Cân 4g bột dược liệu rồi cho vào cốc có mỏ. Thêm 10ml ethanol 90%. Đun cách thủy sôi trong vài phút. Lọc nóng. Dịch lọc được tiến hành các phản ứng định tính: phản ứng Cyanidin, phản ứng với kiềm, phản ứng với FeCl3, phản ứng diazo hóa.
a. Phản ứng Cyanidin (Phản ứng Shinoda)
Cho vào ống nghiệm nhỏ 1ml dịch chiết. Thêm một ít bột magnesi kim loại (khoảng 10mg). Nhỏ từng giọt HCl đậm đặc (3 - 5 giọt). Đun cách thủy sôi vài phút, phản ứng dương tính khi dung dịch chuyển từ màu vàng sang màu đỏ.
Kết quả: Phản ứng không rõ ràng.
b. Phản ứng với kiềm
- Cho vào ống nghiệm nhỏ 1ml dịch chiết. Phản ứng dương tính nêu khi thêm vài giọt dung dịch NaOH 10% sẽ thấy xuất hiện tủa vàng. Thêm 1ml nước cất, tủa sẽ tan và màu vàng của dung dịch sẽ được tăng thêm.
Kết quả: Phản ứng dương tính.
- Nhỏ một giọt dịch chiết lên giấy lọc. Hơ khô rồi để lên miệng lọ amoniac đặc đã được mở nút, phản ứng dương tính sẽ thấy màu vàng của vết dịch chiết được tăng lên. Nhỏ một giọt khác trên giấy lọc làm chứng.
Kết quả: Phản ứng dương tính rõ.
c. Phản ứng với FeCl3
Cho vào ống nghiệm nhỏ 1ml dịch chiết. Thêm vài giọt dung dịch FeCl3
5%.
Kết quả: Xuất hiện tủa xanh đen (Phản ứng dương tính).
d. Phản ứng diazo hóa
Cho 1ml dịch chiết vào ống nghiệm, kiềm hóa bằng dung dịch kiềm (dung dịch NaOH, KOH, Na2CO3), thêm vài giọt thuốc thử diazo mới pha, lắc đều,
đun nóng trên nồi cách thủy trong vài phút. Phản ứng dương tính khi xuất hiện màu đỏ.
Kết quả: Phản ứng không rõ ràng.
Nhận xét: Các phản ứng dương tính không đặc hiệu nên sơ bộ kết luận dược liệu Xích đồng nam không chứa flavonoid.