3.1. SƠ BỘ ĐÁNH GIÁ KẾT QUẢ DOCKING
Để tìm hiểu sơ bộ tương tác liên kết của các chất với HDAC, chúng tôi nghiên cứu đánh giá tính tương tác của HDAC 8 với chất 2d. Docking được tiến hành tại phòng nghiên cứu cấu trúc của đại học quốc gia Seul, Hàn quốc theo phương pháp đã được trình bày sơ bộ ở phần phương pháp nghiên cứu. Kết quả nghiên cứu Docking và dự đoán năng lượng liên kết được trình bày ở hình dưới đây.
Hình 3.1: Kết quả docking và dự đoán năng lượng liên kết của chất 2d và
HDAC 8
Kết quả docking cho thấy ở chất 2d phần cấu trúc gắn với coenzym Zn2+ ở đáy túi HDAC không phải là nhóm chức acid hydroxamic như các hydroxamat đã tổng hợp trước đây mà là nhóm 3-oxim với ái lực của chất 2d
với HDAC 8 lớn hơn SAHA thể hiện ở năng lượng liên kết của 2d với HDAC 8 (-5,3kcal/mol) nhỏ hơn năng lượng liên kết của SAHA với HDAC 8 (-4,4 kcal/mol). Đây là một điểm mới cần tiến hành nghiên cứu thêm.
3.2. TỔNG HỢP HÓA HỌC
Quá trình tổng hợp 4 chất trong khóa luận được thực hiện theo sơ đồ chung dưới đây:
NH H O O X N OC2H5 X O O O i X = -H -Cl -Br -NO2 N NHOH NHOH O X O ii
Sơ đồ 3.1: Quy trình tổng hợp chung
Tác nhân và điều kiện:
i) ethyl 7-bromoheptanoat, DMF, K2CO3, CH3OH, KI, 80oC, 2h; ii) CH3OH, NH2OH.HCl, NaOH, -5oC, 15-20’ ii) CH3OH, NH2OH.HCl, NaOH, -5oC, 15-20’
Quy trình tổng hợp gồm 2 giai đoạn:
- Giai đoạn 1 là phản ứng thế ái nhân, tổng hợp ethyl 7-(2,3- dioxoindolin-1-yl) heptanoat từ isatin và ethyl 7-bromoheptanoat trong dung môi là DMF.
- Giai đoạn 2, tiếp tục tổng hợp N-hydroxy-7-(3-(hydroxyimino)-2- oxoindolin-1-yl)heptanamid và hydroxylamin.HCl, trong giai đoạn này có sử dụng xúc tác là NaOH và dung môi là CH3OH.
3.2.1. TỔNG HỢP CÁC CHẤT ESTER TRUNG GIAN
Quy trình tổng hợp các ester trung gian 1a-dđược thực hiện theo sơ đồ dưới đây (xem sơ đồ 3.2):
NH H O O X N OC2H5 X O O O i X = -H -Cl -Br -NO2
Sơ đồ 3.2: Quy trình tổng hợp chất trung gian ester 1a-d
Tác nhân và điều kiện:
i) ethyl 7-bromoheptanoat, DMF, K2CO3, CH3OH, KI, 80oC, 2h;
3.2.1.1. Tổng hợp chất ethyl 7-(2,3-dioxoindolin-1-yl) heptanoat (1a) a. Tiến hành phản ứng a. Tiến hành phản ứng
- Cho 0,147 g isatin (≈ 1mmol) và 1ml DMF vào bình cầu dung tích 50ml. Thêm 0,207g K2CO3 khan (≈ 1,5mmol). Khuấy từ trong khoảng 15-20 phút ở nhiệt độ phòng cho đến khi hỗn hợp đồng nhất. Thêm 0,5ml CH3OH, khuấy 15 phút nữa. Cho 0,08g KI (≈ 0,5 mmol) vào bình phản ứng, trộn đều.
- Chuẩn bị 0,237g ethyl 7-bromoheptanoat (≈ 1mmol) hòa trong 1ml DMF sau đó nhỏ từ từ vào hỗn hợp phản ứng.
- Nâng nhiệt độ lên 80o
C, tiến hành phản ứng trong 2h có kèm khuấy từ. Kiểm tra phản ứng bằng SKLM với pha động DCM:CH3OH (90:10).