Luận văn : HOÀN THIỆN QUY TRÌNH BIẾN NẠP ĐOẠN DNA VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN E coli DH5α part 3 pptx

Luận văn : HOÀN THIỆN QUY TRÌNH BIẾN NẠP ĐOẠN DNA VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN E. coli DH5α part 3 pptx

... ở 37 0C. A B C D 37 3. 4.10 Chuyển sản phẩm nối vào tế bào vi khuẩn E. coli DH5α khả nạp (theo quy trình của Sambrook và cộng sự, 1989 có chỉnh sửa) Thực hiện biến nạp theo quy trình ... biến nạp theo quy trình 2 (ở thể tích biến nạp là 3: 0 .5, và dịch biến nạp đã pha loãng ½ khi trang lên đĩa) cho kết quả tốt hơn chọn lọc thể biến nạp theo quy trình 1 (ở thể tích biến nạp 3: 0 .5, ... nạp 3: 0 .5, và dịch biến nạp không pha loãng khi trang lên đĩa) và chọn lọc thể biến nạp theo quy trình 3 (ở thể tích biến nạp là 1 0:1 .5). Biến nạp theo quy trình 1 cho kết quả chỉ vài khuẩn...

Luận văn : HOÀN THIỆN QUY TRÌNH BIẾN NẠP ĐOẠN DNA VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN E. coli DH5α part 2 doc

... vào vi khuẩn E. coli DH5α và kiểm tra Sơ đồ 3. 3 Quy trình biến nạp đoạn DNA vào vi khuẩn E. coli DH5α và kiểm tra Vi khuẩn E. coli DH5α ... chữ vi t hoa để chỉ chủng vi khuẩn sử dụng. Ví d : Escherichia coli Ry 13 Giống Loài Chủng EcoRI: enzyme đầu tiên đƣợc tìm thấy ở E. coli EcoRV: enzyme thứ 5 đƣợc tìm thấy ở E. coli 2 .3. 1 .3 ... DNA polymerase (tổng hợp) 5’ 3 , exonuclease (thủy giải), 3 5’ và exonuclease 5’ 3 . Enzym DNA fragment Klenow là enzym DNA polymerase I bị cắt bỏ tiểu đơn vị nhỏ (nhờ một protease), phần...

Luân. văn : Xây dựng quy trình biến nạp đoạn DNA vào tế bào vi khuẩn E.coly DH5α part 9 pptx

... 3. 2.6 Các loại enzym dùng trong thí nghiệm 25 3. 3 Phƣơng pháp nghiên cứu 26 3. 3.1 Quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn 26 3. 3.2 Quy trình biến nạp đoạn DNA vào vi khuẩn E. coly DH5α ... kiểm tra 31 3. 3.7.1 Chiết tách plasmid 31 3. 3.7.2 Phản ứng cắt DNA Plasmid 33 3. 3.7 .3 Quy trình điện di trên gel agarose 34 3. 3.8 Tinh sạch plasmid và đoạn DNA từ sản phẩm PCR 34 3. 3.9 Thiết ... tƣợng biến nạp 4 2 .3 Sự biến nạp nhân tạo vào tế bào E. coly 5 2 .3. 1 Khái niệm sự biến nạp nhân tạo. 5 2 .3. 2 Sự điều hoà gen của operon Lac ở E. coly 5 2 .3. 3 Chuẩn bị tế bào khả nạp 7 2 .3. 3.1...

Luân. văn : Xây dựng quy trình biến nạp đoạn DNA vào tế bào vi khuẩn E.coly DH5α part 8 pptx

... 15.http://www.kings.edu/Biology/lux/bacterial.html 6. 16.http://fruitfly4.aecom.edu/labmanual/27.html 7. 17.http://core.eai.edu/biol/foruvellm/farwelebpage/Biotech3100/pvector.200.pfd 8. http://lybrary.thinkquest.org/19697/data/ovpc6b.html ... http://opbs.okstate.edu/~melcher/MG/MGW4/ html 13. http://www.ornl.gov/sci/techresourses/human 14. http://www_biology.ucsd.edu/classes/bimm100.FACO/03cloning.html 15. http://bioprotocol.endlex.com/protocols/lygation.html ... vào và trữ ở -700C. Biến nạp plasmid vào khả nạp Bƣớc 1: Hút 3 l dịch huyền phù tế bào competen cell đã đƣơc chuẩn bị cho vào eppendorf 1.5 ml, thêm 0.5µl DNA plasmid vào, đảo nhẹ, giữ lạnh...

Luân. văn : Xây dựng quy trình biến nạp đoạn DNA vào tế bào vi khuẩn E.coly DH5α part 3 ppt

... DNA polymerase (tổng hợp) 5’ 3 , exonuclease (thủy giải) 3 5’ và exonuclease 5’ 3 . Enzym DNA fragment Klenow là enzym DNA polymerase I bị cắt bỏ tiểu đơn vị nhỏ (nhờ một protease), phần ... trách nhiệm exonuclease 5’ 3 . Do đó, enzym Klenow có hai hoạt động: hoạt động tổng hợp DNA polymerase 5’ 3 và hoạt động thủy giải exonuclease 3 5’. 2.5.2.2 Terminal transferase Enzym này ... bởi hai loại enzym là E. coly DNA lygase hay T4 DNA lygase. 2.5 .3. 1 E. coly DNA lygase Enzym đƣợc ly trích từ E. coly xúc tác nối hai đoạn DNA có đầu sole 5’ ACGG + TAATCGCCA 3 3 TGCCATTA...

Hoàn thiện quy trình biến nạp đoạn dna vào tế bào vi khuẩn E. coli DH5

... nghiên cứu 25 3. 4.1 Quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn 25 3. 4.2 Quy trình biến nạp đoạn DNA vào vi khuẩn E. coli DH5α và kiểm tra 26 3. 4 .3 Tăng sinh vi khuẩn E. coli DH5α trên môi ... biến nạp đoạn DNA vào tế bào vi khuẩn E. coli DH5α phát triển từ đề tài: “Xây dựng quy trình biến nạp đoạn DNA vào tế bào vi khuẩn E. coli DH5α do Phạm Duy và Huỳnh Văn Thái, trƣờng đại học ... điện di trên gel agarose 32 3. 4.7 Tinh sạch plasmid và đoạn DNA từ sản phẩm PCR 33 3. 4.7.1 Phƣơng pháp tinh sạch DNA 33 3. 4.7.2 Quy trình tinh sạch DNA từ gel 33 3. 4.7 .3 Quy trình tinh sạch...

23
1,336
15

Tài liệu HOÀN THIỆN QUY TRÌNH BIẾN NẠP ĐOẠN DNA VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN E. coli DH5α pot

... nghiên cứu 25 3. 4.1 Quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn 25 3. 4.2 Quy trình biến nạp đoạn DNA vào vi khuẩn E. coli DH5α và kiểm tra 26 3. 4 .3 Tăng sinh vi khuẩn E. coli DH5α trên môi ... đồ 3. 1 Vùng trình tự MCS của plasmid pBluescript II SK (+/-) 23 Sơ đồ 3. 2 Quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn E. Coli 25 Sơ đồ 3. 3 Quy trình biến nạp đoạn DNA vào vi khuẩn E. coli ... (restriction map), vào vi c phân tích so 2 thực hiện đề tài “ Hoàn thiện quy trình biến nạp đoạn DNA vào tế bào vi khuẩn E. coli DH5α phát triển từ đề tài: “Xây dựng quy trình biến nạp đoạn...

Luân. văn : Xây dựng quy trình biến nạp đoạn DNA vào tế bào vi khuẩn E.coly DH5α part 7 pdf

... theo thể tích giữa tế bào khả nạp và plasmid là 3 : 0.5, điện di ở 100V trong 30 phút. Qua 3 lần tách chiết, chúng tôi đã hoàn thiện đƣợc quy trình tách chiết plasmid từ vi khuẩn E. coly biến ... bằng (blunt end) cho đoạn DNA DC TS TS DC EcoRV DC1 DC2 DC3 DNA plasmid 3. 0kb 56 Hình 4.20 Sản phẩm cắt plasmid tách chiết mẫu biến nạp đoạn DNA 629bp và mẫu biến nạp đoạn DNA 580bp. ... biến nạp, kết quả tách chiết không còn lẫn DNA genome và các tạp DC 1 2 3 4 5 1 2 DC 3 4 5 DNA plasmid 3. 0kb DNA plasmid 3. 0kb 54 Với đoạn DNA có kých thƣớc 629bp, chỉ có 6 khuẩn...

Luân. văn : Xây dựng quy trình biến nạp đoạn DNA vào tế bào vi khuẩn E.coly DH5α part 6 doc

... còn lẫn tạp 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 DNA genome DNA plasmid 3. 0kb 43 4.2 Các quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn 4.2.1 Chọn lọc vi khuẩn biến nạp với nồng độ ... biến nạp ở tỉ lệ thể tích là 10 : 1. Hình 4.8 Kết quả cấy vi khuẩn biến nạp ở tỉ lệ thể tích là 3 : 0.5. Biến nạp với tỉ lệ tế bào khả nạp và plasmid theo thể tích(μl) là 30 :3 ... kháng sinh 60µg/ ml Hình 4 .3 Kết quả cấy vi khuẩn biến nạp khi sốc nhiệt 90 giây. (a) biến nạp với tỉ lệ tế bào khả nạp và plasmid theo thể tích (μl) là 30 :3 phục hồi trong 800μl môi trường...

Xem thêm