min
1 - 6.073
2 - 6.780
3 - 9.033
WVL:220 nm tuy nhiên sử dụng pha tĩnh phân cực tức là dùng sắc ký pha thuận, trong khi dung môi dùng cho sắc ký pha thuận là dung môi không phân cực như : benzen, toluen…. là rất độc. Chính vì vậy, chúng tôi vẫn định hướng nghiên cứu định lượng Captopril bằng phương pháp sắc ký lỏng pha đảo.
Tiến hành khảo sát chọn cột,trước hết với cột Gemini C18.Sử dụng các hệ đệm khác nhau và thay đổi thành phần pha động khác nhau trên cột C18 (250mm x 4,6 mm, 5µm).Kết quả khảo sát trên cột C18 được minh họa ở hình 3.2.
Hình 3.2: Sắc ký đồ của Captopril khi chạy ở các hệđệm khác nhau và các pha
động khác nhau.
Trên các sắc ký đồ thu được, pic của Captopril không tách ra khỏi pic tạp,pic tạp luôn ra sau pic Captopril, chứng tỏ Captopril và tạp chất có ái lực với pha tĩnh C18 khá giống nhauvà mức độ thân nướccủa tạp kém hơn Captopril. Chính vì vậy,nếu giảm mức độ không phân cực của pha tĩnh thì Captopril sẽ bị lưu giữ hơn, và sự lưu giữ với các tạp chất liên quan cũng tăngvà tăng nhiều hơn so với Captopril, tạo điều kiện có thể tách được Captopril riêng rẽ .
Vì những lý do trên nên chúng tôi quyết định thay đổi pha tĩnh hay chính là thay cột Gemini bằng cột Luna C8có mức độ phân cực cao hơn cột C18.
3.1.3 Khảo sát chọn thành phần pha động và tốc độ dòng đối với cột LunaC8 (250 mm x 4,6 mm, 5µm) (250 mm x 4,6 mm, 5µm)
Trong HPLC pha đảo thì pha động thông dụng nhất là acetonitril, methanol, nước và hỗn hợp của các thành phần trên. Do Captopril dễ tan trong MeOH mặt khác dung môi AcCN có độ nhớt thấp muốn đạt áp suất đầu cột trong khoảng thích hợp từ 80-150 bar thì tốc độ dòng tăng cao, khi tốc độ dòng tăng cao thì thời gian lưu bị rút lại rất ngắn không tách được các tạp khác ra. Đồng thời: mức độ ảnh
0.0 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 8.8 10.5-10.0 -10.0 0.0 12.5 25.0 37.5 50.0
70.0KS C18 #11 [modified by Nam Hung] UV_VIS_1mAU mAU min 1 - 4.193 2 - 5.207 WVL:220 nm 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.9 -2.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5
16.0KS C18 #7 [modified by Nam Hung] capto lan 2 UV_VIS_1mAU mAU
min
1 - 9.213
2 - 10.553
hưởng tới sự thay đổi pH của MeOH ít hơn là khi dùng AcCN,độ hấp thụở 220 nm của MeOH thấp hơn AcCN,và giá thành của MeOH chỉ bằng 1/3 so với giá
thành của AcCN nếu cùng thể tích nên chúng tôi sử dụng MeOH là một thành phần trong pha động.
3.1.4.1Chọn hệđệm – pH
Trên cơ sở lý thuyết, Captopril có pKa =3,7, nên khoảng pH để Captopril ở
dạng phân tử gần như hoàn toàn là 1,7 – 2,7. Trong khoảng pH này, đệm phosphat có pKa1 = 2,15. Vì thế, chúng tôi sử dụng đệm phosphat để phân tích Captopril
Do giới hạn chịu đựng của cột với pH là từ 1,5 – 12,5,đồng thời ở pH< 2 thì captopril tương tác với nhau tạo ra các thiocetal dẫn đến định lượng không chính xác nên chúng tôi không sử dụng pH thấp hơn
pH = 2
Chúng tôi chọn pH của đệm là pH = 2,5 để khởi đầu.Kết quả phân tích được trình bày trong ở hình 3.3.
Hình 3.3: Thông số phân tích và sắc ký đồ của Captopril khi chạy với pH = 2,5 Qua sắc ký đồ và các thông số phân tích pic ởhình 3.3, ta thấy với đệm pH 2,5: pic của Captopril bị kéo đuôi và không cân xứng (AF = 2,17), chứng tỏ tỷ lệ
Captopril ở dạng phân ly/dạng phân tử còn lớn nên để tỷ lệ này giảm thì cần giảm pH của pha động.Chúng tôi giảm pH của hệ đệm xuống pH 2,4 để tiếp tục nghiên No. Ret.Time Width Resol. Asym.
min Min (EP) (EP) 1 6,300 0,922 2,48 2,17 2 9,007 1,239 n.a. 1,65 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 13.3 -10.0 0.0 12.5 25.0 37.5 50.0