chế
M ục đích: Đánh giá khối lượng và độ tinh khiết của steviosid sau mỗi lần kết tinh lại.
Tiến hành'.
Glycosid thô chiết được từ 15g dược liệu theo quy trình ở hình 5 được đun hồi lưu cách thủy với MeOH (tỷ lệ steviosid thô/MeOH = 1/50). Thêm 5% than hoạt, đun sôi 10 phút, lọc nóng, rửa than bằng Iml MeOH. Dung dịch thu được đem cất loại dung môi, cắn thu được đem kết tinh bằng MeOH. Cân khối lượng tinh thể CN1 thu được sau kết tinh lại lần 1.
Tiến hành kết tinh lại CN 1 lần 2 bằng MeOH và cân khối lượng tinh thể sau khi kết tinh lại lần 2.
Kết quả:
- Cảm quan: sản phẩm Glycosid thô có màu trắng ngà đến hơi vàng, kết tinh lại lần 1 có màu trắng ngà, kết tinh lại lần 2 thu được sản phẩm có màu trắng tinh.
- Khối lượng Glycosid thu được sau khi kết tinh lại được trình bày ở bảng 9.
Bảng 9. Khối lưựng CNl thu được sau mỗi lần kết tinh lại
Mầu Khối lượng (g)
Glycosid thô (CN1 ) 0,32
CN1 kết tinh lại lần 1 0,27
Nhận xét; Từ bảng 9 cho thấy CNl sau khi kết tinh lại lần 2 khối lượng giảm ít so với lần 1. Vì vậy, ở quy trình sẽ xây dựng chúng tôi tinh chế glycosid thô bằng cách kết tinh lại 1 ỉần trong MeOH.
Độ tinh khiết của CNl sau mỗi lần kết tinh lại được kiểm tra bằng phương pháp SKLM với hệ dung môi CHCl3:Me0H;H20 = 15:8:1. Kết quả được thể hiện ở sắc ký đồ hình 6.
Hình 6. Ảnh chụp sắc ký đồ của CNl
trong hệ dung môi CHCl3:Me0H:H20
(15:8:1), hiện vết bằng dung dịch H2SO4
10% trong EtOH, sấy 2 phút ở 100“C.
A: Glycosid thô
B: CNl kết tinh lại lần 1 C: CN2 kết tinh lại lần 2
B
Từ sắc ký đồ hình 6 cho thấy Glycosid thô vẫn còn lẫn tạp chất (sắc ký đồ cho 2 vết), sau khi kết tinh lần 1 và lần 2 đã tương đối tinh khiết, trên sắc ký đồ chỉ cho 1 vết.