ε τ × × × × × − = 2 10 ) ( 6 E f pu o V D V A A U
2.3.4.1. Tạo chitosan phân tử lượng thấp
Chitosan phân tử lượng cao được depolymer hoá theo phương pháp của Moghaddam et al (2009) [22].
Nguyên tắc:
Natri nitrit là tác nhân depolymer hoá chitosan do phản ứng deamine hoá. Cơ chế phản ứng như sau: trước hết hình thành ion diazonium, sau đó ion này phân huỷ tạo ion carbonium, gây ra sự cắt mạch.
Hình 2.2. Sơđồ phản ứng depolymer hoá chitosan Tiến hành:
Chuẩn bị dung dịch Acid acetic 6%.
Tạo 100ml hỗn hợp chitosan 2% (trong dung dịch Acid Acetic 6%, chitosan ban đầu phân tử lượng cao thường vào khoảng 400kDa).
Bổ sung vào dung dịch trên 10ml dung dịch NaNO2 (7mg/ml), sau đó sử dụng máy khuấy từ khuấy trong 1h, ở nhiệt độ phòng. Chuẩn về pH=9.0 bằng dung dịch NaOH 4N.
Ly tâm, tách thu phần cặn màu trắng vàng.
Rửa cặn 3 lần với Acetone (bằng phương pháp ly tâm loại dịch).
Hòa tan cặn trong 1 lượng nhỏ dung dịch Acid Acetic 0,1N. (dung dịch 0,5%)
Tiến hành thẩm tích với dung dịch đệm là nước, kích thước màng bán thấm là 12KDa, thời gian thẩm tích 24h, sau 4-6h thay đệm 1 lần.
Sản phẩm sau thẩm tích đem đông khô, thời gian khoảng 10-12h.sản phẩm thu được có màu vàng (chitosan phân tử lượng thấp, sản phẩm lưu trữ
tại tủ lạnh 4°C).
2.3.4.1. Tạo hạt nano chitosan
Nguyên tắc: Hạt nano chitosan được tạo thành theo phương pháp tạo gel ion hoá theo Calvo et al (1997) [7].
Cơ chế của phương pháp này dựa trên tương tác tĩnh điện giữa chitosan tích điện dương và một polyanion như tripolyphosphate. Đầu tiên chitosan
được hoà tan vào dung dịch acetic. Sau đó chitosan được trộn lẫn với polyanion để tạo hạt nano chitosan dưới điều kiện khuấy từ liên tục tại nhiệt
độ phòng.
Tiến hành:
Hòa tan 0,1g chitosan phân tử lượng thấp (sản phẩm đã chuẩn bị ở mục trên) trong 100 ml dung dịch acid acetic để thu dung dịch chitosan phân tử
thấp có nồng độ 0,1% (gọi là dung dịch A). Hòa 0,05g sodium tripolyphosphate (TPP) trong 200 ml nước khử ion để được dung dịch TPP 0,025% (gọi là dung dịch B). Hòa 2 phần dung dịch A (100 mL) với 1 phần (50 mL) dung dịch B (nhỏ từng giọt dung dịch B vào dung dịch A) và hỗn hợp được khuấy với tốc độ 300 vòng/phút và thời gian là 1 giờ ở nhiệt độ
phòng.
Sản phẩm nano chitosan được kiểm tra kích thước size, thế zeta, hình
ảnh SEM sau đó tiến hành đông khô và bảo quản ở 4°C để dùng cho các thí nghiệm tiếp theo.