- Tỷ lệ khối lượng khô/ tươi
Cách tiến hành: Cân dƣợc liệu tƣơi: 1000,06 g. Sấy trong 24 giờ ở nhiệt độ 49 – 500
C. Do nhiệt độ nóng chảy của EPMC khá thấp: 47 – 500C, có khả năng bay hơi cùng hơi nƣớc. Vì vậy phải sấy dƣợc liệu ở nhiệt thấp < 500C để đảm bảo không bị giảm hàm lƣợng một cách tối đa do nhiệt.
Khối lƣợng dƣợc liệu tƣơi và dƣợc liệu khô thu đƣợc tƣơng ứng là 1000,06 g và 228, 32 g.
Tỉ lệ khối lƣợng khô/ tƣơi =
= = Nhƣ vậy, từ dƣợc liệu Địa liền tƣơi thành dƣợc liệu khô giảm 4,38 lần. - Lập đường chuẩn
Mối quan hệ giữa lƣợng chất chấm lên vết và diện tích pic đã đƣợc khảo sát trong khoảng từ 2 µg đến 12 µg.
Cách tiến hành pha dãy chất chuẩn: chuẩn bị 6 bình định mức 10 ml sạch, khô. Đánh dấu bình theo thứ tự lần lƣợt các số 1, 2, 3, 4, 5, 6. Tƣơng ứng với số đếm của bình là số ml hút từ dung dịch chuẩn gốc (ở mục 2.3.4) vào các bình là 1 ml, 2 ml, 3 ml, 4 ml, 5 ml, 6 ml. Thêm Ethanol 96% tới vạch định mức của các bình. Dùng các dung dịch thu đƣợc để chấm sắc ký của mẫu chuẩn (dung dịch chuẩn dùng trong ngày). Tiến hành sắc ký tƣơng tự mục 2.3.4.
Bảng 3.1 Kết quả thu được khi đo 6 mẫu chuẩn Mẫu chuẩn số 1 2 3 4 5 6 Nồng độ các mẫu (mg/ml) 19,9 39,8 59,7 79,6 99,5 119,4 Lƣợng chất trên vết (µg) 1,99 3,98 5,97 7,96 9,95 11.94 Diện tích Pic (mA.s) 6217,282 13256,09 19089,3 25432,6 28195,22 33249,07 Phƣơng trình đƣờng chuẩn y = 2675x + 2274 R2 0,9840
Từ kết quả đó, ta xây dựng đƣợc đƣờng chuẩn đƣợc biểu thị ở hình vẽ sau đây:
Hình 3.2 Đường chuẩn thể hiện mối liên quan tuyến tính giữa lượng chất và diện tích pic.
y = 2675.1x + 2274.6 R² = 0.9849 0 5,000 10,000 15,000 20,000 25,000 30,000 35,000 40,000 0 2 4 6 8 10 12 14 Lƣợng chất trên pic mcg
Nhận xét:
Mối quan hệ giữa lƣợng chất chấm lên vết và diện tích pic đã đƣợc khảo sát trong khoảng từ 2 µg đến 12 µg. Kết quả đánh giá thực nghiệm cho thấy trong khoảng nồng độ này có tƣơng quan tuyến tính chặt chẽ (với R2
= 0,9840) giữa lƣợng chất EPMC trên vết và đáp ứng diện tích pic của EPMC khi phân tích bằng TLC trong điều kiện đã thiết lập. Nhƣ vậy ta có thể định lƣợng EPMC trong mẫu thử có nồng độ trong khoảng 2 µg đến 12 µg.
- Định lượng lượng EPMC trong các mẫu dược liệu
Thí nghiệm:
Tiến hành chuẩn bị mẫu nhƣ ở mục 2.3.4, bản mỏng silica gel 60F254 (6 cm×10 cm) đã đƣợc hoạt hóa ở 110°C trong 2 giờ đƣợc chia vạch thành 2 băng, chấm lần lƣợt mỗi băng 10 microlit dung dịch thử tƣơi và khô, chấm thành vạch dài 1cm, rộng 0,5 cm và phân tích vết sắc ký nhƣ mô tả trong mục 2.3.4. Kết quả hàm lƣợng EPMC trong các mẫu dƣợc liệu thu đƣợc trong bảng 3.2.
Bảng 3.2 Kết quả định lượng của mẫu tươi và mẫu khô
Nội dung Mẫu tƣơi Mẫu khô
Khối lƣợng mẫu (mg) 2001,6 456,6
Thể tích chấm sắc ký (µl) 10 10
Diện tích Pic 32137,4 29987,8
Hàm lƣợng EPMC trong dƣợc liệu (%) 0,56 2,27
Tỷ lệ hàm lƣợng EPMC sau sấy/ trƣớc sấy
Nhƣ vậy theo kết quả, hàm lƣợng EPMC trong dƣợc liệu thu đƣợc là > 2%, hàm lƣợng EPMC trong dƣợc liệu khô bằng 93,03% trong dƣợc liệu tƣơi, giảm 6,97%.