2.3.1. Khảo sát sự phụ thuộc của độ hấp thụ quang với nồng độ dược chất
Pha dung dịch gốc (dung dịch S): cân chính xác 50 mg felodipin chuẩn. Hòa tan trong 50ml ethanol, cho vào bình định mức 200ml. Thêm ethanol tới vạch, lắc đều. Được dung dịch S có nồng độ 250 µg/ml.
Pha dãy dung dịch chuẩn: từ dung dịch gốc, tiến hành pha dãy dung dịch chuẩn có nồng độ 8, 10, 20, 30, 40, 50 µg/ml bằng ethanol. Dãy dung dịch chuẩn đem đo độ hấp thụ quang ở bước sóng λ= 362 nm.
2.3.2. Phương pháp bào chế HPTR
HPTR được bào chế với một trong số các chất mang: PEG, HPMC hay PVP. Tùy theo chất mang sử dụng mà HPTR được chế theo phương pháp thích hợp.
2.3.2.1. Phương pháp dung môi
Áp dụng với các chất mang là HPMCvà PVP K30. -Cân các thành phần theo trong công thức (bảng 3.1). -Trộn hỗn hợp felodipin với chất mang.
-Hòa tan hỗn hợp dược chất với chất mang trong dung môi (với HPMC là hỗn hợp dicloromethan và ethanol, với PVP K30 là ethanol).
-Thêm tá dược hấp phụ, khuấy đều.
-Hỗn hợp thu được đem bốc hơi dung môi một phần ở 40o C trong nồi cách thủy 1 giờ.
-Hỗn hợp sau bốc hơi dung môi, đem sấy trong tủ sấy ở nhiệt độ 50o
C tới khi bay hết dung môi.
-Chất rắn thu được sau khi sấy, để ổn định trong bình hút ẩm trong 24h. Sản phẩm nghiền và rây qua rây có kích thước mắt rây thích hợp.Bảo quản HPTR trong lọ thủy tinh có nút và bao kín bằng giấy parafilm, để trong bình hút ẩm, tránh ánh sáng.
2.3.2.2. Phương pháp đun chảy kết hợp dung môi
Áp dụng với chất mang là PEG 4000.
-Cân các thành phần theo công thức (bảng 3.1).
-Cho PEG 4000 vào 1 cốc có mỏ khác (cốc 2), đun cách thủy cho tới khi PEG 4000 tan chảy hoàn toàn ở nhiệt độ 70o
C.
-Rót dung dịch ở cốc 1 sang cốc 2 khuấy đều trong nồi cách thủy. Tráng cốc 1 bằng ethanol.
-Thêm tá dược hấp phụ, khuấy đều.
-Hỗn hợp thu được đem bay hơi dung môi ở 40o C trên nồi cách thủy trong 1 giờ.
-Chất rắn thu được đem sấy ở nhiệt độ 50o
C tới khi bay hơi hết dung môi. -Chất rắn thu được sau khi sấy, để ổn định và làm khô trong bình hút ẩm trong 24 giờ. Sản phẩm đem nghiền và rây qua rây có kích thước mắt rây thích hợp. Bảo quản HPTR trong lọ thủy tinh kín, bao giấy parafilm, để trong bình hút ẩm, tránh ánh sáng.
2.3.3. Phương pháp bào chế viên nén rã nhanh
Viên nén rã nhanh chứa 10mg felodipin được bào chế theo hai phương pháp: phương pháp dập từng viên và phương pháp tạo hạt ướt.
2.3.3.1. Phương pháp dập từng viên
-Cân các thành phần theo công thức (bảng 3.3). -Nghiền và rây PEG 6000, NLS qua rây 180 µm. -Rây Aerosil, magnesistearat qua rây 180 µm.
-Trộn HPTR lần lượt với PEG 6000 (hoặc NLS), tá được độn, tá dược siêu rã, magnesistearat, Aerosil theo nguyên tắc đồng lượng.
-Hỗn hợp bột sau khi đã nhào trộn đem dập viên với độ cứng và cối chày thích hợp.
2.3.3.2. Phương pháp tạo hạt ướt
Cân các thành phần theo công thức (bảng 3.4) Bào chế tá dược dính chứa HPTR: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Hòa tan felodipin trong ethanol. Thêm lần lượt HPMC E6, dicloromethan khuấy tới khi thu được dung dịch đồng nhất. Thêm lactose, trộn đều.
- Nghiền PEG 6000, rây qua rây 180 µm.
- Trộn lần lượt tá dược độn, tá dược siêu rã, PEG 6000 theo nguyên tắc đồng lượng.
Tạo hạt:
- Khối bột thu được đem nhào ẩm bằng tá dược dính. Khối ẩm thu được tạo hạt qua rây 350 µm. Sấy hạt ở nhiệt độ 60o C trong 15 phút. Sửa hạt qua rây 350 µm
- Rây Aerosil, magnesistearat qua rây 180 µm. - Trộn hạt với Aerosil, magnesistearat.
- Hạt sau khi trộn với tá dược trơn được đem dập viên với độ cứng 3 – 4 kp và kích thước chày cối thích hợp.
2.3.3.3. Phương pháp tối ưu hóa
Công thức đánh giá ảnh hưởng của lượng manitol và CP được thiết kế bằng phần mềm MODDE 8.0, với hai biếnlà manitol và CP. Đánh giá trên ba biến đầu ra là tốc độ hòa tan của felodipin sau 5 phút, thời gian rã, độ mài mòn.Kết quả khảo sát được sử dụng để thiết kế công thức tối ưu bằng phần mềm INFORM 3.1.
2.4. Phương pháp đánh giá
2.4.1. Phương pháp đánh giá HPTR
2.4.1.1. Định lượng hàm lượng dược chất trong HPTR
Mẫu chuẩn: từ dung dịch S (mục 2.3.1), tiến hành pha loãng bằng ethanol để được dung dịch có nồng độ 20 µg/ml.
Mẫu thử:cân chính xác một lượng mẫu tương ứng chứa 5mg felodipin. Cho lượng bột đã cân vào bình định mức dung tích 100ml. Thêm 50ml ethanol vào bình định mức, lắc đều, siêu âm 15 phút. Thêm ethanol tới vạch, lắc đều. Dung dịch thu được đem lọc, bỏ 20ml dịch lọc đầu. Hút chính xác 10ml dịch lọc, cho vào bình định mức 25ml. Pha loãng dịch lọc bằng ethanol vừa đủ 25ml, lắc đều.
Mẫu chuẩn và mẫu thử được đem đo quang ở bước sóng λ = 362 nm. Mẫu thử được so sánh với mẫu chuẩn.
Tiến hành theo phương pháp thử tốc độ hòa tan của Karavas E. và cộng sự [10]. Đánh giá trên máy thử tốc độ hòa tan ERWEKA – DT 600 kiểu cánh khuấy. Thông số:
-Thiết bị: máy đo tốc độ hòa tan kiểu cánh khuấy. -Tốc độ quay: 100 vòng/ phút.
-Nhiệt độ: 37 ± 0,5o C.
-Môi trường thử: 500 ml đệm phosphat pH 6,5 chứa 0,5 % NLS. -Thời gian thử: 60 phút.
Tiến hành: cân chính xác một lượng HPTR (tương ứng khoảng 10mgfelodipin) cho vào cốc thử tốc độ hòa tan. Vận hành máy. Lấy mẫu ở những thời điểm 5, 15, 30, 45, 60 phút. Mỗi lần lấy mẫu, hút khoảng 10ml dung dịch mẫu, đồng thời bổ sung vào cốc thử một thể tích môi trường mới bằng với thể tích mẫu đã hút. Mẫu sau khi hút được lọc qua giấy lọc, bỏ 4ml dịch lọc đầu. Dịch lọc đem đo độ hấp thụ quang ở bước sóng λ = 362 nm. Dung dịch thử hòa tan được so sánh với mẫu chuẩn nồng độ 20 µg /ml (pha theo cách pha mẫu chuẩn mục 2.4.1.1).
2.4.1.4. Phổ hồng ngoại (IR)
Phổ hồng ngoại Fourier được tiến hành trên thiết bị Model IFS-66/S, Bruker Optics, Germany. Một đến hai mg mẫu được trộn với 150 mg KBr và nén thành đĩa đường kính 12 mm bằng máy nén thủy lực (Model No. 3912, Carver Inc., U.S.A). Mẫu được phân tích trong khoảng 600-4000 cm-1
với độ phân giải là 0,1 cm-1
.
2.4.1.5. Phân tích nhiệt vi sai (DSC)
Các thí nghiệm DSC được thực hiện trên thiết bị phân tích nhiệt Mettler Toledo.
Tiến hành đánh giá với các mẫu felodipin nguyên liệu, HPMC E6, HPTR bào chế theo công thức SD5 mới bào chế và lão hóa sau 1 tháng ở nhiệt độ phòng. Mẫu chuẩn và mẫu thử được ép trên đĩa nhôm và chạy ở khoảng nhiệt từ 40oC đến 200o
C với tốc độ gia nhiệt 10oC/phút, tốc độ khí nitrogen tốc độ 50 ml/phút.
2.4.1.6. Đánh giá độ ổn định của HPTR
Tiến hành lão hóa cấp với các công thức SD3(1:1), SD5(1:3), SD6(1:4), SD8(1:6). Bột HPTR đựng trong đĩa pettri và được lão hóa cấp tốc trong tủ vi khí (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
hậu ở điều kiện 40 ± 2oC, độ ẩm 75 ± 0,5 % trong 4 tuần. Đánh giá tốc độ hòa tan của dược chất trong HPTR ở thời điểm tuần thứ 4.
2.4.2. Phương pháp đánh giá viên nén rã nhanh
2.4.2.1. Định lượng hàm lượng dược chất trong viên nén
Cân chính xác 10 viên nén, tính giá trị trung bình khối lượng của một viên. Tiến hành nghiền mịn 10 viên. Bột viên được định lượng theo phương pháp định lượng hàm lượng dược chất trong HPTR (mục 2.4.1.1).
2.4.2.2. Đánh giá thời gian rã
Theo phương pháp thử thời gian rã cải tiến của dược điển Mỹ [25]. Tiến hành trên thiết bị thử thời gian rã ERWEKA với thông số:
- Ống thủy tinh hình trụ dài 75,0 - 80,0 mm, đường kính trong 21,5 mm. - Mặt dưới được gắn tấm lưới có mắt lưới kích thước 2,00 mm.
- Thể tích môi trường: 900ml nước cất.
- Khoảng cách giữa mặt lưới với bề mặt nước trong cốc 6 – 8 cm. - Nhiệt độ: 37 ± 0,5o
C Tiến hành:
Đánh giá trong điều kiện tĩnh không có rung lắc. Cho một viên vào ống thủy tinh. Viên rã hoàn toàn khi không còn nhân con hoặc bột viên qua hết lưới. Kiểm tra nhân con bằng đũa thủy tinh. Thời gian rã được ghi băng đồng hồ bấm giây.
2.4.2.3. Đánh giá độ mài mòn
Theo phương pháp của dược điển Mỹ 30 [23]. Đánh giá trên thiết bị pharmatesttyp PTF20E. Thông số:
- Sử dụng trống quay có đường kính 287,0 ± 4,0 mm, dày 38,0 ± 2,0 mm, đường kính cánh cung 80,5 ± 5,0 mm.
- Số vòng quay: 100 vòng.
- Tốc độ quay: 25 ± 1 vòng /phút.
Tiến hành: lấy 20 viên nén bất kỳ, sàng loại bỏ bột viên. Cân chính xác 20 viên (tương ứng với 8g) đã sàng (M1). Lau sạch trống quay và cho 20 viên vào trống. Vận hành máy. Mẫu sau khi quay, sàng loại bỏ bột. Cân lại mẫu (M2).
Độ mài mòn được tính theo công thức:
2.4.2.4. Đánh giá tốc độ hòa tan của felodipin trong viên nén rã nhanh
Tiến hành đánh giá tốc độ hòa tan của viên nén rã nhanh chứa felodipin giống với phương pháp đánh giá tốc độ hòa tan của HPTR chứa felodipin. Thay mẫu HPTR bằng viên nén rã nhanh (mục 2.4.1.2).
2.5. Phương pháp xử lý số liệu
Dữ liệuđượctínhtoán nhờ phầnmềm Excel 2007 (Microsoft., USA). Các thí nghiệmđượctiếnhành ba lần và biểu thị bằng giá trị trung bình ± độ
lệchchuẩn.
Công thức đánh giá ảnh hưởng của manitol và CP tới tốc độ hòa tan của felodipin, độ mài mòn, thời gian rã của viên nén rã nhanh được thiết kế trên phần mềm MODDE 8.0. Kết quả đánh giá được xử lý và thiết kế công thức tối ưu trên phần mềm INFORM 3.1
CHƯƠNG III: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1. Kết quả thực nghiệm và bàn luận
3.1.1. Khảo sát sự phụ thuộc của độ hấp thụ quang với nồng độ dược chất
Để lựa chọn được khoảng nồng độ felodipin phù hợp cho định lượng và thử hòa tan, tiến hành đánh giá mối thương quan giữa nồng độ felodipin và mật độ quang ở bước sóng λ= 362 nm.
Hình 3.1. Đồ thị phụ thuộc của độ hấp thụ quangvới nồng độ dược chất
Nhận xét:từ hình 3.1 cho thấy, giá trị độ hấp thụ quangtuyến tính với nồng độ dược chất trong khoảng từ 10µg/ml tới 40 µg/ml ở bước sóng 362 nm, với hệ số tương quan R2
= 0,999. Như vậy, định lượng felodipin bằng phương pháp đo quang đảm bảo chính xác ở khoảng nồng độ từ 10 µg/ml tới 40 µg/ml. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
3.1.2. Nghiên cứu bào chế HPTR chứa felodipin
Để lựa chọn HPTR phù hợp cho công thức bào chế viên nén rã nhanh xét về khả năng cải thiện tốc độ hòa tan của felodipin, tiến hành xây dựng công thức bào chế HPTR theo bảng 3.1.
Bảng 3.1. Công thức bào chế hệ phân tán rắn chứa felodipin CT* (g) SD 1 SD 2 SD 3 SD 4 SD 5 SD 6 SD 7 SD 8 SD 9 SD 10 SD 11 SD 12 SD 13 SD 14 Felodipin 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 PVP K30 0,50 - - - - - - - - - - - - - PEG 4000 - 0,50 - 1,50 - - 3,00 - - - - - - - HPMC E6 - - 0,50 - 1,50 2,00 - 3,00 - - 1,50 1,50 1,50 1,50 HPMC K4M - - - - - - - - 1,50 - - - - - HPMC 15M - - - - - - - - - 1,50 - - - - α- Lactose 4,00 4,00 4,00 4,00 4,00 4,00 4,00 4,00 4,00 4,00 4,00 4,00 4,00 - Aerosil - - - - - - - - - - - - - 4,00 KTMR** (μm) 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 350 600 800 180
(*: công thức, **: kích thước mắt rây)
3.1.2.1.Khảo sát ảnh hưởng của các loại polyme khác nhau
HPTR thường sử dụng các polyme thân nước làm chất mang. Mỗi polyme khác nhau với những dược chất khác nhau có khả năng ức chế quá trình kết tinh của dược chất là khác nhau. Vì vậy cần tiến hành sàng lọc để chọn ra loại chất mang có khả năng cải thiện tốc độ hòa tancủa dược chất tốt nhất. Kết quả được thể hiện ở hình 3.2 và bảng 4.1 (phụ lục 1).
Hình 3.2. Đồ thị so sánh tốc độ hòa tan của felodipin trong HPTR sử dụng 3 loại polyme HPMC E6, PEG 4000, PVP K30 với tỷ lệ dược chất và polyme là 1:1, ( n= 3, TB ± ĐLC)
Nhận xét: từ hình 3.2 cho thấy, mức độ giải phóng dược chất trong hệ HPTR với chất mang là PVP K30 sau 5 phút là thấp nhất (69,44 %)so với chất mang là HPMC E6 (75,32 %) và PEG 4000 (73,15 %). Điều này có thể do PVP K30 khả năng ức chế quá trình kết tinh của dược chất là kém nhất. Trong quá trình bảo quản, HPTR sử dụng chất mang là PVP K30 hút ẩm mạnh và bị vón cục.
Từ kết quả này tiếp tục khảo sát tốc độ hòa tan của felodipin trong HPTR với chất mang là PEG 4000 và HPMC E6. Kết quả khảo sát được thể hiện ở hình 3.3 và bảng 4.2 (phụ lục 1).
Hình 3.3. Đồ thị so sánh tốc độ hòa tan của felodipin từ HPTR sử dụng chất mang là HPMC E6 và PEG 4000 với tỷ lệ dược chất và polyme là 1:3 (n=3, TB ±ĐLC)
Nhận xét:từ hình 3.3 cho thấy, mức độ giải phóng dược chất sau 5 phút từ HPTR với chất mang là HPMC E6 (92,51%) cao hơn so với HPTR có chất mang là PEG 4000 (88,55 %). Do độ nhớt của PEG 4000 (ở 20o
C, dung dịch 2% PEG 4000 là 13,123mPas [12]) cao hơn HPMC E6 (ở 20o
C, dung dịch 2% là 6 mPas [18]). Khả năng ức chế chuyển từ trạng thái vô định hình sang trạng thái tinh thể felodipin của HPMC E6 tốt hơn PEG 4000. Qua bước khảo sát này, lựa chọn HPMC E6 làm chất mang cho bào chế HPTR chứa felodipin.
3.1.2.2. Đánh giá ảnh hưởng của tỷ lệ felodipin và HPMC trong hệ phân tán rắn tới tốc độ hòa tan của felodipin trong HPTR
Để lựa chọn được tỷ lệ dược chất và chất mang cho tốc độ hòa tan của felodipin trong HPTR cao nhất, tiến hành khảo sát ảnh hưởng của tỷ lệ felodipin và HPMC E6. Kết quả được thể hiện ở hình 3.4 và bảng 4.3 (phụ lục 1).
Hình 3.4. Đồ thị ảnh hưởng của tỷ lệ polyme tới tốc độ giải phóng của felodipin trong HPTR (n=3, TB ±ĐLC)
Nhận xét: từ hình 3.4 cho thấy, ở tỷ lệ dược chất và chất mang là 1:3 thì tốc độ hòa tan của felodipin trong HPTR là cao nhất (thời điểm 5 phút, phần trăm hòa tan lên tới 92,51 %). Sự chênh lệch tốc độ hòa tan của felodipin ở tỷ lệ 1:3 và 1:4 là không nhiều. Tốc độ hòa tan thấp nhất ở tỷ lệ 1:1 (thời điểm 5 phút, phần trăm hòa tan là 73,15 %). Điều này có thể giải thích như sau. Ở tỷ lệ thấp, lượng HPMC E6 không đủ để ức chế hoàn toàn quá trình kết tinh của dược chất trong HPTR. Do đó trong HPTR vẫn còn một lượng lớn dược chất tồn tại dưới dạng tinh thể. Ở tỷ lệ 1:6, lượng HPMC E6 nhiều, độ nhớt cao, lượng polyme dư thừa bao phủ bên ngoài dược chất. Khi tiểu phân HPTR tiếp xúc với môi trường hòa tan, lớp bên ngoài hình thành
lớp dung dịch có độ nhớt cao. Do đó cần có thời gian để nước hòa tan hết lớp polyme bên ngoài, tốc độ giải phóng dược chất chậm. Qua bước khảo sát này, lựa chọn tỷ lệ dược chất và chất mang là 1:3 làm tỷ lệ để bào chế HPTR.
3.1.2.3. Khảo sát ảnh hưởng của khối lượng phân tử HPMC khác nhau
Để lựa chọn được khối lượng phân tử HPMC thích hợp nhất, tiến hành khảo sát ảnh hưởng của khối lượng phân tử HPMC tới tốc độ hòa tan của felodipin trong HPTR. Căn cứ vào điều kiện thực tế, chỉ có thể chọn được HPMC E6, HPMC K4M, HPMC K15M để sàng lọc. Kết quả khảo sát được trình bày ở hình 3.5 và bảng 4.4 (phụ lục 1).
Hình 3.5. Đồ thị ảnh hưởng của khối lượng phân tử HPMC tới tốc độ hòa tan của felodipin trong HPTR (n=3, TB ± ĐLC)
Nhận xét: từ đồ thị 3.5 cho thấy, tốc độ giải phóng felodipin ra khỏi HPTR trong