Chiết Soxhlet là phƣơng pháp đƣợc nhiều nghiên cứu lựa chọn trong việc tạo ra dịch chiết của cây Địa liền để kiểm tra tác dụng, hoạt tính sinh học của nó. Phƣơng pháp này có nhiều lợi thế hơn so với phƣơng pháp ngấm kiệt (tốn ít dung môi và rút ngắn thời gian chiết) và sử dụng dƣợc liệu khô.
Điều kiện thực nghiệm của đề tài có thể dùng dung môi là diethyl ether, toluen, ether dầu hỏa, ethanol, methanol, cloroform, dicloromethan… Do điều kiện phòng thí nghiệm sẵn có, và có thêm một số ƣu điểm nên chúng tôi chọn n- hexan và ethyl acetat đều có ƣu điểm là khả năng hòa tan hoạt chất và tinh dầu khá tốt, khá chọn lọc và ít độc.
Cách tiến hành:
Cân 69 g bột dƣợc liệu khô, lắp đặt bộ dụng cụ Soxhlet, đổ 200ml n- hexan từ trên xuống qua sinh hàn, xuống phần chứa nguyên liệu, dung môi ngấm vào dƣợc liệu. Đến một mức nhất định sẽ chảy xuống bình cầu phía dƣới. Chiết trong 6 giờ ở nhiệt độ 70-80 0C. Thời gian một vòng của dung môi là 9 phút.
Chiết xong để nguội. Cất thu hồi dung môi bằng máy cô quay chân không thu đƣợc dịch màu vàng nâu. Đổ dịch vào ống đong, cho dung môi vào tráng sạch bình cầu với lƣợng vừa đủ càng ít càng tốt, cho dịch tráng vào ống đong. Tráng lại nhiều lần và đổ vào ống đong đủ 14 ml. Đổ sang cốc có mỏ, tráng sạch ống đong bằng 1ml dung môi. Bịt kín miệng cốc bằng giấy ni lông và cho vào tủ lạnh để qua đêm.
Hôm sau, trong cốc xuất hiện sản phẩm kết tinh, lọc thu tủa. Định tính xác định đƣợc là EPMC. Tuy nhiên, tủa thu đƣợc có màu vàng trong khi đó tủa thu đƣợc ở cất kéo hơi nƣớc là không màu chứng tỏ tủa thu đƣợc bằng phƣơng pháp này lẫn nhiều tạp hơn. Vì vậy, cần phải kết tinh lại trong dung môi. Càng thực hiện nhiều lần kết tinh lại trong dung môi thì tủa càng sạch. Tuy nhiên, quá trình này cũng sẽ làm mất đáng kể một lƣợng hoạt chất. Ta chỉ kết tinh lại một lần.
Tủa thô thu đƣợc rửa qua bằng 3 ml dung môi, dàn đều tủa trên phễu lọc, nhỏ từ từ dung môi đều lên tủa để loại bỏ bớt tạp. Tủa sau tủa đƣợc kết tinh lại trong 8 ml dung môi. Sau kết tinh, lọc thu sản phẩm, xác định khối lƣợng và nhiệt độ nóng chảy của sản phẩm.
Sản phẩm tạo ra vẫn còn hơi vàng (còn lẫn tạp). Đối với ethyl acetat cũng tiến hành tƣơng tự. Kết quả thu đƣợc thể hiện ở bảng sau:
Bảng 3.4 Kết quả của phương pháp Soxhlet bằng 2 dung môi n-hexan và ethyl acetat
Dung môi
Nội dung n-hexan Ethyl acetat
Khối lƣợng dƣợc liệu nghiên cứu (g) 69,6g 68,5g
Thể tích n-hexan dùng để kết tinh EPMC (ml) 15 15
Khối lƣợng EPMC thô (g) 1,69 1,20
Khối lƣợng sau kết tinh lại (g) 1,47 1,06
Nhiệt độ nóng chảy của sản phẩm sau kết tinh lại (0C) 46,3 44,6
Hiệu suất chiết (%) 86 63