... LIệU2.1. Hiện tượng ưu thế lai 2.2. Hệ thống lúa lai hai dòng Khái niệm hệ thống lúa lai hai dòng Ưu điểm của hệ thống lúa lai hai dòng Các phương pháp chọn tạo dòng mẹ lúa lai hai dòng(EGMS). + Phương pháp truyền thống + Chỉ thị phân tử và ứng dụng 2.3. Tình hình nghiên cứu và ứng dụng chỉ thị phân tử trong chọn tạo lúa lai hai dòng Tình hình nghiên cứu và ứng dụng trên thế giới Tình hình nghiên cứu và ứng dụng ở Việt Nam1.2.Mục đích và yêu cầu:1.2.1.Mục đích:Xác định gen tms2 trong tập đoàn các dòng TGMS bằng chỉ thị phân tử. Nghiên cứu di truyền gen tms2. 1.2.2 Yêu cầu : Khảo sát một số đặc điểm nông sinh học của các tổ hợp lai F1Chiết tách AND để tiến hành phản ứng PCRĐánh giá được khả năng hữu – bất dục bằng phương pháp truyền thống của các tổ hợp lai F2.Phát hiện gen tms2 ở các dòng TGMS và thế hệ F2 .PHầN ... PHÁP NGHIÊN CứU 3.1. Đối tượng , vật liệu , địa điểm và thời gian nghiên cứu 3.1.1. Đối tượng nghiên cứu Gồm một số tổ hợp lai F1 , quần thể F2 3.1.2. Vật liệu nghiên cứu * Thí nghiệm trong phòng:Thiết bị :+ Máy PCR , máy chạy điện di , máy chụp ảnh điện di , máy li tâm , máy votex , tủ lạnh , lò vi sóng . + Các loại ống effendof , các loại pipet và đầu tiếp đi kèm . Thành phần cho phản ứng PCR + Cặp mồi phát hiện gen bất dục đực tms2 theo M.T.Lopez và cộng sự (2003)có trình tự là : RM11_F:5’TCTCCTCTTCCCCCGATC3’ RM11_R:5’ATAGCGGGCGAGCTTAG3’Hóa chất chạy PCR : dNTD , MgCl2 , Taq ADN polymerase , PCR mastermix , nước cất Hóa chất dùng để chiết tách ADN hệ gen : Để chọn tạo lúa lai hai dòng thành công thì dòng TGMS phải nhiều và phong phú,từ đó mới tạo ra được tổ hợp cho ưu thế lai cao.Hiện nay các dòng TGMS đang được sử dụng như:103S,T1S96,64S,287S,36S2,Kim 76S,Pair 64S và 25S.Các nhà khoa học đã tìm được 6 gen TGMS(tms1, tms2, tms3, tms4, tms5, tms6).Mỗi gen này có ngưỡng chuyển hóa hữu dục và bất dục khác nhau,trong đó,gen tms2 có ngưỡng chuyển hóa hữu dục ổn định.Nhà chọn tạo giống đã sử dụng các gen TGMS này lai chuyển vào các dòng,giống lúa triển vọng để tạo dòng TGMS tốt,có khả năng phối hợp cao,tạo ra nhiều tổ hợp lai mới cho ưu thế lai cao như TH33,Việt Lai 20,TH34,…Thành phần ... PCRBước 6:Cho 600 µl hỗn hợp Chlorofom : Isoamylalcohol(24:1),lắc đều va ly tâm 7 phút với tốc độ 13000 vòng/phút rồi hút phần dung dịch ở trên vào ống eppendorf mới đã đánh dấu tương ứng. Bước 7: Cho 800 µl Ethanol(96%)(hoặc 600 µl Isopropanol),trộn đều và ly tâm 7 phút với tốc độ 13000 vòng/phút.Sau đó đổ phần dung dịch phía trên giữ lại phần kết tủa dưới đáy ống nghiệm. Bước 8: Rửa kết tủa bằng Ethanol 70%,làm khô tự nhiên ở nhiệt độ phòng bằng cách úp ngược ống nghiệm lên giấy thấm. Bước 9:Hòa tan kết tủa bằng 50 µl dung dịch TE rồi bảo quản ở nhiệt độ 20oC+Kiểm tra độ tinh sạch ADN bằng cáchđiện di trên gel agarose 1%.+Tiến hành phản ứng PCR với cặp mồi RM11 cho gen tms2. Bằng việc sử dụng ADN marker(chỉ thị phân tử) thời gian chọn tạo ra các dòng mới được rút ngắn.Các chỉ thị liên kết chặt với các tính trạng kiểu hình. Do đó,chúng ta có thể xác định được các tính trạng dựa trên sự có mặt của các gen mong muốn.Kỹ thuật này không chỉ có độ chính xác cao mà còn xác định được trên một lượng lớn vật liệu nghiên cứu. Để đáp ứng được mục tiêu chọn giống chúng tôi tiến hành đề tài: Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử DNA chọn lọc gen tms2 để tạo ra các dòng TGMS mới”....