3.2.1.1. Định tính alcaloid
Cho khoảng 5g bột dược liệu vào bình nón dung tích 100ml, thấm ẩm dược liệu bằng dung dịch amoniac đặc. Sau 30 phút thêm 25,0ml chloroform vào, đậy kín. Sau 12 giờ lọc lấy dịch chiết chloroform cho vào bình gạn. Lắc kỹ với 10ml dung dịch H2SO4 1N hai lần, mỗi lần 5ml. Gộp các dịch chiết acid lại với nhau, đem làm phản ứng.
Phản ứng với thuốc thử Mayer (K2HgI4)
Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết, thêm 2 – 3 giọt thuốc thử Mayer
Kết quả: dung dịch không có kết tủa màu trắng, (-)
Phản ứng với thuốc thử Dragendorff (KBiI4)
Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết, thêm 2 – 3 giọt thuốc thử Dragendorff.
Kết quả: Dung dịch không có kết tủa màu da cam, (-).
Hình 3.10 : Vi phẫu thân rễ Nần trắng
3 2 1
Phản ứng với thuốc thử Bouchardat (iodo – iodid)
Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết, thêm 2 – 3 giọt thuốc thử Bouchardat.
Kết quả: dung dịch không có kết tủa màu nâu, (-). ═> Kết luận: Trong Nần trắng không có chứa alcaloid
3.2.1.2. Định tính glycosid tim
Cho 10g bột dược liệu vào bình nón 250ml, ngâm trong 50ml cồn 25º trong 24 giờ. Lọc dịch chiết vào cốc có mỏ 100ml, đem loại tạp bằng dung dịch chì acetat 30% đến dư. Lọc bỏ tủa qua giấy lọc gấp nếp vào cốc có mỏ dung tích 100ml, giỏ vài giọt dịch lọc đầu tiên vào một ống nghiệm, thêm 1 giọt chì acetat. Nếu xuất hiện kết tủa thì ngừng lọc. Thêm khoảng 1ml chì acetat 30% vào dịch chiết, khuấy đều, lọc lại và tiếp tục thử đến khi dịch lọc không còn tủa với chì acetat là lúc đó lượng chì acetat đã đủ.
Cho dịch lọc vào bình gạn dung tích 100ml lắc với CHCl3 hai lần, mỗi lần 8ml. Gạn lớp chloroform vào một cốc có mỏ đã sấy khô, chia đều vào 6 ống nghiệm nhỏ đem cô cách thủy. Cắn thu được để làm các phản ứng.
Phản ứng Liebermann – Burchardat
Hòa tan cắn trong ống nghiệm thứ nhất bằng 0,5ml anhydrid acetic. Đặt nghiêng ống nghiệm 45º, cho từ từ theo thành ống 1ml dung dịch acid H2SO4 đặc, tránh xáo trộn chất lỏng trong ống.
Kết quả: Dung dịch có màu nâu nhạt, hơi đục. Không thấy mặt tiếp xúc giữa hai lớp chất lỏng có vòng màu tím đỏ. Phản ứng âm tính.
Phản ứng Legal
Hòa tan cắn trong ống nghiệm thứ hai bằng 0,5ml cồn 90º. Thêm 5 giọt nitroprussiat 1% và 5 giọt dung dịch NaOH 10%. Lắc đều sau đó so với ống chứng.
Kết quả: Dung dịch không có màu đỏ cam đậm hơn so với ống chứng. Phản
ứng âm tính.
Phản ứng Baljet
Cho vào ống nghiệm to (15ml) dung dịch acid picric 1% : NaOH 10% (1:9) lắc đều (thuốc thử Baljet).
Hòa tan cắn trong ống nghiệm thứ ba bằng 0.5ml ethanol 90º. Lắc đều cho tan hết cắn, nhỏ từng giọt thuốc thử Baljet mới pha. So với ống chứng (không có cắn).
Kết quả: Dung dịch không có màu đỏ da cam đậm hơn so với ống chứng. Phản ứng âm tính.
Phản ứng Keller – Kiliani
Hòa tan cắn trong ống nghiệm thứ tư bằng 0,5ml cồn 90º, lắc đều cho tan hết cắn. Thêm vài giọt FeCl3 5% acid acetic. Lắc đều, để nghiêng ống nghiệm 45º. Thêm từ từ đồng lượng H2SO4 đặc (1ml) theo thành ống nghiệm để dịch lọc chia thành hai lớp.
Kết quả: Dung dịch không có vòng màu tím đỏ ở mặt tiếp xúc hai lớp chất lỏng. Phản ứng âm tính.
═> Kết luận: Trong Nần trắng không có glycosid tim.
3.2.1.3. Định tính coumarin
Lấy 10g bột dược liệu cho vào bình nón dung tích 100ml, thêm 50ml cồn 90º, đun cách thủy tới sôi 5 phút, lọc nóng qua giấy lọc. Dịch chiết thu được đem làm các phản ứng sau.
Phản ứng mở, đóng vòng lacton
Cho vào 2 ống nghiệm nhỏ, mỗi ống 1ml dịch chiết + Ống nghiệm 1: Thêm 0,5ml dung dịch NaOH 10% + Ống nghiệm 2: Để nguyên
Đun cả hai ống nghiệm trên nồi cách thủy đến sôi.
Quan sát thấy: - ống nghiệm 1: dung dịch vẩn đục màu nâu đỏ. - ống nghiệm 2: dung dịch vẫn trong.
Thêm vào cả hai ống nghiệm mỗi ống 2ml nước cất, lắc đều thấy: - ống nghiệm 1: trong suốt
- ống nghiệm 2: có tủa đục
Kết quả: phản ứng dương tính.
Cho vào ống nghiệm nhỏ 1ml dịch chiết. Thêm vào đó khoảng 2ml dung dịch NaOH 10%, lắc kỹ rồi nhỏ vài giọt thuốc thử diazo mới pha.
Kết quả: sau phản ứng xuất hiện tủa màu đỏ gạch. Phản ứng dương tính.
Quan sát hiện tượng huỳnh quang
Nhỏ vài giọt dịch chiết lên giấy lọc, nhỏ chồng tiếp vài giọt dung dịch NaOH 10%, sấy nhẹ. Che một phần diện tích vết chất bằng một vật chắn rồi dặt dưới ánh sáng tử ngoại 365nm trong vài phút. Quan sát thấy phần không che bằng vật chắn sáng hơn phần che. Sau đó bỏ vật chắn ra, thấy phần bị chắn sáng lên bằng phần không chắn.
Kết quả: Phản ứng dương tính.
═> Kết luận: Trong Nần trắng có coumarin.
3.2.1.4. Định tính tanin
Cho khoảng 5g bột dược liệu vào bình nón dung tích 50ml, thêm 20ml nước cất, đun sôi trong 2 phút. Để nguội, lọc. Dịch lọc cho đều vào 4 ống nghiệm nhỏ, mỗi ống 2ml để làm định tính.
Ống nghiệm 1: Thêm 2 giọt dung dịch FeCl3 5%, lắc đều.
Kết quả: Sau phản ứng không thấy xuất hiện kết tủa màu xanh đen (-).
Ống nghiệm 2: Thêm 2 giọt dung dịch chì acetat 10%, lắc đều. Kết quả: Sau phản ứng không thấy xuất hiện kết tủa bông trắng (-).
Ống nghiệm 3: Thêm 5 giọt gelatin 1%, lắc đều.
Kết quả: Sau phản ứng không xuất hiện tủa bông trắng (-). ═> Kết luận: Trong Nần trắng không có tanin.
3.2.1.5. Định tính flavonoid
Cho 5g bột dược liệu vào bình nón, thêm 25ml cồn 90º, đun cách thủy sôi trong 10 phút, lọc nóng được dịch chiết cồn, đem làm các phản ứng flavonoid.
Phản ứng Cyanidin (phản ứng Shinoda hay Willstater)
Cho vào ống nghiệm 2ml dịch chiết cồn, một ít bột magie và nhỏ từ từ dung dịch HCl đặc. Đun cách thủy trong 5 phút.
Phản ứng với FeCl3 5%
Cho vào ống nghiệm 2ml dịch chiết cồn, cho thêm 2 – 3 giọt dung dịch FeCl3 5%
Kết quả: dung dịch không có màu xanh đen rõ (-).
Phản ứng với dung dịch kiềm
Phản ứng với dung dịch NaOH loãng:
Cho vào ống nghiệm 2ml dịch chiết cồn sau đó cho thêm vài giọt dung dịch NaOH 10%.
Kết quả: thấy xuất hiện kết tủa vàng. Sau đó thêm 1ml nước cất, lắc đều lên thì thấy tủa không tan hết và màu vàng của dung dịch không đậm lên (-).
Phản ứng với hơi NH3:
Nhỏ vài giọt dịch chiết cồn lên một miếng giấy lọc, hơ khô rồi đặt lên miệng lọ NH3 đặc đã mở nút.
Kết quả: Màu vàng của dịch chiết không đậm lên (-). ═> Kết luận: Trong Nần trắng không có flavonoid.
3.2.1.6. Định tính anthranoid
Lấy khoảng 1g bột dược liệu cho vào ống nghiệm, thêm 10ml nước cất, đun sôi trực tiếp trong 10 phút. Để nguội, lọc lấy dịch lọc, thêm 5ml ether ethylic lắc nhẹ, gạn lấy dịch chiết ether ethylic đem làm phản ứng Borntraeger
Cho 1ml dịch chiết ether vào ống nghiệm sạch, thêm 1ml dung dịch NaOH 10%
Kết quả: dung dịch không thấy xuất hiện màu hồng. Phản ứng âm tính. ═> Kết luận: Trong Nần trắng không có anthranoid.