3. nội dung nguyên liệu ph−ơng pháp nghiên cứu
3.3.2.Ph−ơng pháp phân lập virus viêm gan vịt * Xử lý bệnh phẩm
* Xử lý bệnh phẩm
Lấy gan của vịt con bị mắc bệnh trong tự nhiên, có triệu chứng bệnh tích điển hình của bệnh viêm gan vịt do virus. Đem nghiền gan với n−ớc sinh lý thành huyễn dịch 1/5 làm đông tan 3 lần, xử lý kháng sinh (Penicillin và Streptomycin), để ở nhiệt độ 40C trong 2 giờ, ly tâm với tốc độ 5000 vòng/phút trong 15 phút. Lấy huyễn dịch ở trên xử lý bằng Clorofoc 5% trong 10 phút để diệt các virus khác không phải virus viêm gan vịt.
* Phân lập virus viêm gan vịt trên phôi vịt
Thí nghiệm đ−ợc bố trí làm 2 lần, mỗi lần dùng 45 phôi vịt 12 ngày tuổi khoẻ mạnh, chia làm 2 lô (30 phôi cho lô thí nghiệm, 15 phôi cho lô đối chứng).
- Lô thí nghiệm: Mỗi phôi tiêm 0,2ml huyễn dịch bệnh phẩm vào xoang niệu mô. Hàn vết tiêm bằng Parafin rồi đem ấp tiếp.
- Lô đối chứng: Mỗi phôi tiêm 0,2ml n−ớc sinh lý.
Sau khi tiêm 20 giờ, soi kiểm tra ngày 3 lần, những phôi chết và sống đều tiến hành mổ phôi, kiểm tra, quan sát bệnh tích đại thể. Sự có mặt virus viêm gan vịt đ−ợc đánh giá dựa vào sự nhân lên của virus trên phôi, virus gây chết phôi và bệnh tích đặc tr−ng trên phôi.
* Phân lập virus viêm gan vịt trên vịt con
Thí nghiệm đ−ợc bố trí 2 lần, mỗi lần dùng 40 vịt con 7 ngày tuổi, khoẻ mạnh, không nằm trong ổ dịch, ch−a tiêm vacxin viêm gan vịt, kháng thể viêm gan vịt. Chia làm 2 lô: 25 vịt cho lô thí nghiệm, 15 vịt cho lô đối chứng.
- Lô thí nghiệm: mỗi vịt tiêm 0,5ml huyễn dịch bệnh phẩm, tiêm bắp. - Lô đối chứng: vịt không tiêm bệnh phẩm, tiêm 0,5ml n−ớc sinh lý. Sau khi tiêm, theo dõi vịt trong thời gian 10 ngày. Đánh giá sự có mặt của virus viêm gan vịt dựa vào triệu chứng, bệnh tích đặc tr−ng của bệnh viêm gan vịt và tỷ lệ gây chết vịt.