Định lượng cắn các phân đoạn (xem Bảng 3.2)
Bảng 3.2. Hàm lượng cắn trong từng phân đoạn chiết phần trên mặt đất của cây Dâu dây.
Lần Khối lượng dược liệu (g) Độ ẩm (%) Cắn methanol Cắn n-hexan Cắn ethyl acetat Cắn n-butanol m cắn (g) F (%) m cắn (g) F (%) m cắn (g) F (%) m cắn (g) F (%) 1 100,05 7,81 8,34 8,46 1,09 1,18 1,76 1,91 1,72 1,86 2 100,14 7,83 8,36 8,48 1,09 1,18 1,77 1,92 1,73 1,87 3 100,00 7,81 8,34 8,45 1,08 1,17 1,75 1,90 1,70 1,84 Trung bình 8,46 % 1,18 % 1,91 % 1,86 %
30
Nhận xét: Phần trên mặt đất của cây Dâu dây có hàm lượng cắn ethylacetat là lớn nhất (1,91 %), tiếp đến là cắn phân đoạn n-butanol (1,86 %), thấp nhất là cắn phân đoạn n-hexan ( 1,18%).
Định tính các phân đoạn:
Định tính bằng các phản ứng hóa học:
Khi tiến hành định tính các nhóm chất trong cây Dâu dây, kết quả cho thấy phần trên mặt đất (lá và thân) cây Dâu dây có các nhóm chất: flavonoid, saponin, tanin, caroten, acid hữu cơ, đường khử, polysaccarid. Do đó, chúng tôi tiến hành định tính các nhóm chất flavonoid, saponin, tanin, caroten, acid hữu cơ, đường khử, polysaccarid ở các phân đoạn, kết quả thu được thể hiện ở bảng 3.3.
Bảng 3.3. Kết quả định tính cắn các phân đoạn trong phần trên mặt đất (lá và thân) cây Dâu dây.
STT Nhóm chất Phản ứng đặc trưng Kết quả Cắn n-hexan Cắn ethyl acetat Cắn n- butanol Cắn nước (còn lại) 1 Flavonoid Phản ứng Cyanidin - + + - Pứ với FeCl3 5% ++ +++ ++ - Pứ với kiềm ++ +++ + - Pứ với TT Diazo - ++ + - 2 Saponin Hiện tượng tạo bọt - + + - Pứ Slakowski - + + - 3 Tanin Pứ với dd FeCl3 5% - + ++ -
Pứ với dd chì acetate 10%
31 Pứ với dd gelatin 1% - + ++ - 4 Caroten Pứ với H2SO4 + + - - 5 Steroid Pứ Lieberman ++ - - - 6 Acid hữu cơ Pứ với bột Na2CO3 - - - + 7 Đường khử Pứ với TT Fehling - - + +++ 8 Polysaccarid Pứ với TT Lugol - - - +
Nhận xét:
Cắn ở phân đoạn n-hexan cho phản ứng dương tính với nhóm hợp chất: steroid, caroten.
Cắn ở phân đoạn ethylacetat cho phản ứng dương tính với các nhóm hợp chất: flavonoid, saponin, tanin, caroten.
Cắn ở phân đoạn n-butanol cho phản ứng dương tính với các nhóm hợp chất: flavonoid, saponin, tanin, đường khử.
Cắn ở phân đoạn dịch chiết nước cho phản ứng dương tính với: đường khử, acid hữu cơ và polysaccarid.
Vì vậy, sơ bộ nhận định trong các phân đoạn trên thành phần flavonoid đều có mặt trong phân đoạn ethylacetat và n-butanol. Trong đó nhóm hợp
chất flavonoid tập trung chủ yếu ở phân đoạn ethylacetat.
Định tính cắn các phân đoạn bằng sắc ký lớp mỏng:
- Dung dịch chấm sắc ký: Hòa tan cắn thu được ở phân đoạn ethylacetat, n- butanol trong dung môi methanol làm dịch chấm sắc ký.
- Bản mỏng Silica gel F254 (Merck) tráng sẵn được hoạt hóa ở 110oC trong 1 giờ, để nguội và bảo quản trong bình hút ẩm.
- Cắn phân đoạn ethylacetat dùng hệ dung môi: Ethylacetat : acid acetic : acid formic : nước (10:1:1:2).
32
- Cắn phân đoạn n-butanol dùng hệ dung môi: n – Butanol : acid acetic: nước (5:1:4).
Sau khi triển khai lấy bản mỏng ra, sấy nhẹ cho bay hết dung môi. Bản SKLM được quan sát dưới ánh sáng thường, đèn tử ngoại với 2 bước sóng 254nm và 365nm. Sau đó hiện màu bằng thuốc thử. Kết quả cho một số sắc ký đồ như hình 3.9 và 3.10.
Chú thích:
+ (1,2): Cắn ethylacetat (Trước khi phun thuốc thử).
- Hình A: SKC quan sát ở ánh sáng thường. - Hình B: SKC quan sát ở UV 254 nm.
- Hình C: SKC quan sát ở UV 365 nm.
Chú thích:
+ (1,2): Cắn ethylacetat (Sau khi phun thuốc thử acid boric : acid oxalic (2:1), sấy kính ở 110oC trong 5 phút. - Hình A: SKC quan sát ở ánh sáng
thường.
- Hình B: SKC quan sát ở UV 365 nm.
Hình 3.9. Sắc ký đồ phân đoạn cắn ethylacetat với hệ dung môi Ethylacetat : acid acetic : acid formic : nước (10:1:1:2).
33
Quan sát ở ánh sáng thường, sắc ký đồ cho các vết màu vàng và các vết này đậm lên sau khi phun thuốc thử đặc trưng của flavonoid. Ngoài ra, quan sát ở ánh sáng tử ngoại 365 nm, các vết màu vàng có phát quang màu xanh da trời và các vết này đậm lên sau khi phun thuốc thử. Giá trị Rf lần lượt của từng vết này là: 0,62; 0,69; 0,73; 0,81.
Hình 3.10. Sắc ký đồ phân đoạn cắn n-butanol
Chú thích:
+ (1,2): Cắn n-butanol.
- Hình A: Sắc ký đồ quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 365nm trước khi phun thuốc thử.
- Hình B: Sắc ký đồ quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 365nm sau khi phun thuốc thử acid boric : acid oxalic (2:1), sấy kính ở 110oC trong 5 phút.
34
Nhận xét: Sắc ký đồ cho các vết phát quang màu xanh da trời và các vết này đậm lên sau khi phun thuốc thử. Có 2 vết phát quang xanh da trời rõ nét tại các giá trị Rf lần lượt là: 0,12; 0,27.
Như vậy từ hình ảnh sắc ký đồ của cắn phân đoạn ethylacetat và phân đoạn n-butanol cho thấy: Phân đoạn ethylacetat và n-butanol cho các vết phát quang màu xanh da trời và các vết này đậm lên sau khi phun thuốc thử acid boric : acid oxalic (2:1), đây là thuốc thử đặc trưng của nhóm hợp chất flavonoid. Điều này chứng tỏ nhóm hợp chất flavonoid là nhóm chất chính có mặt trong cắn phân đoạn ethylacetat và cắn phân đoạn n-butanol.