tế Đối với thử nghiệm độ độc cấp tính in vivo liệu độ độc tế bào in vitro có ích để ước lượng liều ban đầu [9] LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 4.2 Chọn lồi động vật Khơng có tiêu chí tuyệt đối để chọn loài động vật cụ thể cho thử nghiệm độc tính tồn thân trang thiết bị y tế Tuy nhiên, loài sử dụng phải xác minh mặt khoa học tuân theo điều khoản TCVN 7391-2 (ISO 10993-2) Đối với nghiên cứu đường miệng cấp tính, tĩnh mạch, da hít vào trang thiết bị y tế, chuột nhắt chuột cống trắng ưu tiên, ngồi thỏ chọn cho nghiên cứu da cấy da Các loài không thuộc gậm nhấm cần xem xét thử nghiệm ghi nhận số nhân tố cho biết số lượng lựa chọn loài để nghiên cứu Thường ưu tiên sử dụng loài chủng động vật tiến hành loạt nghiên cứu độc tính tồn thân khoảng thời gian khác nhau, ví dụ độc tính tồn thân cấp tính, bán cấp tính, bán mãn tính và/hoặc mãn tính Điều kiểm sốt thay đổi loài chủng tạo điều kiện thuận lợi cho đánh liên quan đến khoảng thời gian nghiên cứu Nếu sử dụng nhiều lồi nhiều chủng phải lập văn giải thích lựa chọn 4.3 Tình trạng động vật Nhìn chung, nên sử dụng động vật trưởng thành, nòi khỏe mạnh biết rõ nguồn gốc xác định tình trạng sức khỏe vi sinh học Khi bắt đầu nghiên cứu, thay đổi khối lượng động vật sử dụng phạm vi giới không vượt ± 20 % khối lượng trung bình Khi sử dụng cái, chúng phải chưa sinh đẻ không mang thai Việc lựa chọn động vật phải giải thích rõ ràng 4.4 Chăm sóc chăn ni động vật Chăm sóc chăn ni động vật phải phù hợp với hướng dẫn chăn nuôi động vật chấp nhận Động vật phải làm cho thích nghi với điều kiện phịng thí nghiệm trước xử lý khoảng thời gian định Kiểm soát điều kiện mơi trường kỹ thuật chăm sóc động vật thích hợp cần thiết để có kết có ý nghĩa Thành phần dinh dưỡng vật liệu chuồng trại biết gây có ảnh hưởng độc hại phải xác định xác phải xem xét đến ảnh hưởng tiềm tàng chúng đến kết thử 4.5 Cỡ số lượng nhóm 4.5.1 Cỡ nhóm Độ xác phép thử độc tính tồn thân phụ thuộc chủ yếu vào số lượng động vật sử dụng mức liều Độ xác cần thiết số lượng động vật nhóm liều cần thiết phụ thuộc vào mục đích nghiên cứu Cỡ nhóm tăng hợp lý theo thời gian xử lý, cuối kỳ nghiên cứu có đủ động vật nhóm để đánh giá sinh học kỹ lưỡng Tuy nhiên, số lượng động vật tối thiểu sử dụng phù hợp với việc nhận kết có ý nghĩa [xem TCVN 7391-2 (ISO 10993-2)] Cỡ nhóm tối thiểu kiến nghị, cách xem xét nêu Bảng Bảng - Cỡ nhóm tối thiểu kiến nghị Loại nghiên cứu Lồi gặm nhấm, Khơng phải lồi gặm nhấm, Cấp tính a a (3 giới) a Bán cấp tính 10 (5 giới) Bán mãn tính 20 (10 giới) a (4 giới) a Mãn tính 40 (20 giới) b, c c a Thử nghiệm giới chấp nhận Khi trang thiết bị dự định sử dụng giới thử nghiệm phải tiến hành giới b Khuyến nghị đề cập đến thử nghiệm nhóm mức liều Nơi có nhóm liều tăng cường bổ sung cỡ nhóm khuyến nghị giảm xuống 10 giới c Cần khuyến nghị từ chuyên gia tư vấn thống kê cỡ nhóm nghiên cứu mãn tính Số lượng vật thử nghiệm phải dựa yêu cầu tối thiểu cần để cung cấp cách liệu có ý nghĩa Phải giữ lại đủ số động vật kết thúc nghiên cứu để đảm bảo đánh giá thống kê kết 4.5.2 Số lượng nhóm Một nhóm liều xử lý liều lượng mẫu thử thích hợp lồi có khơng có nguy gây độc (ví dụ phép thử giới hạn) Tuy nhiên, nghiên cứu liều đáp ứng nhiều liều khác cần nhiều nhóm để phản ứng độc LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Số lượng nhóm tăng cần tăng liều cách có chủ định Khi cần tăng liều, xem xét ví dụ sau: - tăng diện tích bề mặt lâm sàng tiếp xúc; - tăng khoảng thời gian tiếp xúc; - tăng phần chiết hóa chất riêng biệt; - tăng số lần đưa mẫu thử vào thể vòng 24 Các phương pháp khác để tăng liều chấp nhận Phương pháp sử dụng phải giải thích 4.5.3 Đối chứng xử lý Phụ thuộc vào mục tiêu nghiên cứu, chất vật thử cách tiếp xúc, đối chứng âm tính, đối chứng phương tiện và/hoặc đối chứng xử lý giả phải đưa vào tất nghiên cứu độc tính tồn thân Các đối chứng phải tiến hành theo quy trình chuẩn bị xử lý mẫu thử 4.6 Cách tiếp xúc Trang thiết bị y tế chất tiết từ chúng vào thể qua nhiều cách tiếp xúc Cách tiếp xúc thử phải có liên quan mật thiết mặt lâm sàng với việc sử dụng trang thiết bị, Nếu có cách thay phải giải thích Các ví dụ cách đưa mẫu thử vào thể tìm thấy Phụ lục A 4.7 Chuẩn bị mẫu Hướng dẫn chuẩn bị ổn định mẫu theo TCVN 7391-12 (ISO 10993-12) 4.8 Lấy liều 4.8.1 Đưa mẫu thử vào thể Các quy trình phải thiết kế để tránh thay đổi sinh lý vấn đề sử dụng động vật không trực tiếp liên quan đến độ độc vật liệu thử Nếu dùng liều lượng hàng ngày đủ thể tích nồng độ, liều dùng theo phần nhỏ giai đoạn không vượt 24 Các mẫu thử phải chuyển giao nhiệt độ chấp nhận sinh lý Nhìn chung, nhiệt độ phịng nhiệt độ thể thông lệ chung Các thay đổi phải giải thích Tá chất đưa vào thể qua đường ngồi đường ruột phải tương thích sinh lý Khi cần phải sử dụng việc lọc mẫu để loại hạt ghi vào biên Việc nuôi giữ động vật nghiên cứu độc tính tồn thân tiếp xúc lặp lại thường giới hạn từ đến ngày Bản chất khoảng thời gian nuôi giữ phải tối thiểu cần để đáp ứng mục tiêu khoa học không tổn hại việc sử dụng động vật thử Các thay đổi phải giải thích Khi cần phải ni giữ động vật phải làm thích nghi với thiết bị nuôi giữ trước đưa mẫu thử vào thể 4.8.2 Thể tích liều Hướng dẫn thể tích liều tóm tắt Phụ lục B Khi sử dụng nhiều nhóm liều, thay đổi thể tích thử giảm thiểu cách điều chỉnh nồng độ để đảm bảo thể tích khơng đổi tất liều Sử dụng thể tích liều lớn thể tích nêu Phụ lục B phải giải thích Phải tránh đưa mẫu thử vào thể với thể tích liều lớn qua đường miệng chúng chốn hết dung tích dày chuyển vào ruột nhỏ Thể tích lớn chảy ngược dịng vào thực quản Đưa mẫu thử vào cần giới hạn thể tích, điều phụ thuộc vào cỡ động vật vị trí Thể tích đưa mẫu thử vào riêng cho lồi trình bày Phụ lục B Thể tích tiêm tĩnh mạch thực thời gian ngắn khoảng phút Tốc độ tiêm yếu tố quan trọng, với loài gặm nhấm, tốc độ không vượt ml/phút Để đưa mẫu thử vào thể với thể tích lớn phải tiêm truyền tĩnh mạch chậm có thời gian Khơng kể đến tốc độ tính, tốc độ truyền dịch lỏng phải dừng lại giảm động vật biểu thay đổi đáng kể điều kiện lâm sàng Tốc độ tiêm tĩnh mạch chậm cần cho mẫu thử bị hạn chế độ hịa tan độ gây kích thích LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Có thể sử dụng truyền liên tục có định lâm sàng Thể tích tốc độ truyền phụ thuộc vào chất cho xem xét kỹ thuật trị liệu dịch lỏng chuẩn Như hướng dẫn, thể tích truyền lần nhỏ 10 % thể tích máu tuần hồn Hiệu tối thiểu việc nuôi giữ động vật thử nhân tố phải xem xét truyền kéo dài Khi đưa mẫu thử vào da, tham khảo Phụ lục B Tốc độ phạm vi hấp thụ phụ thuộc vào công thức mẫu thử 4.8.3 Tần suất liều Tần suất liều dựa mối tương quan lâm sàng Các quy trình tăng cường phải mơ tả giải thích rõ ràng Trong nghiên cứu độc tính tồn thân cấp tính, động vật phải tiếp xúc với mẫu thử liều đơn với phần liều vòng 24 Trong nghiên cứu tiếp xúc lặp lại, động vật phải cho liều với mẫu thử hàng ngày, bảy ngày tuần suốt thời gian thử Các chế độ cho liều khác chấp nhận phải giải thích 4.9 Khối lượng thể mức tiêu thụ thức ăn/nước Thay đổi khối lượng thể thay đổi mức tiêu thụ nước thức ăn tác động vật thử Do vậy, khối lượng riêng vật xác định trước mẫu thử đưa vào thể (ví dụ thường vòng 24 cho lần lấy liều đơn lấy liều cấp tính, khơng q ngày cho nghiên cứu tiếp xúc lặp lại) khoảng thời gian đặn suốt trình nghiên cứu lúc kết thúc nghiên cứu Khi lấy liều theo khối lượng thể, phải sử dụng khối lượng thể Đo mức tiêu thụ nước thức ăn phải xem xét nghiên cứu tiếp xúc lặp lại dài hạn 4.10 Quan sát lâm sàng Các quan sát lâm sàng phải tiến hành nhân viên đào tạo để đảm bảo báo cáo quán Tần suất khoảng thời gian quan sát phải xác định theo chất độ nghiêm trọng phản ứng gây độc, tốc độ khởi điểm thời gian hồi phục Tần suất quan sát tăng cần thiết giai đoạn sớm nghiên cứu, đặc biệt nghiên cứu cấp tính Thời gian xuất biến dấu hiệu độc khoảng thời gian thời điểm chết quan trọng, đặc biệt có khuynh hướng biểu dấu hiệu lâm sàng bất lợi gây chết từ từ Nên áp dụng giết nhân đạo để tránh chịu đựng không cần thiết Các quan sát lâm sàng nói chung phải xem xét đến giai đoạn đỉnh điểm tác động báo trước sau cho liều Các quan sát ghi lại cách hệ thống chúng thực Các ghi chép lưu lại cho vật Các quan sát bên chuồng khả sống dấu hiệu lâm sàng phải ghi lại lần ngày, sử dụng công cụ miêu tả tác động lâm sàng phịng thí nghiệm thơng thường (xem Phụ lục C) Các quan sát bệnh tật tử vong phải ghi lại lần ngày nghiên cứu lặp lại dài hạn Sàng lọc rộng dấu hiệu lâm sàng bất lợi cần xem xét sở hàng tuần cho nghiên cứu tiếp xúc lặp lại dài hạn 4.11 Bệnh học lâm sàng Phân tích huyết học hóa học lâm sàng tiến hành để nghiên cứu tác động độc mô, quan hệ thống khác Khi dẫn, phân tích phải tiến hành mẫu máu nhận từ động vật nghiên cứu tiếp xúc lặp lại trước khi, phần thủ tục tiến hành giết động vật lên kế hoạch Trong số trường hợp cần cho động vật nhịn ăn uống trước lấy mẫu máu Khi có dẫn khoa học, phân tích nước tiểu tiến hành tuần cuối nghiên cứu tiếp xúc lặp lại dài hạn cách lấy thể tích nước tiểu theo thời gian (ví dụ 16 đến 24 giờ) Các thơng số để đánh giá huyết học, hóa học lâm sàng phân tích nước tiểu liệt kê Phụ lục D 4.12 Bệnh học giải phẫu Khi dẫn lâm sàng, phải xem xét đánh giá tổng quát bệnh học cho nghiên cứu độc tính tồn thân cấp tính LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Tất động vật nghiên cứu tiếp xúc lặp lại phải mổ toàn chi tiết, bao gồm kiểm tra cẩn thận bề mặt bên thể, tất lỗ miệng, khoang sọ, khoang ngực khoang bụng thành phần bên chúng Các quan chọn để cân phải cắt khỏi mô liên kết khối lượng ướt tính sớm tốt để tránh bị khô Phụ lục E gợi ý mô cần cân bảo quản môi trường cố định thích hợp để kiểm tra mơ bệnh học Tóm tắt quan sát tối thiểu cho loại nghiên cứu nêu Bảng Bảng - Tóm tắt quan sát Quan sát Cấp tính Bán cấp tính Bán mãn tính/mãn tính a Thay đổi khối lượng thể + + + Các quan sát lâm sàng + + + Bệnh học lâm sàng b a, b + Bệnh học tổng quát b + + Khối lượng quan b + + Mô bệnh học b a, b + a Thử nghiệm độc tính tồn thân mãn tính nhìn chung kéo dài thời gian thử nghiệm bán mãn tính, giải thích giai đoạn tiếp xúc với người Nhiều thông số tương tự ghi lại báo cáo Cỡ nhóm tăng, bao gồm nhóm vệ tinh tạo cho số tất quan sát b Phải xem xét phép đo có định lâm sàng thử nghiệm tiếp xúc lâu khơng lường trước Danh sách phân tích máu mô/cơ quan gợi ý liệt kê Phụ lục D E 4.13 Thiết kế nghiên cứu Các thiết kế nghiên cứu liệt kê phần tiêu chuẩn Khuyến cáo việc tham vấn chuyên gia thiết kế nghiên cứu 4.14 Chất lượng điều tra nghiên cứu Thực hành thực nghiệm tốt giải việc tổ chức, xử lý điều kiện nghiên cứu phịng thí nghiệm lập kế hoạch, thực hiện, theo dõi, ghi chép báo cáo Các thực hành dự định để nâng cao chất lượng giá trị liệu thử Chúng hỗ trợ nỗ lực hài hịa tồn cầu cách tạo thuận lợi cho giác thư thương mại quốc gia Các nghiên cứu độc tính tồn thân phải tiến hành theo ngun tắc Độc tính tồn thân cấp tính 5.1 Quy định chung Độc tính tồn thân cấp tính cung cấp thông tin chung nguy sức khỏe nảy sinh tiếp xúc cấp tính phác đồ lâm sàng định Một nghiên cứu độ độc cấp tính bước khởi đầu để thiết lập cách thức lấy liều nghiên cứu bán cấp tính/bán mãn tính nghiên cứu khác cung cấp thơng tin kiểu hoạt động gây độc chất cách tiếp xúc lâm sàng định Tiếp sau việc đưa mẫu thử vào thể thử nghiệm độc tính tồn thân cấp tính, cần quan sát tác động (ví dụ dấu hiệu lâm sàng bất lợi, thay đổi khối lượng thể, phát mô bệnh học vĩ mô) chết Con vật cho thấy dấu hiệu kiệt sức, đau dai dẳng nghiêm trọng cần phải gây chết nhân đạo Các vật liệu bị bào mòn gây kích thích biết gây đau làm kiệt sức đáng kể phải báo cáo khơng cần thử CHÚ THÍCH ICCVAM ECVAM đánh giá nên phép thử độ độc tế bào in vitro phép thay cho thử nghiệm độ độc cấp tính 5.2 Thiết kế nghiên cứu 5.2.1 Chuẩn bị Động vật trưởng thành khỏe mạnh làm thích nghi với điều kiện phịng thí nghiệm ngày trước bắt đầu thử Thời gian ngắn phải giải thích Động vật sau lấy ngẫu nhiên chia thành nhóm xử lý LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 5.2.2 Động vật thực nghiệm 5.2.2.1 Chọn lồi Thơng thường sử dụng loài gặm nhấm (chuột nhắt, chuột cống trắng) Các đặc điểm mơ hình (tuổi, khối lượng ) mô tả 4.2 4.3 Nếu không sử dụng lồi gặm nhấm phải giải thích khoa học việc sử dụng 5.2.2.2 Số lượng giới tính Số lượng loại nhóm, số lượng vật nhóm giới tính mơ tả 4.5 5.2.2.3 Điều kiện nuôi dưỡng Nhiệt độ độ ẩm tương đối buồng nuôi động vật thực nghiệm phải phù hợp với lồi, ví dụ (22 ± 3)oC độ ẩm tương đối 30 % đến 70 % chuột nhắt Thông thường tần suất chiếu sáng nhân tạo 12 chiếu sáng 12 bóng tối Đối với việc cho ăn, sử dụng thức ăn phịng thí nghiệm tiêu chuẩn có bán sẵn, cấp nước uống khơng hạn chế Động vật ni chuồng theo nhóm giới tính ni riêng biệt; ni theo nhóm khơng vượt chuồng 5.2.3 Điều kiện thử nghiệm 5.2.3.1 Các mức liều Các mức liều phải mơ tả 4.8 Động vật nhóm đối chứng phải xử lý nhóm thử trừ không cho chúng liều mẫu thử 5.2.3.2 Quy trình Động vật nhận liều đơn mẫu thử, cần, nhiều liều giai đoạn 24 Các dấu hiệu độc phải ghi lại quan sát thấy, bao gồm thời điểm bắt đầu, mức độ khoảng thời gian Quan sát đặn động vật cần thiết để đảm bảo động vật không bị thiếu hụt nghiên cứu chúng ăn thịt đồng loại, tự phân hủy mô xếp sai Vào cuối nghiên cứu tất động vật sống sót phải gây chết nhân đạo Bất kỳ động vật hấp hối phải bỏ gây chết nhân đạo thấy hành vi Kế hoạch quan sát gây chết nhân đạo áp dụng nên ngăn ngừa khả động vật bị chết hệ trực tiếp độ độc mẫu thử 5.2.4 Khối lượng thể Số đo khối lượng thể phải lấy trước cho liều, hàng ngày ngày đầu sau cho liều, hàng tuần sau cho liều lần định theo thời gian nghiên cứu cuối thời điểm nghiên cứu 5.2.5 Quan sát lâm sàng Giai đoạn quan sát cho nghiên cứu độc tính tồn thân cấp tính ngày dài thấy phù hợp Tính đặc hiệu tần suất loại quan sát mô tả 4.10 Phụ lục C Trong trường hợp, quan sát phải tiến hành tần suất hành động phù hợp, để giảm thiểu mát động vật khỏi nghiên cứu, ví dụ mổ xác đông lạnh vật chết cách ly gây chết vật yếu hấp hối Quan sát bên chuồng phải bao gồm, không giới hạn, với thay đổi da, lơng, mắt màng nhày, hơ hấp, tuần hồn tự chủ hệ thần kinh trung ương, hoạt động sinh dưỡng dạng hành vi công cụ mô tả Phụ lục C 5.2.6 Bệnh học 5.2.6.1 Bệnh học lâm sàng Phải xem xét đánh giá bệnh học lâm sàng có định lâm sàng Phải tiến hành kiểm tra sau đây: a) Huyết học, mô tả Phụ lục D, phải xem xét kiểm tra cuối giai đoạn thử b) Xác định hóa sinh lâm sàng máu liệt kê Phụ lục D, phải xem xét cuối giai đoạn thử Các vùng thử xem thích hợp với nghiên cứu tiếp xúc cấp tính chức gan thận Hóa sinh lâm sàng bổ sung sử dụng cần thiết để mở rộng quan sát tác động quan sát LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Phân tích nước tiểu khơng cần thiết, tiến hành có dẫn dựa độ độc có quan sát Các thông số gợi ý liệt kê Phụ lục D 5.2.6.2 Bệnh học tổng quát Phải xem xét đánh giá bệnh học tổng quát có định lâm sàng Đánh giá phải bao gồm việc kiểm tra bề mặt thể, tất lỗ miệng, khoang sọ, khoang ngực khoang bụng thành phần bên Khi thấy thích hợp, cần xem xét để ghi lại khối lượng não bộ, gan, thận, thượng thận tinh hoàn Các quan phải cân ướt sớm tốt sau cắt để tránh bị khô dẫn đến giá trị thấp giả tạo 5.2.6.3 Mô bệnh học Mô bệnh học tổng thể thường không tiến hành quan mơ từ động vật nghiên cứu độc tính tồn thân cấp tính, trừ dẫn cụ thể phát mổ toàn tử thi 5.3 Tiêu chí đánh giá 5.3.1 Quy định chung Phụ thuộc vào thiết kế thử nghiệm sử dụng, áp dụng tiêu chí đánh giá sau đây: a) Đối với thử nghiệm kiểu dược điển - Nếu giai đoạn quan sát phép thử độc tính tồn thân cấp tính, khơng động vật xử lý với mẫu thử cho thấy hoạt tính sinh học cao đáng kể so với động vật xử lý với dược tá đối chứng mẫu đáp ứng yêu cầu phép thử - Sử dụng năm động vật, hai nhiều số chết, có hành vi rối loạn kiệt sức với hai nhiều số con, giảm khối lượng thể 10 % số ba nhiều số mẫu khơng đáp ứng yêu cầu phép thử - Nếu vật xử lý với mẫu cho thấy có biểu hoạt tính sinh học nhẹ khơng nhiều vật cho thấy triệu chứng hoạt tính sinh học tổng thể chết lặp lại phép thử sử dụng nhóm gồm mười - Đối với phép thử lặp lại, tất mười vật xử lý với mẫu không thấy biểu hoạt tính sinh học có ý nghĩa khoa học so với vật đối chứng giai đoạn quan sát mẫu đáp ứng yêu cầu phép thử b) Đối với phép thử độc tính tồn thân cấp tính khơng theo dược điển Sự lựa chọn để tiến hành đánh giá sử dụng phương pháp có phạm vi rộng bao gồm bệnh học lâm sàng giải phẫu, loại trừ cần thiết lặp lại phép thử Tiếp xúc cấp tính gồm đánh giá lại có khác không rõ rệt so với đối chứng hành Sự khác phải giải thích nghiên cứu bổ sung thêm năm vật nữa, áp dụng 5.3.2 Đánh giá kết Các phát nghiên cứu độc tính tồn thân cấp tính phải đánh giá với phát nghiên cứu trước, có sẵn, xem xét mặt tác động độc phát mổ tử thi toàn bộ, quan sát Đánh giá bao gồm quan hệ liều chất thử, có khơng có xuất độ nghiêm trọng bất thường, bao gồm bất thường hành vi lâm sàng, tổn thương toàn bộ, thay đổi khối lượng thể, tác động tử vong tác động chung riêng khác 5.4 Báo cáo tổng kết Báo cáo tổng kết cho nghiên cứu độc tính tồn thân cấp tính phải bao gồm thơng tin sau: a) Chất thử; - chất vật lý, độ tinh khiết đặc điểm hóa lý phù hợp; - liệu nhận dạng khác b) Tá dược (nếu thích hợp); - giải thích việc chọn tá dược khác với tá dược liệt kê TCVN 7391-12 (ISO 10993-12) c) Động vật thử - loài/chủng sử dụng; - số lượng, tuổi giới tính động vật; LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn - nguồn bao gồm tình trạng vi sinh học (ví dụ ni ngăn ni thông thường), điều kiện (nhiệt độ, độ ẩm, chỗ ngủ, chiếu sáng, chế độ ăn, …); - khối lượng thời điểm bắt đầu phép thử d) Điều kiện thử - sở chọn liều; - chi tiết công thức/chuẩn bị chất thử; nồng độ đạt được; độ ổn định đồng nhất, phù hợp; - chi tiết việc đưa chất thử vào thể; - chuyển đổi từ nồng độ chất thử (ppm) sang liều thực (mg/kg BW), áp dụng; - chi tiết chất lượng thức ăn, nước uống chỗ ngủ e) Kết - liệu tóm tắt dạng bảng biểu, trình bày cho nhóm thử nhóm đối chứng, số lượng vật bắt đầu phép thử, số lượng vật biểu dấu hiệu lâm sàng bất lợi số lượng vật có thay đổi khối lượng thể; - khối lượng thể/thay đổi khối lượng thể; - tiêu thụ thức ăn nước uống, áp dụng; - số liệu phản ứng gây độc theo giới tính mức độ liều, bao gồm dấu hiệu độ độc; - chất, độ nghiêm trọng khoảng thời gian quan sát lâm sàng (có thuận nghịch hay khơng); - đánh giá hành vi thần kinh, áp dụng; - phép thử huyết học dùng kết với số liệu ranh giới liên quan, áp dụng; - phép thử hóa sinh lâm sàng dùng kết với số liệu ranh giới liên quan, áp dụng; - phép thử phân tích nước tiểu dùng kết với số liệu ranh giới liên quan, áp dụng; - số liệu khối lượng thể cuối khối lượng quan, áp dụng; - phát mổ xác; - miêu tả chi tiết tất phát mô bệnh học, áp dụng; - đánh giá kết thống kê thảo luận ý nghĩa sinh học chúng f) Thảo luận kết g) Kết luận h) Công bố đảm bảo chất lượng Nghiên cứu độc tính tồn thân cấp tính cung cấp thơng tin tác động tiếp xúc cấp tính với chất thử Phép ngoại suy kết nghiên cứu cho người có giá trị đến mức độ hạn chế cung cấp thơng tin có ích tiếp xúc cho phép Độc tính tồn thân tiếp xúc lặp lại (Độc tính tồn thân bán cấp tính, bán mãn tính mãn tính) 6.1 Quy định chung Trong độ độc cấp tính đề cập đến tác động bất lợi liều đơn (hoặc tiếp xúc hạn chế) dạng phổ biến tiếp xúc người với nhiều trang thiết bị y tế dạng tiếp xúc lặp lại liên tục Các tác động từ tiếp xúc lặp lại liên tục xảy tiềm tàng tích lũy hóa chất mơ chế khác, quan trọng xác định khả xảy trường hợp thơng qua thử nghiệm dài hạn (bán cấp tính, bán mãn tính, mãn tính) Các phép thử độc tính tồn thân tiếp xúc lặp lại cung cấp thơng tin nguy sức khỏe xuất phát từ tiếp xúc kéo dài cách lâm sàng định Nó cung cấp thơng tin kiểu hoạt động độc chất cách tiếp xúc lâm sàng định Các nghiên cứu độc tính tồn thân tiếp xúc lặp lại cung cấp thông tin chi tiết tác động độc, quan đích, khả thuận nghịch tác động khác đóng vai trị làm sở để ước tính độ an tồn Các kết nghiên cứu cung cấp thông tin quan trọng phản ánh phạm vi hướng dẫn nghiên cứu bệnh học lâm sàng giải phẫu LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Các nghiên cứu tiếp xúc lặp lại nhìn chung khơng cung cấp tiêu chí thử nghiệm lại Nhưng cỡ nhóm thiết kế để giúp cho việc đánh giá thống kê quan sát ghi lại (xem Bảng 1) Do khoảng thời gian biến đổi nghiên cứu tiếp xúc lặp lại nên mẫu thử phải chuẩn bị yêu cầu để đảm bảo độ ổn định chúng 6.2 Thiết kế nghiên cứu 6.2.1 Chuẩn bị Động vật trưởng thành khỏe mạnh làm thích nghi với điều kiện phịng thí nghiệm ngày trước thử Động vật sau lấy ngẫu nhiên chia thành nhóm xử lý 6.2.2 Động vật thực nghiệm 6.2.2.1 Chọn lồi Thơng thường sử dụng loài gặm nhấm (chuột cống trắng, chuột nhắt) Các đặc điểm động vật thực nghiệm (tuổi, khối lượng, ) mô tả 4.2 4.3 Nếu sử dụng lồi khơng thuộc gặm nhấm phải giải thích khoa học việc sử dụng 6.2.2.2 Số lượng giới tính Số lượng loại nhóm, số động vật nhóm giới tính mơ tả 4.5.1 Khi giải thích khoa học, phải xem xét việc sử dụng động vật vệ tinh xử lý với mức liều cao với đối chứng vệ tinh cho giai đoạn xác định trước, sau gây chết nhân đạo cuối Nhóm với đối chứng dùng để kiểm tra tác động xử lý, bao gồm khả thuận nghịch, tồn dai dẳng tác động độc bị trì hỗn Đối với nghiên cứu bán mãn tính động vật vệ tinh phải giữ lại vịng 28 ngày 6.2.2.3 Điều kiện nuôi dưỡng Nhiệt độ độ ẩm tương đối buồng nuôi động vật thực nghiệm phải phù hợp với lồi, ví dụ (22 ± 3)oC độ ẩm tương đối 30 % đến 70 % chuột cống trắng Thông thường tần suất chiếu sáng nhân tạo 12 chiếu sáng 12 bóng tối Đối với việc cho ăn, sử dụng thức ăn phịng thí nghiệm thương phẩm chuẩn có cấp nước uống không hạn chế Động vật nuôi chuồng theo nhóm giới tính ni riêng biệt; ni theo nhóm khơng vượt q chuồng 6.2.3 Điều kiện thử nghiệm 6.2.3.1 Mức độ liều Động vật thực nghiệm đầu tư nguồn khác nghiên cứu độc tính tồn thân tiếp xúc lặp lại với mục tiêu thiết lập an toàn cho người, bảo đảm việc xem xét nhiều nhóm để kiểm tra tác động liều đáp ứng Mức độ liều mô tả 4.8 Liều sử dụng cho phép thử độ độc trang thiết bị y tế phải xác định liên quan đến kết đánh giá rủi ro, cân liều tiếp xúc lâm sàng với sử dụng nhân tố an tồn, áp dụng Đối với nghiên cứu dài hơn, cần có nỗ lực để có ba mức độ liều đối chứng thích hợp Loại trừ việc xử lý với chất thử, động vật nhóm đối chứng phải xử lý theo cách tương tự động vật nhóm thử Khơng giống nghiên cứu hóa học cổ điển độc tính tồn thân tiếp xúc lặp lại, nghiên cứu tiếp xúc lặp lại với trang thiết bị y tế thường không gây tác động liều đáp ứng, tác động độc mức độ liều cao không bắt buộc Tuy nhiên, sử dụng phổ liều cho ước tính có ích ranh giới độ an tồn cho người 6.2.3.2 Quy trình Động vật cho liều với mẫu thử lý tưởng ngày/tuần, xuyên suốt giai đoạn nghiên cứu Đối với nghiên cứu tiếp xúc lặp lại dài hạn, việc cho liều ngày/tuần chấp nhận phải lập văn giải thích 6.2.4 Khối lượng thể Số đo khối lượng thể phải lấy trước cho liều, hàng tuần sau cho liều định theo thời gian nghiên cứu cuối thời điểm nghiên cứu 6.2.5 Quan sát lâm sàng Giai đoạn quan sát cho nghiên cứu độc tính tồn thân liều lặp lại phải phù hợp với thời gian nghiên cứu Tính đặc hiệu tần suất loại quan sát mô tả 4.10 Phụ lục C Trong LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn trường hợp, quan sát phải tiến hành tần suất phải hành động phù hợp để giảm thiểu mát động vật khỏi nghiên cứu ví dụ mổ xác hay đơng lạnh vật chết cách ly gây chết vật yếu hấp hối Quan sát bên chuồng phải bao gồm, không giới hạn với thay đổi da, lông, mắt màng nhày hơ hấp, tuần hồn tự chủ hệ thần kinh trung ương, hoạt động sinh dưỡng dạng hành vi sử dụng công cụ mô tả Phụ lục C Thông thường việc kiểm tra mắt kính soi đáy mắt thiết bị phù hợp tương ứng, phải tiến hành trước đưa chất thử vào thể thời điểm kết thúc nghiên cứu, phù hợp tất động vật nhóm đối chứng nhóm cho liều cao Nếu phát thấy thay đổi mắt phải kiểm tra tất động vật Các trường hợp không kiểm tra phải lập văn giải thích 6.2.6 Bệnh học 6.2.6.1 Bệnh học lâm sàng Cần tiến hành kiểm tra sau đây: a) Huyết học, mô tả Phụ lục C, phải xem xét kiểm tra cuối giai đoạn thử Phụ thuộc vào độ dài nghiên cứu mà xem xét việc lấy mẫu thường xuyên b) Xác định hóa sinh lâm sàng máu phải tiến hành cuối giai đoạn thử Phụ thuộc vào độ dài nghiên cứu mà xem xét việc lấy mẫu thường xuyên Các vùng thử xem thích hợp với nghiên cứu tiếp xúc lặp lại cân chất điện phân, trao đổi chất cacbonhydrat, chức gan thận Chọn phép thử riêng bị ảnh hưởng quan sát kiểu hoạt động chất thử Các xác định gợi ý liệt kê Phụ lục D Hóa sinh lâm sàng bổ sung sử dụng cần thiết để mở rộng quan sát tác động quan sát Phân tích nước tiểu khơng cần thiết, tiến hành có định dựa độ độc có quan sát Các thông số gợi ý liệt kê Phụ lục D Số liệu trước cho giá trị thơng thường có ích để thiết lập mức độ ranh giới để so sánh với đối chứng nghiên cứu có Nếu số liệu ranh giới trước khơng phù hợp phải xem xét đến việc thu thập thông tin cho động vật tuổi, giới tính, chủng nguồn, ưu tiên phịng thí nghiệm 6.2.6.2 Bệnh học tổng quát Tất vật phải mổ toàn xác, bao gồm kiểm tra bề mặt thể, tất lỗ miệng, khoang sọ, khoang ngực khoang bụng thành phần bên Thượng thận, não bộ, mào tinh hoàn, tim, thận, gan, buồng trứng, lách, tinh hoàn, tuyến ức, tử cung phải cân ướt sớm tốt sau cắt để tránh bị khô giá trị thấp giả tạo Cơ quan mô liệt kê Phụ lục E nên bảo quản mơi trường thích hợp để kiểm tra mơ bệnh học tương lai 6.2.6.3 Mô bệnh học a) Mô bệnh học tổng thể nên tiến hành quan mơ từ vật nhóm đối chứng nhóm cho liều cao b) Tất tổn thương tổng thể phải kiểm tra c) Phổi động vật nhóm cho liều thấp trung gian, sử dụng, phải kiểm tra mô bệnh học để lấy chứng việc nhiễm bệnh, điều cho đánh giá thuận tiện trạng thái sức khỏe động vật Cũng cần xem xét kiểm tra mô bệnh học gan thận nhóm Có thể khơng cần thiết kiểm tra mơ bệnh học kỹ động vật nhóm này, phải luôn tiến hành quan biểu chứng tổn thương nhóm liều cao d) Khi sử dụng nhóm vệ tinh, mơ bệnh học tiến hành mơ quan xác định biểu tác động nhóm xử lý e) Nhìn chung, nghiên cứu mãn tính, phải sử dụng động vật canh gác để kiểm soát xuất tác nhân gây nhiễm trùng Huyết học mô học nhóm canh gác thực định 6.3 Tiêu chí đánh giá 6.3.1 Quy định chung Dữ liệu tóm tắt dạng bảng biểu, biểu thị số lượng động vật thời điểm ban đầu nghiên cứu, số lượng động vật tổn thương, loại tổn thương tỷ lệ động vật mang loại tổn thương cho LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn nhóm thử Đánh giá thống kê tiến hành mối liên quan sinh học phải xem xét trước tiên Tất phương pháp thống kê chấp nhận nói chung sử dụng; phương pháp thống kê phải lựa chọn thiết kế nghiên cứu 6.3.2 Đánh giá kết Các phát nghiên cứu tiếp xúc lặp lại phải đánh giá với phát nghiên cứu trước xem xét mặt tác động độc, phát mổ xác mô bệnh học Đánh giá bao gồm quan hệ liều chất thử có mặt khơng có xuất độ nghiêm trọng bất thường bao gồm bất thường hành vi lâm sàng, tổn thương toàn bộ, thay đổi cực nhỏ, nhận dạng quan đích, tác động tử vong tác động chung riêng khác 6.4 Báo cáo tổng kết Thông tin 5.4 phải có báo cáo tổng kết nghiên cứu độc tính tồn thân tiếp xúc lặp lại Ngồi phải cung cấp thông tin sau đây: - phép thử huyết học sử dụng kết với liệu ranh giới tương ứng; - phép thử hóa sinh lâm sàng sử dụng kết với liệu ranh giới tương ứng; - phát mô bệnh học; - đánh giá thống kê kết sử dụng thảo luận ý nghĩa mặt sinh học kết Nghiên cứu độc tính tồn thân dài hạn cung cấp thông tin tác động tiếp xúc lặp lại với chất thử Phép ngoại suy kết nghiên cứu cho người có giá trị đến mức độ hạn chế cung cấp thơng tin có ích tiếp xúc cho phép Phụ lục A (tham khảo) Các cách đưa mẫu thử vào thể A.1 Khái quát Một số cách đưa mẫu thử vào thể liệt kê A.2 đến A.10 Các cách khác để đưa mẫu thử vào thể thích hợp mặt lâm sàng nên sử dụng Cách đưa mẫu thử vào thể thích hợp nên sử dụng Nếu dùng cách thay để đưa mẫu thử vào thể phải giải thích Nên có tư vấn chuyên gia thiết kế nghiên cứu phù hợp A.2 Ngoài da Các phép thử độc tính tồn thân qua đường ngồi da thích hợp với trang thiết bị sử dụng bề mặt Phải xem xét đến hạn chế việc đưa mẫu thử vào miệng động vật A.3 Cấy da Các phép thử độc tính tồn thân qua đường cấy ghép thích hợp với trang thiết bị cấy ghép Phép thử thích hợp cho thử nghiệm trực tiếp vật liệu cách ứng dụng đến vùng chung riêng Hình dạng cấu trúc vật thử cần phải xem xét Các phương pháp cấy ghép tìm thấy TCVN 7391-6 (ISO 10993-6) A.4 Hít vào Các phép thử độc tính tồn thân qua đường thở thích hợp với trang thiết bị có mơi trường tiếp xúc cho phép hóa chất dễ bay qua, với mẫu thử dạng hơi/hạt hít vào Phương pháp cụ thể cho cách tìm thấy hầu hết văn chuyên dùng độc học hít vào A.5 Nội bì Các phép thử độc tính tồn thân qua đường nội bì thích hợp với trang thiết bị có mơi trường tiếp xúc nội bì cho phép hóa chất thấm qua Mẫu thử thường đưa trực tiếp vào vùng nội bì cách tiêm Sử dụng nhiều vị trí xử lý phải mô tả chứng minh rõ ràng A.6 Trong Các phép thử độc tính tồn thân qua đường thích hợp với trang thiết bị có mơi trường tiếp xúc mơ cho phép hóa chất thấm qua Mẫu thử thường đưa trực tiếp vào mô cách tiêm cấy phẫu thuật Các vị trí cần chọn lựa để giảm thiểu chức khả đau phá hủy thần kinh căng sợi mẫu thử tiêm vào cấy LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn ghép Các vị trí phải luân phiên cho nghiên cứu liều lặp lại, ví dụ cơng thức khơng chứa dịch giữ lại kho chứa vịng 24 Sử dụng nhiều vị trí xử lý phải mô tả chứng minh rõ ràng A.7 Trong bụng Các phép thử độc tính tồn thân qua đường vào bụng thích hợp với trang thiết bị có mơi trường tiếp xúc đường dịch khoang bụng cho phép hóa chất thấm qua Đây cách thích hợp chất chiết khơng nên đưa theo đường tĩnh mạch, chẳng hạn với chất chiết dầu khơng phân cực có hạt Cách thích hợp để lọc dịch tiêm tĩnh mạch Mẫu thử thường đưa trực tiếp vào khoang bụng Tính tốn tần suất liều lượng nên xem xét đến vật thử đưa cách hấp thụ chủ yếu qua tuần hồn bàng hệ vậy, phải qua gan trước vào hệ tuần hồn chung Phải thận trọng khơng tiêm vào dày đường ruột A.8 Trong tĩnh mạch Các phép thử độc tính tồn thân qua đường tĩnh mạch thích hợp với trang thiết bị có mơi trường tiếp xúc trực tiếp gián tiếp với đường dịch lỏng máu cho phép hóa chất thấm qua Các mẫu thử thường đặt vào truyền trực tiếp vào hệ mạch Nếu có hạt phải xem xét việc chuyển cách qua đường bụng lọc mẫu Thể tích liều khuyến nghị tốc độ truyền cho nghiên cứu tĩnh mạch với lồi động vật phịng thí nghiệm sử dụng phổ biến liệt kê Phụ lục B Phải thận trọng để giảm thiểu khả tiêm mẫu thử mạch Tiêm thường phút nhiều phải xem xét việc sử dụng kim tiêm bướm ống thơng dị tĩnh mạch A.9 Miệng Các phép thử độc tính tồn thân qua đường miệng thích hợp với trang thiết bị tiếp xúc trực tiếp gián tiếp với niêm mạc miệng, với sản phẩm có ứng dụng ruột khác Mẫu thử thường đưa vào ống đưa thẳng vào dày Động vật thực nghiệm thường bị nhịn đói trước đưa mẫu thử vào Thời gian nhịn đói từ vài đến qua đêm, với khoảng thời gian ngắn cho động vật có tốc độ trao đổi chất cao Tiếp theo giai đoạn bỏ đói, động vật phải cân sau đưa liều mẫu thử vào dựa khối lượng thể Sau đưa mẫu thử vào, khơng bổ sung thức ăn đến Khi đưa liều thành phần nhỏ qua giai đoạn định cần cung cấp cho động vật thức ăn nước uống phụ thuộc vào độ dài giai đoạn A.10 Dưới da Các phép thử độc tính tồn thân đường da thích hợp với trang thiết bị có mơi trường tiếp xúc da cho phép hóa chất thấm qua Các mẫu thử thường đưa trực tiếp vào vùng da cách tiêm cấy ghép Sử dụng nhiều vị trí xử lý phải mơ tả chứng minh rõ ràng Phụ lục B (tham khảo) Thể tích liều B.1 Khái quát Các nguyên tắc nghiên cứu động vật nhân đạo yêu cầu tất nỗ lực cần có để giảm thiểu loại bỏ tất tác động bệnh học sinh lý có hại Các giá trị liệt kê Bảng B.1 giới hạn tối đa báo cáo tài liệu Các giá trị không xem khuyến nghị tiêu chuẩn này, nhà nghiên cứu nên áp dụng giới hạn liên quan đến nhân tố khối lượng thể/diện tích bề mặt, tốc độ đưa mẫu thử vào thể, đặc điểm lý hóa sinh học mẫu thử chủng động vật Phải cố gắng giảm thiểu thể tích liều xem xét yếu tố điều chỉnh Bảng B.1 - Thể tích liều tối đa để đưa mẫu thử vào thể Loài Chuột cống trắng Dưới da Trong Trong bụng ml/kg ml/kg ml/kg 20 20 Nuốt qua ống ml/kg 50 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Tĩnh mạch ml/kg 40 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Nuốt qua ống Dưới da Trong Trong bụng ml/kg ml/kg ml/kg Chuột nhắt 50 50 50 50 Thỏ 10 20 20 10 Chó 20 20 10 Khỉ 20 15 10 Loài Tĩnh mạch ml/kg ml/kg CHÚ THÍCH Các quy chuẩn quốc gia khơng sử dụng thể tích tối đa nêu Nhìn chung kiến nghị đưa mẫu thử vào lồi gặm nhấm khơng vượt q 0,1 ml/vị trí (chuột nhắt) 0,2 ml/vị trí (chuột cống trắng) B.2 Tham khảo thể tích liều Xem Thư mục tham khảo, Phần [10-15] Phụ lục C (tham khảo) Quan sát dấu hiệu lâm sàng thông thường Bảng C.1 - Quan sát dấu hiệu lâm sàng thông thường Quan sát lâm sàng Dấu hiệu quan sát Hệ thống liên quan Hơ hấp Khó thở (thở khác thường, thở hổn hển), ngừng thở, chứng xanh tím, thở gấp, chảy mũi CNS, phổi, tim Hoạt động thần kinh vận động Tăng/giảm trạng thái ngủ lơ mơ, thăng bằng, mê man, chứng giữ nguyên thế, điều hịa, vận động khác thường,kiệt sức, rùng mình, tạo bó CNS, vận động sinh dưỡng, giác quan, thần kinh cơ, thần kinh tự chủ Rối loạn Chứng giật rung, trương lực, giật rung-trương lực, ngạt, uốn người sau CNS, thần kinh cơ, thần kinh tự chủ, hô hấp Phản xạ Màng sừng, đứng thẳng, xúc giác cơ, ánh sáng, phản xạ giật CNS, giác quan, thần kinh tự chủ, thần kinh Dấu hiệu thị giác Chảy nước mắt, thu hẹp đồng tử, tật giãn đồng tử, lồi mắt, chứng sa mi mắt, mờ đục, viêm mống mắt, viêm màng kết, giãn màng nháy Thần kinh tự chủ, kích ứng Dấu hiệu tim mạch Nhịp tim chậm, nhịp tim nhanh, chứng loạn nhịp, giãn mạch, co mạch CNS, thần kinh tự chủ, tim mạch, phổi Tiết nhiều nước bọt Vượt mức Thần kinh tự chủ Sự dựng lông Lông bờm xờm Thần kinh tự chủ Chứng cảm giác đau Giảm phản ứng CNS, giác quan Tiếng Giảm trương lực, tăng trương lực Thần kinh tự chủ Dạ dày - ruột Phân nhão, ỉa chảy, nơn, tiểu tiện nhiều, táo bón CNS, thần kinh tự chủ, giác quan, vận động GI, thận Da Phù, ban đỏ Phá hủy mơ, kích ứng LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Phụ lục D (tham khảo) Dự kiến phép đo huyết học, hóa học lâm sàng phân tích nước tiểu D.1 Huyết học - Khả đơng máu (PT, APTT) - Nồng độ haemoglobin - Haematocrit - Đếm tiểu cầu - Đếm tế bào hồng cầu - Đếm tế bào bạch cầu - Chênh lệch WBC D.2 Hóa học lâm sàng - Albumin - ALP - ALT - AST - Canxi - Clorit - Cholesterol - Creatinin - GGT - Glucoza - Photphat vô - Kali - Natri - Bilirubin tổng số - Protein tổng số - Triglycerít - Nitơ urê - Các enzim bổ sung phù hợp mặt khoa học - Mức độ globulin miễn dịch xem thị độ độc hệ miễn dịch D.3 Phân tích nước tiểu (lấy mẫu theo thời gian, ví dụ 16 đến 24 giờ) - Dạng - Bilirubin (sắc tố màu da cam) - Glucoza - Keton - Máu huyền bí - Protein - Cặn - Khối lượng riêng độ thẩm thấu - Thể tích LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn - Các phép thử khác thích hợp khoa học vật thử bị nghi gây độc tính cho quan cụ thể (nhìn chung cần lấy mẫu để lạnh) Phụ lục E (tham khảo) Dự kiến danh mục quan cho đánh giá mô bệnh học - Tuyến thượng thận* 1) - Toàn vùng tổn thương (bao gồm vị trí xử lý) - Động mạch chủ - Xương ống (xương đùi, xương sườn xương ức) - Não* (các phần đại diện gồm não, tiểu não học cầu) - Manh tràng - Kết tràng - Tá tràng - Mào tinh hoàn* - Thực quản - Mắt - Túi mật (nếu có) - Tim* - Hồi tràng - Ruột chay - Thận* - Gan* - Phổi khí quản (được bảo quản cách thổi phồng với chất cố định sau ngâm nước) - Hạch lympho (tại chỗ để bao trùm vị trí đưa mẫu thử vào thể xa để bao trùm tác động toàn thân) - Tuyến vú (con cái) - Cơ (cơ vân) - Ống mũi (cho nghiên cứu hít vào) - Dây thần kinh (vùng hơng chày) ưu tiên gần với - Buồng trứng* - Tuyến tụy - Tuyến cận giáp - Tuyến yên - Tuyến tiền liệt - Trực tràng 1) Cùng với đánh giá mô bệnh học, mô/cơ quan đánh dấu hoa thị (*) phải cân, với quan khác nên cân thích hợp mặt khoa học Các phát lâm sàng phát khác gợi ý cần thiết để kiểm tra thêm mơ Ngồi ra, quan xem quan đích dựa đặc điểm biết chất thử phải bảo quản Mô bệnh học tổng quát phải tiến hành quan mô bảo quản tất vật nhóm liều đối chứng nhóm liều cao Các kiểm tra mô/cơ quan đích đến đặc hiệu cần thiết phải mở rộng vật nhóm liều khác thay đổi liên quan đến xử lý quan sát nhóm liều cao LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn - Tuyến nước bọt - Túi tinh - Da - Tủy sống - Lá lách* - Mỏ ác - Dạ dày - Tinh hoàn* - Tuyến ức* - Tuyến giáp - Khí quản - Bóng đái - Tử cung* (bao gồm cổ ống) - Âm đạo Phụ lục F (tham khảo) Thông tin chất gây sốt vật liệu Gây sốt khả hóa chất chất khác gây phản ứng sốt Phản ứng sốt vật liệu, nội độc tố gây chất khác, ví dụ thành phần vi khuẩn gram dương nấm Tiêu chuẩn quan tâm đến gây sốt vật liệu Không cần thiết thử khả gây sốt in vivo tất trang thiết bị y tế Tuy nhiên, vật liệu mang thực thể hóa chất trước gây phản ứng sốt phải đánh giá khả gây sốt vật liệu Nhiễm nội độc tố nguồn phản ứng gây sốt, không nhầm lẫn với phản ứng gây sốt vật liệu - Gây sốt nội độc tố Dạng gây sốt bắt nguồn từ nội độc tố có hoạt tính sinh học vi khuẩn gram dương, thường trình nhiễm gây sốt trình chế tạo trang thiết bị y tế đánh giá cách đo lượng nội độc tố trang thiết bị phép thử LAL đặc hiệu nội độc tố không cần phép thử thỏ.2) - Gây sốt vật liệu Loại gây sốt bắt nguồn từ nhân tố không liên quan đến nội độc tố Sau danh mục chất biết gây phản ứng sốt nội độc tố: - Chất gây sốt nội sinh (ví dụ IL-1, IL-6, TNFα, INF-); - Prostaglandin; - Các chất cảm ứng (ví dụ axit polyadenylic, axit polyuridylic, axit polybionosinic axit polyribocytidylic); - Các chất phá hủy chức trung tâm điều hịa nhiệt (ví dụ LSD, cocain, morphin); - Các chất không cặp đơi phản ứng phosphoryl hóa ơxi hóa (ví dụ 4,6-dinitro-o-cresol, dinitrophenol, axit picric); - N-phenyl--naphthylamin aldo-α-naphthylamin (cơ chế gây sốt chưa biết); - Ngoại độc tố vi khuẩn (ví dụ TSST-1, SEA, Spe F, Spe C); - Chất truyền dẫn thần kinh (ví dụ noradrenalin, serotonin); - Các kim loại muối nicken số trường hợp 2) Thử nghiệm LAL: AAMI/ST72 - Nội độc tố vi khuẩn - Các phương pháp thử, giám sát thường quy phương pháp thay cho thử nghiệm theo lô LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Để phát khả gây sốt vật liệu, phép thử kiến nghị gây sốt thỏ có phổ rộng để phát hoạt tính gây sốt kiến nghị Các phương pháp tiến hành phép thử gây sốt thỏ thấy Dược điển Hoa Kỳ, Dược điển Châu Âu Dược điển Nhật Bản Phép thử LAL không phù hợp để xác định khả gây sốt chất Nếu có phương pháp khác để phát khả gây sốt nội độc tố phát triển có giá trị phương pháp xem xét để thay phép thử thỏ Các thành tựu gần phương pháp dựa giải phóng cytokin bạch cầu mono/các đại thực bào phát gây sốt liên quan đến thành phần vi khuẩn gram dương, vi khuẩn gram âm nấm Các phương pháp khơng có giá trị khảo nghiệm khả gây sốt vật liệu Thư mục tài liệu tham khảo Phần chung [1] U.S./EPA PB 86/108958 89/124077 [2] U.S./EPA Toxicological principles for the safety assessment of direct food additives (Các nguyên lý độc học để đánh giá độ an toàn phụ gia thực phẩm trực tiếp), 1982 [3] U.S Code of Federal Regulation 1500.40: Method of Testing Toxic Substances (Phương pháp thử nghiệm chất độc) [4] Dược điển Hoa Kỳ 26: Biological Reactivity Tests, In Vivo (Phép thử phản ứng sinh học in vivo); The National Formulary 21, Rockville, MD; Pharmacopoeial Convention, 2003 pp 2028-2032 [5] ASTM F 619-03, Standard Practice for Extraction of Medical Plastics (Thực hành chuẩn để chiết nhựa y tế) [6] SN119800:1990, Biological Evaluation of Dental Materials (Đánh giá sinh học vật liệu nha khoa) [7] Dược điển Châu Âu, Xuất lần thứ 4, 2002 [8] MHLW Notification No.0213001(2003.02.13) Principles for Biological Safety Evaluation of Medical Devices (Các nguyên tắc để đánh giá an toàn sinh học trang thiết bị y tế) [9] Halle, W (2003) The Registry of Cytotoxicity: Toxicity testing in cell cultures to predict acute toxicity (LD50) and to reduce animal testing [Đăng ký độ độc tế bào:Thử nghiệm độc tính ni cấy tế bào để dự đốn độc tính cấp (LD50) để giảm thử nghiệm động vật], ATLA 31:89-98 Tham khảo thể tích liều [10] HULL, R.M Guideline limit volumes for dosing animals in the preclinical stage of safety evaluation (Hướng dẫn thể tích giới hạn để cấp liều động vật giai đoại tiền lâm sàng việc đánh giá an toàn), Human and Environmental Toxicology, 1995, 14, pp 305-307 [11] DERELANKO, M.J HOLLINGER, M.A CRC Handbook of Toxicology (Sổ tay độc học), CRC Press, NY, 2nd edition, 2001, p 98 [12] DIEHL, K.-H et al A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes, J Applied toxicology, 21, 2001, pp 15-23 [13] MORTON, D et al Effects of infusion rates in rats receiving repeated large volumes of intravenous saline solution, Laboratory Animal Sciences, 47, 1997, pp 656-659 [14] RICHMOND, J.D Dose limit volumes: the United Kingdom view - past and present Presented at the Humane Society of the United States - Refinement in Toxicology Testing: Dosing Data: Volume and Frequency, March 14, 1999, New Orleans, LA [15] MORTON, D.B et al Refining procedures for the administration of substances Report of the BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW Joint Working Group on Refinement, Laboratory Animals, 35, 2001, pp 1-41 MỤC LỤC Lời nói đầu Lời giới thiệu Phạm vi áp dụng LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Tài liệu viện dẫn Thuật ngữ, định nghĩa Xem xét chung Độc tính tồn thân cấp tính Độc tính tồn thân tiếp xúc lặp lại Phụ lục A (tham khảo) Các cách đưa mẫu thử vào thể Phụ lục B (tham khảo) Thể tích liều Phụ lục C (tham khảo) Quan sát dấu hiệu lâm sàng thông thường Phụ lục D (tham khảo) Dự kiến phép đo huyết học, hóa học lâm sàng phân tích nước tiểu Phụ lục E (tham khảo) Dự kiến danh mục quan cho đánh giá mô bệnh học Phụ lục F (tham khảo) Thông tin chất gây sốt vật liệu Thư mục tài liệu tham khảo LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162