a)Quan sát hiện tượng tạo bọt
Cho vào ống nghiệm to (15ml) 1g bột dược liệu, thêm 5ml nước, đun sôi nhẹ, lọc nóng vào một ống nghiệm to (15ml) khác, cho thêm nước cất cho đủ khoảng 10ml, bịt ống nghiệm bằng ngón tay cái, lắc mạnh ống nghiệm theo chiều dọc trong 5 phút, để yên và quan sát cột bọt trong 15 phút.
Kết quả: thấy cột bọt vẫn bền sau 15 phút (+++).
b)Xác định chỉ số tạo bọt
Chỉ số bọt là độ pha loãng cần thiết của 1g Dược liệu để có được một cột bọt cao 1cm sau khi ngừng lắc 15phút trong điều kiện quy định.
+ Tiến hành : Cân 1gam bột dược liệu cho vào bình nón có thể tích 250ml đã chứa sắn 100ml nước sôi, đun cách thủy sôi nhẹ trong 30phút, lọc dịch chiết vào bình định mức 100ml, để nguội và thêm nước vừa đủ 100ml, được dịch chiết dược liệu có nồng độ 1%. Lấy 20ml dịch chiết 1% pha với nước vừa đủ trong bình định mức 100ml, được dịch chiết 0,2%
Lấy 10 ống nghiệm có chiều cao 16cm và đường kính 16mm, cho vào các ống nghiêm lần lượt 1,2,3…10ml dịch chiết 0,2%, thêm nước cất vào mỗi ống cho đủ mỗi ống 10ml. Bịt miệng các ống nghiệm rồi lắc theo chiều dọc trong 15 giây, mỗi giây 2 lần lắc. Để yên 15 phút và đo chiều cao của các cột bọt.
CBS = 10 : (C x X)
Trong đó C là nồng độ dịch chiết dược liệu
X là số ml dịch chiết dược liệu đã cho vào ống nghiệm mà ở đó có cột bọt cao 1 cm
Sau khi quan sát 15 phút ta thấy, ống nghiệm thứ 2 có cột bọt cao 1cm, do đó kết quả chỉ số bọt của mẫu là 500
c)Xác định chỉ số phá huyết
Chỉ số phá huyết là số ml dung dịch đệm cần thiết để hòa tan saponin có trong 1g dược liệu để gây ra hiện tượng phá huyết đầu tiên và hoàn toàn đối với một loại máu đã chọn.
Tiến hành
+ Pha dung dịch đệm:
Dung dịch mono kali phosphat 9,07% 28ml Dung dịch dinatri phosphat 11,87% 162ml NaCl tinh khiết 1,8g + Pha dung dịch treo máu:
Lấy máu bò mới cắt tiết cho vào cốc có mỏ 1 lít, dùng đũa khuấy tròn đều khoảng 10 phút, lọc qua gạc để loại fibrin. Lấy bình định mức 100ml đã tráng bằng dung dịch đệm, cho vào khoảng 40ml dung dịch đệm, 2ml máu rồi thêm dung dịch đệm đủ 100ml, ta được dung dịch máu treo 2%. Lấy một bình định mức 100ml khác đã tráng bằng dung dịch đệm, cho vào khoảng 40ml dung dịch đệm, 10ml dung dịch máu 2% rồi thêm dung dịch đệm vừa đủ 100ml, được dung dịch máu 0,2%.
+ Pha dung dịch dược liệu:
Cân chính xác 5,0125g bột dược liệu. Cho vào bình nón có thể tích 250ml đã tráng dung dịch đệm, thêm 50ml dung dịch đệm đun sôi rồi đặt lên nồi cách thủy đun sôi nhẹ trong 30 phút. Lọc nóng qua bông cho dung dịch vào bình định mức 100ml, thêm dung dịch đệm vừa đủ 100ml, được dung dịch dược liệu 5%.
+ Xác định chỉ số phá huyết: Lấy 20 ống nghiệm nhỏ (5ml), đánh số thứ tự từ 1 đến 20, cho vào mỗi ống lần lượt theo bảng:
Bảng 3.1: Tiến hành xác định chỉ số phá huyết STT Dung dịch đệm
(ml)
Dung dịch dược liệu (ml) Dung dịch máu 0.2% đã loại fibrin (ml) 1 0,95 0,05 1 2 0,90 0,10 1 3 0,85 0,15 1 4 0,80 0,20 1 5 0,75 0,25 1 6 0,70 0,30 1 7 0,65 0,35 1 8 0,60 0,40 1 9 0,55 0,45 1 10 0,50 0,50 1 11 0,45 0,55 1 12 0,40 0,60 1 13 0,35 0,65 1 14 0,30 0,70 1 15 0,25 0,75 1 16 0,20 0,80 1 17 0,15 0,85 1 18 0,10 0,90 1 19 0,05 0,95 1 20 0,00 1,00 1
Kết quả : Ống gây ra sự phá huyết đầu tiên và hoàn toàn là ống có màu hồng trong suốt là ống số 10.
Tính chỉ số phá huyết (CSPH): CSPH = 2: (C x X)
Trong đó C là nồng độ dung dịch dược liệu (5%)
X là số ml dung dịch dược liệu đã cho vào ống nghiệm mà ở đó có sự phá huyết đầu tiên và hoàn toàn
Áp dụng công thức trên, ta tính được CSPH là 80.
Bảng 3.2 : Kết quả định tính sơ bộ các nhóm chất trong Nần trắng
STT Nhóm chất Phản ứng định tính Kết quả Kết luận 1 Flavonoid Phản ứng cyanidin _ Không
Phản ứng với FeCl3 5% _ Phản ứng với dung dịch NaOH
10% _
Phản ứng với hơi NH3 _
2 Alcaloid Phản ứng với TT Mayer _ Không Phản ứng với TT Dragendorff _
Phản ứng với TT Bouchardat _
3 Saponin Khả năng tạo bọt + Có 4 Glycosid tim Phản ứng Liebermann – Burchardt _ Không
Phản ứng Legal _ Phản ứng Baljet _ Phản ứng Keller – Kiliani _
5 Coumarin Phản ứng mở, đóng vòng lacton + Có Phản ứng diazo hóa +
Quan sát hiện tượng huỳnh quang +
6 Tanin Phản ứng với FeCl3 5% _ Không Phản ứng chì acetat 10% _
Phản ứng với gelatin 1% _
7 Anthranoid Phản ứng Borntrarger _ Không 8 Chất béo Vết mờ trên giấy lọc + Có 9 Caroten Phản ứng với acid H2SO4 đặc – Không
10 Sterol Phản ứng với anhydrid acetic và
acid H2SO4 đặc + Có 11 Đường khử Phản ứng với TT FehlingA,
Fehling B + Có 12 Acid hữu cơ Phản ứng với tinh thể Na2CO3 _ Không 13 Acid amin Phản ứng với TT Ninhydrin 3% _ Không 14 Polysaccharid Phản ứng với TT Lugol + Có
Chú thích: (–) Phản ứng âm tính (+) Phản ứng dương tính
Nhận xét: Trong thân rễ Nần trắng có saponin, coumarin, chất béo, sterol, đường khử, polysaccharid.