Dược chất có trong DIG, dược chất giải phóng từ DIG được định lượng bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao- HPLC.
23
-Pha tĩnh: Cột Eclipse XDB-C8 5µm, kích thước 4,6mm× 150,0mm.
-Pha động: hỗn hợp methanol và dung dịch đệm phosphat pH 2,5 với tỷ lệ 75/25, lọc qua màng cellulose acetat 0,45µm, siêu âm đuổi bọt khí trong 15 phút.
-Tốc độ dòng pha động: 1mL/phút.
-Thể tích tiêm mẫu: 20µL.
-Detector UV bước sóng 276nm.
Mẫu chuẩn:
Cân chính xác một lượng dược chất khoảng 100mg, hòa tan hoàn toàn bằng nước cất trong bình định mức 100mL, bổ sung vừa đủ thể tích, thu được dung dịch gốc nồng độ 1mg/mL.
Tiếp tục pha loãng dung dịch gốc 50 lần bằng nước cất để thu được mẫu chuẩn có nồng độ khoảng 20µg/mL. Lọc qua màng lọc 0,45µm.
Mẫu thử
Định lượng dược chất có trong mẫu DIG: pha loãng DIG 50 lần bằng nước cất, lọc qua màng lọc 0,45µm.
Định lượng dược chất giải phóng in vitro: 1mL mẫu lấy được từ môi trường khuếch tán trực tiếp đem đi phân tích.
Công thức tính
Nồng độ dược chất trong mẫu thử được tính theo công thức sau:
Ct = ×
Trong đó:
Ct : Nồng độ dược chất trong mẫu DIG (mg/mL)
mc: Khối lượng dược chất cân ban đầu để pha mẫu chuẩn (mg). St: Diện tích pic chính của mẫu DIG (mAU.giây)
Sc: Diện tích pic của mẫu chuẩn (mAU.giây)
Phần trăm dược chất giải phóng từ DIG được tính toán như trình bày ở mục 2.3.5.
24
= ×
Trong đó:
H: phần trăm dược chất trong mẫu DIG (%). Ct: nồng độ dược chất trong mẫu DIG (mg/mL).
25
CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN