140 KS 08112012 #46 [modified by Nam Hung] UV_VIS_1 mAU
3.3. ĐÁNH GIÁ PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CAPTOPRIL TRONG NGUYÊN LIỆU BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC
NGUYÊN LIỆU BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC
3.3.1Khảo sát khoảng tuyến tính của phương pháp định lượng
Pha một dãy nồng dung dịch của captopril có nồng độ biến thiên từ 80µg/ml
đến 120µg/ml.
Trong bình định mức 50 ml, cân chính xác một lượng bột Captopril chuẩn
đối chiếu (nồng độ 95,3%) chứa khoảng 60,0mg Captopril. Thêm 40ml hỗn hợp MeOH:Đệm phosphat 0,01M pH 2,40 (65:35), lắc kỹ siêu âm trong 2 phút. Thêm hỗn hợp dung môi đến vạch, lắc đều. Hút chính xác 5,00 ml dung dịch vừa pha, cho
vào bình định mức 50ml, thêm 40 ml hỗn hợp pha động, lắc đều, thêm tiếp hỗn hợp pha động cho tới vạch lắc và lắc đều. Dung dịch thu được có nồng độ Captopril khoảng 120µg/ml. Tiến hành pha loãng theo bảng 3.2 để thu được các dung dịch có nồng độ lần lượt là 80µg/ml, 90µg/ml, 100µg/ml, 110µg/ml. Lọc qua màng lọc 0,45µm. Các dịch lọc thu được đem tiêm sắc ký.
Bảng 3.2. Cách pha dãy dung dịch khảo sát khoảng tuyến tính.
Dung dịch số 1 2 3 4 5
số ml dung dịch gốc (120µg/ml) 2 3 5 11 1
Số ml hỗn hợp pha động 1 1 1 1 0
Nồng độ dung dịch (µg/ml) 80 90 100 110 120 Tiêm lần lượt 20µl mỗi dung dịch trên vào hệ thống HPLC đã chạy ổn định với pha động 30 phút. Tiến hành sắc ký. Ghi các giá trị diện tích pic đo được ứng với các nồng độ của Captopril. Kết quả khảo sát tuyến tính được trình bày ở bảng 3.3.
Bảng 3.3. Kết quả khảo sát khoảng tuyến tính của Captopril
Dung dịch 1 2 3 4 5
Nồng độ (µg/ml) 80 90 100 110 120 Diện tích pic (mAU*min) 28,304 31,752 35,330 38,978 42,438
Từ kết quả thu được ở bảng 3.3, chúng tôi thiết lập mối tương quan giữa diện tích pic thu được trên sắc ký đồ và nồng độ của dung dịch. Phương trình hồi quy tuyến tính biểu thị mối tương quan này là:
y = 0,3549 x – 0,1336 với hệ số tương quan r=0,9999, R2= 0,9999
Độ lệch chuẩn của y-intercept : Sb = 0,1960
Khoảng tin cậy của y-intercept : ∆b = 0,6238 ;-0,7575 ≤ b ≤ 0,4902 chứa gốc tọa độ.
Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc tuyến tính giữa nồng độ dung dịch và diện tích pic của Captopril được ghi ở hình 3.9.
Hình 3.9. Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc tuyến tính giữa nồng độ dung dịch và diện tích pic của Captopril
Từ kết quả thu được ở hình 3.9 cho ta thấy: tất cả các giá trị đo được nằm trên đường hồi quy 80% đến 120% nồng độ định lượng tương đương với 80µg/ml
đến 120 µg/ml.
Như vậy, trong khoảng nồng độ từ 80µg/ml đến 120µg/ml có sự phụ thuộc tuyến tính giữ nồng độ dung dịch và diện tích pic của Captopril. Sự phụ thuộc này là chặt chẽ. Khoảng nồng độ khảo sát là rộng nên thuận tiện cho việc phân tích định lượng trong nguyên liệu.