Quy trình bào chế và thành phần công thức là 2 yếu tố có ảnh hưởng lớn tới các đặc tính của hệ tiểu phân nano lipid. Sau các quá trình khảo sát để lựa chọn được công thức thích hợp nhất, tiến hành đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng của hệ NLC-DEA như: hiệu quả mang dược chất, cấu trúc NLC, trạng thái kết tinh của dược chất và đánh giá khả năng thấm và lưu giữ thuốc trên da của hệ NLC.
3.2.4.1. Đánh giá hiệu quả mang dược chất vào trong hệ NLC
Cơ chế giải phóng dược chất trong hệ NLC có đặc điểm khác biệt so với các dạng bào chế khác. Sự giải phóng dược chất từ NLC thường gồm 2 giai đoạn: giai đoạn đầu giải phóng nhanh và giai đoạn sau giải phóng kéo dài. Giai đoạn giải phóng nhanh tạo ra sự chênh lệch gradient nồng độ góp phần làm tăng tính thấm dược chất, còn giai đoạn sau sẽ góp duy trì tác dụng của dược chất trong thời gian kéo dài [10]. Vì vậy đánh giá hiệu quả mang dược chất trong hệ NLC cũng như hàm lượng dược chất tự do ngoài môi trường, từ đó có được những nhận định xu hướng DC giải phóng.
Bào chế công thức CT4 và đánh giá hiệu quả mang dược chất theo mục 2.3.2.6. Kết quả được trình bày trong bảng 3.5 (n = 3, TB±SD).
Bảng 3.5. KTTP, PDI, thế Zeta và hiệu quả mang DC của công thức CT4
Chỉ số KTTP (nm) PDI Thế Zeta (mV) HQ mang DC
(%)
CT4 224,4 ± 1,18 0,157 ±0,032 -26,4 ± 2,01 87,84 ± 8,0
Nhận xét: Từ bảng số liệu cho thấy hàm lượng dexamethason acetat được mang vào trong nano lipid đạt 87,84%. Kết quả gần tương đồng với nghiên cứu của Xuefan Xu và các cộng sự khi nghiên cứu bào chế đánh giá hệ NLC chứa DEA sử dụng thành phần lipid rắn là compritol ATO 888 và thành phần lipid lỏng là dầu đậu tương (soybean oil) cho hệ tiểu phân NLC có kích thước khoảng 227±8 nm và hiệu quả mang dược chất lớn nhất là 77±6% [29].
3.2.4.2. Hình thái và kích thước tiểu phân hệ nano lipid
Để xác định hình dạng và cấu trúc của tiểu phân NLC, tiến hành xác định hình thái và KTTP hệ NLC bằng kính hiển vi điện tử truyền qua TEM. Kết quả như hình 3.8.
Hình 3.8. Ảnh chụp hệ NLC-CT4 qua kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM)
Nhận xét: hệ tiểu phân nano lipid chứa dexamethason acetat có hình cầu hoặc gần cầu, kích thước tiểu phân phân bố khá đồng đều, có thể quan sát thấy đa số là các tiểu phân có kích thước tiểu phân từ 200 nm đến 250 nm. Điều này phù hợp với kết quả đo kích thước tiểu phân bằng máy zetasizer với kích thước tiểu phân trung
bình là 223,8 nm và PDI là 0,168. Hình ảnh chụp TEM thứ 2 cho thấy cấu trúc rõ rệt của các tiểu phân nano lipid với phần vỏ là các lipid rắn có màu đen đậm hơn, phần lõi là thành phần lipid lỏng có chứa dược chất được quan sát như phần có màu nhạt hơn.
Như vậy, hệ NLC-DEA sau khi bào chế có dạng hình cầu và cấu trúc lõi vỏ, kết quả này cũng phù hợp với nghiên cứu của Khurana S. và các cộng sự [14].
3.2.4.3. Phân tích nhiễu xạ tia X
Quá trình bào chế hệ NLC-DEA dưới sự tác động của nhiệt độ xảy ra ở 2 quá trình là đun nóng (75-850C) và làm lạnh (40C). Sự tác động của nhiệt độ ảnh hưởng tới trạng thái kết tinh của DEA trong hệ tiểu phân nano lipid. Do đó tiến hành phân tích nhiễu xạ tia X với mẫu CT4 để xác định trạng thái kết tinh của DEA. Kết quả được thể hiện trong hình 3.9.
10 20 30 40 50 0 250 500 750 1000 1250 1500 1750 2000 DEA Compritol Int ens ity 2 theta (degree) NLC-DEA
Hình 3.9. Hình ảnh chụp XRD của mẫu NLC-CT4, mẫu nguyên liệu DEA và compritol
Nhận xét: nhìn vào hình 3.9 cho thấy DEA đã bị thay đổi trạng thái từ kết tinh sang vô định hình. Hình ảnh phân tích nhiễu xạ tia X của các mẫu cho thấy sự khác nhau về vị trí các pic trong công thức NLC-DEA so với mẫu nguyên liệu DEA ở trạng thái tinh thể. Sự xuất hiện đỉnh pic trong công thức NLC tương ứng với đỉnh pic của nguyên liệu compritol nhưng với cường độ yếu hơn. Điều này có thể lý giải
do phân tử DEA đã được hòa tan trong thành phần lipid lỏng. Kết quả thu được phù hợp với nghiên cứu của Han F và các cộng sự [14].
3.2.4.4. Đánh giá tính thấm của DEA từ NLC qua da chuột nhắt
Kết quả các nghiên cứu về hệ tiểu phân NLC đã chỉ ra tác dụng tăng cường tính thấm qua da của hệ nano lipid [13]. Để chứng minh nhận định trên và khẳng định NLC-DEA giúp tăng cường tính thấm, chúng tôi tiến hành đánh giá tính thấm của DEA từ công thức CT4 và từ hỗn dịch nguyên liệu DEA chứa hàm lượng dược chất tương ứng. Kết quả thu được biểu diễn trong bảng phụ lục 3.6 và đồ thị hình 3.10.
Hình 3.10. Đồ thị tốc độ thấm của DEA từ công thức CT4 và mẫu nguyên liệu
Nhận xét: đồ thị hình 3.9 cho thấy tốc độ thấm của DEA từ công thức CT4 cao hơn hẳn so với công thức hỗn dịch từ nguyên liệu DEA ban đầu. Cụ thể là sau thời gian 8 giờ công thức NLC cho 26,30 µg/cm2 DEA thấm qua da so với mẫu hỗn dịch nguyên liệu chỉ cho 11,46 µg/cm2 DEA. Trong giai đoạn đầu khoảng 3 giờ sau khi dùng thuốc chưa thấy sự khác biệt rõ rệt về lượng dược chất thấm qua da của 2 công thức trên, nguyên nhân có thể là do trong giai đoạn thâm nhập ban đầu lớp da nhanh chóng bị hydrat hóa tạo điều kiện cho DEA khuếch tán thụ động cho tới khi đạt nồng độ bão hòa trong lớp biểu bì. Sau giai đoạn đầu này, DEA thấm từ công thức nano lipid tăng cao hơn so với mẫu nguyên liệu do công thức NLC đảm bảo cho sự tiếp xúc gần gũi với lớp sừng và làm tăng số lượng thuốc được mang trong
0 5 10 15 20 25 30 0 2 4 6 8 10 Lư ợng D EA thấ m qua da (µg /cm ²)
Thời gian lấy mẫu (giờ)
Hỗn dịch DEA NLC-DEA
NLC xâm nhập vào da. Hơn nữa kích thước tiểu phân của hệ NLC chỉ khoảng 224 nm nhỏ hơn rất nhiều so với kích thước micro của các tiểu phân nguyên liệu DEA làm tăng cường khả năng xâm nhập của các tiểu phân NLC qua da từ đó làm tăng lượng DEA thấm qua da. Kích thước tiểu phân nhỏ làm tăng cường hiệu ứng bao phủ bề mặt giảm sự mất nước trên bề mặt da cải thiện khả năng thấm của dược chất [10].
24 giờ sau khi dùng thuốc mẫu da được xử lý theo phương pháp trong mục
2.3.2.8 để đánh giá khả năng lưu giữ thuốc trên da của NLC so với mẫu nguyên liệu. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
3.2.4.5. Đánh giá lưu giữ thuốc trên da của hệ nano lipid
Dạng bào chế dùng qua da với mục đích tăng cường tác dụng tại chỗ của thuốc do đó để đánh giá tác dụng của thuốc tại vị trí đích chúng tôi tiến hành định lượng lượng DEA còn lưu giữ trên da của hệ NLC so với hỗn dịch DEA. Kết quả được biểu diễn trong đồ thị hình 3.11.
Hình 3.11. Lượng DEA lưu giữ trên da của công thức NLC-CT4 và hỗn dịch DEA
Nhận xét: sau 24 giờ lượng DEA còn lưu giữ trên da của công thức sử dụng NLC cao hơn so với công thức hỗn dịch có hàm lượng dược chất tương ứng. Cụ thể là lượng DEA còn lưu giữ trên da của hệ NLC là 15,55 µg/cm2 và của hỗn dịch DEA là 7,18 µg/cm2. Hệ NLC với KTTP nhỏ làm cho các tiểu phân dễ dàng đi qua hàng rào bảo vệ da là tầng lớp sừng để xâm nhập vào lớp biểu bì và hạ bì gây ra tác
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 Hỗn dịch DEA NLC-DEA Lượ ng D EA trên d a (µg /cm ²)
dụng, điều này đặc biệt có ý nghĩa đối với các thuốc có tác dụng tại đích là biểu bì và hạ bì như dạng dùng ngoài da của DEA. KTTP nhỏ làm tăng khả năng bao phủ
bề mặt và hình thành lớp màng phim trên bề mặt da làm tăng cường lượng DEA
xâm nhập vào các lớp bên trong và bị lưu giữ lại. Nghiên cứu của Han.F và các cộng sự lý giải việc hình thành các khoảng chứa thuốc trên da sau khi dùng NLC, từ đó kéo dài thời gian lưu giữ thuốc trong da đảm bảo việc kéo dài thời gian giải phóng thuốc và tác dụng kéo dài [10].
Tóm lại hệ NLC ngoài tác dụng tăng cường tính thấm của DEA còn có tác
dụng lưu giữ lại lượng lớn thuốc trong da sau quá trình sử dụng.
Kết luận: như vậy chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu và đánh giá một số đặc tính của hệ tiểu phân nano lipid chứa DEA. Thông qua quá trình khảo sát ảnh hưởng của các yếu tố thuộc thành phần công thức và kỹ thuật bào chế lên KTTP cũng như đánh giá độ ổn định của các công thức cho thấy công thức CT4 sử dụng 1,0 g compritol; 1,0 g miglyol và 2% Tween 80 cho kích thước khoảng 224 nm với chỉ số phân bố kích thước 0,157 được lựa chọn để đưa vào hydrogel chứa NLC-DEA.