NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ
♣ Nuôi cấy huyền phù tế bào cần một lýợng mô sẹo khá lớn, xấp xỉ 2 Ờ 3 g/100ml dung dịch môi trýờng (Helgeson, 1979).
♣ Sau một thời gian, dịch huyền phù là một hỗn hợp các tế bào đõn, các cụm tế bào, các mảnh còn lại của mẫu cấy và các tế bào chết.
IV. ĐẶC TRÝNG CỦA TẾ BÀO TRONG NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ
♣ Mức độ tách rời của các tế bào phụ thuộc vào đặc tắnh của các khối tế bào xốp và có thể đýợc điều chỉnh bởi thành phần môi trýờng.
VD: trong nhiều trýờng hợp, tăng tỷ lệ Auxin/Cytokinin sẽ sản sinh nhiều khối tế bào xốp.
♣ Theo King và Street (1977), không có một quy trình chuẩn nào cho nuôi cấy huyền phù tế bào.
IV. ĐẶC TRÝNG CỦA TẾ BÀO TRONG NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ
♣ Sinh trýởng và phát triển của tế bào nuôi cấy:
Pha lag: bắt đầu khi đýa mô sẹo vào môi trýờng, kéo dài cho tới lần phân bào đầu tiên.
Pha tăng tốc: các tế bào bắt đầu phân chia và số lýợng tế bào tăng dần. Pha hàm số mũ: số lýợng tế bào tăng theo hàm số mũ.
Pha ổn định: số lýợng tế bào đạt cực đại và không đổi theo thời gian, số tế bào sinh ra (do phân bào) xấp xỉ số tế bào chết đi.
IV. ĐẶC TRÝNG CỦA TẾ BÀO TRONG NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ
IV. ĐẶC TRÝNG CỦA TẾ BÀO TRONG NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ
♣ Để duy trì quá trình nuôi cấy, các tế bào cần đýợc cấy truyền vào giai đoạn sớm của pha ổn định.
Thời điểm cấy truyền cụ thể dựa vào kinh nghiệm, nói chung là nên bắt đầu khi mật độ tế bào cực đại.
Mật độ tế bào cực đại trong khoảng 18 Ờ 25 ngày, với huyền phù sinh trýởng mạnh có thể ngắn hõn, từ 6 Ờ 9 ngày.
IV. ĐẶC TRÝNG CỦA TẾ BÀO TRONG NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ
♣ Ở lần cấy truyền đầu tiên, dịch nuôi cần đýợc lọc nhằm loại bỏ cụm tế bào lớn, các mảnh từ mẫu cấy ban đầu, sau đó dùng pipet để lấy dịch cấy truyền.
♣ Lýợng tế bào đem cấy truyền phải đủ lớn để đảm bảo mật độ tế bào, vì khi thấp