Các bước tiến hành
Tiến hành thử độc tính bán trường diễn của cao TES trên chuột cống trắng, giống đực, với liều nhắc lại 28 ngày.
Thí nghiệm bao gồm các bước tiến hành như sau: chuột cống trắng trưởng thành, giống đực, sau khi đã được nuôi ổn định trong điều kiện phòng thí nghiệm 5 ngày, được chia ngẫu nhiên thành 3 lô, mỗi lô 10 con.
- Lô chứng: uống uống dung môi dùng để pha mẫu thử (CMC- Na 0,5%) - Lô thử 1: uống cao TES pha trong CMC-Na 0,5 % với liều 6g/kg. - Lô thử 2: uống cao TES pha trong CMC-Na 0,5 % với liều 12g/kg.
Chuột được cho uống mẫu thử hoặc dung môi dùng để pha mẫu thử (đối với lô chứng) vào một giờ nhất định trong ngày (khoảng 9h sáng), liên tục trong 28 ngày.
Mẫu thử được pha để đảm bảo thể tích cho uống đồng đều giữa các lô và đều là 2ml/100g chuột.
Cân trước khi chia lô và cân hàng tuần để theo dõi cân nặng chuột đồng thời điều chỉnh liều mẫu thử cho chuột uống.
Lấy máu đuôi chuột vào ba thời điểm: ngay trước khi cho chuột uống mẫu thử (N0), sau khi cho chuột uống mẫu thử 14 ngày (N14) và sau khi cho chuột uống mẫu thử 28 ngày (N28). Máu chuột được lấy vào 2 ống nghiệm trong đó một ống nghiệm đã có chứa sẵn chất chống đông là EDTA, lắc nhẹ ống máu, đem đi xác định các thông số huyết học (gồm số lượng hồng cầu, nồng độ hemoglobin, nồng độ hematocrit, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu, số lượng tiểu cầu, lympho bào). Ống nghiệm thứ 2 không có chất chống đông, sau khi lấy máu để máu đông tự nhiên trong khoảng 30 phút, ly tâm thu huyết thanh để định lượng các thông số sinh hóa máu (gồm hoạt độ AST, hoạt độ ALAT, nồng độ cholesterol toàn phần, nồng độ protein tòa phần, nồng độ creatinin).
Ngày thứ 28 sau khi lấy máu giết mỗi lô 3 chuột, lấy gan, thận để làm tiêu bản đánh giá tổn thương ở mức vi thể (làm tiêu bản và đọc kết quả vi thể được tiến hành tại bộ môn Giải phẫu bệnh, trường đại học Y Hà Nội)
Các thông số đánh giá
- Biểu hiện của động vật thực nghiệm: tình trạng da, lông, mắt, sự tiết dịch, phân, nước tiểu, hoạt động tự nhiên, hành vi, sự tiêu thụ thức ăn, nước uống
- Sự thay đổi khối lượng cơ thể (cân hàng tuần)
- Các thông số huyết học: số lượng hồng cầu, nồng độ hemoglobin, tỷ lệ hematocrit, thể tích trung bình hồng cầu, lượng huyết sắc tố trung bình, nồng độ huyết sắc tố, số lượng tiểu cầu, số lượng bạch cầu và tỷ lệ % tế bào lympho
- Các thông số sinh hóa: hoạt độ AST, ALT, cholesterol toàn phần, protein toàn phần, creatinin huyết thanh
- Đại thể các cơ quan: quan sát cảm quan các cơ quan tim, gan, thận. lách. - Mô bệnh học: lấy ngẫu nhiên 30% động vật mỗi lô để làm tiêu bản vi thể gan, thận
Cách đánh giá kết quả:
So sánh các thông số nghiên cứu của lô chuột uống mẫu thử với lô chứng tại cùng thời điểm để đánh giá ảnh hưởng của mẫu thử trên các thông số này.