Cân 4g bột dược liệu rồi cho vào cốc có mỏ. Thêm 10ml ethanol 90%. Đun cách thủy sôi trong vài phút. Lọc nóng. Dịch lọc được dùng để làm các phản ứng.
a. Phản ứng mở đóng vòng lacton :
Cho vào 2 ống nghiệm mỗi ống 1ml dịch chiết Ống 1 thêm 0,5ml dung dịch NaOH 10% Ống 2 để nguyên.
Phản ứng dương tính khi xảy ra các hiện tượng sau: - Đun cả 2 ống nghiệm đến sôi. Để nguội rồi quan sát
Ống 1: Có màu vàng hoặc tủa đục màu vàng Ống 2: Trong
- Thêm vào cả 2 ống nghiệm mỗi ống 2ml nước cất. Lắc đều rồi quan sát Ống 1: Trong suốt
Ống 2: Có tủa đục
Acid hóa ống 1 bằng vài giọt HCl đặc, ống 1 sẽ trở lại tủa đục như ống 2.
Kết quả: Phản ứng dương tính.
b. Phản ứng diazo hóa
Tiến hành và kết quả tương tự phần định tính flavonoid (phản ứng không rõ ràng).
c. Quan sát huỳnh quang của các vết coumarin dưới ánh sáng tử ngoại khi tác dụng với dung dịch kiềm (Phản ứng chuyển từ đồng phân cis sang đồng phân trans dưới tác dụng của tia tử ngoại)
Nhỏ vài giọt dịch chiết lên giấy thấm. Nhỏ tiếp vài giọt dung dịch NaOH 5%. Sấy nhẹ. Che một phần diện tích dịch chiết trên giấy lọc bằng một miếng kim loại (chìa khóa, đồng xu) rồi chiếu tia tử ngoại trong một vài phút. Bỏ miếng kim loại ra, quan sát tiếp dưới đèn tử ngoại.
Phản ứng dương tính khi phần không bị che có huỳnh quang sáng hơn phần bị che. Tiếp tục chiếu tia tử ngoại, phần bị che sẽ sáng dần lên, sau vài phút cả hai phần đều phát quang như nhau.
Kết quả: Phản ứng âm tính.
Nhận xét: Phản ứng mở đóng vòng lacton (đặc hiệu) dương tính nhưng 2 phản ứng còn lại âm tính. Sơ bộ kết luận dược liệu không chứa coumarin.