Tiến hành
- Mẫu nghiên cứu: dịch nước và dịch ethyl acetat.
Dịch Nƣớc:
+ Lấy 5 g cao hòa trong 10 ml ethanol tuyệt đối. Ly tâm. Lọc. + Bay hơi dung môi đến khi còn khoảng 2 ml, dùng để chấm sắc ký.
Dịch Ethyl acetat:
+ Lấy 5 g cao, hòa trong 15 ml nước, cho vào bình gạn. Lắc với ethyl acetat (3 lần x 8 ml).
+ Gạn lấy lớp ethyl acetat. Gộp dịch ethyl acetat, loại nước bằng natri sulfat khan.
+ Bay hơi dung môi đến khi còn khoảng 2 ml, dùng để chấm sắc ký. - Chất hấp phụ: Silicagel GF254.
- Hệ dung môi khai triển:
Hệ 1: Cloroform : ethyl acetat : acid formic (5:5:1) Hệ 2: n-hexan : ethyl acetat : acid formic (15:20:1) Hệ 3: n-butanol : methanol : nước (3:1:1)
Hệ 4: Toluen : ethyl acetat : acid formic (6:2:1) Hệ 5: Toluen : ethyl acetat : acid formic (5:2:1) Hệ 6: Toluen : ethyl acetat : acid formic (4:2:1) Hệ 7: Toluen : ethyl acetat : acid formic (3:2:1) - Hiện màu:
+ Ánh sáng tử ngoại UV: λ = 254 nm và λ = 366 nm.
+ Hơi amoniac. Sau khi khai triển sắc ký, hơ bản mỏng trên miệng lọ amoniac mở sẵn trong 1 phút. Quan sát ở ánh sáng thường.
Kết quả: Qua khảo sát thấy hệ dung môi Toluen : ethyl acetat : acid formic (6:2:1) (hệ số 4) cho kết quả tách tốt nhất ở cả dịch nước và dịch ethyl acetat. Kết quả được thể hiện ở hình 3.2 và bảng 3.2 .
(a) (b) (c)
Hình 3.2. Sắc ký đồ của các dịch chiết nước và dịch ethyl acetat ở hệ Toluen : ethyl acetat : acid formic (6:2:1)
Chú thích: (a): Sắc ký đồ quan sát ở UV 254 nm. (b): Sắc ký đồ quan sát ở UV 366 nm.
(c): Sắc ký đồ quan sát ở ánh sáng thường sau khi hiện màu bằng hơi amoniac
Bảng 3.2. Giá trị Rf của các vết của dịch chiết toàn phần và dịch chiết phân đoạn ethyl acetat Stt Rf UV 254 nm UV 366 nm Ánh sáng thường Dịch Nước Dịch ethyl acetat Dịch Nước Dịch ethyl acetat Dịch Nước Dịch ethyl acetat 1 0.05 + + + + + + 2 0.16 - - + + - - 3 0.21 - - + + + + 4 0.24 + + - - - - 5 0.26 - - + + - - 6 0.37 + + - - - - 7 0.39 + + + + - - 8 0.45 + + - - - - 9 0.47 - - + + - - 10 0.79 - - + + - - 11 0.92 - - + - -
Nhận xét:
Kết quả hình 3.2 và bảng 3.2 cho thấy:
Trên sắc ký đồ ở 254 nm và ở ánh sáng thường, số lượng vết quan sát được và vị trí vết là tương đương nhau giữa dịch chiết toàn phần và phân đoạn ethyl acetat. Sắc ký đồ quan sát tại 254 nm có 05 vết. Sắc ký đồ quan sát tại ánh sáng thường sau hiện màu bằng hơi NH3 có 02 vết.
Trên sắc ký đồ ở 366 nm, số vết của dịch chiết toàn phần là 08. Số vết của dịch chiết phân đoạn ethyl acetat là 07